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如何使用CRISPR编辑你的基因
利用基因同源重组进行基因敲除基因敲除是80年代后半期应用DNA同源重组原理发展起来的。80年代初，胚胎干细胞(ES细胞)分离和体外培养的成功奠定了基因敲除的技术基础。1985年，首次证实的哺乳动物细胞中同源重组的存在奠定了基因敲除的理论基础。到1987年，Thompsson首次建立了完整的ES细胞基因敲除的小鼠模型。直到现在，运用基因同源重组进行基因敲除依然是构建基因敲除动物模型中最普遍的使用方法。诱导性基因敲除也是以Cre/loxp系统为基础，但却是利用控制Cre表达的启动子的活性或所表达的Cre酶活性具有可诱导的特点，通过对诱导剂给予时间的控制或利用Cre基因定位表达系统中载体的宿主细胞特异性和将该表达系统转移到动物体内的过程在时间上的可控性，从而在1oxP动物的一定发育阶段和一定组织细胞中实现对特定基因进行遗传修饰之目的的基因敲除技术。人们可以通过对诱导剂给予时间的预先设计的方式来对动物基因突变的时空特异性进行人为控制、以避免出现死胎或动物出生后不久即死亡的现象。常见的几种诱导性类型如下：四环素诱导型；干扰素诱导型;激素诱导型;腺病毒介导型。
科学家使用基因编辑技术治愈小白鼠，癌症被攻克只是时间问题。
基因小鼠模型作为新型实验动物模型能有效反映人体细胞免疫反应特征、临床免疫治疗和评价等具有重要的意义;针对人群MHC优势基因型的转基因小鼠模型不仅对新型疫苗研究具有极大推动作用。本文对人MHC转基因小鼠模型的研究状况及进展进行了分析和简要综述,而且对免疫基础研究和疾病模型建立。同时报告了针对我国人群MHC限制性特征研发的2种人MHC转基因小鼠(HLA-A2/DP4转基因小鼠和HLA-A11/DR1转基因小鼠)的研究结果
如果我没记错的话，“转基因超级鼠”应该在初中和高中生物里都提到过，这项研究被称为分子生物学技术发展史上的里程碑。最早好像是两个美国实验小组一起研制出来的，把小鼠变成了大鼠。转基因鼠比与它同胎所生的小鼠生长速度快两到三倍，体积大一倍。利用的技术应该叫“显微注射技术”。使用核尚未融合的受精卵是因为要事先将大鼠的生长激素基因在显微镜下注入受精卵,再使受精卵内的卵细胞核或精子核结合,这样才能使其中携带着转入的基因。
国家的还在努力，科学家也还在努力。我们也要对他们抱有希望。
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1、在实验中需要的注意事项？（1）肝匀浆一定要磨得较细，细胞彻底破碎。（2）在细胞内的核酸通常是与蛋白质形成复合物而存在———核糖核蛋白和脱氧核糖核蛋白。核蛋白在水溶液和各种电解质溶液中有一定的溶解度，所以在前面研磨步骤将损失一部分核酸。因此应避免加入大量的水进行研磨，以减少核蛋白的溶解（3）避免液体洒在离心机上面或钻头上。（4）启动离心机后，离心机如有不正常反应或噪音，应立即停止离心。（5）离心管需平衡后才对称放入离心机。 2、DNA和RNA在组成上有什么区别？如何鉴别？DNA和RNA组成上戊糖与嘧啶碱基不同。核糖经与强酸（盐酸与硫酸）共热生成糠醛，后者和3，5-二羟甲苯缩合生成绿色化合物；而脱氧核糖在强酸中加热，可生成-羟基-γ-醛酮戊醛，后者再与二苯胺作用生成蓝色化合物。 3、如何防止核酸酶降解所带来的误差？①选取核酸酶含量较低的材料，如小牛胸腺细胞等。②在制备肝匀浆时，应尽量在冰冷条件下进行，并尽快加入含 0l mol ／ L 柠檬酸钠的 14mol/L 氯化钠溶液，以抑制脱氧核糖核酸酶，防止 DNA 的分解，以提高核酸的量。
做小鼠胚胎发育的研究人员一般喜欢用LacZ，也就是将LacZ置于一个启动子的调节之下。用LacZ可以进行胚胎全身染色(whole body staining)，这样可以了解一个基因在体内的表达谱全貌。如果做细胞跟踪，比如免疫细胞，神经细胞等，一般喜欢用荧光蛋白。 这样一是容易对细胞进行分离(比如FACS)和体外分析，二是容易对分离的细胞进行体内追踪(比如Adoptive transfer)。早些年用的最多的是EGFP和EYFP。有的时候，我们需要将两种不同的reporter小鼠交配在一起，研究两个基因的关系，这时可以将两个基因采用不同的荧光蛋白进行标记，也就是做两种不同的模式小鼠。赛业生物科技有限公司在生物技术方面十分专业。赛业生物已服务全球数万名科学家，产品和技术已直接应用于包括CNS（Cell，Nature, Science）三大期刊在内的学术论文。除了提供基因敲除、基因敲入、条件性基因敲除模型定制服务外，赛业生物还有专业的手术疾病模型团队，可以提供多种复杂精细的小动物手术疾病模型；药物筛选评价小鼠平台可以提供从欧美行业领袖引进的免疫缺陷鼠、用于心血管及阿尔茨海默症等研究的人源化小鼠；国际标准化无菌鼠技术平台可以提供无菌鼠、无菌动物定制服务、微生物菌群移植服务等基于无菌动物模型的各类产品和服务，结合赛业生物成熟稳定的基因编辑小鼠平台，还可帮助您研究菌群与基因的互作机制。
通常基因敲除小鼠鉴定都是利用鼠尾提取的DNA为模板做PCR鉴定并测序，当然，如果是利用胚胎干细胞的同源重组方法制备的，注射前就已经对重组的胚胎干细胞做过Southern鉴定了，如果是利用Cas9技术制备的，通常在获得F1代杂合子小鼠时还应进行Southern鉴定，毕竟Southern才是基因敲除鉴定的金标准。
第一步将要做的基因放在载体上；第二步线性化并纯化，线性化的时候注意不要切割到影响基因表达的位置（启动跟表达区不要断开）第三步就是显微注射受精卵，注意受精卵在没有融合的情况下注射；第四步就是移值到假孕鼠了；第五步过二十来天生小鼠；第六步就是鉴定工作了，阳性一般都是所要的转基因鼠，完毕。
如何使用CRISPR编辑你的基因
一、获取目的基因（根据人们的需要选）二、制作重组质粒。必须的，否则进去不表达。三、转化受体细胞。选受精卵。外源基因易表达。四、目的基因产品检验。
neo 在小鼠基因型鉴定中起什么作用基因敲除小鼠已经成为现代生命科学基础研究和药物研发领域不可或缺的实验动物模型，在生命科学、人类医药和健康研究领域中发挥着重要的作用。基于胚胎干细胞的基因打靶技术、EGE技术（基于Crispr cas9技术）是当下比较火热的基因敲除小鼠制备技术。利用这两种技术制备基因敲除小鼠的流程是什么样的？一、 基于胚胎干细胞的基因打靶技术制备基因敲除小鼠的流程： 课题设计，订购课题BAC菌； 按照课题设计，完成打靶载体设计和构建； 将重组载体电转到胚胎干细胞中，用G418筛选转染后的胚胎干细胞，得到阳性克隆； 进一步通过PCR和southern blot杂交技术（基因敲除小鼠检测金标准）对上一步得到的阳性克隆进行筛选，得到稳定整合外源基因的胚胎干细胞阳性克隆； 将胚胎干细胞阳性克隆注射到小鼠囊胚中，并植入到假孕小鼠的子宫内； 得到嵌合鼠，并获得F1阳性杂合子小鼠。基于胚胎干细胞的基因打靶技术制备基因敲除小鼠是目前为止唯一一个可以满足几乎所有基因组修饰要求的打靶技术，但目前只应用在小鼠的基因敲除上，而且其周期长工作量大。二、 利用EGE技术（基于Crispr cas9技术）制备基因敲除小鼠的流程 设计构建识别靶序列的sgRNA; 设计构建致靶基因切割的EGE系统载体质粒； 利用百奥赛图自主开发的UCA试剂盒对sgRNA/Cas9进行活性检测； 设计构建打靶载体； 体外转录sgRNA/Cas9 mRNA; 小鼠受精卵原核注射sgRNA/Cas9 mRNA和打靶载体； 获得Fo代小鼠，利用PCR对Fo代小鼠进行基因型鉴定； 获得F1代小鼠，利用PCR和southern blot杂交技术（基因敲除小鼠检测金标准）对F1代小鼠进行基因型鉴定。虽然EGE技术（基于Crispr cas9技术）制备基因敲除小鼠看似比基于胚胎干细胞的基因打靶技术制备基因敲除小鼠流程繁琐，其实不然，EGE技术（基于Crispr cas9技术）系统构建简单，基因敲除/敲入效率高，速度快，可实现多基因、多物种基因敲除/敲入，最快2个月即可得到F0代阳性鼠，5个月得到F1F1代杂合子小鼠。
小鼠模型建立方式有很多种，传统的有药物、饮食诱导或手术方式构建，另外也有通过基因编辑的方式来构建，包括基因敲除小鼠、基因敲入小鼠、点突变小鼠、人源化修饰小鼠等等。鉴定方式可以通过qPCR验证、测序或蛋白鉴定等。大大满足了目前的研究需求。