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可能有以下的原因： 1.首先要考虑的是你的胶的制作有没有问题，比方说Tris的pH值是不是发生了改变？ 2.电泳缓冲液是不是好的，一般我们的电泳缓冲液都只回收两次就不用了。 3.转膜的时候，是不是把滤纸全部浸润了，胶是不是平的，我又一次胶比膜大，因此没有放平，就出现了有空缺，后来把 ...
上回说到如何进行蛋白质的样品制备、蛋白质定量及 SDS－PAGE 电泳，如果你还没看过，点此详见：《献给初学者：western blot 操作步骤详解》。下面就跟大家讲讲接下来的步骤。转膜 我们实验室使用的是半干转膜电泳槽。
2. 配胶 ：如果刚上手做WB，一定要在配胶前验漏，懒一下说不定就会体验到一遍又一遍配胶一遍又一遍漏掉的绝望。 如果已经很熟悉自己的器材，可以省略。配胶用的架子都是损耗品，这是配胶反复漏液，不管怎么调整都没用的时候才知道的。不过在在损耗初期还是可以凑合用的，方法见下图 ...
一抗孵育时间不足：建议放在4℃过夜结合。. 二抗与一抗不匹配：检查并且选择正确的针对一抗来源的种属的抗体。. 洗膜过度：洗膜时间不宜过长，加入的去垢剂 （detergent）不宜过强或过多，建议使用0.05-0.1%的弱去垢剂Tween-20。. 原文链接：. Western Blot 常见问题 ...
蛋白质从凝胶转移到膜上 蛋白质从凝胶转移到膜上，同时维持其相对位置和分辨率的过程被称为转印。转印可通过三种不同的方法来实现： 简单扩散（Kurien和Scofield，1997）是在凝胶上依次放置膜、一叠干滤纸，并在滤纸上放上重物以促进扩散过程而实现的（Kurien和Scofield，2003）。
图解. 实验方法原理. Western免疫印迹，是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测的方法。. 对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。. 与Southern或Northern杂交方法类似，但Western Blot采用的是聚丙烯 ...
下面的干货一定能帮到你，操作如此之简单，保证你一学就会，做出漂亮的 figures。. 打开 PS，新建画布（国际标准纸张）。. 将 WB 曝光原图拖入到画布中，使用参考线将条带摆正。. 矩形选区选择想要的条带，cltr+ 单击拖动到另一个新建的空白画布中。. 如下 ...
转膜顺序：阴极碳板+海绵+三滤+胶+膜+三滤+海绵+阳极碳板； 3. 转膜条件：0.35 A/250 V/1 h/40 min/冰浴中进行转膜（转膜过程产生大量的热，注意冷却）； （具体转膜时间要根据目的蛋白的大小而定；目的蛋白的分子量越大，需要的转膜时间越长，反之则短。. ） 4 ...
WB 也有潜规则？内参不对，实验白费,抗体,蛋白,实验,细胞,内参 什么是内参？内参是指一种高表达或广泛表达的蛋白，且在各组织和细胞中的表达相对恒定，可作为 WB 技术分析蛋白水平的标准化 …
大分子量蛋白WB师兄有一点小经验要传授给你！英文特生物技术北京有限公司 6月5日点击关注了解更多精彩内容！！ 大分子量蛋白WB一直被大家吐槽难做，各种没结果，今天特意总结了师兄的一些tips给大家，快干了这杯干货！样品制备大分子量蛋白不好提取，因为许多大分子量蛋白是膜蛋白，膜蛋 …
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