【摘要】 目的 研究缺铁性贫血（IDA）患者外周血淋巴细胞免疫表型的变化。方法 30例缺铁性贫血患者（IDA组）和30例健康体检者（正常对照组）， 均应用流式细胞仪三色直接免疫荧光法检测淋巴细胞免疫表型。对两组外周血淋巴细胞免疫表型进行比较。结果 IDA组外周血中CD3+、CD3+CD4+及CD4+/CD8+比值显著低于正常对照组（P<0.01）， CD3+ CD8+值高于正常对照组（P<0.05）。结论 缺铁性贫血患者影响机体T细胞的增殖分化， 导致细胞免疫功能障碍和免疫调节机制紊乱。
【关键词】 缺铁性贫血；淋巴细胞免疫表型； 流式细胞仪；骨髓细胞学检查
DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.14.009
Investigation of flow cytometry in examination of lymphocyte immunophenotyping in iron-deficiency anemia patients YANG Hong， MENG Yan， WANG Chao. Department of Inspection， Beijing Fengtai Hospital， Beijing 100070， China
【Abstract】 Objective To research the changes of lymphocyte immunophenotyping in iron-deficiency anemia （IDA） patients. Methods There were 30 iron-deficiency anemia patients （IDA group） and 30 healthy people （normal control group）， and they all received flow cytometry three-color direct immunofluorescent method for detection of lymphocyte immunophenotyping. Comparison was made on the peripheral blood lymphocyte immunophenotyping between the two groups. Results IDA group had much lower levels of CD3+、CD3+CD4+， and CD4+/CD8+ ratio in peripheral blood than the normal control group （P<0.01）， and it also had higher CD3+ CD8+ value than the normal control group （P<0.05）. Conclusion Iron-deficiency anemia may affect proliferation and differentiation of T lymphocyte， resulting in decreased immune functions and immune regulatory dysfunction.
【Key words】 Iron-deficiency anemia； Lymphocyte immunophenotyping； Flow cytometry； Marrow cytology examination
缺铁性贫血是因机体铁的需要量增加和铁吸收减少， 使体内储存铁耗尽而缺乏， 又未得到足够的补充， 导致合成血红蛋白的铁不足而引起的贫血。是人类最常见的慢性疾病之一。淋巴细胞免疫表型是了解机体免疫系统功能的状态。在正常机体内各淋巴细胞亚群的相互作用， 维护着机体正常的免疫功能， 当淋巴细胞亚群的数量和功能发生异常时， 都可导致机体免疫功能紊乱并发生一系列的病理变化。淋巴细胞免疫表型的分析对一些疾病的诊断、治疗、免疫功能重建、器官移植监测等有重要的临床意义。流式细胞仪检测缺铁性贫血与淋巴细胞免疫表型的关系， 国内外报道较少。现将本院2012年1月～2014年12月收治的30例IDA患者进行了外周血淋巴细胞免疫表型（CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+及CD4+/CD8+）的检测， 并与正常人对照。现报告如下。
1 资料与方法
1. 1 一般资料 30例IDA患者作为IDA组， 男5例， 女25例， 年龄23～81岁， 中位年龄46.5岁。血红蛋白48～92 g/L， 红细胞（3.24～4.76）×1012/L， 网织红细胞0.1%～1.0%， 外周血红细胞呈小细胞低色素性改变。骨髓细胞学检查示：骨髓增生明显活跃-活跃， 粒/红比值1.91～4.37， 红系增生活跃， 以中晚幼红细胞为主， 晚幼红细胞核固缩明显。成熟红细胞大小不等， 以小者居多， 中心淡染区明显扩大。骨髓细胞铁染色：外铁（-）， 细胞内铁为0～13%， 骨髓报告：符合缺铁性贫血骨髓象。血清铁2.51～11.5 mol/L， 血清铁蛋白3.15～12.4 ng/L。全部病例服用铁剂治疗有效。另选健康体检者30例作为正常对照组， 其中男10例， 女20例， 为血常规、血清铁、铁蛋白各项指标均在正常范围内， 且无其他器质性病变。两组一般资料比较， 差异无统计学意义（P>0.05）， 具有可比性。
1. 2 仪器与试剂 采用美国BD FACSCalibur流式细胞仪， 三色标记McAb：CD3FITC/CD4PE/CD45PerCP、CD3FITC/CD8PE/CD45PerCP、红细胞裂解液、荧光校准微球 calibrate 3 Beads均购自美国BD公司。
1. 3 方法
1. 3. 1 样品的制备 各管分别加入CD3FITC/CD4PE/CD45 PerCP、CD3FITC/CD8PE/CD45PerCP荧光抗体20 μl， 再分别加入新鲜EDTA-K3抗凝外周血100 μl， 混匀， 室温避光孵育 20 min， 加入 1∶9 配制的溶血素 2 ml， 避光 10 min。2000 r/min 离心5 min， 倒掉上清液， 加入 PBS 缓冲液 2 ml， 2000 r/min 离心5 min。去上清， 加入500 μl PBS混匀待测。
1. 3. 2 流式细胞仪测定 以荧光微球calibrite 3-colour校准仪器补偿、使仪器分辨率CV<2%达到最佳工作状态， 采用MultiSET 软件获取数据。建立SSC/CD45Percp、CD4PE/CD3 FITC、SSC/CD3FITC荧光点图， 用CD45-PerCP/SSC-Gating和Back-Gating 细胞群双圈门以排除碎片的干扰， 调节 FSC、SSC、Detectors/Amps、Copensation， FL1-FL 2% 、FL2-FL 1% 荧光补偿， 每管获取1.5万个细胞， 建立CD4+/CD3+、CD8+/CD3+散点图， Th（CD4+）和Ts（CD8+）的表达情况， 同时计算出 Th/Ts 比值。
1. 4 统计学方法 应用SPSS11.0统计学软件对研究数据进行统计分析。计量资料以均数±标准差（ x-±s）表示， 采用t检验。P<0.05表示差异具有统计学意义。
2 结果
IDA组外周血中CD3+、CD3+CD4+及CD4+/CD8+比值显著低于正常对照组（P<0.01）， CD3+CD8+值高于正常对照组（P<0.05）。见表1。
3 讨论
3. 1 缺铁性贫血是一种全球性疾病， 虽然随着现代物质生活条件的改善， 各种营养缺乏性疾病已大为减少， 但缺铁性贫血仍然是人们所面临的威胁健康的一大难题。为了了解缺血性贫血对机体免疫系统功能的影响， 本试验通过流式细胞仪三色免疫标记法观察30例成人缺铁性贫血外周血淋巴细胞免疫表型的变化， 总结出缺铁性贫血主要影响机体的细胞免疫功能， 可引起细胞免疫功能障碍和免疫调节紊乱。
3. 2 淋巴细胞是免疫系统的重要组成部分， 在人体细胞免疫中发挥核心作用。T 细胞免疫主要通过T 细胞的增殖分化来实现， 这是一个消耗能量
、依赖核酸及蛋白质合成的复杂过程。CD3+ CD4+ T 细胞是辅助性/诱导性T淋巴细胞（Th细胞）， 也是迟发性超敏反应的启动者、促使B细胞产生抗体的辅助细胞、抑制性T淋巴细胞的诱导细胞；CD3+CD8+ T 细胞是抑制性/细胞毒性T细胞（Ts细胞）， 是细胞毒性T 细胞介导反应的效应细胞， 也是抑制B细胞产生抗体的抑制性细胞； 当CD4+/CD8+比值发生变化时， 可引起机体免疫功能降低。从而影响淋巴细胞的增殖和分化， 使T淋巴细胞功能受损， 导致免疫功能低下和免疫调节紊乱。
3. 3 缺铁性贫血可对多系统造成危害， 但对免疫功能的具体影响具有争议。Salaman 等认为， IDA 可影响人体整个免疫系统， 使特异性和非特异性免疫功能均下降； 本研究从机体免疫功能角度出发， 分析IDA 对人体免疫功能的影响， 结果发现IDA 患者CD3+、CD3+CD4+T细胞比例减少、CD3+CD8+ T 细胞比例升高， 提示IDA影响T细胞的增殖分化， 导致细胞免疫功能障碍和免疫调节机制紊乱。
参考文献
张之南， 沈悌. 血液病诊断及疗效标准. 北京： 科学出版社， 2007：6-9.
王建中. 流式细胞术分析血液淋巴细胞免疫表型方法学研究. 中华检验医学杂志， 2000， 23（4）：203-206.
王腊梅， 周红彬. 3～6岁缺铁性贫血患儿免疫功能变化研究 . 西南军医， 2004， 6（4）：9-10.
礼征南， 王亚男， 董敏， 等. T-淋巴细胞亚群在血液病中的诊断应用. 中国医药前沿， 2010， 5（4）：63-64.
罗运贵， 包勇， 罗媛， 等. 缺铁性贫血患儿123 例免疫功能低下相关分析. 四川医学， 2002， 23（11）：1189-1190.
吴斌， 杨滨， 陈素清. 缺铁性贫血患儿腺苷脱氨酶活性改变 . 中华血液学杂志， 1997， 18（6）：332-333.
