关于疫苗制备论文的参考文献

第1章 疫苗的历史、发展和前景11．1 疫苗概念的产生及其历史11．2 疫苗的应用及其效果分析31．3 疫苗研究新技术的发展61．3．1 传统疫苗71．3．2 基因工程疫苗71．4 疫苗对消灭和控制动物传染病的发展前景8参考文献8第2章 疫苗免疫学基本理论92．1 疫苗相关免疫学基础92．1．1 免疫系统92．1．2 免疫器官92．1．3 免疫细胞112．1．4 抗原132．1．5 抗体152．1．6 免疫球蛋白的基本结构和功能162．2 免疫应答的基本过程172．2．1 非特异性免疫应答172．2．2 特异性免疫应答192．3 疫苗有效免疫反应的基本要素222．3．1 抗原方面的因素222．3．2 机体方面的因素222．3．3 免疫方法的影响232．4 疫苗免疫的主动免疫反应232．4．1 抗原提呈232．4．2 抗原竞争242．4．3 体液免疫和细胞免疫反应的动态变化252．4．4 免疫反应的调节252．4．5 免疫记忆和免疫促进效应262．4．6 全身性免疫、局部免疫和初乳免疫272．4．7 被动免疫28参考文献28第3章 疫苗佐剂303．1 疫苗佐剂的作用机理303．1．1 调节免疫303．1．2 提呈抗原313．1．3 细胞毒性T细胞应答313．1．4 储存作用323．2 植物佐剂323．2．1 皂苷类323．2．2 免疫刺激复合物佐剂323．2．3 蜂胶佐剂333．2．4 香菇多糖343．2．5 云芝多糖343．2．6 黄芪多糖343．3 细菌佐剂353．3．1 脂多糖353．3．2 胞壁酰二肽及其衍生物353．3．3 霍乱毒素353．3．4 大肠杆菌不耐热肠毒素363．3．5 百日咳毒素363．3．6 短小棒状杆菌363．3．7 卡介苗373．3．8 单磷酰脂质A373．4 矿物油佐剂373．4．1 油乳剂373．4．2 MF59佐剂373．5 矿物盐佐剂383．5．1 铝佐剂（铝胶）383．5．2 磷酸钙佐剂393．5．3 氢氧化铁凝胶佐剂403．5．4 硒403．6 细胞因子佐剂403．6．1 白细胞介素?1413．6．2 白细胞介素?2413．6．3 白细胞介素?12413．6．4 粒细胞?巨噬细胞集落刺激因子413．6．5 干扰素423．6．6 其他细胞因子423．7 核酸佐剂433．7．1 免疫刺激序列（CpG基序）433．7．2 表达与免疫相关的细胞因子的核酸载体463．7．3 双链RNA463．8 投递系统473．9 新佐剂的选择和研究方向47参考文献49第4章 疫苗设计的技术基础514．1 经典疫苗及新型疫苗的技术特点514．1．1 经典疫苗的技术要点514．1．2 新型疫苗的特点524．2 当前疫苗研究的趋势524．2．1 新型疫苗的分子设计524．2．2 新型疫苗的规模化生产534．2．3 开发配套的鉴别诊断技术534．2．4 新型佐剂的使用534．2．5 动物用生物制品工程研究中心建设534．3 常规活疫苗的研发原则534．3．1 病原自然弱毒株534．3．2 异源免疫534．3．3 异源动物或细胞传代致弱544．3．4 改变体外培养传代环境544．4 基因工程疫苗及其研发原则544．4．1 亚单位疫苗及其研发原则544．4．2 基因缺失疫苗及其研发原则554．4．3 活载体疫苗及其研发原则554．4．4 核酸疫苗及其研发原则564．4．5 合成多肽疫苗及其研发原则584．4．6 T细胞疫苗604．5 基因工程疫苗设计中优化基因表达的关键因素614．5．1 密码子最佳化614．5．2 翻译终止效率624．5．3 真核细胞中的异源蛋白表达624．6 计算机辅助疫苗设计技术634．6．1 计算机辅助疫苗设计技术的原理与方法634．6．2 计算机辅助疫苗设计技术的应用与常用工具644．6．3 计算机辅助疫苗设计的产业前景654．7 利用免疫蛋白质组学方法筛选高效疫苗654．7．1 免疫蛋白质组学654．7．2 免疫蛋白质组学的技术体系664．7．3 免疫蛋白质组学在疫苗候选靶位筛选中的应用674．7．4 展望67参考文献68第5章 疫苗效果的免疫学评价695．1 疫苗开发的原则与开发步骤695．2 疫苗效果免疫学评价的一般原则695．2．1 方法695．2．2 安全性705．2．3 免疫效果705．2．4 保护效果705．2．5 流行病学评价705．3 疫苗效果的免疫学评价方法705．3．1 疫苗免疫效果的实验室评估705．3．2 疫苗免疫效果的临床评估735．4 疫苗效果的流行病学评价745．4．1 传染病的流行与疫苗的作用策略745．4．2 传染病的流行及其流行病学特征745．4．3 疫苗在控制传染病流行中的作用765．4．4 疫苗的免疫策略765．4．5 疫苗效果的流行病学指标775．4．6 疫苗效果调查的流行病学设计78参考文献79第6章 基因工程疫苗概述816．1 基因工程疫苗的概念816．2 基因工程亚单位疫苗826．2．1 细菌性疾病亚单位疫苗826．2．2 病毒性疾病亚单位疫苗836．2．3 激素亚单位疫苗836．3 基因突变疫苗及基因缺失疫苗836．4 基因工程活载体疫苗846．4．1 复制性活载体疫苗846．4．2 非复制性载体疫苗856．5 核酸疫苗856．6 转基因植物可食疫苗856．7 合成肽疫苗866．8 抗独特型疫苗876．9 畜禽基因工程疫苗产业发展现状与前景876．9．1 国际畜禽基因工程疫苗产业化现状886．9．2 国内畜禽基因工程疫苗产业化现状886．9．3 21世纪面临的机遇、挑战和策略89参考文献90第7章 基因工程亚单位疫苗927．1 基因工程亚单位疫苗的种类927．2 基因工程亚单位疫苗抗原基因的选择937．3 基因工程亚单位疫苗的抗原表达系统937．3．1 原核表达系统937．3．2 酵母表达系统967．3．3 昆虫细胞表达系统1017．3．4 哺乳动物细胞表达系统1047．4 外源蛋白表达操作案例1107．4．1 原核表达外源蛋白1107．4．2 毕赤酵母表达外源蛋白1117．4．3 昆虫细胞（Bac?to?Bac系统）表达外源蛋白1147．4．4 脂质体法转染真核细胞1157．5 亚单位疫苗研究与应用1157．5．1 原核表达系统在亚单位疫苗研究中的应用1157．5．2 真核表达系统在亚单位疫苗研究中的应用1167．6 展望117参考文献117第8章 转基因植物疫苗1198．1 植物生物反应器生产可食用疫苗研究进展1208．1．1 可食用疫苗的表达系统1208．1．2 可食用疫苗的可行性1218．2 转基因植物疫苗的载体系统1238．2．1 外源基因转移的植物病毒载体1238．2．2 外源基因转移的质粒载体1258．2．3 载体卡盒1308．2．4 载体构建中常用的选择标记基因及报告基因1318．2．5 外源基因的转化方法1358．2．6 转入基因的状况和表达以及基因沉默1458．3 转基因植物疫苗的植物受体系统1488．3．1 植物基因转化受体系统的类型及其特性1488．3．2 植物基因转化受体系统建立的程序1498．3．3 植物基因转化受体系统建立中常遇的问题1528．4 转基因植物操作案例1538．4．1 根癌农杆菌介导的基因转化方法1538．4．2 发根农杆菌介导的植物转化1618．4．3 基因枪轰击法（瞬时表达）1638．5 转基因植物疫苗存在的问题与对策1638．5．1 受体植物不理想1648．5．2 重组抗原蛋白表达量低1648．5．3 转基因植物疫苗的免疫原性弱1648．5．4 安全性问题1658．5．5 植物大量表达外源基因时出现长势弱的现象1658．5．6 口服时抗原的消化降解1658．5．7 重组蛋白的提纯1658．5．8 免疫耐受1658．6 展望166参考文献166第9章 病毒基因缺失疫苗1699．1 基因缺失疫苗研究概况1699．2 畜禽基因缺失疫苗制备原理与技术1719．2．1 疱疹病毒基因缺失疫苗的制备原理和方法1719．2．2 反转录病毒基因缺失疫苗的制备原理与方法1759．2．3 RNA病毒基因缺失疫苗的制备原理与方法1759．3 畜禽基因缺失疫苗的研究与应用现状1809．3．1 伪狂犬病基因缺失疫苗的研究1809．3．2 牛传染性鼻气管炎基因缺失疫苗的研究1809．3．3 马疱疹病毒基因缺失疫苗的研究1819．3．4 反转录病毒基因缺失疫苗的研究1819．3．5 RNA病毒基因缺失疫苗的研究1819．3．6 畜禽基因缺失疫苗的应用现状1829．4 畜禽基因缺失疫苗的展望182参考文献183第10章 病毒活载体疫苗18610．1 重组病毒活载体疫苗的技术特点18610．2 重组活载体疫苗的设计原则18710．2．1 抗原的选择18710．2．2 活载体的选择18710．2．3 转移载体的构建18810．2．4 外源基因插入位点的选择18810．3 痘病毒载体疫苗18810．3．1 痘病毒的分子生物学18910．3．2 痘苗病毒载体疫苗19010．3．3 禽痘病毒载体疫苗19510．4 疱疹病毒载体20910．4．1 伪狂犬病病毒载体疫苗20910．4．2 1型牛疱疹病毒载体疫苗21710．4．3 马立克病病毒载体21810．5 腺病毒22310．5．1 腺病毒载体的概述22310．5．2 腺病毒载体的构建22510．5．3 改进腺病毒载体的方法23110．5．4 展望23410．6 反转录病毒23510．6．1 反转录病毒概述23510．6．2 反转录病毒载体的包装原理23510．6．3 反转录病毒载体的分类23610．6．4 反转录病毒载体的构建23810．6．5 反转录病毒的优缺点23810．6．6 近年来反转录病毒载体的改进23910．6．7 展望24010．7 甲病毒RNA复制子疫苗24110．7．1 基本原理和特点24110．7．2 甲病毒复制子疫苗的优缺点24210．7．3 甲病毒复制子疫苗的免疫机理24210．7．4 几种主要的甲病毒RNA复制子24310．7．5 甲病毒表达载体构建策略24610．8 重组活载体疫苗的局限性24710．8．1 安全性24710．8．2 母源性抗体干扰24810．8．3 重组病毒的表达量24910．8．4 病原性及免疫效力24910．9 重组病毒活载体疫苗的发展方向249参考文献251第11章 细菌性载体疫苗25611．1 沙门菌载体25611．1．1 鼠伤寒沙门菌菌株特征25711．1．2 鼠伤寒沙门菌减毒株的构建原理25711．1．3 重组减毒鼠伤寒沙门菌疫苗构建及其免疫机制25711．1．4 重组鼠伤寒沙门菌株的构建方法26111．1．5 结语26411．2 重组BCG载体26511．2．1 重组BCG载体的优点26511．2．2 重组BCG载体的研究进展26511．2．3 rBCG诱导的免疫应答及免疫途径对免疫效果的影响26811．2．4 rBCG存在的一些问题26911．2．5 重组卡介苗菌株的构建方法26911．2．6 展望27311．3 乳酸菌（乳酸杆菌和乳酸乳球菌）载体27311．3．1 乳酸杆菌载体27411．3．2 乳酸乳球菌27911．4 弧菌载体疫苗28211．4．1 弧菌载体28211．4．2 适用减毒弧菌的表达系统28311．4．3 平衡致死质粒的保持28311．4．4 对细菌载体应用的更多考虑28411．5 志贺菌载体疫苗28511．5．1 志贺菌载体28511．5．2 志贺菌传递质粒DNA28511．6 李斯特菌载体28511．6．1 李斯特菌疫苗28611．6．2 李斯特菌载体28611．6．3 减毒李斯特菌在肿瘤治疗中的应用28611．6．4 李斯特菌传递质粒DNA28711．7 枯草芽孢杆菌整合载体28711．7．1 芽孢杆菌整合载体的研究历程28711．7．2 枯草芽孢杆菌整合载体的整合机理及方式28811．7．3 枯草芽孢杆菌整合载体疫苗的构建28911．7．4 芽孢杆菌整合载体的应用291参考文献291第12章 核酸疫苗29412．1 DNA疫苗的特点29512．1．1 DNA疫苗的主要优点29512．1．2 DNA疫苗的局限性29712．2 DNA疫苗的免疫应答机制29812．2．1 从诱导产生的免疫应答类型方面来探讨DNA免疫机制29912．2．2 从接种途径方面来探讨DNA免疫的机制30112．3 DNA疫苗的构建与评价30312．3．1 选择合适的目的基因和载体30412．3．2 DNA疫苗的构建30512．3．3 提高抗原蛋白表达量和免疫原性30512．3．4 验证抗原蛋白的表达情况30612．3．5 DNA疫苗的免疫学效果评价30612．3．6 安全性分析30712．4 提高DNA疫苗免疫效果的策略30712．4．1 编码抗原的目的基因的改造30712．4．2 疫苗质粒载体的选择和优化30812．4．3 基因佐剂30912．4．4 免疫途径和免疫方法31512．4．5 DNA疫苗免疫方式的改进31712．4．6 DNA疫苗的靶向策略31812．4．7 接种方案32112．4．8 疫苗剂型的改进32212．5 DNA疫苗在畜禽疾病控制中的应用研究与发展趋势32312．5．1 禽的相关DNA疫苗32312．5．2 猪的相关DNA疫苗32512．5．3 牛的相关DNA疫苗32612．5．4 犬的相关DNA疫苗32712．5．5 细菌病的DNA疫苗32712．5．6 寄生虫病的DNA疫苗32812．6 DNA疫苗的安全性问题32912．6．1 重组质粒能否整合到宿主细胞基因组中导致原癌基因的激活或抑癌基因的抑制32912．6．2 重组质粒能否诱导自身免疫反应,产生抗DNA抗体33012．6．3 重组质粒持续表达外源抗原能否产生不良后果33012．6．4 重组质粒能否具有生殖毒性33112．6．5 重组质粒与细胞因子合用能否导致其他风险33112．6．6 DNA疫苗标准化的问题33112．6．7 风险与效率比33212．7 结语332参考文献333第13章 A型流感病毒反向遗传学操作技术及其在疫苗研制过程中的应用33613．1 流感病毒的分子生物学33613．1．1 流感病毒的结构与编码蛋白的功能33613．1．2 流感病毒的复制33913．2 流感病毒反向遗传学技术的发展34113．2．1 借助辅助病毒拯救流感病毒34113．2．2 由克隆的基因拯救A型流感病毒34113．3 反向遗传学操作技术在流感病毒疫苗研究中的应用34413．3．1 弱毒流感疫苗株的拯救34413．3．2 病毒感染与疫苗免疫动物鉴别诊断34413．4 流感病毒8质粒系统实验操作方法34513．4．1 pHW2000双向转录载体34513．4．2 以pHW2000为载体的病毒拯救34613．5 展望347参考文献348第14章 新城疫病毒的反向遗传操作及其在新型疫苗研制中的应用34914．1 RNA病毒的反向遗传操作34914．1．1 概述34914．1．2 感染性分子克隆的构建35014．1．3 感染性分子克隆的体外操作35214．1．4 结语35314．2 新城疫病毒概述35314．2．1 新城疫病毒的生物学特性35414．2．2 新城疫病毒的分子生物学特性35714．2．3 新城疫的诊断、免疫与防制36114．3 新城疫病毒的反向遗传操作技术原理及操作36314．3．1 分子水平构建cDNA等元件36414．3．2 拯救过程36514．3．3 验证分析36614．3．4 操作过程的注意事项36714．4 反向遗传操作技术在新城疫病毒中的应用36714．4．1 研究结构和功能的关系36714．4．2 插入报告基因的重组病毒37114．4．3 标记疫苗/嵌合疫苗37214．4．4 禽用载体疫苗37314．4．5 用于人类传染病预防的疫苗载体37414．4．6 载体修饰用于肿瘤的治疗37614．4．7 结语378参考文献378第15章 细菌人工染色体技术及其在新型疫苗研制中的应用38215．1 细菌人工染色体技术的产生38215．2 细菌人工染色体的结构功能及其遗传特性38315．3 细菌人工染色体的构建策略及构建方法38415．3．1 细菌人工染色体的构建策略38415．3．2 细菌人工染色体的构建方法38515．4 细菌人工染色体的构建操作案例38715．4．1 材料38715．4．2 重组鸡马立克病病毒转移载体的构建38715．4．3 重组鸡马立克病病毒的获得38915．4．4 电转化感受态细胞DH10B的制备38915．4．5 BAC分子克隆化病毒的筛选38915．4．6 BAC?DNA拯救重组病毒生长特性的测定39015．5 细菌人工染色体作为疫苗的应用及探索39015．6 细菌人工染色体疫苗的修饰系统39315．6．1 Red/ET重组系统39315．6．2 Red/ET重组的机制39415．7 细菌人工染色体疫苗诱导机体免疫应答的机制39715．8 细菌人工染色体疫苗的优越性及其存在的不足39815．8．1 细菌人工染色体疫苗的优越性39815．8．2 细菌人工染色体疫苗存在的问题与对策39815．9 展望398参考文献399第16章 联合免疫40016．1 概述40016．2 联合疫苗的历史和发展40116．3 传统的联合疫苗40216．4 新型的联合疫苗40316．5 联合疫苗的制造和使用40516．6 展望407参考文献407……

一、基因疫苗的诞生自1796年英国医生琴娜(Jener)首次采用牛痘苗以来,疫苗已在世界范围内被广泛应用,200多年来各种疫苗已经帮助人类战胜了包括天花在内的多种传染病.然而,现有的疫苗主要有两种：第一种疫苗是传统疫苗，即弱毒活苗和灭活苗，如鸡新城疫弱毒苗，猪瘟灭活苗，它是直接将无毒或减毒的病原体作为疫苗接种到人或动物体内，刺激机体免疫系统产生特异性免疫应答，从而预防疾病的发生；第二种疫苗是基因工程苗，它是通过基因工程，先分离得到具有强烈免疫原性但无毒性的抗原蛋白的编码基因，然后导入表达载体中，再在宿主细胞表达出重组抗原蛋白，经分离纯化后的重组抗原蛋白作为疫苗接种如重组乙肝疫苗。但它存在一些不可忽视的缺陷如:灭活疫苗难以诱发细胞免疫,需多次免疫注射;亚单位疫苗免疫原性差;减毒活疫茵存在毒性回升的危险等问题.因此,现在对一些传染病仍缺乏相应的安全有效的疫苗. 第三代疫苗基因疫苗的问世,为解决这些难题带来了希望.基因疫苗（genetic vaccine）又称核酸疫苗(nucleic acid vaccine)或DNA疫苗，是在基因治疗（genetic therapy）技术的基础上发展而来的。基因治疗是从20世纪80年代发展起来用于预防和治疗疾病的最具革命性的生物医学医疗技术，其原理是将人或动物的正常基因或有治疗作用的基因通过一定方式导入人体靶细胞以纠正基因的缺陷或发挥治疗作用，从而达到治疗疾病目的。1990年Wolff JA等在进行基因治疗试验时，以裸DNA注射作对照，结果意外发现裸DNA可被骨骼肌细胞吸收并表达出外源性蛋白。1992年Tang 、 DC等首次证明经基因免疫产生的外源性蛋白质——人生长激素可刺激小鼠免疫系统产生特异性抗体，而且加强免疫后抗体效价增加，从而宣告基因疫苗的诞生。（注：1）概括起来，基因疫苗就是指将编码外源性抗原的基因插入到含真核表达系统的载体上，然后直接导入人或动物体内，让其在宿主细胞中表达抗原蛋白，该抗原蛋白可直接诱导机体产生免疫应答。抗原基因在一定时限内的持续表达，不断刺激机体免疫系统产生应答反应，从而达到预防疾病的目的。二、核酸免疫的作用机理目前对核酸免疫作用机理的认识主要还仅限于理论推测，且多数资料来自基因治疗试验，二者在作用机理上很相似。在基因免疫中，含病原体抗原基因的核酸疫苗被导入宿主细胞，被周围的组织细胞、APC细胞或其它炎性细胞摄取，并在细胞内表达。表达产物作为抗原可能的呈递途径是：肌细胞直接摄入或经T小管和细胞样内陷摄取进入，在外源基因启动子作用下使外源基因表达，使产物在胞内水解酶的作用下分解成长短不一的多肽，其中的一部分被hsp70运到内质网，经网膜上的TAP分子转入膜内与主要组织相容性复合物（MHC）I类结合，最终在细胞膜表面被CDS十细胞识别；另一部分短肽进入溶酶体，与（MHC）Ⅱ分子结合，运到细胞表面被 CD4＋细胞识别。这些多肽含有不同的抗原表位，它们将诱导细胞毒性T淋巴前体、B细胞和特异性辅助T细胞，产生细胞免疫和体液免疫。同时，基因表达可以通过细胞分泌和分裂的方式进入组织细胞间隙，以天然折叠方式被B淋巴细胞识别。核酸免疫后，还可以使肌细胞和抗原递呈细胞被感染，从而使CD4＋和CD8＋细胞亚群活化，产生特异的免疫应答。 CorrM等（1996）的研究表明，从转染DNA得肌肉组织释放出的抗原被APC摄入，运送到管状淋巴结中，在B淋巴细胞和T淋巴细胞表达， I类MHC限制的CTL应答可能主要以这种方式产生。以前曾认为该过程需要内源抗原的表达，但现在的研究表明，只要有外源抗原的存在，也能有效地引起I类MHC限制的CTL应答。 三、基因疫苗质粒载体的构建获得准确的抗原编码基因并将它插入到合适的载体DNA上，是发展基因疫苗的主要工作。1、编码抗原蛋白基因的分离制备DNA疫苗首先要获得编码抗原的基因，一般选择编码病原体表面糖蛋白的基因。抗原蛋白产生后可在宿主体内正确糖基化，从而诱导对病原体的免疫应答反应；对于易变异的病原体，最好选择各种变型都具有的核心蛋白保守的DNA序列，这样可对各种变异的病原体产生免疫应答反应，避免因病原体变异产生的免疫逃避问题。2 目的基因质粒的载体构建基因疫苗大多采用质粒作载体。一般说来，基因疫苗质粒载体至少包括5个主要的部件：（1）细菌复制子，以便质粒DNA在细菌体内复制扩增，得到大量的拷贝，但不能在宿主细胞（真核细胞）中复制；（2）原核生物选择性标记基因，如抗生素抗性基因，以筛选含有质粒DNA的阳性细菌克隆（菌株）；（3）真核生物的启动子、增强子、终止子、内含子等转录调控元件；（4）编码抗原蛋白的目的基因序列；（5）多聚核苷酸信号序列，以保证mRNA翻译时适时终止。另外，基因疫苗质粒载体通常含有一段未甲基化的CpG序列，其具有刺激Th1细胞的免疫活性。四、严重创伤后全身性炎症反应综合征及免疫调节治疗严重创伤后机体免疫功能表现为双向性改变。一方面表现为以吞噬功能和白细胞介素-2（IL- 2）等产生降低为代表的免疫受抑状态；另一方面表现出以全身性炎症反应综合征为特征的过 度炎症反应。正是这二方面共同作用构成了创伤后机体免疫功能紊乱，诱发多器官功能不全综合症（Multiple Organ Dysfunction Syndrome,MODS）。下面就全身性炎症反应综合征和免疫调节治疗作一综述。