牛血清中抑菌成分的研究论文

乳铁素B也叫：牛乳铁蛋白活性肽英文名：Lactoferricin B (Lfcin-B) 乳铁素B是牛乳铁蛋白经胃蛋白酶酶解后得到的最重要的抗菌肽，具有较强抗菌活性. 研究表明，乳铁素B对大肠杆菌的最小抑菌质量浓度为 mg/mL，对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度为 mg/mL；葡萄糖、 蔗糖、 麦芽糖、牛血清白蛋白(BSA)、 尿素、硫酸铵在0～10 mg/mL，乳糖、可溶性淀粉在0～4 mg/mL的质量浓度范围内，对乳铁素B的抗菌活性影响不大；当NaCl或KCl的浓度为25～100 mmol/L，MgCl2或CaCl2的浓度为～ mmol/L时，乳铁素B的抗菌活性就会大大降低；随着缓冲盐浓度和有机酸浓度（25～100 mmol/L）的增大，乳铁素B的抗菌活性呈下降趋势，且在微碱性环境下乳铁素B表现出较强的抗菌活力.乳铁蛋白(Lactoferrin，简称Lf)是富含在初乳中的一种功能因子， 具有抗菌特性等多种生物学功能。近代研究证明，u 虽然具有抗菌活性， 但酶解u 得到的抗菌肽的抗菌活性远远高于IJf。有若干种抗菌肽已从Lf的酶解液中获得。乳铁素(Lactoferricin)就是胃蛋白酶酶解u 所得到的最重要的抗菌肽，Lf降解生成乳铁素后抗菌活性大大增强I”。Tomita等研究了牛乳铁蛋白(Bovine Lactoferricin， BLf)经蛋白酶降解后的活性多肽的抑菌性能。利用胃蛋白酶降解牛乳或人乳的u ， 分别产生乳铁素B(LactoferricinBovine， 简称Lfcin—B)和乳铁素H(Lactoferricin Hu一man，简称Lfcin—H)两种。Lfcin．B有25个氨基酸残基组成，分子量为3 126 u；Lfcin—H 有47个氨基酸残基组成， 氨基酸顺序也均已测出。Lfcin—B和Lfcin—H 均不易被胃蛋白酶进一步水解， 均具有很强的杀菌、抑菌能力，且抗菌活性超过天然u ，介质环境存在铁质与否并不影响乳铁素的抗菌能力。乳铁素的抗菌谱也较之天然u 有较大改良， 能够抑制天然u 原本不能抑制的一些微生物的生长I 1。乳铁素具有广谱抗菌特性，对很多食品病原细菌有杀灭效果，有望作为一种天然抗菌组分获得广泛应用。对于每种酶其作用的pH 值与温度基本确定， 因此， 底物质量浓度和酶与底物的质量浓度比是酶解体系中两个最重要的因素。特别是象蛋白酶这样具有位点特异性的催化剂， 不仅存在底物抑制现象，即酶解反应在低底物质量浓度时符合米氏方程， 当底物质量浓度升高时， 反应速度反而下降， 而且对产物的种类也会产生影响。另一方面， 在水解度不同的情况下， 由于蛋白酶对肽链的切割程度的不同， 也会使相应的短肽产品在质量浓度上及性质上有所区别。本文对不同的底物质量浓度、酶与底物的质量浓度比、酶解时问等对产品的抑菌效果的影响做了分析，通过正交实验来确定其最佳的酶解条件。Tomita等[2]研究了牛乳铁蛋白(简称BLf)经蛋白酶酶解后的活性多肽的抗菌性能．利用胃蛋白酶酶解牛乳或人乳Lf，分别产生乳铁素B(facto—ferricin Bovine，简称Lfcin—B)和乳铁素H(Lacto—ferricin Human，简称Lfcin—H)两种．Lfcin—B有25个氨基酸残基组成，相对分子质量为3 126，Lfcin-H有47个氨基酸残基组成，氨基酸顺序也已测出．Lfcin—B和Lfcin—H 均不易被胃蛋白酶进一步酶解，均具有很强的杀菌、抑菌能力，且抗菌活性超过天然Lf[3]．由于乳铁素具有广谱抗菌特性，对很多食品病原细菌有杀灭效果，有望作为一种天然抗菌组分获得广泛应用．为此，作者开展了Lfcin—B的抗菌活性的研究，确立了Lfcin—B对大肠杆菌(E．coli)和金黄色葡萄球菌(S．aureus)的最小抑菌浓度，研究了不同的碳源、氮源、无机盐、有机酸、缓冲液及不同pH值对其抗菌活性的影响，为其在食品及医药行业应用提供依据．乳铁素 B是牛乳铁蛋白经胃蛋白酶酶解后所得到的最重要的抗菌肽,乳铁蛋白酶解生成乳铁素后抗菌活性大大增强.通过正交试验确立了牛乳铁蛋白酶解制备乳铁素 B的最佳条件,指出在底物质量浓度为 50 g/L,酶与底物质量浓度比为 1: 30(质量比),酶解时间为 60 min时所得的乳铁素质量浓度及活性较好. 研究表明,乳铁素B对大肠杆菌的最小抑菌质量浓度为 mg/mL,对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度为 mg/mL;葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、牛血清白蛋白(BSA)、尿素、硫酸铵在0～10 mg/mL,乳糖、可溶性淀粉在0～4 mg/mL的质量浓度范围内,对乳铁素B的抗菌活性影响不大;当NaCl或KCl的浓度为25～100 mmol/L,MgCl2或CaCl2的浓度为～ mmol/L时,乳铁素B的抗菌活性就会大大降低;随着缓冲盐浓度和有机酸浓度(25～100 mmol/L)的增大,乳铁素B的抗菌活性呈下降趋势,且在微碱性环境下乳铁素B表现出较强的抗菌活力. 2，文献资料：食品与生物技术学报-2005年2期 1－5页中国乳品工业-2004年5期

牛血清是重要的细胞培养添加成分，但目前牛血清的类型有胎牛血清、新生牛血清、补铁新生牛血清等，其性能和价格均不相同。牛血清是细胞培养中用量最大的天然培养基，含有丰富的细胞生长必须的营养成份，常用于动物细胞的体外培养，具有极为重要的功能。1.提供对维持细胞指数生长的激素，基础培养基中没有或量很少的营养物，以及主要的低分子营养物。2. 提供结合蛋白，能识别维生素、脂类、金属和其他激素等，能结合或调变它们所结合的物质活力。3.有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合，起到解毒作用。4.是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源。5.起酸碱度缓冲液作用。6.提供蛋白酶抑制剂，使在细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活，保护细胞不受伤害。胎牛血清培养效果通常来说是最佳。而补铁新生牛血清对于一些细胞类型，其效果可等价于胎牛血清，或优于常规新生牛血清。三种血清价格从高到低排序为：胎牛血清、补铁新生牛血清、常规新生牛血清。最适血清的选择，与各实验室、生产企业的条件和需求有关，与所培养细胞类型有关。除了根据以往经验和文献报道，必要时也可开展针对特定细胞的血清筛选试验，以筛选出最佳血清。不同类型血清比较的最新报道：2020年8月《生物学杂志》第4期刊登了一篇《不同类型牛血清对MDCK 细胞培养效果研究》，研究了进口胎牛血清、国产胎牛血清、国产新生牛血清对MDCK 细胞的促生长效果。作者在含10%不同类型牛血清的DMEM培养液中连续传代培养MDCK细胞，比较了三种血清培养MDCK细胞的传代稳定性、最大増殖密度、倍增时间、比生长速率、贴壁率等指标。结果显示，在最大增殖密度和倍增时间上，胎牛血清均优于新生牛血清。在贴壁率方面［贴壁率(%) = (所形成集落数/ 接种细胞数)×100%］，进口胎牛血清略高于国产胎牛血清，差异显著；国产新生牛血清低于国产胎牛血清和进口胎牛血清，差异极显著。Ausbian是市面上一款比较低调、却口碑相传、被反复选择的进口血清品牌，它被各大科研院所、高校重点实验室及药厂广泛使用，并多年来持续稳定供应细胞典藏等重大项目。下面对Ausbian®血清做一个简单介绍。一、Ausbian®进口牛血清，包括：Ausbian®特级胎牛血清、Ausbian®精制新生牛血清、Ausbian®补铁新生牛血清、Ausbian®疫苗专用新生牛血清、Ausbian®细胞治疗专用胎牛血清、Ausbian®透析胎牛血清。二、Ausbian®血清质控所有Ausbian®血清出厂前，均经过严格质控，每个批次附有详细完整的《检测报告》，包括：品名、货号、批号、血源地、生产日期、保质期、pH值、渗透压、总蛋白、无菌检查（细菌、真菌、支原体）、病毒检查（如BVD、牛腺病毒、细胞病变效应等）以及促细胞生长能力等。三、Ausbian®血清的优势如下：均精选内毒素更低批次（≤3EU/ml），使细胞更健康。Ausbian®特级胎牛血清尤其可满足干细胞、基因敲除、原代培养、细胞典藏、长期传代等各类细胞的培养要求；是细胞典藏等重大项目十几年的稳定供应品牌。新批次在使用前，提供试用服务，养细胞更放心。胎牛血清每批次产量为1500瓶-2500瓶，新生牛血清每批次产量为2000瓶-3000瓶。试用满意的实验室批号优先锁定，保证大多数项目两年不需换批次，细胞试验数据稳定。每年按厂家生产顺序，会有多批次平行供应，每个实验室专属批号管理，保证供货稳定。为Ausbian®血清用户免费提供申报支持，具有完整的检测报告，为各类项目的申报提供支持。（同时为血清VIP用户在支原体检测、方法学验证等方面，提供更多免费延伸性技术帮助。）针对特殊科研项目，可提供3-5个平行批次，让试验人有更多选择空间。为Ausbian®血清提供免费代储存服务，为储存空间不足的实验室提供可靠的血清仓储保护，按要求随时发货。Ausbian®血清从出厂，到实验室，全程低温冷链保护，确保血清无反复冻融。免费真品保障，每个血清瓶身加贴Viansaga®防伪标签，Ausbian品牌真品保护，逢假必究，为实验室做好售后保障。免费无忧售后，所有实验室签收的Ausbian胎牛血清，从签收日开始计算，一年之内，血清在妥善保管、未开封未融化、且不影响二次销售的情况下，均可享受无条件退货或换货的售后保障。免费专业帮助，汇集近二十年，千万个血清用户细胞培养经验，为各种细胞培养提供问题梳理分析，解决方案参考。对于生产或研究所用的培养细胞，大多数情况下，生产或研究人员可以依据以往经验以及文献报道选择合适的血清。了解更多

乳铁素 B是牛乳铁蛋白经胃蛋白酶酶解后所得到的最重要的抗菌肽,乳铁蛋白酶解生成乳铁素后抗菌活性大大增强.通过正交试验确立了牛乳铁蛋白酶解制备乳铁素 B的最佳条件,指出在底物质量浓度为 50 g/L,酶与底物质量浓度比为 1: 30(质量比),酶解时间为 60 min时所得的乳铁素质量浓度及活性较好.研究表明,乳铁素B对大肠杆菌的最小抑菌质量浓度为 mg/mL,对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度为 mg/mL;葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、牛血清白蛋白(BSA)、尿素、硫酸铵在0～10 mg/mL,乳糖、可溶性淀粉在0～4 mg/mL的质量浓度范围内,对乳铁素B的抗菌活性影响不大;当NaCl或KCl的浓度为25～100 mmol/L,MgCl2或CaCl2的浓度为～ mmol/L时,乳铁素B的抗菌活性就会大大降低;随着缓冲盐浓度和有机酸浓度(25～100 mmol/L)的增大,乳铁素B的抗菌活性呈下降趋势,且在微碱性环境下乳铁素B表现出较强的抗菌活力.好像就这么多了……

牛血清白蛋白的提取操作步骤：

1、盐析取离心管一支加入牛血清2mL、加入等量PBS（磷酸盐缓冲生理盐水）稀释血清，摇匀后，逐滴加入饱和硫酸铵溶液2mL，边加边摇，充分混匀，然后静止放臵10分钟，再离心（2000r/min）10min，将上清液倾入试管中。

2、取干净的比色板，在各孔内滴加一滴纳氏试剂

3、取玻璃纸一张，折成袋形，将离心后的上清液倒入袋内，用线扎紧上口（注意要留有空隙），用玻璃棒悬在盛有半杯蒸馏水的100mL烧杯内，使透析袋下半部侵入水中，对蛋白液进行透析，常用玻璃棒搅拌袋外（烧杯中）液体，以缩短透析时间。

4、每隔2分钟检查一次，更换蒸馏水多次，用纳氏试剂检查袋外液体的NH4+，观察颜色变化并记录，直至袋内盐分透析完毕。

5、将袋内液体倾入试管，即得牛血清白蛋白溶液。

牛血清白蛋白的鉴定方法：

1、点样取一张膜条，将薄膜无光泽面向下，放入培养皿中的巴比妥缓冲液中使膜条充分浸透，取出，用干净滤纸吸去多余的缓冲液，以薄膜的无光泽面距一端㎝处做点样线，将牛血清样品与待测的牛血清白蛋白溶液分别用点样器在同一张薄膜的点样线处不同位置点样。标准液点一次，待测液点三次。

2、电泳将点样后的膜条致于电泳槽架上，放置时膜条无光泽面向下，点样端致于阴极，待平衡5min后，打开电源，调节电源，调节电泳仪的电压为160伏，通电60min，关闭电源后用镊子将模条取出。

3、 染色将膜条直接浸于盛有氨基黑10B的染色液中，染2分钟后取出，立即浸于漂洗液中，分别在漂洗液1、2、3中各漂洗5min，直至背景漂洗干净为止，用滤纸吸干薄膜。

4、鉴定比较样品和待测液中白蛋白在薄膜上的电泳结果，看位置是否一致。

扩展资料：

牛血清白蛋白

牛血清中的简单蛋白，是血液的主要成分（38g/1000ml），分子量68kD。等电点。含氮量16%，含糖量。仅含已糖和已糖胺，含脂量只有。白蛋白由581个氨基酸残基组成，其中35个半胱氨酸组成17个二硫键，在肽链的第34位有一自由巯基。白蛋白可与多种阳离子、阴离子和其他小分子物质结合。

血液中的白蛋白主要起维持渗透压作用、PH缓冲作用、载体作用和营养作用。在动物细胞无血清培养中，添加白蛋白可起到生理和机械保护作用和载体作用。牛血清白蛋白（BSA），又称第五组分，是牛血清中的一种球蛋白，包含583个氨基酸残基，分子量为 Da，等电点为。牛血清白蛋白在生化实验中有广泛的应用，例如在western blot中作为Blocking agent。

参考资料来源： 百度百科-牛血清白蛋白