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孕妇感染HCMV时IgG抗体亲和力与HCMV DNA联合检测的

2015-08-04 08:50 来源:学术参考网 作者:未知

【摘要】 目的:本文通过研究HCMV-IgG亲和力指数(avidity index,AI)以及HCMV-DNA的检测,对孕产妇原发性感染及继发性感染进行综合评价。旨在为防止和减少围产期感染、流产及新生儿先天畸形、听力障碍和智力障碍提供有效而准确的检测数据及临床诊断依据。方法:采用德国Virion/serion公司酶联免疫吸附试验(ELISA)定量试剂,检测孕妇血清中HCMV的IgM和IgG抗体、IgG抗体亲和力;采用中山医科大学达安公司RV核酸扩增(PCR)荧光定量检测孕妇血清中HCMV-DNA,并对其结果进行分析。结果:341例孕妇中,HCMV-IgG低亲和力样本孕产史不良孕妇组所占比例显著高于初次妊娠孕妇。孕产史不良孕妇HCMV-DNA阳性例数所占比例显著高于初次妊娠孕妇。结论:341例孕妇中存在一定比例的HCMV现症感染,建议妊娠妇女尤其是有不良孕产史者尽可能同时进行HCMV-IgG亲和力指数及HCMV-DNA检查,以便尽早采取措施,避免由于HCMV感染导致的新生儿出生缺陷的发生。
  【关键词】 孕妇; 巨细胞病毒; 亲和力指数; HCMV DNA
  The Clinical Significance of IgG Avidity in Pregnant Women Infected with HCMV and HCMV DNA Detection/DONG Yu-lin.//Medical Innovation of China,2012,9(28):008-010
  【Abstract】 Objective:This article through the study of HCMV-IgG avidity index (avidity the index, AI) and HCMV-DNA detection, maternal primary infection and secondary infection of a comprehensive evaluation. Designed to prevent and reduce perinatal infections, abortion and neonatal congenital malformations, hearing impairment and mental retardation to provide effective and accurate test data and clinical diagnosis is based on.Method:Using the German Virion / serion enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) quantitative reagent, detected in maternal serum of HCMV IgM and IgG antibodies and IgG avidity; Zhongshan Medical University, Tat RV nucleic acid amplification (PCR) fluorescence quantitative detection maternal serum levels in HCMV-DNA, and the results were analyzed.Result:341 cases of pregnant women,maternal history of poor pregnant women group of HCMV-IgG low affinity sample proportion was significantly higher than the initial pregnancy. The adverse pregnancy history of pregnant women HCMV-DNA positive proportion of the number of cases was significantly higher than the initial pregnancy.Conclusion:341 cases of pregnant women in a certain proportion of HCMV now disease infection,it is recommended that pregnant women especially those with history of adverse pregnancy by as much as possible HCMV-IgG avidity index and HCMV-DNA checks in order to take early measures to avoid due to HCMV infection causes the occurrence of birth defects.
  【Key words】 Pregnant women; Human cytomegalovirus; Avidity index; HCMV DNA
  First-author’s address:Yan’an Hospital of Kunming,Kunming 650051,China
  doi:10.3969/j.issn.1674-4985.2012.28.004
  巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)为疱疹病毒科β属的线性双链DNA病毒,感染人类的巨细胞病毒简称HCMV(human cytomegalovirus)。巨细胞包涵体病是巨细胞病毒通过胎盘传播的,孕妇感染巨细胞病毒是导致围产期感染、流产、死胎、早产、先天畸形、听力障碍及智力障碍的主要原因之一。本文通过研究341例孕妇的HCMV-IgG亲和力指数(avidity index,AI)以及HCMV-DNA的检测,对孕产妇原发性感染及继发性感染进行综合评价。

1 资料与方法
  1.1 一般资料 选择2010年5月-2012年7月在昆明市延安医院进行检查的门诊孕妇341例。应用定量ELISA技术检测其HCMV-IgM及HCMV-IgG抗体,根据检测结果及妊娠史将之分为初次妊娠孕妇组(237例)及孕产史不良孕妇组(104例)。104例孕产史不良妇女中,习惯性流产47例,胚胎停止发育38例,胎儿畸形6例,死胎11例,智力低下儿2例。根据HCMV-IgG或IgM抗体测定结果又分为四组:A组IgM(-)/IgG(+);B组IgM(+)/IgG(+);C组IgM(+)/IgG(-);D组IgM(-)/IgG(-)。
  1.2 标本采集与保存 所用孕产妇均为空腹静脉采血。抗体检测抽血4~5 ml,2 h内分离血清。-18~-20 ℃保存备用,一周内完成检测。HCMV-DNA检测抽血1 ml,EDTA抗凝,当天完成检测。所有检测由专人完成。
  1.3 HCMV抗体定量检测及亲和力检测 采用定量ELISA技术检测孕妇血清中HCMV的IgM和IgG抗体、IgG亲和力试剂。试剂为德国Virion/serion(维润赛润)有限公司产品。酶标仪为美国BioRad公司产品。酶标检测定量判断软件由德国维润赛润公司提供。操作严格按照试剂说明书进行操作,每批样本检测均进行室内质控。质控品与样本同时检测,室内质控每次检测在控。
  1.3.1 HCMV抗体阳性判断临界值 CMV-IgM为10~15 U/ml;CMV-IgG为25~40 U/ml;低于临界值下限的判断为阴性,高于临界值上限的判为阳性。并对可疑样本进行核实复查。
  1.3.2 HCMV抗体亲和力指数的测定 通过上述检测判定为IgG阳性的血清样本,进行亲和力检测。根据维润赛润公司提供的软件计算样本的AI值。AI<45%为低亲和力抗体,表示原发性感染(少于4周)。AI介于45%~55%为中等亲和力抗体,AI>55%为高亲和力抗体,后两者提示既往HCMV感染(包括病毒再感染)。
  1.4 FQ-PCR检测血清HCMV DNA 采用RV核酸扩增(PCR)荧光定量检测。试剂为中山医科大学达安基因公司产品。检测仪器为ABI prism 7000型核酸扩增实时荧光检测仪。操作严格按照试剂说明书提取DNA及PCR扩增。每次试验严格按照试剂盒提供的阳性标准品做标准曲线,试验设阴性、阳性及空白对照。
  1.5 统计学处理 采用SPSS 17.0软件对数据进行统计学处理,多组样本间采用 字2检验进行比较,检验水准α=0.05。
  2 结果
  2.1 各组间 HCMV IgG亲和力指数检测结果见表1。
  167例初次妊娠孕妇与95例孕产史不良孕妇抗体亲和力检测结果如表1所示,经 字2检验,HCMV-IgG低亲和力样本孕产史不良孕妇所占比例显著高于初次妊娠孕妇,差异有统计学意义( 字2=10.229,P<0.05)。初次妊娠A组中164例全为高亲和力样本,提示HCMV隐性感染。B组中3例样本中1例为低亲和力抗体,提示原发感染,2例为高亲和力抗体提示与继发感染有关。孕产史不良孕妇A组5例(6.25%)HCMV-IgG阳性患者为低亲和力抗体,提示HCMV原发感染后期。B组3例(20%)样本为低亲和力抗体,提示存在原发感染;4例样本为中等亲和力抗体,提示1-3月内的既往原发感染;8例样本为高亲和力抗体样本,提示与继发感染有关。
  2.2 各组间HCMV-DNA检测结果见表2。
  237例初次妊娠孕妇与104例孕产史不良孕妇HCMV-DNA检测结果如表2所示,经 字2检验,孕产史不良孕妇阳性例数所占比例显著高于初次妊娠孕妇,差异有统计学意义( 字2=60.567,P<0.05)。237例初次妊娠组中,有2例HCMV-DNA阳性。104例孕产史不良组中,有36例HCMV-DNA阳性均提示胎儿有感染风险。孕产史不良D组中,1例样本HCMV-DNA阳性,提示患者可能处于HCMV感染窗口期,抗体还未出现,但HCMV-DNA已可检测出。孕产史不良B组中,亲和力试验表明15例样本中有7例存在原发感染及1~3月内的既往原发感染,但HCMV-DNA中有9例样本阳性,表明继发感染中可能存在新毒株再次感染使HCMV-DNA可被检出。
  3 讨论
  我国孕妇中HCMV-IgG抗体阳性率高达80%~100%,孕妇感染HCMV可发生在妊娠的各个时期,可由原发感染和继发感染引起。以往HCMV-IgM一直被认为是HCMV活动性感染与潜伏性感染的评价指标[1]。本文中,对HCMV的原发与继发性感染进行了评估,目前检测HCMV-IgG亲和力广泛应用的检测方法即亲和力试剂法[2]。本文通过检测HCMV-IgM/IgG先筛选出341名孕妇,分组后通过检测IgG抗体亲和力指数评估两组孕妇HCMV的原发性感染及继发感染情况,同时对两组孕妇的血样进行HCMV-DNA检测,用以评估胎儿的感染风险。
  巨细胞病毒是造成先天性伤害的最常见原因。在怀孕期间,母亲的HCMV原发感染对于胎儿的危险明显高于继发感染。因为巨细胞的继发感染同样会形成IgM抗体,所以不能单独通过检测病原体特异性IgM抗体来确定原发感染。Bodeus等[3]报道,IgG亲和力指数高的孕妇,即使IgM阳性,仍可判定为HCMV继发感染,不需要做产前诊断。此外,在巨细胞病毒IgM抗体测定时,经常能观察到和诸如疱疹病毒的交叉反应。因此,测定巨细胞病毒IgG抗体的亲和力可以作为重要证据,以此弄清HCMV IgM阳性结果是否和急性HCMV感染有关。通过对两组研究对象的HCMV-IgG阳性样本进行亲和力指数评估后发现,HCMV-IgG低亲和力样本中孕产史不良孕妇所占比例显著高于初次妊娠孕妇,差异有统计学意义。初次妊娠组中,0.42%为原发感染,70.04%为既往感染,其中隐性感染占69.20%。孕产史不良孕妇组中,7.69%为原发感染,22.12%为既往原发感染,61.54%为既往感染,其中隐性感染占53.85%。

 荧光定量PCR技术是通过荧光信号的定量监测来实现PCR过程中产物的检测,并精确计算出PCR初始模板量,融合了PCR的敏感性、DNA杂交的特异性和光谱技术精确定量等优点。从两组研究对象的HCMV-DNA检测结果可以发现,孕产史不良孕妇阳性例数所占比例显著高于初次妊娠孕妇,差异有统计学意义。初次妊娠组阳性感染率为0.84%。孕产史不良孕妇组阳性感染率为36.54%。很显然,有不良孕产史孕妇HCMV感染率更高。Boppana等[4]对孕期HCMV感染致不良妊娠结局病例中HCMV分离株的gH基因测序并检测到了新的毒株。提示孕妇HCMV继发感染中由新毒株再次感染者,其宫内感染胎儿出生后多表现出临床症状。而体内潜在感染病毒被激活者,受累胎儿出生时则多无临床表现。本文中,孕产史不良孕妇B组中,亲和力指数试验表明15例样本中有7例存在原发感染及1~3月内的既往原发感染,但HCMV-DNA测定中有9例样本阳性,表明继发感染中可能存在新毒株再次感染使HCMV-DNA可被检出。孕产史不良孕妇组中38例HCMV-DNA阳性,其中一例HCMV-IgM阴性,提示患者可能处于HCMV感染窗口期,抗体还未出现,但HCMV-DNA已可检测出。因此,采用HCMV-DNA检测早期感染患者可以避免窗口期漏检。另外,Revolle等[5]报道,有免疫能力的孕妇,一般只在原发感染时发生病毒血症,在感染后的数月内,其外周血可以检测到病毒DNA。在病毒血症期间,母体受HCMV感染的白细胞可携带病毒并随血液循环传播病毒。孕妇HCMV继发感染时,外周血中检测不到病毒DNA。本文中,孕产史不良孕妇A组中,亲和力指数试验表明80例样本中有24例存在原发感染及1~3月内的既往原发感染,但HCMV-DNA测定中有21例样本阳性,进一步证明了上述观点。同时,应用RT-PCR的方法检测孕妇血中病毒DNA,结果阳性还可表明存在HCMV活动性感染。
  综上所述,荧光定量PCR检测可以准确的反映出患者体内HCMV感染及其病毒复制情况,通过病毒复制判断感染的严重程度,指导临床用药和疗效观察[6]。结合HCMV-IgG亲和力指数测定,能很好的反映孕妇是否存在原发感染及活动性感染这些危险因素,从而给临床提供早期诊断和预防胎儿先天畸形的有力依据。
  参考文献
  [1] Revello M G,Gerna G.Diagnosis and management of human cytomegalovirus infection in the mother, fetus, and newborn infant[J].Clin Microbiol Rev,2002,15(4):680-715.
  [2] Seo S, Cho Y, Park J. Serologic screening of pregnant Korean women for primary human cytomegalovirus infection using IgG avidity test[J].Korean J Lab Med,2009,29(6):557-562.
  [3] Bodeus M,Hubinont C,Coubau P.Increased risk of cytomegalovirus transmission in utero during late gestation[J].Obstet Cynecol,1999,93(1):658-660.
  [4] Boppana S B,Rivera L B,Fowler K B,et al.Intrauterine transmission of cytomegalovirus to infants of women with preconceptional immunity[J].N EnglJ Med,2001,344(1):1366-1371.
  [5] Revolle M G,Zavattoni M,Sarasini A,et al.Human cytomegalovirus in blood of immunocompetent persons during primary infection:prognostic implications for pregnaney[J].J Infect Dis,1998,177(1):1170-1175.
  [6] 李晓峰,张锐.荧光定量PCR检测HCMV-DNA的临床意义与探讨[J].中国实验诊断学,2010,14(2):273-274.

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