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在2型糖尿病人群中ABCA1 R219K基因多态性与血脂的

2015-07-08 09:34 来源:学术参考网 作者:未知

【摘要】 目的: 研究abca1 r219k基因多态性在2型糖尿病(t2dm)患者中的分布及其与血脂的关系. 方法: 应用聚合酶链反应(pcr)和限制性片段长度多态性(rflp)方法检测143例t2dm患者和83例健康对照者(作为正常对照组)abca1 r219k多态性基因型,分析其分布特点及其与血脂水平的关系. 结果: rr,rk和kk基因型在t2dm组的分布分别为:57,71,15例;正常对照组:29,38,16例.两组比较,abca1 r219k多态性的基因型及等位基因频率分布差异均无统计学意义(χ2=3.454,p=0 178;χ2=2.098,p=0.147),提示abca1 r219k多态性与t2dm的发病无关. 在t2dm组中, kk型的hdlc水平高于rr型和rk型(1.38,1.27,1.28),tg水平在rr型、rk型和kk型之间依次递减(2.09,1.96,1.75),且kk型的hdlc与rr型之间差异有统计学意义(p=0.046). 结论:abca1 r219k多态性不是t2dm发病的遗传学标志,但该变异参与t2dm患者脂质异常的调节.
【关键词】 abca1基因 多态现象 2型糖尿病 血脂
  0引言
  atp结合盒转运子a1 (atpbinding cassette transporter 1, abca1)介导细胞内胆固醇和磷脂外流,是高密度脂蛋白(hdl)介导胆固醇逆转运的第一步[1-5]. 已知abca1基因多态性与冠心病、脂代谢等疾病有关,研究认为abca1 r219k对心血管系统的保护作用与其调节脂代谢的直接作用有关,这类研究多集中于正常人群与心血管疾病人群[6,8-11]. 由于2型糖尿病(t2dm)与血脂异常密切相关,因此我们采用聚合酶链反应限制性片段长度多态性(pcrrflp)方法检测这种基因变异对中国人t2dm 及血脂的影响.
  1对象和方法
  1.1对象
  t2dm组选自甘肃省人民医院内分泌科及兰州大学附属一院心内科住院患者143(男76,女67)例,年龄(57.34±7.60)岁. t2dm诊断按照1997年美国糖尿病协会(ada)推荐的标准诊断. 患者之间无亲缘关系. 同期选择正常对照(n)组83(男47,女36)例, 年龄(57.15±7.52)岁,为本院职工和外单位健康体检者,经检查排除糖尿病、高血压、高血脂、冠心病、肥胖及肾病等. 两组对象年龄、性别分别经t检验、卡方检验均具有可比性(t=0.18,p=0.61; χ2=0.256, p=0.612). 以上研究对象均为中国汉族人. 所有受试者均签署了知情同意书.
  1.2方法
  1.2.1abca1 r219k基因型鉴定
  基因组dna提取:应用上海生工生物工程有限公司试剂抽提外周白细胞基因组dna. 引物设计参考国外有关文献[6],上游引物5′ gtatttttgcaaggctaccagttacatttgacaa 3′,下游引物:5′ gattggcttcaggatgtccatgttggaa 3′. 聚合酶链式反应(pcr)体系为25 μl:含有基因组dna 0.2~0.5 μg、上游和下游引物分别为0.1 μmol/l,dntpmix 0.25 mmol/l, tag酶25 nkat,10×tag酶缓冲液、mgcl2 2 mmol/l及灭菌去离子水适量.应用自动循环仪进行扩增. 扩增条件:预变性94℃ 5 min,反应循环:变性94℃ 60 s,退火60℃ 60 s,延伸72℃ 30 s,循环30次. 最后72℃延伸10 min.  限制性内切酶反应体系20 μl:取10 μl pcr扩增产物、加10×酶切缓冲液2 μl,加msp 内切酶(上海生工)166.7 nkat、灭菌去离子水补充体积至20 μl. 37℃ 3 h后,置65℃ 10 min终止酶切反应, 得酶切产物. 20 g/l琼脂糖凝胶电泳分离酶切产物. abca1产物片段总长度177 bp,经特异性限制内切酶消化后,可出现3种片段大小的组合. 分别为rr:177 bp;rk:177 bp,107 bp,70 bp;kk:107 bp,70 bp(图1).
  1.2.2检测指标
  ①腰臀比(whr)、体质量指数(bmi)测定:清晨空腹情况下,测量腰围、臀围、身高、体质量,并计算whr,bmi. ②血脂测定:受检者均采血前半月停用影响血脂代谢的药物,清晨空腹采血,测定血清总胆固醇(tc),三酰甘油(tg),高密度脂蛋白胆固醇(hdlc),低密度脂蛋白胆固醇(ldlc)以及血红蛋白、白细胞、血小板计数、肝、肾功能等生化指标(检验科专人质控检验).
  统计学处理:计算hardyweinberg平衡判断样本的代表性. 主要统计指标均进行正态性检验. 正态分布的统计指标均以x±s表示. 计量资料两组间比较采用t检验,多组比较采用oneway anova检验,用lsdt检验进行两两比较. 计数资料的组间比较采用卡方检验. 所有统计学分析均采用spss12.0分析软件.
  2结果
  2.1不同组别间基因型与等位基因频率
  对两组研究对象的基因型频率进行了平衡检验,

两组基因型都符合hardyweinberg遗传平衡,所以,本研究所选择的研究人群基因频率能够代表群体的基因分布. rr,rk和kk基因型在t2dm组的分布分别为:57,71,15例;正常对照组:29,38,16例. 两组比较, abca1 r219k多态性的基因型频率及等位基因频率分布差异均无统计学意义(χ2=3.454,p=0.178;χ2=2.098,p=0.147,表1).表 12型糖尿病组与正常对照组等位基因及基因型频率(略)
  2.2不同基因型之间体重指数、腰臀比及血脂水平
  abca1 r219k 3个不同基因型间whr和bmi差异无统计学意义(p>0.05). kk型的hdlc水平高于rr型和rk型(1.38, 1.27, 1.28),且kk型和rr型比较,差异有统计学意义(p=0.046). kk型的tg水平低于rr型和rk型(1.75, 2.09, 1.96),但差异无统计学意义(p>0.05). 其它血脂差异均无统计学意义(p>0.05,表2).表2不同基因型之间体质量指数、腰臀比及血脂水平(略)
  3讨论
   abca1基因是abca1亚族成员之一. 是由2261个氨基酸组成的膜蛋白,分子量为254 ku. 人类abca1基因位于染色体9q31区带,长度149 kb,含有1453 bp启动子、146 581 bp外显子和内含子(外显子50个,内含子49个)等[7]. 其中abca1 r219k是7号外显子第1051位核苷酸g变成a,使abca1蛋白质第219位的精氨酸(r)变成赖氨酸(k). 近年来,这一位点与血脂及冠心病的研究已成为国内外研究的热点. 流行资料表明,这一位点基因突变可产生有益的临床血脂谱[6,8-11]. 由于t2dm及其大血管合并症与脂质紊乱密切相关,所以我们采用多聚酶链反应限制性片段长度多态性(pcrrlfp)方法检测143例t2dm患者及 83例正常人abca1 r219k位点的基因分布情况.

本研究结果显示t2dm组和正常对照组比较,基因型及等位基因频率差异无统计学意义,提示abca1 r219k多态性不是t2dm发病的遗传学因素. clee等[6]研究发现rk型和kk型携带者的tg水平较rr型的明显降低,虽然hdlc水平较rr型升高,但差异无统计学意义. 赵水平等[8]对中国692 例脑卒中患者和351例健康对照者的研究中发现kk型携带者的hdlc和apoai水平明显高于rk和rr型. 我们的研究结果与赵水平的基本一致. 在t2dm患者(其中有71例合并有冠心病)中发现kk基因型携带者的血清hdlc水平显著高于rr型(p=0.046),tg水平低于rr型,提示该多态性可能参与中国人t2dm合并冠心病患者血脂异常的调节,也有可能通过这一机制影响糖尿病患者大血管病变的发生.
  abca1 r219k基因变异引起血脂变化的机制尚不十分清楚,clee等[6]认为可能与提高abca1活性有关. vaisman等[12]研究发现,用转基因鼠过度表达abca1,可增强胆固醇外流;增加血浆胆固醇、胆固醇酯、游离胆固醇、磷脂、 hdlc,apoai和apob水平;导致富含apoe的hdl的积聚.

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