【关键词】 s100a9;钙结合蛋白类；卵巢肿瘤；芯片分析技术；免疫组织化学
【摘要】 目的 探讨s100a9在上皮性卵巢肿瘤组织表达及意义。方法 采用组织芯片技术和免疫组化方法检测22例正常卵巢、20例良性卵巢上皮性肿瘤、63例上皮性卵巢癌组织中s100a9的表达，同时对蛋白表达进行定位。结果 上皮性卵巢癌中s100a9表达明显高于正常卵巢组织和良性上皮性卵巢肿瘤，差异有显著意义（f=52.548,q=5.766、18.331,p<0.05）。s100a9在上皮性卵巢癌ⅲ～ⅳ期、低分化及有大网膜转移时表达明显高于相应对照组，差异有显著意义（t=4.03、3.43、3.27,p<0.05），而其表达与病理类型、有无腹水及淋巴结转移无关（p>0.05）。20例癌组织s100a9细胞核表达，其余为细胞质表达。结论 s100a9可能参与了上皮性卵巢肿瘤的发生、发展、转移过程。
【关键词】 s100a9;钙结合蛋白类；卵巢肿瘤；芯片分析技术；免疫组织化学
expression of s100a9 and its significance in epithelial ovarian tumors
li bo, cui zhumei, zheng ye
(department of gynecology, the affiliated hospital of qingdao university medical college, qingdao 266003, china) ;
［abstract］ objective to investigate the expression and its significance of s100a9 in epithelial ovarian tumors. methods using tissue microarray and immunohistochemical technique, the expression and location of s100a9 were examined in tissues of epithelial ovarian carcinoma (eoc, 63 cases), benign epithelial ovarian tumor (beot, 20) and normal ovary (22). results the expression of s100a9 in eoc was higher than that in normal ovary and beot (f=52.548;q=5.766,18.331;p<0.05). the expression of s100a9 in stage ⅲ-ⅳ eoc, in poorly differentiated and with greater omentum metastasis was higher than that of the control (t=4.03,3.43,3.27;p<0.05). as compared with the control, the difference of the expression of s100a9 was not significant in terms of the types of pathology, ascites and lymph node metastasis (p>0.05). s100a9 expression located in nucleus was seen in 20 cancer samples, and that of the rest was in cytoplasm. conclusion s100a9 is likely involved in the pathogenesis, development and metastasis of epithelial ovarian cancers.
［key words］ s100a9; calciumbinding proteins; ovarian neoplasms; array analytical technique; immunohistochemistry
上皮性卵巢癌约占全部卵巢恶性肿瘤的90%，其发展速度快，容易发生腹腔内种植转移，预后差。www.133229.COm至今, 对其发生、发展机制所知甚少。s100a9与多种上皮来源肿瘤的发生、转移关系密切,但其在卵巢癌中表达的研究报道尚不多见。本研究应用组织芯片技术和免疫组化方法，检测并比较s100a9在上皮性卵巢肿瘤和正常卵巢组织中表达水平的差异，探讨其与上皮性卵巢肿瘤的发生、发展、转移的关系。现将结果报告如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
上皮性卵巢癌组织63例，为2005年9月—2007年6月我院手术切除的标本，病人年龄17～77岁，术前均未行放化疗及其他辅助治疗。临床分期（figo 2000）：ⅰ～ⅱ期22例，ⅲ～ⅳ期41例；浆液性腺癌47例，黏液性腺癌9例，透明细胞癌3例，子宫内膜样腺癌2例，brenner瘤1例，混合性（透明细胞癌、浆液性腺癌）1例；有大网膜转移38例，无大网膜转移25例；高、中分化13例，低分化50例；有腹水34例，无腹水29例；有淋巴结转移19例，无淋巴结转移44例。良性卵巢上皮性肿瘤20例，其中黏液性囊腺瘤10例，浆液性囊腺瘤10例。同时，选取同期因子宫肌瘤而行手术治疗的正常卵巢组织22例作为对照组。所有组织标本均经同一病理医师复检，证实诊断。
1.2 s100a9表达检测方法
制作组织芯片，并采用pv9000二步法进行染色。一抗选用s100a9兔抗人单克隆抗体，按照pv9000试剂盒说明书操作。以食管癌组织切片作为阳性对照；以pbs代替一抗作为阴性对照。
1.3 结果判定
低倍镜下观察切片，选择癌细胞较密集处，换高倍镜（200倍）随机观察5个视野，每个视野计数100个细胞，计算每个视野中阳性细胞数，取其平均值。对不足5个高倍视野者，计数组织中全部细胞数。s100a9阳性表达为细胞核或细胞质呈棕黄色染色,根据着色强度及阳性细胞百分比进行评分。染色强度评分：无着色为0分，淡黄色（弱阳性）为1分，棕黄色（中等染色强度）为2分，棕褐色（强阳性）为3分。阳性细胞百分率评分：阳性细胞<1%为0分,1%～25%为1分,26%～50%为2分,51%～75%为3分,76%～100%为4分。免疫反应得分(即每个标本的加权分数)为阳性细胞百分率得分与免疫染色强度得分的乘积。计算63例上皮性卵巢癌中s100a9表达的平均值,≥6分为高表达,<6分为低表达。
1.4 统计学方法
采用spss 11.5软件进行数据处理,结果以±s表示, 两组间资料比较采用t检验，多组间资料比较采用方差分析、snk法，p＜0.05为差异有显著性。
2 结果
2.1 s100a9蛋白在不同卵巢组织中的表达
正常卵巢组织中s100a9的表达水平为1.14±1.83，良性卵巢上皮性肿瘤组织为4.50±1.24，上皮性卵巢癌组织为6.13±1.54，良性卵巢上皮性肿瘤组织s100a9的表达水平高于正常卵巢组织，上皮性卵巢癌组织s100a9的表达水平明显高于正常卵巢及良性卵巢上皮性肿瘤组织，差异有显著性（f=52.548,q=5.766～18.331,p<0.05）。上皮性卵巢癌中47例s100a9高表达； 43例s100a9表达在细胞浆，20例表达在细胞核，s100a9在癌组织中表达强度不均一，部分区域表达密集。
2.2 s100a9蛋白的表达水平与上皮性卵巢癌临床病理特征的关系
卵巢癌组织的分期越晚，s100a9表达水平越高，差异有显著意义（t=4.03，p＜0.05）。卵巢癌组织s100a9的表达随分化程度的降低而增高，差异有显著意义（t=3.43，p＜0.05）。 s100a9在有大网膜转移组的卵巢癌组织中的表达高于无大网膜转移组，差异有显著意义（t=3.27，p＜0.05）。而有、无腹水及淋巴结转移组s100a9的表达差异无显著意义(t=0.77、0.07，p>0.05)。不同病理类型的卵巢癌组织中s100a9的表达比较，差异无显著意义(f=1.415,p>0.05)。见表1。表1 上皮性卵巢癌组织中 s100a9表达与临床病理特征的关系（略）
3 讨论
s100a9蛋白(又被称为calgranulin b蛋白、mrp14蛋白)属钙结合蛋白s100蛋白家族成员，s100蛋白是一组参与细胞周期活动、细胞分化、肿瘤生长以及细胞外基质分泌活动的钙结合调节蛋白,其调控基因位于人染色体1q21上[12]。该区稳定性差,易发生染色体的缺失、易位、重叠等改变,与肿瘤的发生关系密切。近年来研究显示，在多种疾病包括肿瘤组织中有s100a9表达，提示s100a9表达有可能作为临床疾病诊断及评估的新指标。
本文结果显示，上皮性卵巢癌组织中s100a9的表达明显高于正常卵巢组织。在病理分期晚、组织分化程度低、有大网膜转移的上皮性卵巢癌组织中，s100a9的表达较高。已有研究表明，s100a9在肝癌、结直肠癌、乳癌、肺腺癌等腺细胞来源的肿瘤中表达均上调，且肿瘤的分化程度越低，s100a9的阳性表达率越高[35]，本文实验结果与其结论相一致。s100a9可依赖p38mapk信号转导途径，使mmp9表达上调[6]，而mmp9在判断卵巢恶性肿瘤的侵袭、转移及恶性程度和预后评估中具有较为重要的临床意义[7]。唐锟等[8]研究显示，s100与mmp7的表达呈正相关，且s100与胆管癌组织神经浸润转移有关，故我们推测，s100a9在卵巢组织癌变过程中可能发挥一定作用，并与上皮性卵巢癌的发展、转移有关。 s100a9在宫颈鳞癌、食管鳞状细胞癌中表达下调，说明在不同来源的肿瘤发生过程中，s100a9发挥的生物学作用及调控机制可能不同。s100蛋白通过抑制p53蛋白的活性促进肿瘤发生,但其具体机制仍待进一步研究。
kim 等[9]研究显示，结直肠癌中s100a9在肿瘤间质的特异性肿瘤浸润的细胞中高水平表达；而在子宫颈鳞癌中，s100a9蛋白表达阳性的细胞仅见于角化细胞所分布的区域[10]，说明s100a9的表达具有细胞特异性。本研究显示，s100a9在卵巢癌组织中也呈不均一、选择性表达，鉴于s100a9表达的调节与dna的甲基化有关，且s100a9蛋白的稳定性与细胞内ca2+密切相关，推测可能通过基因干预及ca2+的调节来控制s100a9蛋白的表达，从而达到控制卵巢癌的进展过程。
综上所述，s100a9作为与肿瘤发生、发展紧密相关的因子，其在上皮性卵巢癌表达均明显高于正常卵巢及卵巢良性肿瘤组织，且癌组织分期越晚，分化程度越低, s100a9的表达越高。说明s100a9蛋白在卵巢肿瘤的发生中可能起到了比较重要的作用，其可能参与了卵巢肿瘤的发展过程，有望成为一个新的卵巢肿瘤早期诊断及病情监测的指标，并为卵巢癌的治疗提供新的思路。
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