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研三了，老板突然要求写SCI，很是急的想上吊呀！现在已经分到了好几个新的五环三萜类化合物，还有另一个已知的化合物雌马酚（s-equol），雌马酚是个很好的东西（首次从实验样品中分离纯）！由于今年研三 …
我在做GST的重组蛋白，用BL21DE3表达以后一直在沉淀里，低温过夜OD600是1.2诱导的，上清表达量比较低，我表达的是全长的蛋白，大家遇到这种情况是重新构建质粒还是更换感受态啊~求助~~~第三四五泳道的那个蛋白条带是过了GST柱子之后我的目的蛋白 ...
蛋白纯化过程中常遇见一些问题，这里整理了下几个蛋白纯化实验中的遇见的问题及其解决方式。1)我现在手头有个融合蛋白，纯化的时候用助溶剂溶解后做了GST亲和层析，之后用蛋白酶切割后却发现目的蛋白
蛋白沉淀对蛋白纯化来说并不是多么好的方法，因为它只能达到几倍的纯化效果，而我们在达到目的前需要上千倍的纯化。其好处是可以把蛋白从混杂有蛋白酶和其他有害杂质的培养基及细胞裂解物中解脱出来。2．2 缓冲液的更换虽然更换缓冲液不能提高蛋白
蛋白纯化中的一点心得蛋白纯化中的一点心得 1.大肠杆菌表达外源蛋白，在超声破碎的时候，用含有1%triton-X-100的 PBS 悬浮，然后超声 的效果较好，1%triton-X-100的作用还是很明显的，对其他的一些细菌同样起作用，比如链霉菌。
4. 你的蛋白即使没有形成包涵体，破菌上清也有可能是可溶性多聚体，即破菌上清中的目的蛋白结构混乱，与杂蛋白发生疏水聚集（也可能是二硫键错配），形成的聚集体粒径不足以形成胶体或沉淀，导致纯化过程中杂蛋白与目的蛋白一起挂柱，类似第2条。
有没有大神能给我介绍下国内外蛋白纯化系统各自的优缺点啊？公司在考虑购买实验室级别的蛋白纯化系统目前国外我知道的有GE的AKTA,Bio-Rad的Duoflow。国内的有苏州赛谱的SCG蛋白纯化系统，利穗科技的APPSEV，上海闪谱的ClearFirst，上海金达的PPS。
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蛋白沉淀对蛋白纯化来说并不是多么好的方法，因为它只能达到几倍的纯化效果，而我们在达到目的前需要上千倍的纯化。其好处是可以把蛋白从混杂有蛋白酶和其他有害杂质的培养基及细胞裂解物中解脱出来。2．2 缓冲液的更换虽然更换缓冲液不能提高蛋白
蛋白纯化中的一点心得蛋白纯化中的一点心得 1.大肠杆菌表达外源蛋白，在超声破碎的时候，用含有1%triton-X-100的 PBS 悬浮，然后超声 的效果较好，1%triton-X-100的作用还是很明显的，对其他的一些细菌同样起作用，比如链霉菌。
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