茶多酚的提取茶多酚的提取、精制⼯艺及产品中茶多酚的定量分析【实验⽬的】1、了解茶多酚的性质及⽤途;2、了解植物天然产物常规提取和精制的⽅法;3、掌握茶多酚提取与精制的原理和⽅法;4、掌握茶多酚的分析检测⽅法。【实验材料和仪器】1、仪器电动搅拌器离⼼机酸度计真空⼲燥箱抽滤瓶真空蒸发浓缩装置⽔环式真空泵电⼦天平⽔浴锅紫外分光光度计电热恒温⼲燥箱分液漏⽃微量吸管器2、试剂氯化钠碳酸氢钠柠檬酸硫酸铝盐酸亚硫酸氢钠⼄酸⼄酯维⽣素C 磷酸氢⼆钠磷酸⼆氢钾硫酸亚铁酒⽯酸钾钠硫酸没⾷⼦酸丙酯Ⅰ、⼯艺过程及操作⽅法【实验原理】茶多酚是茶叶中30 多种多酚类物质的总称,是⼀类富含于茶叶中、主要由表⼉茶素、表没⾷⼦⼉茶素及没⾷⼦酸酯类等组成的多羟基化合物,含量约占茶叶⼲物质总量的20%~30%。茶多酚分⼦中带有多个活性羟基(-OH),可终⽌⼈体中⾃由基链式反应,清除超氧离⼦,类似SOD 之功效。茶多酚对超氧阴离⼦与过氧化氢⾃由基的清除率达98%以上,呈显著的量效关系,其效果优于维⽣素E和维⽣素C。茶多酚还有抑菌、杀菌作⽤,能有效降低⼤肠对胆固醇的吸收,防治动脉粥样硬化,是艾滋病毒(⼈类免疫缺陷病毒,HIV)逆转录酶的强抑制物,有增强机体免疫能⼒,并具抗肿瘤、抗辐射、抗氧化、防衰⽼机理。茶多酚安全、⽆毒,是⾷品、饮料、药品及化妆品的天然添加成分。⽬前茶多酚已在医药、饮料、⾷品、保健等⾏业中⼴泛应⽤。由于茶多酚易溶于热⽔,因此本实验⾸先⽤热⽔在⼀定温度下将茶多酚从茶叶中提取出来;然后对茶叶浸提液盐析处理除去部分杂质;再利⽤某些⾦属离⼦与茶多酚形成的络合物在⼀定pH值下溶解度最低的特性,将茶多酚从浸提液中沉淀出来并⾼效地与咖啡碱等杂质分离;经过稀酸转溶将茶多酚游离出来后,⽤对茶多酚具有很好选择性的有机溶剂再次对其进⾏萃取分离;最后将茶多酚萃取液通过真空浓缩、真空⼲燥得到茶多酚精品。【实验步骤】1、浸提:称取⼀定重量过20⽬的茶叶末,加⼊其重量20倍的70℃~95℃的热⽔,搅拌下恒温浸提60min,过滤得茶叶浸提液。取样分析浸提液中茶多酚的含量,计算浸提液中茶多酚的总量、茶多酚的浸提率。2、盐析:加氯化钠于茶叶浸提液中,使其质量分数为6%,静置盐析后过滤。3、沉淀:在上述滤液中加⼊茶叶重量2%~5%的NaHSO3,然后加⼊茶叶重量20%的硫酸铝饱和⽔溶液,加热⾄70℃~80℃,⽤15%NaHCO3溶液在快速搅拌下调节pH⾄5~6,此时有⼤量沉淀析出,沉淀⾃然沉降⼀段时间后过滤,最后⽤等体积70℃热⽔洗涤沉淀三次。4、酸溶:将沉淀在快速搅拌下放⼊到茶叶重量3倍的pH=的盐酸⽔溶液中溶解沉淀,控制酸转溶液的pH=,酸溶时间50min,少量胶状沉淀经离⼼分离除去。取样分析计算酸转溶液中茶多酚的含量和总量,计算茶多酚经过盐析、沉淀及酸溶后的回收率。5、萃取:加⼊茶叶重量3%的NaHSO3⾄酸转溶液中,然后⽤其体积倍的⼄酸⼄酯萃取3次,每次萃取时间为10min,合并萃取液。取样分析计算萃余相中茶多酚的总量,计算茶多酚的萃取率。6、洗涤:加⼊茶叶重量2%的维⽣素C⾄萃取液体积倍的⽔中,⽤柠檬酸调节⽔溶液的pH=,等分成⼆份对⼄酸⼄酯萃取液洗涤两次。7、蒸发浓缩:将洗涤后的⼄酸⼄酯相在50℃~70℃下真空蒸发回收⼄酸⼄酯,待浓缩成膏状物时,加⼊膏状物2倍体积的⽆⽔⼄醇洗涤挂在壁上的物料,继续浓缩成稠的膏状物。8、⼲燥:将膏状物放⼊真空⼲燥箱中,在60℃~90℃下进⾏真空⼲燥,在前1~2h内,将物料搅动⼏次,当物料⼲燥成粉状或⼲的块状时,结束⼲燥。⼲燥时间⼀般4~8h。9、包装保存:将⼲燥好的茶多酚产品转移⾄⾃封塑料袋中,称重、取样后⽴即密封,置⼊棕⾊玻璃⼲燥器中于低(室) 温下避光保存。产品取样⽤于分析产品中茶多酚含量,计算出茶多酚的最终得率。Ⅱ、提取精制过程中及产品中茶多酚含量的分析检测⽅法(⼀)、提取精制过程中茶多酚含量的分析检测【实验原理】在⼀定pH值条件下,酒⽯酸铁能与多酚类物质反应形成蓝紫⾊络合物,该络合物在540nm 波长下具有最⼤吸光度。在适当的浓度范围内,茶多酚的含量与络合物的吸光度成正⽐,符合朗伯-⽐尔定律,因此可⽤分光光度法对茶多酚定量分析。【实验材料及步骤】1、酒⽯酸亚铁溶液:称取1g(准确⾄)硫酸亚铁和5g(准确⾄)酒⽯酸钾钠,⽤⽔溶解并定容⾄1L(此液放置过夜后使⽤,可稳定1星期)。2、pH=的磷酸盐缓冲液:a液(1/15mol/L的磷酸氢⼆钠溶液):称取磷酸氢⼆钠,加⽔溶解并稀释⾄1L;b液(1/15mol/L的磷酸⼆氢钾溶液):称取经110℃烘⼲2h的磷酸⼆氢钾,加⽔溶解并稀释⾄1L。取a 液85mL和b液15mL混匀,即得pH=磷酸盐缓冲溶液。3、供试液的制备与测定:准确吸取待测溶液1mL,将其稀释1~25倍,再从稀释液中准确吸取1mL,注⼊25mL 的容量瓶中,加⽔4mL 和酒⽯酸亚铁溶液5mL,充分混合,再加pH= 的磷酸盐缓冲溶液⾄刻度,⽤1cm ⽐⾊杯,在波长540nm处,以试剂空⽩溶液作参⽐,测定吸光度。【实验结果】待测溶液中茶多酚的含量⽤下式计算:茶多酚(g/mL)=式中 ——⽤1cm⽐⾊杯,当吸光度等于时,每毫升茶汤中含茶多酚相当于;A ——试样的吸光度X ——待测溶液的稀释倍数Ⅲ酒⽯酸亚铁分光光度法测定茶多酚含量(见《⽣物分离⼯程实验》P128~129)¥百度文库VIP限时优惠现在开通,立享6亿+VIP内容立即获取茶多酚的提取茶多酚的提取茶多酚的提取、精制⼯艺及产品中茶多酚的定量分析【实验⽬的】1、了解茶多酚的性质及⽤途;2、了解植物天然产物常规提取和精制的⽅法;3、掌握茶多酚提取与精制的原理和⽅法;4、掌握茶多酚的分析检测⽅法。【实验材料和仪器】1、仪器第 1 页电动搅拌器离⼼机酸度计真空⼲燥箱抽滤瓶真空蒸发浓缩装置⽔环式真空泵电⼦天平⽔浴锅紫外分光光度计电热恒温⼲燥箱分液漏⽃微量吸管器2、试剂氯化钠碳酸氢钠柠檬酸硫酸铝盐酸亚硫酸氢钠⼄酸⼄酯维⽣素C 磷酸氢⼆钠磷酸⼆氢钾硫酸亚铁酒⽯酸钾钠硫酸没⾷⼦酸丙酯Ⅰ、⼯艺过程及操作⽅法【实验原理】茶多酚是茶叶中30 多种多酚类物质的总称,是⼀类富含于茶叶中、主要由第 2 页表⼉茶素、表没⾷⼦⼉茶素及没⾷⼦酸酯类等组成的多羟基化合物,含量约占茶叶⼲物质总量的20%~30%。茶多酚分⼦中带有多个活性羟基(-OH),可终⽌⼈体中⾃由基链式反应,清除超氧离⼦,类似SOD 之功效。茶多酚对超氧阴离⼦与过氧化氢⾃由基的清除率达98%以上,呈显著的量效关系,其效果优于维⽣素E和维⽣素C。茶多酚还有抑菌、杀菌作⽤,能有效降低⼤肠对胆固醇的吸收,防治动脉粥样硬化,是艾滋病毒(⼈类免疫缺陷病毒,HIV)逆转录酶的强抑制物,有增强机体免疫能⼒,并具抗肿瘤、抗辐射、抗氧化、防衰⽼机理。茶多酚安全、⽆毒,是⾷品、饮料、药品及化妆品的天然添加成分。⽬前茶多酚已在医药、饮料、⾷品、保健等⾏业中⼴泛应⽤。第 3 页由于茶多酚易溶于热⽔,因此本实验⾸先⽤热⽔在⼀定温度下将茶多酚从茶叶中提取出来;然后对茶叶浸提液盐析处理除去部分杂质;再利⽤某些⾦属离⼦与茶多酚形成的络合物在⼀定pH值下溶解度最低的特性,将茶多酚从浸提液中沉淀出来并⾼效地与咖啡碱等杂质分离;经过稀酸转溶将茶多酚游离出来后,⽤对茶多酚具有很好选择性的有机溶剂再次对其进⾏萃取分离;最后将茶多酚萃取液通过真空浓缩、真空⼲燥得到茶多酚精品。【实验步骤】1、浸提:称取⼀定重量过20⽬的茶叶末,加⼊其重量20倍的70℃~95℃的热⽔,搅拌下恒温浸提60min,过滤得茶叶浸提液。取样分析浸提液中茶多酚的含量,计算浸提液中茶多酚的总量、茶多酚的浸提率。第 4 页2、盐析:加氯化钠于茶叶浸提液中,使其质量分数为6%,静置盐析后过滤。3、沉淀:在上述滤液中加⼊茶叶重量2%~5%的NaHSO3,然后加⼊茶叶重量20%的硫酸铝饱和⽔溶液,加热⾄70℃~80℃,⽤15%NaHCO3溶液在快速搅拌下调节pH⾄5~6,此时有⼤量沉淀析出,沉淀⾃然沉降⼀段时间后过滤,最后⽤等体积70℃热⽔洗涤沉淀三次。4、酸溶:将沉淀在快速搅拌下放⼊到茶叶重量3倍的pH=的盐酸⽔溶液中溶解沉淀,控制酸转溶液的pH=,酸溶时间50min,少量胶状沉淀经离⼼分离除去。取样分析计算酸转溶液中茶多酚的含量和总量,计算茶多酚经过盐析、沉淀及酸溶后的回收率。第 5 页5、萃取:加⼊茶叶重量3%的NaHSO3⾄酸转溶液中,然后⽤其体积倍的⼄酸⼄酯萃取3次,每次萃取时间为10min,合并萃取液。取样分析计算萃余相中茶多酚的总量,计算茶多酚的萃取率。6、洗涤:加⼊茶叶重量2%的维⽣素C⾄萃取液体积倍的⽔中,⽤柠檬酸调节⽔溶液的pH=,等分成⼆份对⼄酸⼄酯萃取液洗涤两次。7、蒸发浓缩:将洗涤后的⼄酸⼄酯相在50℃~70℃下真空蒸发回收⼄酸⼄酯,待浓缩成膏状物时,加⼊膏状物2倍体积的⽆⽔⼄醇洗涤挂在壁上的物料,继续浓缩成稠的膏状物。第 6 页8、⼲燥:将膏状物放⼊真空⼲燥箱中,在60℃~90℃下进⾏真空⼲燥,在前1~2h内,将物料搅动⼏次,当物料⼲燥成粉状或⼲的块状时,结束⼲燥。⼲燥时间⼀般4~8h。9、包装保存:将⼲燥好的茶多酚产品转移⾄⾃封塑料袋中,称重、取样后⽴即密封,置⼊棕⾊玻璃⼲燥器中于低(室) 温下避光保存。产品取样⽤于分析产品中茶多酚含量,计算出茶多酚的最终得率。Ⅱ、提取精制过程中及产品中茶多酚含量的分析检测⽅法(⼀)、提取精制过程中茶多酚含量的分析检测第 7 页【实验原理】在⼀定pH值条件下,酒⽯酸铁能与多酚类物质反应形成蓝紫⾊络合物,该络合物在540nm 波长下具有最⼤吸光度。在适当的浓度范围内,茶多酚的含量与络合物的吸光度成正⽐,符合朗伯-⽐尔定律,因此可⽤分光光度法对茶多酚定量分析。【实验材料及步骤】1、酒⽯酸亚铁溶液:称取1g(准确⾄)硫酸亚铁和5g(准确⾄)酒⽯酸钾钠,⽤⽔溶解并定容⾄1L(此液放置过夜后使⽤,可稳定1星期)。2、pH=的磷酸盐缓冲液:a液(1/15mol/L的磷酸氢⼆钠溶液):称取磷第 8 页酸氢⼆钠,加⽔溶解并稀释⾄1L;b液(1/15mol/L的磷酸⼆氢钾溶液):称取经110℃烘⼲2h的磷酸⼆氢钾,加⽔溶解并稀释⾄1L。取a 液85mL和b液15mL混匀,即得pH=磷酸盐缓冲溶液。3、供试液的制备与测定:准确吸取待测溶液1mL,将其稀释1~25倍,再从稀释液中准确吸取1mL,注⼊25mL 的容量瓶中,加⽔4mL 和酒⽯酸亚铁溶液5mL,充分混合,再加pH= 的磷酸盐缓冲溶液⾄刻度,⽤1cm ⽐⾊杯,在波长540nm处,以试剂空⽩溶液作参⽐,测定吸光度。第 9 页【实验结果】待测溶液中茶多酚的含量⽤下式计算:茶多酚(g/mL)=式中 ——⽤1cm⽐⾊杯,当吸光度等于时,每毫升茶汤中含茶多酚相当于;A ——试样的吸光度X ——待测溶液的稀释倍数Ⅲ酒⽯酸亚铁分光光度法测定茶多酚含量(见《⽣物分离⼯程实验》P128~129