研究论文复苏或传代后的细胞

17个细胞凋亡实验方法

传代细胞的培养步骤如下：(1)人无菌室之前用肥皂洗手，用75％酒精擦拭消毒双手；(2)细胞传代前先在倒置显微镜下观察细胞形态，确定细胞是否需要传代及细胞需要稀释的倍数观察；(3)打开超净工作台的紫外灯照射台面30 min左右，关闭超净工作台的紫外灯，打开抽风机清洁空气，除去臭氧；(4)超净工作台面应整洁，用75％酒精溶液擦净；(5)贴壁细胞的传代；(6)半悬浮细胞及悬浮细胞培养的传代。适应在体外培养条件下持续传代培养的细胞称为传代细胞。幼年动物的肾、肺、肝、卵巢、上皮、肌肉与肿瘤等组织的细胞较易培养，而神经细胞则较难培养。原代细胞基础上通过胰酶等物质消化后继续用于细胞培养的细胞，它与原代细胞具有相同核型。这类细胞在体外可以无限制分裂。

1、附着型胞(adherentcell)

（1）吸掉旧培养液。

（2）用D-PBS洗涤细胞一至二次。

（3）加入trypsin-EDTA溶液(1ml/25cm2,2ml/75cm2)，37℃作用数分钟，于倒立显微镜下观察，当细胞将要分离而呈现圆粒状时，吸掉trypsin-EDTA溶液。(若不移去trypsin-EDTA，则在trypsin-EDTA作用后，加入适量含血清之新鲜培养基终止trypsin作用，离心后再吸掉上清液。

（4）轻拍培养瓶使细胞自瓶壁脱落，加入适量之新鲜培养基，以吸管上下吸放数次以打散细胞团块，混和均匀后，依稀释比例转移至新的培养瓶中，以正常培养条件培养。

2、悬浮型细胞(suspensioncell)

（1）吸出细胞培养液，放入离心管中，离心1000rpm5分钟。

（2）吸掉上清液，加入适量之新鲜培养基，混和均匀后，依稀释比例转移至新的培养瓶中，以正常培养条件培养。

3、融合瘤(hybridoma)

有些hybridomacell需培养三天以上才会产生抗体，若是更换培养基，则可能会失去抗体。因此继代培养不需离心后更换培养基，直接添加新鲜培养基稀释细胞浓度即可。若体积太大，可倾斜放置，或分殖至新培养瓶中。

扩展资料：

传代方法：

1、悬浮生长细胞传代

多采用离心法传代。1000转/分,20-30秒后去上清。沉淀细胞加新培养液后再混匀传代。亦有直接传代 法，即悬浮细胞沉淀在瓶壁时，将上清培养液去除1/2-1/3，然后用吸管直接吹打形成细胞悬液再传代.

2、半悬浮生长细胞传代（Hela细胞）

此类细胞部分呈现贴壁生长现象，但贴壁不牢，可用直接吹打法使细胞从瓶壁脱落下来，进行传代。

3、贴壁生长细胞传代

采用酶消化法传代。常用的消化液有0.25%的胰蛋白酶液。

参考资料来源：百度百科-传代培养

我个人觉得有这样几个问题：虽然看上去状态不错，但总不如指数期的细胞那样状态好，如膜蛋白表达等影响质粒、病毒转染；有一些细胞因子水平、能量代谢等可能达不到要求，影响质粒表达效率；复苏后的第一瓶细胞，如没有几次换液，总会残留些DMSO；如果有污染可能在复苏后的第一瓶看不出来，因为目的细胞数量占优，等传代后就显现出来了；总之我觉得似乎不值得节省这点时间或材料费用吧