【关键词】乙型肝炎；tnf-α基因；单核苷酸多态性（snps）；单体型
摘要：目的探讨肿瘤坏死因子α（tnfα）基因启动子区238g/a、-857t/c、-863c/a与乙型肝炎病毒（hbv）感染结局之间的关系。方法采用病例-对照研究方法，募集244例hbv自限性感染者、212例hbsag携带者和391例慢性乙型肝炎患者作为研究对象，应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（pcr-rflp）方法，对（tnf-α）基因启动子区-238g/a、-857c/t、-863c/a基因型进行测定。结果自限性感染者携带-238a等位基因的频率显著低于hbsag携带者（p=0.04）和慢性乙肝患者（p=0.047）；慢性乙肝患者携带tnf-α-857c等位基因的频率显著高于hbsag携带者（p=0.0008）和自限性感染者（p=0.03）；慢性乙肝者tnf-α-863a等位基因频率显著高于hbsag携带者（p=0.02）。应用多元logistic回归分析，控制年龄、性别等混杂因素后，慢性乙肝患者与hbv自限性感染者比较，tnf-α-857cc和tnf-α-238ga与慢性乙肝显著关联（or=1.53,p=0.044;or=2.11，p=0.045）；慢性乙肝患者与hbsag携带者比较，tnf-α-857cc与慢性乙肝显著关联（or=1.92,p=0.004）；hbsag携带者与hbv自限性感染者比较，tnf-α-238ga与hbsag携带者显著关联（or=2.34,p=0.020）。wwW.11665.coM结论tnf-α基因启动子区多态性可能是影响hbv感染结局的重要危险因素。
关键词：乙型肝炎；tnf-α基因；单核苷酸多态性（snps）；单体型
relationshipbetweenpolymorphismsoftnf-αgenepromoterregionandhbvinfectionoutcome
couchunyan,lihongquan,lizhuo,etal.
youanhospitalaffiliatedtocapitaluniversityofmedicalsciences(beijing100069,china)
abstract：objectivetodeterminewhenther-238g/a,-857t/cand-863c/apolymorphismsoftumornecrosisfactor-alphya(tnf-α)genepromoterwereassociatedwithoutcomesofhepatitisbvirus(hbv)infection.methodsatotalof244hbvself-limitedinfectedsubjects,212asymptomatichbsagcarriers(hbsagcarriers)and391chronichepatitisb(hb)patientswererecruitedtoconductacase-controlstudy.tnf-α-238g/a,-857c/tand-863c/agenepromoterpolymorphismswereexaminedbypolymerasechainreaction-restrictionfragmentlengthpolymorphism(pcr-rflp).resultsthefrequencyof-238alleleainself-limitedindividualswas2.6%,significantlylowerthan5.0%inchronichbpatientsand5.3%inhbsagcarriers(p=0.04andp=0.047),respectively.thefrequencyoftnf-α-857allelecinchronichbpatientswas87.5%,significantlyhigherthan80.5%inhbsagcarriersand82.8%inself-limitedindividuals(p=0.0008andp=0.03),respectively.thefrequencyoftnf-α-863alleleainchronichbgroupwas77.5%,significantlyhigherthan71.5%inhbsagcarriers(p=0.02).multiplelogisticregressionanalysesindicatedanincreasedriskofchronichbassociatedwithtnf-α-238gaand-857ccaftergenderandageadjusting(or=1.53,p=0.044;or=2.11,p=0.045),andhbsagcarrierswith-857ccsignificantlyincreasingriskofchronichbassociatedwithtnf-α-238gaand-857ccaftergenderandageadjusting(or=1.53,p=0.044;or=2.11,p=0.045),anhbsagcarrierswith-857ccsignificantlyincreasingriskofchronichb(or=1.92,p=0.004),and-238gaassociatedwithandincreasingriskofhbsagcarriers(or=2.34,p=0.020).conclusiontnf-αpromoterpolymorphismisprobablyanimportantriskfactoroftheinfluenceofoutcomeofhbvinfection.
keywords：hepatitisb;tumornectosisfactor-alpha(tnf-α)gene;singlenucleotidepolymorphisms(snps);genotype
乙型肝炎的治疗是亟待解决的全球性公共卫生问题〔1〕。感染乙型肝炎病毒(hbv)后可产生自限性感染、hbsag携带者、慢性乙肝多种不同临床结局。hbv感染结局多样性一直是研究者关注的问题，从遗传易感性角度探讨其原因是一个重要研究方向。细胞因子在抵抗病毒感染中起重要作用，它能够间接和直接抑制病毒复制〔2〕。肿瘤坏死因子α（tnf-α）的转录水平与tnf-α启动子区单核苷酸多态性有关〔3〕。本研究比较了tnf-α启动子区-238g/a、-857c/t及-863c/a基因型在自限性感染、hbsag携带状态和慢性乙肝3种不同hbv感染结局者中分布频率的差异，探讨tnf-α基因多态性与hbv感染结局关系。
1对象与方法
11对象采用病例对照研究，于2002年11月～2004年3月在北京佑安医院募集慢性乙肝患者391例，hbsag携带者244例，自限性感染者212例。研究对象的诊断参照2000年中华医学会传染病分会，肝病学会联合修订病毒性肝炎防治方案的标准〔4〕。所有研究对象均自愿同意参加本次研究。受试者均为
tnf-α启动子区-238g/a〔5〕、-857c/t〔6〕和-863〔7〕。
14统计分析采用foxpro60软件建立数据库，sas612软件进行t检验、fisher精确概率法和χ2检验，进行组间比较，所有的p值均由双侧检验确定。采用非条件logistic回归模型进行多因素分析。
2结果
21一般人口学持征慢性乙肝患者391例(其中男性311例，女性80例)，hbsag携带者244例，其中男性140例，女性104例；自限性感染者212例，其中男性110例，女性102例。慢性乙型肝炎病人、hbsag携带者、hbv自限性感染者3组人群的平均年龄分别为332，307和337岁。
22tnf-α启动子区基因多态性与hbv感染结局的关系
221tnf-α-238g/a位点等位基因及基因型频率在3组研究对象中的分布慢性乙肝患者与hbsag携带者携带tnf-α-238a等位基因的频率差异无统计学意义(p=079)；自限性感染者携带a等位基因的频率显著低于hbsag携带者(χ2=435，p=004)和慢性乙肝患者(χ2=396，p=0047)。3组人群均未检测到tnf-α-238aa基因型。慢性乙肝组与hbv携带组tnf-α-238的gg、ga基因型分布差异无统计学意义(p=078)。对照人群自限性感染组gg及ga基因型分布符合hardy-weinberg平衡(p=071)，并与慢性乙肝患者(χ2=413，p=004)及hbsag携带者(χ2=455，p=003)的基因型分布差异有统计学意义。
222tnf-α-857c/t位点等位基因及基因型频率在3组研究对象中的分布慢性乙肝患者携带tnf-α-857c等位基因的频率为875%，高于hbsag携带者的805%(χ2=112，p=00008)和自限性感染者的828%(χ2=496，p=003)；hbsag携带组与自限性感染组比较差异无统计学意义(p=038)。慢性乙肝组中tnf-α-857cc、ct及tt基因型的频率分别为798%，153%和49%，hbsag携带组和hbv自限性感染组这3种基因型频率分别为680%，250%，70%和70.3%，250%，47%。对照人群自限性感染组的基因型分布符合hardy-weinberg平衡(p=007)。慢性乙肝组的基因型频率分布与hbsag携带组(χ2=113，p=0004)和自限性感染组比较差异有统计学意义(χ2=847，p=0015)，但后两者差异无统计学意义(p=059)。
223tnf-α-863c/a位点等位基因及基因型频率在3组研究对象中的分布慢性乙肝组tnf-α-863位点等位基因a频率为775%，高于hbsag携带者的715%(χ2=576，p=002)；hbv自限性感染组为741%，与慢性乙肝组和hbsag携带组比较差异无统计学意义(p=018，p=039)。慢性乙肝组cc、ca及aa基因型频率为87%、276%和637%，与hbsag携带组的152%，266%和582%比较差异有统计学意义(χ2=641，p=004)。对照人群hbv自限性感染组cc、ca及aa基因型频率为90%，340%和570%，其分布符合hardy-weinberg平衡(p=009)。hbv自限性感染组与hbsag携带组和慢性乙肝组比较差异无统计学意义(p=006；p=024)。
23基因多态性与hbv感染结局关联的多元logistic回归分析为控制年龄、性别等因素引起的混杂偏倚影响，采用多元非条件logistic回归分析，tnf-α-238/-857/-863与hbv感染不同结局的关联性分析。结果显示，在控制了年龄、性别混杂因素后，慢性乙肝病人和hbv自限性感染者比较，携带tnf-α-857cc基因型者感染hbv后，较携带tnf-α-857tt或ct基因型者发生慢性乙肝的风险增加(or=153；p=0044)，而携带tnf-α-238ga者则较tnf-α-238gg携带者发生慢性乙肝的风险增加(or=211；p=0045)；慢性乙肝病人和hbsag携带者比较，携带tnf-α-857cc基因型者较携带tnf-α-857tt或ct者增加成为慢性乙肝的风险(or=192；p=0004)；hbsag携带者和hbv自限性感染者比较，携带tnf-α-238ga者在感染hbv后，较gg基因型者增加发展为hbsag携带者的风险(or=234；p=0020)。
3讨论
编码tnf-α的基因位于人类第6号染色体短臂hla-ⅲ类基因区内。它可调节hla-ⅱ类分子和黏附分子的表达。本研究以慢性乙肝病人作为病例组，hbv自限性感染组作为对照组进行分析比较时，感染hbv后携带tnf-α-238ga基因型者成为慢性乙肝的风险增加，当以hbsag携带者作为病例组，自限性感染组作为对照组进行分析比较，感染hbv后携带tnf-α-238ga基因型者成为hbsag携带者的风险也增加。本研究观察到慢性乙肝患者携带tnf-α-857c等位基因的频率，显著高于hbsag携带者hbv自限性感染者。调整年龄、性别等因素的混杂作用后，tnf-α-857cc仍然是影响hbv感染结局(慢性乙肝和hbsag携带)的危险因素。结果提示，tnf-α启动子区的等位基因与hbv感染后的结局相关，tnf-α启动子区基因多态性在清除hbv中可能发挥了重要作用。其机制可能与基因多态性影响tnf-α转录水平，从而降低血清tnf-α水平，导致炎症连锁反应降低有关〔8〕。
参考文献
〔1〕wangfs.currentstatusandprospectsofstudiesonhumangeneticallelesassociatedwithhepatitisbvirusinfection［j］.worldjgastroenterol,2003,9:641-644.
〔2〕kozielmj.cytokinesinviralhepatitis［j］.seminliverdis,1999,19:157-169.
〔3〕koulentakim,notasg,petinakie,etal.nitricoxideandpro-inflammatorycytokinesinacutehepatitisb［j］.eurjinternmed,2004,15:35-38.
〔4〕中华医学会
传染病与寄生虫病学会分会，肝病学分会.病毒性肝炎防治方案［j］.中华传染病杂志，2000，8：324-329.
〔5〕chucj,hussainm,lokasf,etal.hepatitisbvirusgenotypebisassociatedwithearlierhbeagseroconversioncomparedwithhepatitisbvirusgenotypec［j］.gastroenterology,2002,122:1756-1762.
〔6〕masl,tangnl,lamlc,etal.associationbetweentumornecrosisfactor-alphapromoterpolymorphismandalzheimer'sdisease［j］.neurology,2004,62:307-309.
〔7〕skoogt,hooftfm,kallinb,etal.acommonfunctionalpolymorphism(casubstitutionatposition-863)inthepromoterregionofthetumornecrosisfactor-alpha(tnf-alpha)geneassociatedwithreducedcirculatinglevelsoftnf-alpha［j］.humanmoleculargenetics,1999,8:1443-1449.
〔8〕hohlert,krugera,gerkeng,etal.atumornecrosisfactor-alpha(tnf-α)promoterpolymorphismisassociatedwithchronichepatitisbinfection［j］.clinexpimmunol,1998,111:579-582.
(文涛编辑郑新校对)
*基金项目：北京市科委重大项目(h020920020590)
作者单位：首都医科大学附属北京佑安医院，北京100069；
