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银杏内酯B衍生物对血栓形成的抑制作用

2015-07-04 09:48 来源:学术参考网 作者:未知

作者:崔姣,潘苏华,刘成鼎,许惠琴

【摘要】   【目的】 观察银杏内酯b衍生物(xq)对实验性血栓形成的影响。【方法】选用sd雄性大鼠随机分为模型对照组,曲克芦丁组(剂量为48 mg·kg-1·d-1),银杏内酯b(gb)组(剂量为78 mg·kg-1·d-1),xq低、中、高剂量组(剂量分别为39、78、156 mg·kg-1·d-1)。分别采用颈动—静脉旁路法复制血栓模型及电刺激法复制混合血栓模型,观察xq对血栓形成的影响。选用icr雄性小鼠随机分为模型对照组,曲克芦丁组(剂量为96 mg·kg-1·d-1),gb组(剂量为156 mg·kg-1·d-1),xq低、中、高剂量组(剂量分别为78、156、312 mg·kg-1·d-1)。采用5腺苷二磷酸二钠盐(adp)致小鼠急性肺血栓模型,观察xq对血栓形成的影响。【结果】xq中、高剂量组均能显著减轻大鼠动脉血栓的湿、干质量(与模型对照组比较,p<005或p<001),显著延长大鼠混合血栓形成时间(与模型对照组比较,p<005)。xq高剂量组对小鼠急性肺血栓形成有抑制作用,并可显著缩短小鼠的喘促持续时间(与模型对照组比较,p<005)。wWW.133229.cOm【结论】 xq具有一定的抗血栓形成作用。

【关键词】 银杏内酯b衍生物/药理学 血栓形成/中药疗法 疾病模型,动物 大鼠 小鼠

  abstract: objectiveto observe the effect of ginkolide b derivative (xq) on animal thrombosis. methodssd male rats were randomized into the model group, troxerutin (48 mg·kg-1·d-1) group, ginkolide b(78 mg·kg-1·d-1) group, and low, middle and highdose xq (in the dose of 39, 78 and 156 mg·kg-1·d-1 respectively) groups. the antithrombotic effect of xq was observed on rats mixed thrombosis model induced by arteriovenous shunt method and electrical stimulation. meanwhile, icr male mice were randomized into the model group, troxerutin (96 mg·kg-1·d-1) group, ginkolide b(156 mg·kg-1·d-1) group, and low, middleand highdose xq (in the dose of 78, 156 and 312 mg·kg-1·d-1 respectively) groups. the antithrombotic effect of xq was also observed on mice acute pulmonary embolism model induced by adenosine diphosphate (adp).resultsxq at the dose of 78 and 156 mg·kg-1·d-1 decreased the dry and wet weight of the thrombosis, and obviously prolonged the formation time of rats carotid artery thrombosis as compared to the model group (p<005 or p<001). xq in the dose of 312 mg·kg-1·d-1 shortened dyspnea duration in mice with acute pulmonary embolism (p<005 compared to the model group). conclusionxq has certain antithrombotic effect.

  key words: ginkolide b derivative/pharmacology;thrombogenesis/tcd therapy;disease models,animal;rats;mice

  银杏内酯b是银杏科银杏属植物银杏(ginkgo biloba l.)的提取物,其在心脑血管方面的药用价值已经被全世界所公认[1]。银杏内酯b衍生物(xq)是在母体的基础上增加了水溶性的基团,前期实验研究[2]表明xq体内外给药能抑制血小板活化因子(paf)、5腺苷二磷酸二钠盐(adp)、酸溶性胶原(col)、花生四烯酸(aa)等诱导血小板的聚集。为进一步研究xq的药理作用机制,本实验观察了其对体内外血栓形成的影响,现报道如下。

  1 材料与方法

  1.1 受试药物及药品

  银杏内酯b衍生物(xq)由南京柯菲平医药科技有限公司提供,批号:060301;银杏内酯b(gb),为白色结晶体,分子量为4244 g/mol,由合肥标品生物技术有限公司提供,批号:051001;曲克芦丁注射液由天津药业焦作有限公司提供,批号:05072721。
 
  1.2 试剂
 
  adp为sigma公司产品,批号:yy1124b056w,氯化钠注射液为南京小营制药有限公司产品,批号:2005090101,戊巴比妥钠由中国医药(集团)上海化学试剂公司(进口分装)提供,批号:f20020405,肝素钠注射液为江苏万邦生化医药股份有限公司产品,批号: 0601101,葡甲胺为成都科东化工有限公司产品,批号:20060320。

  1.3 实验动物

  雄性清洁级sd大鼠,体质量250~280 g,由中国人民解放军医学动物实验中心(南京军区南京总医院)提供,生产许可证号:scxk(苏)20030004。spf级icr小鼠,体质量20~22 g,乾元浩生物股份有限公司南京生物药厂提供,生产许可证号:scxk(苏)20020030。

  1.4 实验仪器
 
  fa2104上皿电子天平为上海精科公司产品,bt873型实验性体内血栓形成测定仪由包头医学院心血管研究室提供,dhg9123a型电热恒温鼓风干燥箱由上海精宏实验设备有限公司提供。

  1.5 方法

  1.5.1 xq 对颈动—静脉旁路丝线上血栓形成的影响 [3-4]取雄性sd大鼠48只,按体质量随机分为6组,即模型对照组,曲克芦丁组(剂量为48 mg·kg-1·d-1),gb组(剂量为78 mg·kg-1·d-1),xq低、中、高剂量组(剂量分别为39、78、156 mg·kg-1·d-1)。各组均尾静脉给药,容积为5 ml/kg,连续5 d,模型对照组给予等容积的生理盐水。给药第5天,大鼠以10 mg/l戊巴比妥钠溶液(30 mg/kg)麻醉,分离右颈总动脉及左颈外静脉。在3段聚乙烯管中放入1根长约6 cm的4号手术丝线。以50 u/ml肝素生理盐水溶液充满聚乙烯管腔,当管的一端插入左颈外静脉后,从聚乙烯管注入肝素(50 u/kg),夹住管壁,将管的另一端插入右颈总动脉,然后尾静脉给药。给药5 min后开放血流并计时,15 min后中断血流。迅速取出丝线称质量,用总质量减去丝线质量即为血栓湿质量。将丝线70 ℃烘干,取出称质量,总质量减去丝线质量即为血栓干质量。按下列公式计算抑制率:p抑制,湿质量(%)=(m湿,对照组 – m湿,给药组)/m湿,给药组×100%;p抑制,干质量(%)=(m干,对照组 – m干,给药组)/m干,给药组×100%。

  1.5.2 xq对电流损伤大鼠颈总动脉内膜后混合血栓形成的影响[4-5]分组及给药方法同151项下。给药第5天,大鼠以10 mg/l戊巴比妥钠溶液(30 mg/kg)麻醉,分离右侧颈总动脉(长约15 mm),用塑料薄膜与附近组织隔开,在动脉近心端放刺激电极,远心端下放连接仪器的温度测头,然后尾静脉给药。给药5 min后,打开仪器开关,以16 ma直流电刺激动脉7 min,使刺激部位的血管内皮受损,激活血小板和凝血系统,管腔混合血栓逐渐形成,血流逐渐阻断,当血流完全阻断时,远端温度突降,仪器报警,显示堵塞时间(t堵塞),即血栓形成时间。

  1.5.3 xq对adp致小鼠肺血栓形成的影响[6-7]取健康雄性icr小鼠60只,随机分为6组,即模型对照组,曲克芦丁组(剂量为96 mg·kg-1·d-1),gb组(剂量为156 mg·kg-1·d-1),xq低、中、高剂量组(剂量分别为78、156、312 mg·kg-1·d-1)。各组均尾静脉给药,容积为10 ml/kg,连续5 d,模型对照组给予等容积的生理盐水。末次给药后15 min,按200 mg/kg尾静脉注射adp溶液,形成急性肺血栓(小鼠呼吸喘促、不能自主活动),记录注射adp后至小鼠恢复自主活动的时间。

  1.6 统计学方法采用excel软件处理数据。

  2 结果

  2.1 各组对大鼠颈动—静脉旁路丝线上血栓形成的影响

  表1 结果显示:xq中、高剂量组均能显著减轻大鼠动脉血栓的湿、干质量,与模型对照组比较差异有非常显著性意义(p<005或p<001);曲克芦丁组及gb组也能减轻大鼠动脉血栓的湿、干质量,与模型对照组比较差异有显著性意义(p<005)。表1各组对大鼠颈动—静脉旁路丝线上血栓形成的影响(略)

  2.2 各组对电流损伤大鼠颈总动脉内膜后血栓形成的影响

  表2 结果显示:xq 中、高剂量组,曲克芦丁组和gb组均能显著延长血栓形成时间,与模型对照组比较差异有显著性意义(p<005)。表2各组对电流损伤大鼠颈总动脉内膜后
血栓形成的影响(略)

  2.3 各组对adp致小鼠急性肺血栓形成的影响

  表3 结果显示:xq 高剂量组及曲克芦丁组对adp诱发的小鼠急性肺血栓形成有抑制作用,均可缩短小鼠的喘促持续时间,与模型对照组比较差异有显著性意义(p<005)。表3各组对adp致小鼠急性肺血栓形成的影响(略)

  3 讨论

  大多数心脑血管疾病发生的前提是动脉粥样硬化血栓的形成,血小板的活化在血栓形成过程中发挥重要的作用[8]。血栓形成主要取决于血管内膜受损、血液成分改变及血流异常3个基本要素。血小板活化、黏附、聚集易造成微循环淤滞,还可损伤血管内皮,释放生长因子,促进平滑肌增殖,从而导致动脉粥样硬化[9]。血栓按照发生的部位分为静脉血栓和动脉血栓。静脉血栓主要由于血流缓慢或淤滞,凝血因子聚集而导致血液凝固所引起,富含纤维蛋白和红细胞(红血栓)。颈动—静脉旁路丝线上形成的血栓主要是动脉血栓,主要由于血小板相互聚集所引起,血小板的黏附聚集功能对形成的血栓质量有直接影响,稳定的纤维蛋白和血小板组成白血栓。颈动脉电流损伤法形成的血栓主要是混合血栓,红白血栓两者兼而有之[10-11]。

  本研究结果显示:xq能显著抑制实验性动—静脉旁路血栓形成,显著降低血栓干、湿质量,延长电击后混合血栓引起的血管堵塞时间,缩短adp诱发急性肺血栓后小鼠恢复自主活动的时间,表明其抗血栓作用可能与抑制血小板聚集有关。复合血栓诱导剂adp能使纤维蛋白原与相应位点结合,并使血小板内贮存的钙释放,进而促进内源性aa释放而致血小板聚集[12]。xq能使血小板的聚集性减弱,降低血浆黏度,增强纤溶系统,使血小板处于解聚集状态,从而抑制血栓的形成。

  由前期实验研究可知,xq抑制血小板聚集的作用是通过拮抗paf受体而实现的,而且其对adp、aa、col诱导的血小板聚集的半数抑制浓度(ic50)高于银杏内酯b[2]。本实验结果也显示了xq在一定程度上抗血栓形成作用较gb强。xq作为银杏内酯b的衍生物,增加了水溶性,并仍然保持相似的生物活性,作为防治心脑血管疾病的新药具有一定的开发前景。

【参考文献】
  [1]王璇,张慧灵,顾振纶,等.银杏内酯药理作用的研究进展[j].中草药,2005,36(11):1741.

  [2] 韦敏,潘苏华,沈建,等. 银杏内酯b衍生物(xq)对paf、adp等诱导血小板聚集的抑制作用[j].南京中医药大学学报,2007,23(3):179.

  [3] 徐叔云,卞如濂,陈修. 药理实验方法学[m].3版.北京:人民卫生出版社,2002:1281.

  [4] 陈奇. 中药药理研究方法学[m].北京:人民卫生出版社,1993: 571.

  [5] 姜开余,顾振纶,阮长耿,等. wh505对实验性血栓形成的影响及其作用机制[j].中成药,2000,22(11):782.

  [6] 李圣青,张艰,戚好文,等. 小鼠肺栓塞模型的诱导及比较[j]. 第四军医大学学报, 2004,25(15):1379.

  [7] 马世平,刘保林,周素娣,等.西红花总苷的药理学研究ⅱ对血凝、血小板聚集及血栓形成的影响[j].中草药,1999,30(3):196.

  [8] steinhubl s r, moliterno d j. the role of the platelet in the pathogenesis of atherothrombosis[j]. am j cardiovasc drugs,2005,5(6):399.

  [9] 李巍,刘媛,黄艳,等. 维拉帕米对血栓形成及血清一氧化氮水平的影响[j]. 南京医科大学学报,2007,27(10):1080.

  [10]吴明海,孙晓明,管靖华,等. 体外血栓形成的机理研究[j]. 北京生物医学工程,2003, 22(2): 143.

  [11] 朱灵,杨春旭,黎渊弘,等. 蝎龙液浸膏体内外对动物凝血功能及血栓形成的影响[j]. 现代中药研究与实践,2008, 22(4): 22.

  [12] leon c, hechler b, freund m, et al. defective platelet aggregation and increased resistance to thrombosis in purinergic p2y(1) receptornull mice[j]. j clin invest, 1999,104(12):1731.

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