编辑小鼠的基因鉴定实验报告

1、在实验中需要的注意事项？（1）肝匀浆一定要磨得较细，细胞彻底破碎。（2）在细胞内的核酸通常是与蛋白质形成复合物而存在———核糖核蛋白和脱氧核糖核蛋白。核蛋白在水溶液和各种电解质溶液中有一定的溶解度，所以在前面研磨步骤将损失一部分核酸。因此应避免加入大量的水进行研磨，以减少核蛋白的溶解（3）避免液体洒在离心机上面或钻头上。（4）启动离心机后，离心机如有不正常反应或噪音，应立即停止离心。（5）离心管需平衡后才对称放入离心机。 2、DNA和RNA在组成上有什么区别？如何鉴别？DNA和RNA组成上戊糖与嘧啶碱基不同。核糖经与强酸（盐酸与硫酸）共热生成糠醛，后者和3，5-二羟甲苯缩合生成绿色化合物；而脱氧核糖在强酸中加热，可生成-羟基-γ-醛酮戊醛，后者再与二苯胺作用生成蓝色化合物。 3、如何防止核酸酶降解所带来的误差？①选取核酸酶含量较低的材料，如小牛胸腺细胞等。②在制备肝匀浆时，应尽量在冰冷条件下进行，并尽快加入含 0l mol ／ L 柠檬酸钠的 14mol/L 氯化钠溶液，以抑制脱氧核糖核酸酶，防止 DNA 的分解，以提高核酸的量。

做小鼠胚胎发育的研究人员一般喜欢用LacZ，也就是将LacZ置于一个启动子的调节之下。用LacZ可以进行胚胎全身染色(whole body staining)，这样可以了解一个基因在体内的表达谱全貌。如果做细胞跟踪，比如免疫细胞，神经细胞等，一般喜欢用荧光蛋白。 这样一是容易对细胞进行分离(比如FACS)和体外分析，二是容易对分离的细胞进行体内追踪(比如Adoptive transfer)。早些年用的最多的是EGFP和EYFP。有的时候，我们需要将两种不同的reporter小鼠交配在一起，研究两个基因的关系，这时可以将两个基因采用不同的荧光蛋白进行标记，也就是做两种不同的模式小鼠。赛业生物科技有限公司在生物技术方面十分专业。赛业生物已服务全球数万名科学家，产品和技术已直接应用于包括CNS（Cell，Nature, Science）三大期刊在内的学术论文。除了提供基因敲除、基因敲入、条件性基因敲除模型定制服务外，赛业生物还有专业的手术疾病模型团队，可以提供多种复杂精细的小动物手术疾病模型；药物筛选评价小鼠平台可以提供从欧美行业领袖引进的免疫缺陷鼠、用于心血管及阿尔茨海默症等研究的人源化小鼠；国际标准化无菌鼠技术平台可以提供无菌鼠、无菌动物定制服务、微生物菌群移植服务等基于无菌动物模型的各类产品和服务，结合赛业生物成熟稳定的基因编辑小鼠平台，还可帮助您研究菌群与基因的互作机制。

通常基因敲除小鼠鉴定都是利用鼠尾提取的DNA为模板做PCR鉴定并测序，当然，如果是利用胚胎干细胞的同源重组方法制备的，注射前就已经对重组的胚胎干细胞做过Southern鉴定了，如果是利用Cas9技术制备的，通常在获得F1代杂合子小鼠时还应进行Southern鉴定，毕竟Southern才是基因敲除鉴定的金标准。