大鼠生存条件要求简单,饲养成本低,在医学实验 中常用于大批量实验动物研究。研究疾病和药物最常 见的生物样本就是大鼠血清或血浆。由于大鼠体积较 小,在短期内对其进行多次采血会存在一定的困 难M,而且还要考虑采血后大鼠能不能存活。因此采 用合适的采血方法是获取宝贵血液样本的关键M。
汤海涛等0报道应用临床麻醉使用的硬膜外导管进 行大鼠颈静脉置管并输液,达到了理想的效果。本实 验尝试应用硬膜外导管进行大鼠颈静脉置管后进行短 期多次抽血,获得了成功,现将方法报告如下。
1材料与方法
1.1材料SPF级SD大鼠20只,雄性,体质量250 ~ 350 g,由湖北省 实验动物研究中心提供。常规灭菌手术器械,自制鼠板,医用 硬膜外导管、硬膜外导管接头、采血试管,2 mL注射器,生理盐 水,0.5%碘伏,医用棉签,医用无菌纱布,4-0号线,乙醚。
1.2术前准备选择硬膜外导管有多个小孔的原始圆滑头端,剪一段长 10 cm的导管,硬膜外导管接头连接该段导管尾端,接头再与注 射器相连,将导管内和接头预冲生理盐水备用。
1.3方法大鼠采用乙醚吸入麻醉(乙醚对所检测项目结果无影响) 后,仰卧位固定于鼠板上。剃去大鼠颈部任一侧的被毛,常规 消毒手术区域。提起大鼠颈部的皮肤,剪1个0.2 ~0. 3 cm的小口,游离皮下组织,钝性分离出长约1.5 cm颈静脉血管,在 血管下穿过摆放2根44号线,一根结扎颈静脉远心端血管,另 一根放置于近心端备用。小心用镊子提起颈静脉的中间部位, 使用眼科剪在静脉管壁上向心方向将血管壁全层剪1个“V” 形小口,约占静脉周长的1/3 ~1/2,由助手提起两端结扎线,适 当调节插管处颈静脉的粗细和松紧,以减少大鼠出血量,同时 便于将导管置入2.5 ~3 cm,推抽与导管末端相连的注射器,可 见有血回流且推注顺畅后,44号线结扎固定近心端导管,松紧 适宜并把插管缝合在颈部肌肉上,以免导管被拔出。在完成当 天多次采血任务后,拔出导管,缝合切口充分止血后,实验大鼠 单独喂养。
1.4置管后维护在搬动大鼠时动作轻柔,防止人为扯掉插管;由于大鼠苏 醒状态易躁动导致管道脱落,在不影响实验结果的情况下可对 大鼠进行持续乙醚吸入麻醉,但要注意观察大鼠呼吸和心跳, 以防过度麻醉导致大鼠死亡。每次采血完毕,采用临床常用的 中心静脉导管维护方法对管道进行彻底冲管和封管处理,防止 堵管。
2 结果
20只实验大鼠,1只在麻醉过程中死亡,其余均顺利完成 置管,置管成功率为100%。术后1只(5.3% )管道脱落,2只 (10.5% )出现堵管现象,18只(94.7% )顺利完成采血任务。 术后大鼠均无感染发生,均存活至下次手术。
3 讨论
车兆义等63详细比较了大鼠实验中腹主动脉采 血法、眼眶后静脉丛的采血法、心脏穿剌采血方法、尾 尖采血方法及颈静脉采血法等各种方法的优缺点,采 血方法不同会影响实验的结果。当需要多次采血时, 要考虑到选取的方法能否连续多次采血、采集的血样 是否溶血影响实验结果、每次米血量是否足够、米血后 动物能不能存活等因素。有文献报道使用注射器经皮 经颈静脉直接穿剌取血可取得较好的效果M,但是该 方法不适用于采血不顺利时严格按照时间要求进行的 采血操作。临床上中心静脉置管主要用于危急重症患 者的抢救、静脉营养支持、快速补液以及中心静脉压的 检测等69。大鼠通过颈静脉完成中心静脉置管后,经 过良好的维护和管理,可以达到短期多次采血的目的。
使用硬膜外导管进行大鼠颈静脉置管,宜尽量使 用原有带侧孔的硬膜外导管头端,此端光滑不易穿破 血管壁,可以减少对血管的损伤。若将导管置入端剪 成斜面,虽较易置入血管,但因其锐利容易穿破血管, 必须对锐利头端进行打磨处理。硬膜外导管一般剪约 10 cm长度,过短则不便操作,易导致脱管的发生,过 长则血液滞留管腔过多,不利于彻底冲管,导致堵管的 概率增加。导管置入深度适宜,置入过浅导管容易脱 出,置入过深则易致心律失常的发生。本组实验 中导管一般置入颈静脉深度为2.5 ~3 cm。
术中分离大鼠颈静脉须小心谨慎,彻底分离静脉 是顺利完成插管的重要步骤、应尽量去除血管外壁的 结缔组织与脂肪组织M。一般分离后较粗的静脉,经 过剪切口的剌激,静脉立即收缩变细M ,增加了插管 的难度。同时硬膜外导管质地较软,在切口处要反复 多次尝试插管,易造成血管壁损伤,而血管壁损伤是插 管堵塞的原因之一614。本组实验有1只大鼠发生插 管时堵塞,可能与此有关。
由于大鼠实验前禁食禁水,使大鼠血液浓缩,黏稠 度高于平常,发生血栓的可能性增高。为避免肝素抗 凝剂对药物浓度的影响,封管液中一般不加入肝素钠。 每次采血后应用中心静脉导管封管技术,以生理盐水 立即冲管和封管以保持管道通畅。采血时,首先以0 mL注射器抽出导管内混有生理盐水的血液0.5 mL 并舍弃,以避免生理盐水混入血液标本中,再另取一支 空注射器采集到足够合乎要求的血液标本,最后用生 理盐水0.5 mL冲洗导管并封管。所有冲洗、封管均采 用脉冲式,以达到彻底冲尽接头处的血液,避免残留在 接头的血液堵管或影响下次药物浓度的准确性。采血 间隙,一般每30 min就行1次生理盐水脉冲式冲管。 本组实验1例采血过程中出现堵管,考虑与冲管间隔 时间过长、冲封管不彻底有关。
硬膜外导管价廉、易得,在大鼠颈静脉置入硬膜外 导管,并进行短期多次采血应用于大鼠药物浓度监测 可靠、经济,值得推广。