本研究发现AML对照组PB中Treg细胞上TIGIT表达水平与TNF-α呈负相关。TNF-α参与了AML发生发展机制，包括细胞转化、增殖和血管生成等，据报道AML患者PB中TNF-α水平显著升高，且TNF-α水平升高是AML不良预后因素[19]。
第一章 前言
1.2 MDS的免疫微环境异常
目前MDS诊疗过程中进行的骨髓细胞学检查多集中于原始细胞比例，而忽略免疫细胞是否发生异常，然而已有越来越多的证据表明，免疫环境的异质性及其与原始细胞的相互作用导致了MDS治疗结果与反应的不同[8]。因此，在进行分类、疗效及预后评估时也应将免疫相关特征一并纳入考虑。
BM免疫微环境异常在MDS的发生发展过程中具有重要地位，但LR-MDS和HR-MDS免疫异常的表现与内在机制有一定区别。LR-MDS免疫微环境整体表现为促细胞凋亡和细胞毒性，其中促炎症细胞因子数量增加，表达促凋亡受体的MDS细胞反应性增强，CD8+T淋巴细胞表现出细胞毒作用增强，对MDS细胞存在抑制作用，但同时也抑制正常造血细胞，阻碍造血功能（图1.1）。HR-MDS免疫微环境相对于LR-MDS则表现为免疫逃逸和细胞凋亡减少，其中MDS细胞优先表达抗凋亡和抗吞噬细胞的分子，巨噬细胞、调节性T细胞（Regulatory T cell, Treg）、髓源性抑制细胞（Myeloid-derived Suppressor Cell, MDSC）向有助于免疫抑制的方向转化或扩增，CD8+T淋巴细胞在负调控免疫检查点分子的表达介导下耗竭，间充质干细胞（Mesenchymal Stem Cell, MSC）对自然杀伤（Nature Killer, NK）细胞的支持下降（图1.2）[9]。
第三章 结果
应用流式细胞术检测LR-MDS组、HR-MDS组、AML对照组及健康对照组PB中CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞与Treg细胞上TIGIT表达水平，结果显示LR-MDS组CD4+T淋巴细胞与Treg细胞上TIGIT表达水平高于健康对照组（P<0.001），低于HR-MDS组（P<0.05）；HR-MDS组CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞及Treg细胞上TIGIT表达水平明显高于健康对照组与AML对照组（P<0.001）。流式细胞示意图见图3.1.1~3。
注：A：使用前向角散射（FSC）、侧向角散射（SSC）圈选出淋巴细胞，设置为R1；B：以R1设门，圈选出CD4+T淋巴细胞，设置为R2；C：PerCP-eFluor710-TIGIT阴性对照；D：以R2设门圈选CD4+TIGIT+细胞，D1-D4依次为健康对照组、AML对照组、LR-MDS组、HR-MDS组CD4+TIGIT+细胞占CD4+T淋巴细胞比例示意图。
第四章 讨论
4.1 TIGIT在MDS患者中的表达水平与免疫调控
在MDS的发生发展过程中，免疫失调也存在异质性。LR-MDS以免疫亢进与细胞凋亡增加为主要特征，使用免疫抑制剂治疗往往能取得较好疗效，而HR-MDS的特点则是免疫抑制与免疫逃逸，通过激活免疫的治疗手段可能延长患者生存率[137]。此外，部分MDS的免疫失调表现为免疫亢进与抑制共存且互相转化。LR-MDS患者免疫异常如CTL和辅助性T细胞17显著升高，Treg细胞显著降低，提示免疫系统处于激活和促炎状态，导致HSC凋亡率增加[138]，而HR-MDS患者免疫系统处于抑制状态，BM微环境中的异常克隆得以大量扩增[10]。
Meng[126]等的研究显示TIGIT在MDS患者PB的NK细胞及T淋巴细胞表面表达均升高，其高表达与免疫细胞功能障碍以及IFN-γ、TNF-α的分泌减少显著相关，但这一研究未进一步分析TIGIT在PB中不同T淋巴细胞亚群上的表达水平，因此MDS患者PB中T淋巴细胞亚群TIGIT表达水平的具体情况目前尚不清楚。
针对LR-MDS患者，本研究发现PB中TIGIT在CD4+T淋巴细胞与Treg细胞上表达水平高于健康对照组，与IL-2、TNF-α、IFN-γ、IFN-α各细胞因子间无显著相关关系，提示LR-MDS患者PB中TIGIT可能通过在CD4+T淋巴细胞及Treg细胞上调后调节其他细胞因子、趋化因子分泌等机制参与LR-MDS患者免疫亢进，具体作用机制有待进一步研究。由于样本数量限制，LR-MDS患者组仅7例病例，可能对统计学分析存在一定的影响，下一步研究应尽可能扩大病例数量以减小误差，得出更真实准确的结论。
4.2 TIGIT在AML对照组中的表达水平与免疫调控
本研究发现AML对照组PB中TIGIT在CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞和Treg细胞上的表达水平均与IFN-γ表达呈负相关，此外Treg细胞上TIGIT水平还与IL-2、TNF-α、IFN-α表达呈负相关。IL-2可增强自然杀伤细胞的细胞毒性作用，对AML细胞有潜在的抗白血病作用；而IFN已被证实在AML中通过诱导细胞凋亡、抑制促进生长的细胞因子和细胞增殖、增强AML细胞的免疫原性产生抗白血病活性[143, 144]，提示TIGIT在AML对照组PB中T淋巴细胞各亚群上通过下调具有免疫效应的细胞因子，参与AML免疫紊乱。
Kong[127]等研究也发现TIGIT在AML患者PB中CD8+T淋巴细胞上表达升高，且在CD8+终末分化效应记忆T细胞上的表达有升高趋势，并通过检测TIGIT+CD8+T淋巴细胞上抑制性受体的表达发现PD-1、CD160、2B4表达明显升高，且与TIGIT的表达水平存在相关性，提示TIGIT+CD8+T淋巴细胞可能存在T细胞衰竭的表型特征。此外还发现与TIGIT-CD8+T淋巴细胞相比，TIGIT+CD8+T淋巴细胞胞内TNF-α、IFN-γ和IL-2明显降低，Annexin V和CD95的表达都明显升高，但增殖指数增加且杀伤力更强。因此认为TIGIT+CD8+T淋巴细胞显示出细胞因子产生能力降低且对细胞凋亡具有高敏感性，但保留增殖能力和杀伤潜力，即表现为一定程度的功能损伤。这一发现与本研究中TIGIT+CD8+T淋巴细胞水平与IFN-γ表达存在负相关相符，但本研究中TIGIT+CD8+T淋巴细胞水平与TNF-α和IL-2的表达间无统计学意义，仅呈负相关趋势，考虑可能与样本量不足相关，后续实验应扩大样本容量以减少误差。Zhang等[145]发现单独阻断TIGIT仅在TIGIT+CD4+T淋巴细胞中上调TNF-α，在TIGIT+CD8+T淋巴细胞中上调IFN-γ、TNF-α。但联合抑制TIGIT、PD-1和Tim-3则可明显上调CD4+和CD8+T淋巴细胞中IL-2、IFN-γ和TNF-α水平，可能增强抗白血病免疫反应，提示TIGIT可能与PD-1、Tim-3等免疫检查点存在协同效应，今后研究中可将多个免疫检查点共同纳入讨论，探讨是否存在共表达等相关关系及临床意义。
第五章 结论
1. TIGIT在较低危组、较高危组MDS及AML中呈差异表达，且与细胞因子水平具有相关性，提示TIGIT及相关细胞因子可能参与了MDS的发生发展及免疫微环境紊乱。
2. 针对TIGIT的靶向策略有望成为治疗MDS的新途径。
参考文献（略）
（本文摘自网络）
