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海飞丝。产品主打去屑功能，适合广大男性发质，用完很清爽，内含去屑因子，效果俱佳。
大概是5%，其实含量不超过7%就是好的。但如果超过了之后，就会导致起到了一些反的作用。
洗发水效果越好，并不是化学成分越多；因为：洗发水的效果好坏并不是取决于化学成分，而是有效成分（包括表面活性剂、增稠剂、增溶剂、保湿剂、顺滑剂、去屑剂、调理剂、螯合剂、PH调节剂等）最终对于特定发质的感官体验；不同配方体系所含的成分截然不同，有的配方体系成分少效果还好，可是价格会略贵，这和整个日化行业的发展阶段有着紧密的关系；至于您担心的化学添加剂应该是指防腐剂，正规公司的产品防腐剂含量都是符合国家要求的您可以放心；关键要看洗发水生产的厂家是否符合相关的要求，是不是按规定的生产程序生产出来的，至于效果好和化学成分是不成比例的，不能说衣服漂亮是人衬出来。一些去屑洗发水中含有的抗真菌药物会刺激头皮，分解、剥落那些干燥、疏松的皮肤表面，频繁使用反而会加重头屑脱落。去屑洗发水最好每周用1次，如果头屑过多，可以增加至2次，但不宜超过3次。因为，头皮屑不是在清洗过程中溶解的，光靠洗是洗不掉的，关键是控制新油脂的产生，过度清洗会破坏头皮层起保护作用的油脂。
男士可以用清扬去屑洗发水，效果还是很好的，我用了几次，头皮屑的问题就解决了，主要还比较控油，效果很好。
选题 以研究性学习的课题作为论文题目，一文一题。 题目应突出研究性学习的主题。 尽可能有实际操作的可行性，题目不要过大。 题目应体现研究性学习的的特点。 二、选材 材料来源（依研究性学习的内容而选定） 1、观察报告 2、考察报告 3、调查报告 4、实验报告 5、制作报告 三、撰写 注意撰写的格式和结构 1、撰写前先拟出一个提纲，列出主要内容、层次和段落，最好列出主要纲目，在写作时可使文字有条理、不遗漏。 2、正式撰写 （1）论文摘要（300字左右） （2）关键词 用几个字的词来概栝全文 （3）撰写正文 正文要有一个好的开头，开头写得好会增强文章的表现力，引出主题造成悬念，引起人们对文章感兴趣。 （4）文字要求 层次清楚，段落分明，不用含糊、费解、错乱模棱两可的语言。 （5）论文证据 观察报告、考察报告、调查报告、实验报告、制作报告。 论文证据要有原始记录，有准确的计算公式、准确的数据，有列表、有照片、有图纸。 （6）语言文字及编排要规范 图示要明了性，数子要统一性，数量单位要符合国家的标准，不要用废除的单位。 写作结构和表达格式要合理，语句通畅整体性强
至今，各种环保节能的的政策及措施都已成为我们耳熟能详的文明生活发展趋势，然而我们对其真正深入了解认识了吗？我们的日常工作和生活中是否真正的做到了呢？是不是还是一副听的时候专心，过后说起开心，做的时候不用心呢？节能环保并不是我们多喊几句口号就可以实现的，它需要我们真正的从实际生活中去改善，去实践，从身边的每一件事情开始做起。 作为每一个家庭，对社会发展及人类进步起着不可替代的推动作用，是我们社会发展的主要力量支柱。因此，我们更应该提高家庭的综合素质，切实了解节能环保的现实意义和重大作用，将每个家庭成员组织起来，牢牢抱成一团，从生活的方方面面着手去认识，去改进，将节能环保的主题落到实处。 倡导节能环保，首先要减少了解我们日常生活中到底能源耗费在哪里？污染在哪里？针对主要问题，提高节能环保效率。那么家庭污染和社会污染到底哪一个更严重呢？ 新近研究表明：社会工业生产造成的污染只占污染源的百分之四十一，现代家庭造成的污染却占百分之五十九。与社会相比，虽然家庭只是社会的一个细胞，而就污染的危害程度来说，家庭却相对严重一些，已经检测到的有毒有害物质达数百种，常见的也有十种以上，。有一组统计数据可进一步证实家庭污染的危害性：即一个家庭一天平均要制造一点八公斤垃圾，丢弃五个不可分解的塑料袋、二至三个一次性饭盒；一个家庭因洗头、洗澡、洗衣服等，一天平均制造二百公斤废水；一个家庭每天平均使用二十克化学用品等。这些污染物和汇流成河的生活废水，每时每刻都在污染着我们的土地、河流和海洋。 据媒体报道，在一项针对2000多个家庭住户样本的室内污染状况调查中，结果显示：50％以上的家庭室内存在着污染，而“罪魁祸首”就是家用电器。更令人担忧的是，在被调查的家庭中，绝大多数还没有意识到家中的家电污染问题。目前家庭中常见由家电导致的污染包括细菌污染、辐射污染及噪声污染等，重则危害健康，甚至危及人的生命安全。 看到这组数据不由得让我们惊讶，一直以来我们都要将污染的矛头指向工业生产，殊不知，其实最大的污染源就是我们自己，就是我们每一个家庭。我们平时不注重环保节能的后果，最后危害最大的，依然是我们自己，是我们赖以生存的美好家园，是我们原本洁净清悠的地球村。 在能源浪费方面，家庭也占有相当大的比重。多台电视机同时开；多个电脑同时用；电视没看时不切断电源，长期处于待机状态；几十上百瓦的白炽灯同时开好几个；声控灯感应器坏了，灯就没日没夜地亮着；饮水机24小时运作；有的电热户冬天用几个上千瓦的大电炉眼睛眨也不眨；打开水龙头哗哗一放就是好几分钟，等到热水出来了，才慢悠悠地洗漱…… 点点滴滴，看来是微不足道的。但正是这样的点点滴滴，使居民区能源浪费现象显得相当突出。检查我们的行为，司空见惯的“无意识浪费”，在家庭生活中浪费掉的宝贵能源实在太多了。习惯成自然，且有很多浪费现象是人们长期养成的习惯，又习以为常，因此在节约家庭能源方面考虑得不多。然而在现实生活中，我们要改掉那些不经意的浪费“习惯”，其实很简单，只需要举手之劳。 良好的生活和工作环境是我们人类赖以生存的条件，保护环境就是保护我们自己。面对地球生态环境日益恶化、资源日益短缺的现实，我们应该清醒地认识到：拯救地球、保护环境、节约能源，是我们共同的责任。家庭节能环保和我们的生活息息相关，而且很容易进行，做好家庭的节能环保工作，不仅节约了资源，也为家庭节约了一定开支，一举两得。由此我们发出倡议： 一、从家庭用电开始，节约每一度电，杜绝家家电污染。 每个家庭都应努力做到以下几点： a、把白炽灯改成第四代LED绿色光源，在同样的亮度下，其耗电量只是白炽灯的十分之一，但寿命却是白炽灯的50倍。 b、要选用无氯绿色环保家电和太阳能家电系列，比如：使用太阳能发电器、太阳灶、太阳能灯、太阳能帽、太阳能手电筒、太阳能干燥器、太阳能热水器、地板采暖系统等，既节能环保，又安全方便，既为国家的节能环保工作做出贡献，又使家庭引导了绿色生尚生活新潮流。 c、选购空调时要考虑最适合房间大小的匹数。而且夏季空调温度设定在26－28℃。 d、冰箱内贮存食物不宜过满，冰箱内食品之间及食品与箱壁之间应留有100mm以上的空隙。 这比紧贴墙面每天可以节能20％。 e、洗衣机的耗电量取决于使用时间的长短，一般合成纤维和毛丝织物洗涤3～4分钟，棉麻织物洗涤6～8分钟，极脏的衣物洗涤10～12分钟。 f、电视机不要开得很亮，音量也不宜过大，因为每增加1瓦音频功率，就要增加3～4瓦电功耗。 g、使用电饭锅最好提前淘米，用温水或热水煮饭，这样可以节电30％。 h、电饭锅用后立即拔下插头，当锅内温度下降到70摄氏度以下时，它会断断续续地自动通电，既费电又会缩短使用寿命。 i、普通玻璃窗只要贴上一层特殊节能膜，室内温度起码降3℃, 如果阳光更加猛烈，温差会进一步拉大，节能效果更加明显。据介绍，采用这种节能膜后，不仅能过滤紫外线，节能效果达到30％，而且使用期限长达20年。 二、全家动员，全面加强环保节能的思想认识。 首先，父母要做好孩子的表率。父母是孩子的第一任老师。由于孩子的可塑性大、模仿性强，家长的一言一行都能影响孩子。因此，家长自身必须牢固树立节能环保意识，不断提高自身素质，自觉做到“环保节能从我做起，从日常小事做起”，把节能保护渗透到家庭生活的方方面面，为孩子在节能环保方面做出表率。其次，着力培养孩子的节能环保意识。家长可以利用双休日和节假日，领孩子到一些风景名胜区去体验环境美，然后再领孩子到一些环境污染严重的地方，让他们目睹垃圾遍地、污水横流的场景。通过这种对比，让孩子亲身感受环境污染的危害性。最后，要为孩子创造一个良好的节能环保氛围。在日常生活中，家长要把环保意识落实到行动上，让孩子在潜移默化中形成良好的环保习惯。如购物时，要注意选择无污染的绿色产品；从自身做起，认真搞好家庭卫生，努力创造一个整洁的生活环境。这样，通过教育孩子，一方面加强了家长本身的节能环保意识，另一方面也着实减少了家庭的开支，还能为我国的节能环保工作作出贡献，可所谓是“利大无穷”。 三、节约生活中的每一滴水，努力减少水污染。 随着经济快速增长和人口不断增加，努力缓解资源不足的矛盾，不断改善生态环境，实现可持续发展，已经成为十分紧迫的任务。中国是世界12个贫水国家之一，淡水资源还不到世界人均水量的1/4，因此节约用水迫在眉睫。 据统计，就按某市共1700万常住人口，有600多万户家庭来讲，如果每家每月节约1度电，一年全市就可节电6000万度，相当于一座小型发电厂的发电量；如果每家每月节约1吨水，一年全市就可节水6000万吨，相当于一座80万人口城市一年的生活用水总量。 时时刻刻注重节约用水，防止水污染，可以从下几个方面着手： 推广使用节水型水阀和卫生洁具；用水完毕随手关闭龙头，别让水空流；随时检查维修水龙头阻止滴漏；提倡一水多用，让水重复使用；节约用水，用洗菜、淘米水冲厕所、浇花；洗衣服使用无磷洗衣粉，减少污染；如果将漂洗的水留下来做下一批衣服洗涤水用，一次可以省下30-40升清水；慎用清洁剂，尽量用香皂，别让水源污染，时时告诫我们自己，保护水源就是保护生命！ 四、节约每一张纸，使用再生纸和节约用纸,保护森林资源。 目前，造纸的原料主要是木材。我国造纸业年需消耗木材1000万立方米。我们使用、消耗大量的纸张，实际上是在消耗森林资源。现在，地球上平均每年有4000平方公里的森林消失。森林可以为人类提供氧气、吸收二氧化碳、防止气候变化、涵养水源、防风固沙、维持生态平衡等。保护森林，减少开采量，就需要削减木材的需求量。回收1吨废纸能生产800千克再生纸，可以少砍17棵大树，节约一半以上的造纸原料，减少35％的水污染。每张废纸至少可以回收再生两次。因此，应提倡积极回收废纸、尽量使用再生纸和双面用纸充分发挥电子政务优势，大力推行无纸化办公，尽量使用电子媒介修改文稿，努力减少纸张消耗。节约用纸则是保护森林、保护环境的最好措施。 五、节约每一升油，减少空气污染源。 减少对机动车的依赖，近距离出行尽可能使用自行车或者步行，给城市的交通减轻一点负重；减少公务用车，在不影响公务，确保安全的前提下减少独自用车；紧急公务活动确需使用公务车辆时，尽量集中乘坐。让我们人人来做公交族，个个争当自行车骑手！ 另外，如果是自己开车，可掌握以下节能环保技巧：1、如果开车时巧用空挡滑行，一辆升排量的家用轿车每月可以节约10升汽油；2、起步时离合器不能松得太快，否则既耗油又易熄火；3、提高速度时应轻加油门；4、在遇红灯或前方车辆刹车时，不要高挡冲到跟前时才猛踩刹车；5、汽车行驶过程中，要注意看水温表，发动机正常的水温应保持在80摄氏度至90摄氏度之间，如果过高或不足都会使油耗增加；6、时常检查轮胎的气压，以保持在最佳状态，轮胎气压不足会增加耗油量；7、不要随意更换轮胎的大小，选择更宽的轮胎或许让车看来更有“跑车味”，但轮胎越宽，车轮阻力越大，燃油消耗量就越多；8、用黏度最低的发动机油。发动机油黏度越低，发动机就越“省力”，也就越省油；9、不要热身过度。有些车主喜欢在早上开车前，先热身再上路，但热身太久会更耗油，可以先让车慢慢行驶一两千米来达到热身效果；10、不要超速。对一般汽车而言，80公里的时速是最省油的速度，有统计表明，每增加1公里的时速，耗油量会增加。还有一些节油窍门是在驾驶之外的：轮胎气压不足会增加耗油量；尽量用黏度低的发动机油，这样也能省油；开启空调要确保窗门紧闭；定期清洗隔离尘网可以节省30％的电力。 六、每个家庭都应节约每一粒粮食，养成勤俭节约的好习惯。 “谁知盘中餐，粒粒皆辛苦”。家庭做饭时要量力而行，饭不在多，而在于要营养均衡，暴饮暴食或吃饭过饱，都会影响人体的健康，更要杜绝奢侈浪费，父母要给孩子做好表率，从小培养孩子勤俭节约的好习惯。 七、少用一次性制品，保护地球环境和生态平衡。 现代化生活充斥着许多一次性用品：一次性餐具、一次性桌布、一次性尿布、一次性牙刷、一次性照相机……一次性用品给人们带来了短暂的便利，却给生态环境带来了灾难；它们加快了地球资源的耗竭，同时也给地球带来了环境污染。少使用一次性用品，多使用耐用品，对物品进行多次利用，应当成为新的社会风气，新的生活时尚。减少资源和能源的浪费，让我们摆脱“一次性消费”的诱惑，我们可以用充电电池代替普通电池；用手绢代替纸巾；用瓷杯、玻璃杯代替纸杯；用布袋代替塑料袋；用自动铅笔代替木杆铅笔。如果经常在外出差吃饭，可随身带双筷子、带个勺子，带上牙刷、牙膏、剃须刀、洗发水等等，使生活处处皆环保。家庭出游，更要身带各种物品，减少一次性用品的污染及浪费。同时，也要劝说周围的朋友，将节能环保根植于每个家庭。 八、自备购物袋，减少白色污染。 在我们的生活里，塑料袋成了必不可少的东西，无论是在大小超市，还是在菜市场和街边的小摊贩那里，给顾客提供塑料袋似乎成了理所当然的事情，与此相对照的是，一些消费者在购物时过度依赖塑料袋。那些用了就扔的塑料袋不仅造成了资源的巨大浪费，而且使垃圾量剧增。大部分消费者把超市塑料袋带回家中当垃圾袋使用，丢弃后对环境造成二次污染。塑料袋造成的白色污染，已经成为城市环境的大敌。 我国每年塑料废弃量为100多万吨。如果平均每个塑料袋铺开是0．6平方米，那么每人每年弃置的塑料薄膜面积达240平方米。而一些街头小贩用的塑料袋还存在严重的卫生问题。少用或不用塑料袋应该是我们首先倡导的绿色生活。 家庭用塑料袋，更是白色污染中的重点，无论是超市购物，还是街头买菜，都少不了塑料袋。因此，各个家庭都应该外出买菜时自带竹篮，美观又环保。 九、注意日常生活小细节。 1、烧菜做饭少用煤炉，改用液化气，炒菜时不要等油热得冒烟时才放菜，尽量减少空气污染。 2、家中的阳台上多种花草盆景，经常打扫房间，经常晒被，保持家庭环境空气清新怡人。 3、减少噪音污染，尽量减低说话或录音机播放时的音量。 4、正确处理废弃物，对生活垃圾进行分类，合理排放生活用水。 5、保护野生动植物，不吃野生动物，保护生态平衡。 6、奉劝家人、亲友不吸烟，不随意焚烧垃圾，维护家人身体健康，保持洁净环境。 7、塑料瓶、废纸等收集起来卖给收废站，减少垃圾排放。 8、家中养的宠物要看管好，防止影响邻居休息及粪便污染，维护和谐的生活社区和环境。 各个家庭朋友们，全民动员是建设资源节约型社会的基础。我们渴望干净的地球，渴望绿色、健康、洁净的生活空间。 让我们积极响应倡议内容，携起手来，从我做起，从每一个家庭做起，从一点一滴做起，保护环境，节约资源，善待地球，让我们大家都自觉地来做环保节能的宣传者和实践者，为建设节约型社会及实现我国的绿色可持续发展做出自己应有的贡献。
摘要。前言、概述、具体章节、结论。根据一些同学的提问，我归纳了一下。新生入学报到时主要要准备如下东西、要注意如下事项： 1.相关证件。包括：身份证、录取通知书（入学通知书）、户口迁移证、党团组织关系证明（介绍信）、一寸登记照若干张（可以多带几张，以备它用），等等。这些很重要，一定不要忘记。另外，把父母、爷爷奶奶即各个近亲的姓名、出生年月、工作单位、职业和职务搞清楚，填下来，到学校要填各种表格，有的表格需要这些信息。2.钱和卡。上学要交学费和住宿费（分别为每年4500-500元与1000元左右），合计要6000左右（个别专业可能要高些，如艺术类专业）。因为新生出门较少，没有什么旅途安全经验，建议少带现金（但千把块钱还是要带的，以备一些不时之需）。可以在家中先办一张信用卡或储值卡用于交学杂费等。有的学校会给你寄一张卡，让学生把钱存在其中，你可以用这张卡，也可以不用。如果家庭条件还可以，办一张信用卡，把它关联到父母亲的储值卡（如工资卡），每月刷卡后直接从父母亲的卡中扣款，这样的好处是方便、安全。但如果你不想让父母亲知道你的消费情况，可以自己在老家办一张储值卡（让父母亲往里冲钱），然后办一张信用卡与之关联。也可以到学校再办储值卡与信用卡，但这样你父母亲异地往你的储值卡打钱时要付手续费。3.一般情况下，各个学校都要配发一些学习和日常生活用品，这些东西不是无偿给你的，都要你花钱购买。学校发的物品质量都很次而且贵，建议学校发的东西如果可以不要就尽量不要，能自己买的就别买学校发的，有些生活必需品则可以在离开家时先配好，免得到学校后由于人生地不熟不好买。4.衣服被褥。你平常穿的衣服，春夏秋冬各季的，都要带，除非学校距你家乡很近或者父母亲有机会出差来学校给你带东西。内衣和袜子至少要两三套，各季的外衣至少也要两套。如果你现在生活的地方和要去上学的城市的地理气象与生活环境是否相似，那么准备的东西和在老家差不多；如果相差太大，就要带些那个城市需要的衣服（例如，如果你生活在北方，但上学的城市在南方，那么太厚的保暖内衣裤就可以不带了）。被褥也是这样，夏天去学校，可以带一床薄被（如毛巾被），厚被子可以自己带，也可以到学校后再买。席子可以到学校根据床宽购买合适的，床单和枕头（枕套）可以自己带也可以到学校再买。5.洗漱生活用品。要带牙膏牙刷、毛巾、漱口杯、香皂肥皂、洗发水、梳子、手机（看家庭条件）等，以便在途中和到校后就能使用。男生要带剃须刀、女生要带各种女性用品和洗面奶等。至于洗脸盆、晒衣架、拖鞋、雨伞、水瓶、指甲剪、剪刀、小刀、台灯之类的东西就不一定要带了，有的学校会发，就算不发自己买也不贵（这些生活用品到了学校买也很方便，而且到时候和舍友一起去买还能快速缩短距离）。条件可以时，可以带个照相机，为自己和同学照照相，也是人际交流的一种很好方式。6.学习用品。可以带几支水笔、本子、字典、词典（英汉汉英词典等，包括功能强大的电子词典）、书包（背包）。如果学校没有不允许，你家庭条件许可的话，可以带笔记本。但最好不要带，尤其是当你迷恋上网或者玩游戏的时候，带笔记本会影响你的学习和生活以及和同学的正常交往。另外，还可以预备一些生活中用到的药或创可贴之类，虽然不一定会用到它们，不过等需要的时候随手可以找到也很方便。7.旅行箱。如果家庭条件不是特别好得钱花不了，不需要买太贵的，毕业后可以买更好的。箱子可以大一些，能装下自己的衣服及平常不是常用的生活用品和学习用品即可。但不要过分大，免得不好携带，到学校在宿舍也不好放。一般以80公分左右长、50-60公分宽为佳。8. 如果可以的话，带点家乡的特产，不是一定要去给老师，而是给舍友或班上同学吃，毕竟你有四年的时间和他们在一起，越早熟悉越好。10.如果坐火车的话，可以凭录取通知书（入学通知书）享受学生票优惠。11.一点小建议：大学学习勇攀高峰，加入社团量力而行，大学社会实践多多益善，尊敬老师有难必问，同学相处宽容大度，大学恋爱不鼓励也不反对。12.入学测试和体检。有的大学在新生报到后一段时间内，要组织几门文化课的新生入学测试，对考试成绩和高考成绩有较大出入者要进行重点核查。如果你考试没有作弊，不要有任何担心。考试范围和难度不会超过高考，考得好坏无所谓。体检也很容易过，除非你有不符合入学要求的重大疾病而且在高考体检时又使了花招，一般是不要紧的。只要你高考时正常体检、正常考试，这两项都没有问题，现在可以放心玩！当然还有另一种入学考试，那是为各种分班做做准备的，比如英语成绩好的学生分到英语快班。13.新生军训。大学新生要进行军训，军训一般只有两个星期。按照《国防教育法》的规定，组织学生进行军训，这是贯彻国防教育法的具体行动，是推进素质教育、为国家和军队培养造就高素质国防后备力量的重大举措。参加军训可以增进同学友情，应该积极参加。如果身体条件不许可，应该尽早跟辅导员或班主任讲清楚，以免发生意外。14.宿舍是在你去之前就安排好的，这个不用担心。住宿条件有好有坏，不要太拘泥于这个，主要是要和同舍同学友好相处。不要以为住宿条件差就不能适应，人的适应性是非常强的，而且不太好的生活条件对你以后的成长和工作、生活很有好处，不管你的家庭是多么富有！15.专业不理想，调换专业。一般学校进校一年后都可以调换专业。调换专业有两种情况，一种是因为在原专业很难学下去，学校会帮助你换一个好学一点的专业（但一般不是很好的专业，也不是热门专业）；另一种是你想换一个你心仪的其它专业，这种时候一般都要由你要转入的专业所在院系进行资格考试，考试合格才能转入，有的学校还要交一笔费用。
你知道茶籽饼吗？它不仅是农民的肥料，更是乌发生发的天然洗发水一直以来，总有人批评90后如何思想堕落，如何离经叛道，如何扶不起来，还有人说他们是道德毁掉的一代人，是“垮掉的一代”。但这几年，这种声音已经越来越少了，因为00后已经长大了！而在前几个月，一个热门话题又把90后拉回了大众的视线里，这个话题就是《90后们竟已经秃了！》说实话，作为一个生在农村长在农村的90后农村娃，我就从来就没有过这样的忧虑。今天，在江西省石城县的老家，我发现了一个专治头痒和掉发的农村偏方——村子里很多上了年纪的老人都习惯用本地产的茶籽饼洗头发！因为洗后没有头屑、头不痒、不脱发、头发乌黑发亮，并且洗一次一个多礼拜都不会头痒。各位朋友有兴趣不妨试一试吧！什么是茶籽饼？茶籽饼是压榨野山茶油后留下的天然粉渣。由于茶籽饼的蛋白质含量较高，因此它还是一种高效有机肥，广泛应用在农作物及果树栽种中，效果极佳。对淤泥少、底质贫瘠的池塘可起到增肥作用。并且它含有丰富的粗蛋白及多种氨基酸等营养物质，最重要的就是含15-18%的茶皂素。茶皂素是一种天然非离子型表面活性剂。经检测，茶皂素具有良好的乳化、分散、发泡、湿润等功能，并且具有消炎、镇痛，抗渗透等药理作用。所以长期使用有止屑、止痒、去油、杀菌、修复受损发质的功效，还有明显的乌发生发作用，是大自然最佳的洗发水之一。怎么用茶籽饼洗发呢？1、首先用锤子或者斧头直接在茶籽饼上弄一小块下来，具体用量并没有权威的标准，大概用就是了，一般用量不超过一两，然后用锤子把茶籽饼锤成细细的颗粒，再用细布包好。2、把布包放在刚烧开的水中浸泡，浸至水变为茶褐色，待水温适宜时，可以用手拿着布包反复揉搓，使茶籽饼里面的成分尽快散发出来。3、等水温降到40度左右就可以洗头了，洗得时候就不要用洗发水了，一直洗到头发干净为止。尽量让头发多浸泡在水里，这样有利于茶籽饼中的茶皂素更快地进入到头发中，也可以直接拿着布包在头上擦拭。4、最后再用温热水冲一遍就可以了。注意事项1、用来洗头的茶籽饼，最好是生产后储存时间不超过两年的产品，时间太久远的茶籽饼护发作用减弱，且可能产生有害物质。2、每次用茶籽饼洗头不能像用洗发水那样简单快速了事，要反复搓洗时间长一点，这样才能让茶籽饼中有效成分能被头发吸收
0引言脆性X综合征（fragile X syndrome, FXS）是一种最常见的遗传性智力发育不全综合征，有超过99%的FXS是由脆性X智障基因1（fragile X mental retardation, FMR1）中5′端非编码区CGG三核苷酸重复序列不稳定扩增及其CpG岛异常甲基化导致. FMR1基因的表达产物FMRP的缺乏导致FXS的发生［1-2］. 本实验对编码基因存在于3号染色体［3］，能与FMR1 基因5′ d (CGG)n3′重复序列特异性结合的蛋白CGGBP1进行原核表达，并对其DNA结合活性进行研究.1材料和方法材料大肠杆菌DH5α, BL21（ DE3）和表达载体pRSET A均为本实验室保存. 质粒提取试剂盒购自Sigma公司； 限制性内切酶BamH I和KpnI购自宝生物工程公司；T4 DNA连接酶购自Promega公司； Ni2+NTA金属螯合蛋白质纯化系统购自Qiagen公司；链酶亲和素磁珠购自Dynal公司；低分子质量蛋白标准购自上海西巴斯生物技术有限公司. 方法 表达载体的构建根据CGGBP1基因起始密码子和终止子邻近序列设计PCR引物：CGGBP1F CGC GGA TCC GAG CGA TTG TAG TAA CAG CA，CGGBP1R GGG GTA CCT CAA CAA TCT TGT GAG TTG AG. 其上游及下游引物分别加入BamHI和KpnI酶切识别位点序列(引物序列下划线部分). PCR反应以人淋巴细胞cDNA文库为模板，扩增编码CGGBP1的基因序列. 设计PCR扩增体系25 μL，灭菌去离子水10 μL，10×反应缓冲液 μL，25 mmol/L MgCl2 μL，DMSO μL，4× dNTP混合物（每种 mmol/L）2 μL，CGGBP1F和CGGBP1R各10 pmol，模板 μL（50 ng/μL）， Taq DNA（5 μ/μL）聚合酶 μL. 扩增条件：95℃预变性5 min，再94℃ 30 s， 53℃ 1 min，72℃ 1 min循环40次，最后72℃终末延伸产物10 min. PCR产物经琼脂糖电泳分离，用胶回试剂盒回收目的基因. 用BamHI和KpnI酶切PCR产物和pRSET A，酶切产物电泳后回收，在T4连接酶作用下，目的片段定向克隆至pRSET A的BamHI和KpnI克隆位点. 将重组质粒转入大肠杆菌DH5α，接种到含氨苄青霉素的LB培养基平板并挑取单菌落.融合蛋白的诱导表达将测序正确的重组质粒转入BL21（ DE3）. 挑取携带目标质粒的单菌落接种于含100 mg/L氨苄青霉素的LB培养基中， 37℃振荡培养12 h， 按10 mL/L比例转接于新鲜培养基，37℃振荡培养至对数生长期时，加入IPTG至终浓度1 mmol/L，32℃诱导振荡培养4 h，离心收集菌体，SDSPAGE分析重组蛋白的表达.蛋白表达形式的分析取5 mL菌液离心，用500 μL的裂解液（10 mmol/L 咪唑，300 mmol/L NaCl及50 mmol/L磷酸二氢钠 pH ）重悬，加溶菌酶至终浓度为1 mg/mL，冰浴30 min，超声波裂菌，离心后分别将上清和沉淀进行SDSPAGE分析.融合蛋白的纯化将1 mL 500 mL/L Ni2+NTA悬液和4 mL细菌裂解上清液轻轻混匀4℃放置60 min，直接过柱. 过柱结束后，用4 mL漂洗液（20 mmol/L 咪唑，300 mmol/L NaCl及50 mmol/L 磷酸二氢钠 pH ），洗脱未和Ni珠结合的杂蛋白. 经过2次漂洗后再用 mL洗脱液(250 mmol/L 咪唑，300 mmol/L NaCl及50 mmol/L 磷酸二氢钠 pH ) 3次洗脱特异结合的目的蛋白，分步收集. 取收集液，进行SDSPAGE分析.与（CGG）29重复序列双链DNA结合实验取10 μL磁珠用1 mL的无RNA酶的三蒸水清洗磁珠2次，除去防腐剂. 1×生物素亲和素结合缓冲液（10 mmol/L TrisHCl，2 mol/L NaCl，1 mmol/L EDTA，1 g/L Tween 20）15 μL重悬磁珠，各5 μL分3组实验. 其中一组加入25 μL（100 ng/μL）生物素化的（CGG）29重复序列双链DNA，另外两组分别加入25 μL（100 ng/μL）非生物素化的（CGG）29重复序列双链DNA和25 μL三蒸水做对照；三组分别再加入2×生物素亲和素结合缓冲液30 μL，25℃轻摇1 h. 经磁力吸附后，弃上清. 重复上述步骤3次；加入纯化后CGGBP1（500 μg/mL）15 μL 和2×核酸蛋白结合缓冲液（20 mmol/L HEPES，100 mmol/L NaCl， mmol/L DTT，100 g/L甘油）20 μL，室温下静置30 min；经磁力吸附后，弃上清；用1×核酸蛋白结合缓冲液清洗磁珠2次；加三蒸水10 μL，沸水煮10 min，进行SDSPAGE分析.2结果原核表达载体的构建及鉴定扩增产物在15 g/L的琼脂糖凝胶电泳，可观察到一条约504 bp的条带（图1）； 重组质粒pRSET A/CGGBP1及质粒pRSET A分别用BamHI和KpnI酶切，pRSET A/CGGBP1分为两个片段，分别为 ku和504 bp（图2），均与预计结果相同.的表达用BamHI和KpnI双酶切pRSET A/CGGBP1表达质粒，筛选阳性重组质粒. 携带有pRSET A/CGGBP1质粒的 BL21(DE3)菌株，经IPTG诱导后，在Mr 约25 000处出现1条表达条带；而未经IPTG诱导的菌体则无此条带. 诱导后的菌体经溶菌酶及超声波裂解，离心后分为上清和沉淀两部分. 经SDSPAGE分析表明，CGGBP1部分存在于细菌裂解液的上清中，为可溶性蛋白，上清液中的目标蛋白相对较少（图3）. 蛋白纯化在表达质粒pRSET A多克隆酶切位点的上游， 插入有连续6个组氨酸的序列 —(His )6 tag. 重组质粒经诱导表达后，(His )6 tag可以和外源插入片段共同表达. 利用(His )6 tag 和金属Ni2+的螯合所设计的固定化金属配体亲和柱层析方法，是纯化目的蛋白的一种高效而简单的方法. SDSPAGE显示，CGGBP1得到较高程度的纯化（图4）.与5′d（CGG）293′重复序列双链DNA结合实验生物素化的5′d（CGG）29 3′重复序列双链DNA被固定到链酶亲和素磁珠上，非生物素化的5′d（CGG）293′重复序列双链DNA因无法固定到链酶亲和素磁珠上而被洗脱掉. 同理，加入CGGBP1后，未和5′d (CGG）293′重复序列双链DNA结合的蛋白也被洗脱（图5）.3讨论关于微卫星的产生机制，普遍认为是DNA复制过程中DNA聚合酶的滑动［4］，或DNA复制和修复时滑动链与互补链碱基错配，导致一个或几个重复单位的插入或缺失. 已发现微卫星可能是一种非常活跃的碱基序列，通常各种简单的重复序列成簇地聚集在一个染色体区域，这个染色体区形成特异染色体结构的能力将会增强. 这些区域在核糖体RNA基因中非常复杂，同时这些重复序列所折叠形成的结构还能与特异的蛋白质相结合，成为“染色质折叠密码”［5-6］，参与遗传物质的结构改变，基因调控及细胞分化等过程. 脆性X综合征是Igarashi等［7］研究报道的与三核苷酸重复片段扩增突变有关的7种神经变性疾病其中的一种. 该蛋白只和（CGG）n重复序列发生特异性结合，而与其它类型的三核苷酸重复序列不结合［8］. 因此，对该蛋白功能的研究具有重要的理论研究意义. 本实验成功地构建了含CGGBP1的重组质粒，以可溶性蛋白形式获得较高表达. 通过Ni2+NTA柱纯化，获得纯化的目标融合蛋白质，同时证明了该蛋白能和人FMR1基因5′d (CGG)293′重复序列双链DNA特异性结合. 这将为进一步开展真核生物蛋白CGGBP1功能的研究和阐释CGG三核苷酸动态突变的致病机理奠定基础.
修改:相关网站:我给你提供一些大肠杆菌的资料,比较乱,自己去整理.三凉食品这个术语没有听说过,如果可以解释一下,或许我会知道.大肠杆菌O157: H7实验诊断研究进展 大肠杆菌O157: H7感染临床表现出血性肠炎：鲜血样便，腹部痉挛性疼痛，低热或不发热。 溶血性尿毒综合征（HUS）：主要发生在儿童，常出现在腹泻后数天或1-2周。病死率一般在10%，各别可高达50%。血栓性血小板减少性紫癜（TTP）：主要发生在成年人，尤其老年人。病人主要表现为发热、血小板减少、溶血性贫血、肾功能异常等症状，病情发展迅速，病死率高，有时可出现70%的病人死亡。大肠杆菌O157: H7传染源和传播途经大肠杆菌O157: H7基本上是一种食源性病原菌，可通过食用大肠杆菌O157: H7污染的牛肉、牛奶、牛肉或制品、鸡肉、蔬菜、水果、饮料、水等感染,也可通过人与人、人与动物密切接触传播。在实验室，大肠杆菌O157: H7可以感染小鼠、鸡、兔、猪、牛等动物。大肠杆菌O157: H7的感染已成为世界性的问题我国情况也不容乐观一、细菌培养与鉴定 1．分离培养早期培养对确定病原有重要意义。 培养的对象首先是急性血性腹泻患者，其次是HUS、TTP等住院病人，再其次是高危接触者。培养基：山梨醇麦康凯琼脂、胰胨大豆琼脂改良的伊红美兰 、改良的SD-39（MSD）琼脂 添加了头孢克肟 和 亚碲酸钾的山梨醇麦康凯琼脂（TC-SMAC）添加了头孢克肟和鼠李糖（)的山梨醇麦康凯琼脂（CR-SMAC）“科玛嘉”大肠杆菌O157: H7显色培养基四溴荧光亚甲基兰琼脂H7抗血清—山梨醇发酵培养基 增菌液：含10mg/L 新生霉素的EB肉汤或肠道增菌液含10mg/L 新生霉素或10mg/L盐酸-吖啶黄的胰蛋白胨大豆肉汤新生霉素MEC肉汤月桂基胰蛋白胨肉汤加入下例任何一种抑制剂均可增加培养基的选择性头孢克肟 亚碲酸钾 新生霉素10mg/L 万古霉素40mg/L2．免疫磁珠分离法免疫磁珠分离法是将特异性抗体吸附于一种能被吸附的磁性珠子上,然后利用抗原抗体反应特性将样品中的大肠杆菌O157: H7富集起来。方法:1.增菌;2.取样品1ml加大肠杆菌O157: H7免疫磁珠20ul;3.轻轻混合10分钟;4.将试管插入磁架上;5.吸取上清;6.加PBS,重复3-5过程;7.取管壁沉淀物,划线接种于CT-山梨醇麦康凯琼脂(C-头孢克肟,T-亚碲酸钾)等选择性培养基。37℃培养6-24小时，挑取可疑菌落进行鉴定。Chapman等 共检测大便标本690份, 免疫磁珠分离法检出25 。用免疫磁珠分离法分离的l2株大肠杆菌O157: H7中,直接培养阳性仅5株。Wright等将接种大肠杆菌O157: H7的碎牛肉标本置加有万古霉素和头孢克肟的缓冲蛋白胨水培养,然后直接或用大肠杆菌O157抗体包被的磁珠分离细菌后,接种于CT-SMAC,结果直接次培养检出量为200cfu/g,而免疫磁珠分离法仅需 2cfu/g 。Chapman等先用EC肉汤增菌,然后用免疫磁珠分离法富集牛粪便大肠杆菌O157: H7菌株,再用选择性培养基分离，并与CR-SMAC和CT-MAC直接培养作比较。用前者检测接种12株不同大肠杆菌O157: H7菌株的牛粪便悬液,其敏感性比在两种培养基上直接培养高100倍。 Cubbon等用免疫磁分离法（IMS）检测牛粪便和食品标本的大肠杆菌O157: H7。在一起经牛奶传播的大肠杆菌O157: H7爆发中,用IMS、粪便培养和多聚酶链反应(PCR)检测Vero毒素基因的携带,用三种方法对粪便大肠杆菌O157: H7的分离率作比较结果,在受检的142份粪便标本中,直接培养和IMS均阳性20 份,另13份仅IMS阳性。因此,IMS提高了大肠杆菌O157: H7感染病例的检出率,与PCR符合率高。目前，污染的肉、家畜，甚至饮用水均面临大肠杆菌O157: H7的卫生威胁。检测食品和水源中肠道病原体使用传统的培养法,结果不理想。IMS和其它检测的研究表明,对快速检测食品和环境标本似乎前景良好,Yu检等以IMS结合电化学发光检测法(ECL)检测食品和污染物中的大肠杆菌。结果显示,在原缓冲液检出大肠肠菌的范固为100－1000 cfu/lm,在食品检出的范围为1000－2000cfu/lm ，检测时间十分快,一般不到1小时。菌O157: H7菌株的牛粪便悬液,其敏感性比在两种培养基上直接培养高100倍。在监测牛群的4个月间,从牛采集1024份直肠标本,其中检出大肠杆菌O157: H784份（）84份中有23份（）由直接培养和IMS分离。23份中15份由两种培养基、5份仅由CT-SMAC、3份仅由CR－SMAC分离,其余61份()仅IMS分离。用含吐温－20 的PBS洗涤磁珠可减少其它微生物与磁珠的非特异性结合。用无关的抗体包被磁,则大肠杆菌O157: H7不结合。IMS具有快速、操作简单、特异性高,在流行病学调查中有价值。 3．生化反应 目前许多国家使用的O157和 H7特异性抗体与极少数细菌具有不同程度交叉反应。因此用生化试验确定为大肠杆菌是必须的。典型大肠杆菌的主要生化反应结果如下：动力试验（+） 葡萄糖（+） 麦芽糖（+）甘露醇（+） 蔗糖（－/+） 硫化氢（－） 尿素（－） 靛基质（+） 甲基红（+） V-P试验（－）枸橼酸盐（－）苯丙氨酸脱羧酶（－）赖氨酸脱羧酶（+/－）鸟氨酸脱羧酶（ +/ －）氧化酶（－）氰化钾（－）与O157有鉴别意义的生化反应见表1。MUG即4-甲基伞形化内酯-β-葡萄糖醛酸苷。大多数大肠杆菌具有葡萄糖醛酸酶,可水解MUG产生荧光, 但O157: H7中大多数菌株则不水解MUG。Thompson等建立了一种快速MUG试验,取 MUG试剂置试管中,以无菌棉签挑取待检菌纯培养物混匀于其中,℃置20min,暗室内高强度光源下观察结果,产生蓝色荧光者为阳性。 二．血清学检测1．玻片凝集试验2. 胶体金免疫技术3. ELISA 4．免疫荧光技术5．胶乳凝集 6. 间接血凝分析(IEHA)7. 全自动抗原抗体检测系统8. 免疫印记法1．玻片凝集试验玻片凝集试验是鉴定O抗原最经典的方法,实验中如果凝集反应不明确，但根据临床表现和生化反应等菌株高度可疑时,可100℃加热菌液30min再行玻片凝集试验。这样可去除K抗原的影响。为排除交叉反应引起的凝集造成假阳性,应继而做试管凝集反应,所测得的效价不应低于诊断血清原标定效价的一半。鉴定H抗原也应同时做玻片和试管凝集试验,并应先对待检菌做动力试验,在动力活泼时取培养物做H抗原鉴定。2. 胶体金免疫技术胶体金免疫技术特点是以胶体金作为标记物进行的抗原抗体反应。这一技术最初用于免疫电镜技术。至今，在免疫测定中，金标记常与膜载体配合，形成特定模式，典型的如斑点免疫渗滤试验和斑点免疫层析试验等，已是目前应用广泛的一种简便、快速的血清学检验方法。胶体金的制备多采用还原法，氯金酸是主要还原材料。金颗粒的大小取决于制备时加入的柠檬酸三钠的量。胶体金免疫层析试验时以硝酸纤维膜为载体，利用了微孔膜的毛细管作用，滴加在膜条一端的液体慢慢向另一端渗移，犹如层析一样。中国预防医学科学院微生物研究所利用胶体金技术、双抗体夹心法和显色反应等特点，研制了大肠杆菌O157: H7病原体快检金卡，通用于定性检测粪便、食品、水等样品中的O157: H7大肠杆菌。显色程度与样品中细菌含量成正比，最低测菌量为少于100个菌细胞，主要特点是敏感性高，可用于待检样品初筛，阳性样品可进行细菌分离，减少工作量。3. ELISA 大肠杆菌O157: H7的常用检测方法是粪便培养后作细菌分离,然后用生物化学和免疫学方法鉴定,一般需72 小时。Dylla等用一种快速ELISA直接检测粪便中大肠杆菌O157: H7,并与标准培养方法加以对照。结果显示,ELISA检测183份粪便标本,检出大肠杆菌O157: H7 9份。常规培养法阴性176份,而ELISA阴性174份。总特异性为。该法与其它非O157: H7大肠杆菌无交叉反应,是一种准确、敏感、特异、易观察结果的筛选方法，尤其适用于中、小实验室及大量粪便标本的流行病学调查。Padhye等用单克隆抗体进行直接ELISA反应检测O157: H7,除O26 ：H11外，未发现与沙门氏菌、结肠炎耶氏森菌、志贺氏菌和肺炎克雷伯民菌等有交叉反应。单克隆抗体用于检测大肠杆菌O157: H7有明显特异性，可作为一种免疫试剂用于临床和食物标本的快速检测。Clark 等近一步对单克隆抗体的研究发现,此种单克隆抗体识别的物质是LPS,这种LPS抗原决定簇用全细胞ELISA同样可以在其它血清型大肠杆菌和产生或不产生Vero毒素的大肠杆菌中检测到, 而且易受到胆盐、吖啶黄和温度的影响,但可以通过结合免疫捕获的修饰方案来提高ELISA的特异性。4．免疫荧光技术 DEFT 与Ab-DEFT： 直接荧光技术（DEFT）与抗体定位荧光技术(Ab－DEFT)的主要特点是,显微镜下直接计数样品菌细胞。由于无需培养或分离过程,因此检测非常快速。DEFT的基本原理为:对样品进行过滤,用荧光染料(如吖啶橙)对留在滤膜上的菌细胞染色后,用荧光显微镜观察计数。但由于荧光染料的非特异染色,不但被检菌被染色,本底杂菌也可染色,从而影响了结果的精确性。Ab-DEFT则克服了这一缺点,过滤后的菌细胞与荧光标记的特异抗体作用,然后用荧光显微镜观察计数。 固相荧光毛细管免疫分析此方法高度敏感，具有快速、试剂用量少、易于操作等优点。Czajlu等用热杀死的O157: H7菌包被玻璃毛细管作固形支持物。 样品中加入结合了生物素的O157: H7多克隆抗体,作用一段时间,然后将此样品/抗体混合物与标记了Cy5 (一种荧光花青染料)的亲和素加入到毛细管,孵育2min,冲洗、吹干,由激光传感器系统发射650nm波长激发光激发花青染料,之后用光学传感器系统测定荧光发射密度。直接免疫荧光抗体染色 Park等对粪便样品进行离心后,用免疫荧光抗体对粪便涂片进行标记,可检测到所有培养法证实的菌株,检测时间<2h。5．胶乳凝集 该方法是以胶乳颗粒作载体,以O157: H7特异性抗体致敏,制成特异的胶乳试剂,将标本乳化于玻片或有色烧盘上，滴加胶乳试剂,呈明显凝集而对照胶乳不凝集时即为阳性。 6．间接血凝分析(IEHA)该法多用于对LPS、可溶性本体抗原、未加热抗原的抗体检测,对检测H抗原的抗体效果不佳。Morooka等检测了溶血性尿毒综合征(HUS)病人血清LPS抗体,虽然甲醛化羊红细胞(SRBC)有低水平非特异性吸附,但不影响该方法作为一种有效、快速（<3h）的诊断方法。因为感染病人血清的滴度明显高于非特异性吸附。7. 全自动抗原抗体检测系统VIDAS是一种全自动抗原抗体检测系统。可直接从感染性疾病患者标本中检测细菌、病毒、弓形虫、衣原体和螺旋体等微生物的抗原、抗体或毒素。基本原理：采用酶联免疫（夹心法）原理，并在底物中掺入荧光物质，最终产生荧光产物4-甲基-7-羟刀豆素，荧光强弱与标本中被测物浓度相关，经扫描样本读数与标准比较计算出标准值，并根据阴性和阳性临界值判定结果。 8.免疫印记法目的是检测大肠杆菌O157: H7感染者血清中的O157脂多糖和溶血素特异性 抗体。基本原理是将提纯的脂多糖或溶血素用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分离后，通过转移电泳转移到硝酸纤维膜上，然后用抗原抗体进行免疫检测。包括SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、转移电泳、免疫检测三部分。特点是具有比较高的特异性和敏感性 。免疫检测 将封闭好的硝酸纤维素膜按梳子齿的宽度剪成每一个泳道一条，依次编号。1) 每条加入1毫升用PBS稀释的病人血清，室温震荡2小时，同时设阳性对照和阴性对照；2) 用毫升／条PBST震荡洗涤3次，每次5分钟；3) 加入用1毫升用PBS稀释的II抗，室温震荡1小时；4) 用毫升／条PBST震荡洗涤2次，每次5分钟，再用PBS洗涤一次； 5) 将膜放入12毫升显色液中显色，室温震荡15-30分钟，至阳性对照出现满意的蓝紫色 ；6) 将膜放入蒸馏水中终止显色反应，照相；7) 当显色的条带和溶血素的分子量或0157脂多糖的条谱一致时，结果判断为阳性。二．分子生物学检测 分子生物学的出现，为更快诊断微生物提供了许多分子学工具。 这一新的研究是用基因型而不是表型因子来鉴定特异性病原体。因此其特异性更好。加之 操作程序自动化使得DNA分析在实验室应用中已成为常规操作。自动化DNA提取仪，聚合酶链式反应仪(PCR仪)，DNA序列分析仪，脉冲凝胶电泳仪(用于分离DNA大片段，如完整的染色体) 在疾病诊断中都是很有用的。 1．DNA探针探针(probe)标记：放射性核素 、非放射性物质标记 。探针的来源 ：①克隆的基因组DNA探针；②cDNA探针；⑧RNA探针；④寡核苷酸探针。标本处理：根据标本来源和量的不同而处理不同 。杂交方法：斑点杂交 、southern印迹 、原位杂交 、Northern印迹 等。杂交信号检测 ： (1)测量放射性核素射线脉冲数 (2)放射自显影 (3)显色法 (4)发光法。 O157: H7特异噬菌体上的sltⅠ、Ⅱ基因、大质粒溶血素基因及染色体上eae基因等都已制成了可杂交检测的特异探针。Beutin等曾用VT1(750bp,)、VT2(850bp)、溶血素()等探针进行流行病学调查。Thomas等用地高辛标记的VT2B亚单位基因、VT2C基因探针检测不同噬菌体型O157: H7菌。Huck等筛选了O157: H7大质粒上限制性片段,发展了一种的Sma I片段探针,认为此探针对O157: H7血清型最为特异,可与所有O157: H7试验菌杂交。2. PCR技术 聚合酶链式反应技术（PCR）是一种选择性体外扩增DNA或RNA片段的方法。具有特异性强、敏感性高、快速、简便、可扩增RNA或cDNA、对起始材料质量要求低等优点。PCR技术扩增体系的基本成分引物: PCR产物的特异性主要取决于引物链的特异性。由于存在同源序列，随意设计的引物链，其PCR产物在电泳分析时可能出现多条链，因此在设计引物链时应充分考虑引物特异性。引物长度一般为15-30个碱基,G+C含量为40- 60%,浓度 。TaqDNA聚合酶：浓度为1-4ul/100ul。TaqDNA聚合酶单位用量增长可能导致非特异DNA扩增 。模板DNA：应避免混有任何蛋白酶、核酸酶、DNA聚合酶抑制剂及能结合DNA的蛋白酶。DNA摸板的制备方法有加热法、冻溶法、超声波粉碎法、碱变性法、SDS裂解法等多种。 4×dNTPs ： dNTP储存液pH应为，在反应体系中，4种dNTP的浓度应相同，每种dNTP的浓度以50-200 umol/L为宜。缓冲液及其他成份：PCR反应体系中，一般采用Tris-HCl缓冲液。适宜的Mg2+浓度为高于dNTP总浓度 mmol/L。 PCR技术循环参数PCR扩增是由变性、退火和延伸三个步骤反复循环而实现的。确定正确的循环参数是PCR成功的保证。循环参数1．变性温度和时间 模板DNA和PCR产物的变性不完全，是PCR反应失败最常见的一个原因,在变性步骤，使温度达到双链DNA完全分离的变性条件是95 ℃ ，30s。对GC含量高的靶DNA序列，宜用较高的变性温度。在解链温度下，DNA的变性仅需几秒。但是，使反应管内达到解链温度需要一定的时间。原则上变性步骤应高温、短时，即要保证变性充分，又要保持聚合酶在整个反应中的活性。循环参数2．引物退火 引物退火的温度和时间取决于引物的长度、碱基组成及其在反应体系中的浓度 。对GC含量约50％，长20个碱基的典型寡核苷酸引物而言，最佳的退火温度为55 ℃ 。在温度较高的条件下退火，可提高PCR的特异性。 循环参数3．引物延伸 ：引物延伸是DNA聚合酶将脱氧单核苷酸逐一地加到引物的3’一OH末端，引物延伸温度取决于DNA聚合酶的最适温度。如用TaqDNA聚合酶，一般取70-75 ℃ ，常用72 ℃ 。 延伸步骤的时间则取决于目标序列的长度、浓度和延伸温度。目标序列越长、浓度越低、延伸温度越低，则所需的延伸时间越长；反之，目标序列越短、浓度越高、延伸温度越高，所需的延伸时间则越短 一般而言，每1000个碱基的序列，延伸时间1分钟便足够了。对于扩增100—300个碱基的短序列片段，可省去延伸温度这一步骤，而采用快速简便的变性、退火双温循环。这是因为TaqDNA聚合酶即使在退火温度下仍保持很强的活性，而延伸过程可在退火温度转变为变性温度的过程中完成。 循环参数扩增产物长度 100bp 500bp 1000bp 2000bp94℃变性时间（秒） 30 30 60 6055℃复性时间（秒） 30 30 60 6072℃延伸时间（秒） 30 38 120 180一般作25-30个循环即可，进行最后一次循环时间、延伸时间增加5分钟。PCR扩增产物的检测方法PCR反应混合物经过循环扩增后，所需做的工作就是检测反应液中是否存在预期扩增产物及产物的特异性。目前已经发展了许多检测分析PCR扩增产物的方法。包括凝胶电泳、高压液相色谱、核酸探针杂交、探针捕获酶免疫分析、酶切图谱分析、单链构型多态性分析、核酸序列分析。PCR技术类型 免疫PCR技术 原位PCR技术 不对称PCR技术 巢式PCR技术 反向PCR技术 逆转录PCR技术 复合PCR技术 彩色PCR技术 抗原捕获PCR技术增敏PCR技术 酶标PCR技术 二温式PCR技术 锚定PCR技术 定量PCR技术 毛细管PCR技术 多重PCR技术 巢式或套式PCR技术PCR技术在大肠杆菌O157: H7检测中的应用(1)简单PCR： Meng等以eae基因5′末端附近一段688bp DNA片段为基础设计了一对引物,扩增产物为633bp的DNA片段。其退火温度为60℃－63℃, 应用煮沸法与基因释放法,大肠杆菌O157: H7检出限分别为25与38CFU/ml,检测时间为3h。Thomas等用PCR扩增了slt基因片段。引物：正链5′-(TTTACGATAGACTTCTCGAC)-3',反链5′-（CACATATAAATTATTTCGCTC）-3’ 其PCR产物由凝胶电泳测定,检测时间为ld 。徐建国等根据O157: H7 特有的hlyA、B基因序列设计了PCR引物,产物为338bp。PCR技术在大肠杆菌O157: H7检测中的应用（2）多重PCR:由于鉴定O157: H7血清型不能仅仅依靠简单PCR,近年来国外学者对多重PCR方法在大肠杆菌O157: H7的诊断价值方面进行了研究。Meng等同时扩增了eae 上游基因片段、sitⅠ基因片段、sit Ⅱ基因片段,其长度分别为633、210、484bp。此引物设计可有效区别O157: H7血清型与O55: H7、O55: NM。Fratamico等在一个单一反应中同时扩增了eae基因、slt Ⅰ、Ⅱ的保守序列及60MDa质粒保守序列,其产物分别为1087、227、224、166bp。严笠选用针对大肠杆菌O157: H7志贺样毒素Ⅰ、Ⅱ（SLT－Ⅰ、SLT－Ⅱ）和溶血素（Hly）基因的三对引物,在同一扩增体系中进行PCR,检测12株不同来源的O157: H7大肠杆菌及其它致病性大肠杆菌及沙门菌、志贺菌15株。结果复合PCR方法较单一PCR方法具有较高的特异性，12株O157: H7取得了稳定、可靠的阳性结果。能迅速、有效地与其它致病性大肠杆菌及沙门氏菌、志贺菌相鉴别。PCR技术在大肠杆菌O157: H7检测中的应用（3）原位PCR:kurokawa等不用培养过程,直接用原位PCR技术结合落射显微镜,在单细胞水平快速检测O157: H7 。在大肠杆菌O157: H7分型、检测中的应用传统的细菌分类方法主要依赖于细菌的形态学、代谢产物、酶活性和表面抗原等特征。随着现代分子生物学理论和技术的迅速发展，微生物检测进入了基因时代，以核糖体核糖核酸序列为基础的分类方法为微生物的鉴别提供了新的分子生物学方法。如16srRNA、 23srRNA、 16-23srRNA区间序列分析等等，它完全不同于传统方法，具有快速、简便、敏感和特异等优点。23SrRNA基因特征：原核生物的核糖体有三种大小（分别为23S、16S、 5S）的rRNA。目前已知23SrRNA基因全长序列的菌种数目已达250种。长度大约为3000pb。对许多细菌的23SrRNA基因序列分析发现，其序列的可变性比16SrRNA基因要明显，特别是亲源关系近的种系。利用这些可变区序列的差异可对相同菌种不同菌株进行分类鉴定。同时对已知23SrRNA基因序列分析也发现，在最初的520pb中有6个保守区域（5-10区域），并发现，这6个保守区域中6区段和10区段最保守，该序列在14个菌种中完全一致。应用：检测临床感染性疾病的病原菌 首先，将两条引物设计在保守区，成为通用引物，而在变异区中选择序列作为特异性探针，先用通用引物作PCR扩增，可筛选出含有病原菌的样本，再用特异性探针与扩增产物进行杂交，对目的细菌作出鉴定，达到诊断病原体及分型的目的。鉴定特定细菌种属 目前认为，已发现的23SrRNA基因的IVSs具有种属特异性，可利用IVSs（插入序列）进行PCR扩增达到对某一种属细菌的诊断。在流行病学方面的应用利用可变区序列的差异可对相同菌种不同菌株进行分析。为流行病提供依据。除以上介绍的各方法外,常用的有效检测方法还有脉冲场电泳、随机扩增多态性DNA指纹分析、细胞毒试验等,在此不一一赘述。 大肠杆菌O157: H7的检验程序 样品 增菌6小时 磁珠浓缩 可疑菌落 山梨醇麦康凯琼脂G染色 生化反应 血清学 毒力基因 大肠杆菌O157: H7实验室诊断依据 有下列情况之一具有实验室确诊意义： 1) 从腹泻病患者的粪便标本中分离出大肠杆菌O157: H7 ；2) 经PCR或DNA杂交试验证实具有溶血素基因 及志贺样毒素基因；3) 腹泻病患者恢复期血清抗O157LPS IgG抗体呈4倍升高；4) 具有血性便的腹泻患者的急性期血清或恢复期血清，蛋白印记试验证实含有和O157LPS、EHEC溶血素或志贺毒素的特异性抗体．小结自从O157: H7被认识以来,对其基因的研究越来越细,已经探明了许多结构与功能基因,对其病因学、病理学及临床治疗方面均有很大促进作用。由于引起感染所需的O157: H7剂量很低,有必要发展一些灵敏度高的方法,用于快速有效地检测。另外,现已发现存在许多变异株,单用一种方法来检测往往是不够的。如发酵山梨醇的变异株用SMAC即不能检测到;由于许多非EHEC(EPEC、霍乱弧菌、志贺菌等)也可产生SLT,故单纯检测SLT也会产生假阳性结果。因此对一个样品的检测需结合使用多种方法才能获得准确的结果。 第三章 大肠菌群测定 一、大肠菌群检验(一)检验方法(二)培养基 (三)检验时应注意事二、大肠菌群的卫生学意义 大肠菌群是评价食品卫生质量的重要指标之一，目前已被国内外广泛应用于食品卫生工作中。该菌群主要来源于人及温血动物粪便，一般多用来作为食品中的粪便污染指标。过去我国在大肠菌群的检验方面经验不多，对该菌群的认识也不够充分。1974年全国修订食品卫生细菌检验方法座谈会和1976年全国食品卫生标准会议建议以大肠菌群作为粪便污染指标菌，并提出进行有关大肠菌群方面的科研工作。为此，我们成立了大肠菌群科研协作组，对犬肠菌群的检验方法(包括快速检验方法)及其卫生学意义进行了广泛的科学研究和实践，取得了一定成绩，为制订大肠菌群检验方法提供了科学依据。 在这次修订l976年版食品卫生检验方法的过程中，大肠菌群科研协作组又于1983～1985年对大肠菌群检验方法进行了实验研究，并作了对比观察，同时对国内常用的大肠菌群快速检测方法也进行了研讨，为这次修订国家标准食品卫生检验方法微生物学部分中的大肠菌群测定提供了科学依据。 大肠菌群不是细菌学上的分类命名，而是根据卫生学方面的要求，提出来的一组与粪便污染有关的细菌，这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致。其定义为：系指一群需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。有些科学工作者又用靛基质、甲基红、V～P、柠檬酸盐、硫化氢、明胶、动力和44．5℃乳糖分解等试验，将这群细菌再分为大肠艾希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷白氏菌和阴沟肠杆菌等。不论分法如何，对大肠菌群的判定，均应以上述定义为基础。一、大肠茵群检验(一)检验方法 1．乳糖发酵试验。以无菌操作采取样品，采取量及稀释倍数，依据国家或当地卫生标准要求及样品污染情况而定。将待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内，接种量在l m J以上者，用双料乳糖胆盐发酵管，lm1及1mI以下者，用单料乳糖胆盐发酵管。每一稀释度接种3管，置36±l℃温箱内，培养24±2小时，如所有乳糖胆盐发酵管都不产气，则可报告为大肠菌群阴性；如有产气者，则按下列程序进行。 2．分离培养。将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上，置36±l℃温箱内，培养18～24小时，然后取出，观察菌落形态，并作革兰氏染色和证实试验。 3．证实试验。在上述平板上，挑取可疑大肠菌群菌落l～2个进行革兰氏染色，同时
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游泳池的水干不干净检查方法：1、用眼看，如果直接能看出来水很脏，那就不要去洗了。2、用手摸，凭感觉，如果感觉水质很“滑”，那么肯定不干净。3、测试，用消过毒的玻璃杯取游泳池的水20毫升，放入水螅五只，认真观察其生活状况，作好记录，如果一星期后水螅死亡，则水很干净，否则很脏。
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这个太好写了。 可以参考黄老师的书《新型水处理剂——二氧化氯技术及应用》
为评价二氧化氯对饮用水消毒效果及卫生安全性，采用悬液定量杀菌试验和动物试验对二氧化氯发生器工作l h后生产的二氧化氯消毒液进行消毒效果和毒性及消毒后水质理化指标的检测。结果，含 1mg／L，二氧化氯该消毒液作用3min，对水中大肠杆菌的杀灭率为100％；温度和浑浊度对杀菌效果的影响不明显；消毒后水的理化指标符合《生活饮用水卫生规范》的标准。毒理学实验结果显示，二氧化氯消毒液口服对小鼠LD50>10000mg／kg体重，属无毒级，弱蓄积毒性，对大鼠骨髓嗜多染红细胞无致微核作用。详情：QQ993666957
大肠菌群测定的操作细则大肠菌群系指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。该菌主要来于人畜粪便,故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量,推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。食品中大肠菌群数系以100ml(g)检样内大肠菌群最可能数(mpn)表示。1设备和材料温箱：36±1℃。冰箱:0～4℃。恒温水浴:±℃。天平。显微镜。均质器或乳钵。平皿:直径为90mm。试管。吸管。广口瓶或三角烧瓶:容量为500ml。玻璃珠:直径约5mm。载玻片。酒精灯。试管架。2培养基和试剂乳糖胆盐发酵管:按中规定。伊红美蓝琼脂平板:按中规定。乳糖发酵管:按中规定。肉汤:按中规定。磷酸盐缓冲稀释液:按中规定。生理盐水。革兰氏染色液:按中规定。3操作步骤检样稀释以无菌操作将检样25ml(或g)放于有225ml灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内(瓶内予置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内,经充分振摇或研磨做成1:10的均匀稀释液。固体检样最好用均质器,以8000-10000r/min的速度处理1min,做成1:10的均匀稀释液。用1ml灭菌吸管吸取1:10稀释液1ml,注入含有9ml灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内,振摇试管混匀,做成1:100的稀释液。另取1ml灭菌吸管,按上条操作依次做10倍递增稀释液,每递增稀释一次,换用1支1ml灭菌吸管。根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计,选择三个稀释度,每个稀释度,接种3管。乳糖发酵试验将待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内,接种量在1ml以上者,用双料乳糖胆盐发酵管,1ml及1ml以下者,用单料乳糖胆盐发酵管。每一稀释度接种3管,置36±1℃温箱内,培养24±2h,如所有乳糖胆盐发酵管都不产气,则可报告为大肠菌群阴性,如有产气者,则按下列程序进行。分离培养将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上,置36±1℃温箱内,培养18-24h,然后取出,观察菌落形态,并做革兰氏染色和证实试验。证实试验在上述平板上,挑取可疑大肠菌群菌落1-2个进行革兰氏染色,同时接种乳糖发酵管,置36±1℃温箱内培养24±2h,观察产气情况。凡乳糖管产气、革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌,即可报告为大肠菌群阳性。报告根据证实为大肠菌群阳性的管数,查mpn检索表,报告每100ml(g)大肠菌群的mpn值。4粪大肠菌群(faecalcoliform)用接种环将所有产气的乳糖胆盐发酵管培养物(见条)转种于ec肉汤管内,置±℃水浴箱内(水浴箱内的水面应高于ec肉汤液面),培养24±2h,经培养后,如所有ec肉汤管均不产气,则可报告为阴性;如有产气者,则将所有产气的ec肉汤管分别转种于伊红美蓝琼脂平板上,置培养18-24h,凡平板上有典型菌落者,则证实为粪大肠菌群阳性。结果报告根据证实为粪大肠菌群的阳性管数,查mpn检索表,报告每100ml(g)粪大肠菌群的mpn值。
乌龟(Chinemys reevesii)是一种常见的爬行动物,也是一种著名的滋补品。现代中医药学研究表明,龟类有较大的药用价值,龟肉、龟甲、龟血、龟胆汁甚至龟尿都可以入药。 本文对巴西龟(Trachemys scripta)尿液中12种主要活性成分的含量进行了测定,并通过将不同的尿液样本作用于10种供试菌种的抑菌实验研究。研究结果表明:巴西龟尿液中总蛋白、尿酸等成分含量的平均值均高于人尿中的含量;而且不同的尿液样本中一些成分存在着一定的变化,例如尿酸的浓度范围在～μmol/L、总蛋白的浓度范围在～、三甲氧苄二氨基嘧啶的浓度范围在～;同时研究发现巴西龟的尿液具有一定的抑菌作用,特别是对一些常见鱼病的致病菌,例如:肠型点状气单胞菌(Aeromonas punctata fintertinalis)、荧光极毛杆菌(Pseudomonas fluorescens)、嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)、苏伯利气单胞菌(Aeromonas sobria)、鲁克氏耶尔森氏菌(Yersinia ruckeri)、鱼害粘球菌(Myxococeus piscicola)等细菌具有良好的抑制作用,其尿液抑菌的最底抑菌浓度(MIC)为30%,通过对不同尿液样本中12种主要成分含量与对应尿液抑菌圈面积之间相关系数的计算,我们发现只有尿酸和三甲氧苄二氨基嘧啶两种成分与尿液抑菌效果的相关系数rr_()=,因此可以确定巴西龟尿液的抑菌作用效果与尿液中的两种物质即尿酸和三甲氧苄二氨基嘧啶的浓度变化存在着明显的正相关性,从而初步揭示巴西龟尿液的抑菌作用是上述两种成分作用的结果。 本论文是从实验室的角度开展巴西龟尿液主要成分分析及初步阐明巴西龟尿液的抑菌作用,通过前期的实验室研究工作为即将开展的在水产养殖中对家鱼的一些常见病、多发病的防治工作研究从理论上打下铺垫,同时为开展龟鱼混养以龟的尿液排泄物代替化学药物防治鱼病、减少渔业养殖上的农药施用和水体污染、丌展无公害生念养殖提供了科学依据和新的思路。 解剖冬眠及冬眠后禁食期间的乌龟，发现其腹腔内有一巨型储满尿液的膀胱泡．用荧光、紫外、全自动生化分析和液相色谱进一步分析冬眠乌龟体液和尿液中的生化成分，发现了一些与长寿密切相关的特点：1、具有独特的抗氧化特性：冬眠状态乌龟尿液在体外十几个小时内有抗氧化功效；冬眠乌龟尿液中脂过氧化物水平和老年色素类代谢垃圾物质水平都很低，2、冬眠乌龟尿液和血清中都含有多种有特殊功效的生物酶类和抗氧化物质：例如，血清中乳酸脱氢酶和肌酸激酶含量特别高，分别达2321mol／L和4524mol／L；抗氧化剂尿酸在血清中浓度较低，而在尿液中浓度大大提高，3、与正常乌龟相比，冬眠状态乌龟尿液中游离氨基酸成分发生了较大的变化，这些结果对于乌龟的长寿和耐应激生理机制提供了一些初步的生化解释
论文陈述可以很好地组织和发展论点，并为读者提供关于论点的“指南”。
论文陈述包含以下内容：
1、陈述你对这个主题的主要观点
陈述观点时一定要表达一个主要思想，并陈述你的立场或看法。关于主题，需思考：
2、给出几个支持主要观点的理由
理由要写清楚，一定要用符合逻辑的事实和证据来支持这个理由。
3、给出一个与主要观点相反的观点
一个好的论文陈述要承认论点存在另一面。所以，同学可以在论文陈述中给出一个反论点。
论文陈述写作示例：
1、首先，从一个问题开始。例如：互联网对教育有正面或负面的影响吗?
2、其次，表明你对这个问题的立场。例如：互联网对教育的正面影响大于负面影响。
3、最后，发展你的答案。例如：互联网使用的负面影响被其对教育的诸多好处所抵消：互联网有助于学生和老师更容易地获取信息、接触不同的观点，以及这是一个灵活的学习环境。
1. 响应曲面法优化黄参酸奶生产工艺.食品科学（CSCD核心库期刊），2011,32（12）：39-44（第一作者）2. 荷叶离褶伞菌丝体深层发酵及胞内外多糖含量的变化.中国酿造（CSCD核心库期刊），2011，230（5）：56-59（第一作者）3. 荷叶离褶伞子实体、菌丝体及发酵液蛋白质营养价值评价伤.菌物学报（CSCD核心库期刊），2010，29（4）：603-607（第三作者）4. 葡萄表面所得酵母的筛选及其鉴定.食品工业科技（CSCD核心库期刊），2010，31（6）：182-184（第二作者）5. 人参果酸奶制作工艺的研究.中国酿造（CSCD核心库期刊），2009，212（11）：167-169（第一作者）6.肉苁蓉多糖提取工艺及抑菌作用的研究.安徽农业科学（CSCD核心库期刊），2009，37（32）：15855-15856,15878（第一作者）7.极大螺旋藻酸奶加工工艺的研究.中国酿造（CSCD核心库期刊），2009，213（12）：155-158（第一作者）8.荷叶离褶伞子实体发酵液营养成分分析.食品科学（CSCD核心库期刊），2009，31（6）：155-157（第三作者）9.酿酒酵母菌的紫外诱变及其突变株的性能测定.中国酿造（CSCD核心库期刊），2009，211（10）：66-68（第二作者）10.荷叶离褶伞多糖的提取工艺及其抑菌作用的研究.中国食品工业，2009，(12)：51-53（第一作者）11.曼陀罗种子生物碱提取物抑菌活性的研究. 甘肃农业，2009，（5）：90--92（第一作者）12.”Ni2+“对大蒜根尖细胞有丝分裂的影响. 作物杂志（CSCD核心库期刊），2008，（1）：37-40（第一作者）13.黄花蒿不同溶剂提取液的抑菌作用研究，中国野生植物资源，2008，（3）：45-48（第一作者）通讯作者14.镉胁迫对红果龙葵幼苗生理生化的影响. 沈阳农业大学学报，2008，（2）：（第三作者）15.”Cd2+“对龙葵根尖细胞有丝分裂的影响. 河西学院学报，2007，（5）：48-50（第一作者）16.工业废水对黄瓜幼苗生长及叶片抗氧化系统的影响.干旱地区农业研究（CSCD核心库期刊），2006，24（4）：76-80（第三作者）