2型糖尿病患者高血压、冠心病、肥胖、卒中等并发症 的发生率明显高于普通人群。2型糖尿病和高血压均为一 类具有共同遗传背景的多基因疾病。近年有关于载脂蛋白 e（apoe）基因多态性与高血压关系的研究报道，但结果很 不一致。本文采用分子生物学手段以中国东北地区汉族为 对象，探讨apoe基因多态性与2型糖尿病合并高血压的关 系。
1 对象与方法
1.1 研究对象 病例来源于2002年10月～2003年7月 在我院住院患者。对照来源于同期无糖尿病史及脑血管病 史的住院患者和门诊体检者。2型糖尿病诊断和分型依照 1999年who制定的标准。高血压诊断按1999年who和 ish标准。本研究收集单纯2型糖尿病患者45例，2型糖 尿病合并高血压患者92例，对照组68例;性别、年龄和体 重指数在3组之间比较差异均无显著性，具有可比性。
1.2 研究方法
1.2.1 标本的采集与处理 所有受试者在上午6～8时空 腹抽取肘静脉血2.7ml，注入含枸橼酸钠抗凝的真空管，置 -70℃保存。wWW.133229.coM采用酚-氯仿法提取基因组dna，-20℃保 存至分析用。
1.2.2 apoe基因的pcr扩增 以基因组dna为模板， pcr扩增apoe基因第4外显子片段。反应引物按wenham 等 ［1］ 报道设计，由上海sangon公司合成。上游引物序列 为:5′-tccaaggagctgcaggcggcgca-3′;下游引物序 列为:5′-acagaattcgccccggcctggtacactgcca- 3′。pcr扩增在10μl反应体系中进行，其中包括基因组 dna 1μl（10～20ng/μl），10×buffer 1μl，4×dntp 0.6μl （2.5mm），引物各0.4μl（10μmol/l），二甲亚砜1μl，taq dna聚合酶0.5u。先进行94℃10s、68℃10s、72℃30s共4 个循环，再进行94℃10s、62℃10s、72℃30s共30个循环，最 后置于72℃延伸7min。pcr产物经2%琼脂糖凝胶电泳，eb染色检测扩增结果。
1.2.3 限制性内切酶消化 限制性酶切反应在20μl反应 体系中进行，其中包括pcr产物6μl，hin6i内切酶6u （10u/μl）及相应buffer 2μl。轻轻混匀后置37℃消化过 夜。酶切产物经8%中性聚丙烯酰胺凝胶电泳，dna快速 银染，电泳图谱按文献 ［3］ 的方法鉴定apoe基因型。
1.3 统计学方法 用χ 2 检验进行等位基因和基因型频率 分布的比较，用方差分析进行组间均数的比较，数值用均数 ±标准差（ ˉ x±s ）表示。 p <0.05差异具有显著性。所有统 计学分析均采用sas 6.0统计软件系统进行。
2 结果
2.1 apoe基因型鉴定 载脂蛋白e基因pcr-rflp电 泳结果见图1。
图1 载脂蛋白e基因pcr-rflp电泳结果 略
2.2 apoe基因型及等位基因频率分布 见表1。
表1 3组人群apoe等位基因及基因型频率分布 （略）
3 讨论
载脂蛋白e根据氨基酸序列的不同，有3种主要的异 构体e 2 、e 3 和e 4 ，分别由19号染色体上的一个基因位点 的3个等位基因ε 2 、ε 3 和ε 4 编码，形成apoe基因多态性 ［2］ 。这3种等位基因呈共显性表达，在人群中组成了6 种不同的基因表型，即3种纯合子（ε 2 ε 2 、ε 3 ε 3 、ε 4 ε 4 ）和3种 杂合子（ε 2 ε 3 、ε 2 ε 4 、ε 3 ε 4 ）。 apoe基因多态性与血压的关系仍未阐明，临床研究结 果亦有较大分歧。uusitupa等 ［3］ 根据apoe多态性对胆固 醇的影响，推测它可能和血压间存在着某种联系，经研究发 现ε 4 等位基因携带者收缩压较其他等位基因者高，而舒张压则与apoe基因多态性无关 ［3］ 。de knijff等 ［4］ 认为apoe 基因多态性与血压无关。uusitupa等［3］认为apoe可能 通 过升高ldl来减弱内皮依赖性血管舒张而使血压升高; 另外它可能通过影响高血压的相关危险因素而间接起作 用，如携带e 4 等位基因者ldl较高 ［5］ ，而较高的ldl个 体易发生动脉硬化，进而影响血压;有研究认为apoe基因 多态性与高胰岛素血症及胰岛素抵抗间存在相关性 ［6］ ， 胰岛素抵抗被认为是高血压的重要危险因素和病理生理 机制。本研究的结果显示，2型糖尿病合并高血压患者携 带ε 4 等基因的频率与单纯2型糖尿病组和对照组差异无 显著性。这与郑以漫等 ［7］ 研究的结果一致。我们认为 apoe基因型与中国东北地区汉族人2型糖尿病合并高血 压无相关性。 apoe基因多态性与血压之间的关系颇为复杂，可能通 过基因-基因及基因-环境间的相互作用 ［8］ ，以某些直接 或间接的方式影响血压。其确切关系和机制还有待于进一 步研究。
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