靶向药物的论文参考文献

ROS1基因也是肺癌中经常被提及的基因突变，但是其突变频率并不是特别高。另外很多患者和家属没有分清楚ROS1的突变形式，很多不靠谱的基因测序公司，对于ROS1基因上一个位点的突变都解析是药物敏感突变，对患者的靶向用药产生了极大的干扰。本文注重对ROS1的基因突变形式、对应的靶向药物做一次系统梳理。

1、认识ROS1基因和其突变

ROS1基因的重排最开始是在人脑胶质瘤细胞系里被鉴定出来，后续在其他几个恶性肿瘤里也发现了ROS1基因的重排，如胆管癌、卵巢癌、胃癌和非小细胞肺癌，其中在非小细胞肺癌里的突变频率为1%-2%。ROS1基因可与多个基因发生融合突变，其中最主要的融合伴侣是CD74，（见下面图片），ROS1与其他基因发生融合时，一般会保留激酶结构域，而且在断裂点上较为保守。ROS1的重排导致激酶持续激活，上调SHP-1、SHP2以及PI3K、AKT、mTOR、MAPK和ERK信号通路，导致细胞持续增殖，肿瘤发生。

图1：非小细胞肺癌中ROS1基因的融合形式

上图是ROS1基因的融合形式，左侧的绿色部分为ROS1的酪氨酸激酶结构域，蓝色部分为跨膜结构域。右侧部分是报道的与ROS1发生融合变异的基因和其频率。由于存在多种基因可能与ROS1基因发生融合，因此在选择检测ROS1的变异时，需要着重技术原理，避免漏检。检测ROS1突变的技术有FISH（原位免疫荧光杂交）、RT-PCR（逆转录PCR）、IHC（免疫组化）和新一代测序（NGS）。目前FISH是ROS1融合的金标准，通过红色和绿色荧光探针标记ROS1基因两端，如果ROS1基因没有发生断裂，那么红绿荧光凑在一起表现为黄色荧光信号。如果ROS1基因中间发生了断裂，则可以观察到红色荧光、绿色荧光信号的分离，如果大于15%的肿瘤细胞呈现出这种分离信号，则判断为ROS1基因融合突变阳性。

图2：FISH检测ROS1基因的重排

需要认识到任何检测技术都不是完美的，FISH的优势是可以检测石蜡切片组织（FFPE），这是RT-PCR不能具备的，RT-PCR对样本的RNA要求较高，需要新鲜的组织样本提取RNA才能进行逆转录。另外FISH还可以检测一些未知的融合突变，即不需要知道ROS1基因的融合伴侣是谁，只要ROS1发生分离了就行。缺点是手续繁琐、对试验员的操作要求较高。另外FIG基因在ROS1上游134kb处，因此FIG-ROS1的融合形式在荧光信号分离上不是很好判断。最关键的是FISH不能提供出和ROS1发生融合的伴侣基因是什么，是否有生物学和临床的意义。

RT-PCR因为需要之前设计引物，所以不能检测未知的融合突变形式。对样本的RNA要求较高，石蜡标本里RNA降解很严重。因此如果您的检测报告表明是RT-PCR检测的融合突变，而您的标本是石蜡标本，那么就需要注意是否存在假阴性的情况，不管是ALK或者ROS1以及RET都是这种情况。RT-PCR的优势是快速、样本需求量少。

ROS1的免疫组化检测特点是简单，易操作。但是对抗体的要求较高，另外易受到染色背景、判读标准的影响，也有很多地方亟待提升。总之对于ROS1基因的融合突变，最好使用两种以上的检测技术进行相互验证，没有一项技术是可以做到100%的承诺的保证的，但是对于患者来说，漏检因为所有的希望。

2、ROS1的患者和病理特点

ROS1融合突变是非小细胞肺癌的一个亚型（突变频率1%-2%），ROS1的患者群与ALK突变的患者拥有一些共同的特征，患者的特点是年轻、非吸烟、亚裔、进展较快。尽管ROS1融合突变也在肺大细胞癌、鳞状细胞癌里被鉴定出来过，但是ROS1主要是存在于肺腺癌中。

ROS1基因与其他驱动基因突变是不共存的，一项涵盖1073个样本的研究表明ROS1与EGFR、ALK等突变互斥，没有发现他们共同存在。一项涵盖556个患者的研究也表明，使用免疫组化IHC检测ALK和ROS1，没有发现二者共存。后续有报道研究两名ROS1阳性的患者发现了EGFR突变，分别是L858R和19号外显子缺失突变。但是这些为个别案例，总体上肿瘤的驱动基因都是互相排斥的，因为肿瘤也不需要两种驱动基因驱动其增殖。

3、治疗ROS1阳性的克唑替尼

由于ROS1突变与ALK的相似性，研究者很容易想到使用ALK的抑制剂去尝试治疗ROS1的突变。2014年公布的临床研究数据表明，50名患者每日两次口服250mg克唑替尼，客观应答率（ORR）为72%，包含3例患者完全缓解（CR），33例患者部分缓解（PR）。相比ALK突变，ROS1患者使用克唑替尼的反应持续时间更长，达到17.6个月，中位无进展生存期（PFS）为19.2个月，因此专家推出克唑替尼对ROS-1的抑制要强于ALK，而且ROS1阳性突变的患者预后相对较好。

美国FDA于2016年3月11日批准将克唑替尼用于治疗ROS1突变的转移性非小细胞肺癌患者。也是第一个FDA批准的ROS1阳性的靶向药物。但是克唑替尼治疗ROS1阳性的患者也不可避免为会产生耐药，这些耐药原因包含ROS1基因上的一些点突变，如G2032R、L2155S、L2026M、G2101A、K2003I、L1951R等。其中ROS1的G2101A、L2026M和G2032R的肿瘤细胞系对Foretinib敏感，但是L2155S对于Foretinib仍然耐药。G2032R和L2155S细胞系对TAE684也是不敏感的。除去这两个药物外，卡博替尼（XL184）展示出与部分耐药位点的疗效，如图3，ROS1阳性克唑替尼耐药后的L2026M、L1951R和G2032R可以被卡博替尼所解决，对于ROS1阳性的患者来说这算是一个好的事情，虽然这些是细胞系的研究，但是希望还是有的。这些需要着重注意，基因检测报告需要仔细查询是否有这些耐药位点，这些耐药位点的释义和相应的意义。

图3：ROS1的G2032等突变对卡博替尼敏感

ROS1患者在克唑替尼使用的另一个耐药机制是EGFR的代偿性高表达（表达量为2.6倍），这个在肿瘤细胞系中获得了验证，同时使用EGFR的靶向药物吉非替尼或西妥昔单抗联合克唑替尼，可以起到协同抑制的作用（见图4）。

图4：克唑替尼联合达克替尼或阿法替尼，可控制部分ROS1患者的耐药

但是问题是，假如EGFR的高表达也确实是一部分ROS1患者的耐药原因，什么时候对患者进行检测呢，使用什么样本检测。检测的灵敏度和特异性如何？

钙粘附蛋白E表达量丢失，波形蛋白和人纤维连接蛋白表达增加是另外一种ROS1阳性患者对克唑替尼耐药的原因。这导致细胞形态，以及细胞之间的粘附力出现改变。

图5：一些蛋白表达降低或升高也影响ROS1患者对克唑替尼的敏感性

另外也有文献报道KRAS、NRAS等也对ROS1阳性的患者使用克唑替尼耐药，从肿瘤细胞的进化考虑，ROS1对克唑替尼的耐药原因会是比较复杂的，也比较难以预测。因此究竟是什么原因耐药，一定要彻底进行检测明确。推荐什么类型的靶向药物，必须有一定的文献或临床数据支持。

4、其他ROS1融合阳性的靶向药物

ALK和ROS1的激酶活性区域有70%的相似性，因此ALK的抑制剂很多是可以用于ROS1的治疗的，克唑替尼这个药物也就是这么误打误撞地搞出来的。其他的ALK抑制剂是否也可以呢？答案是有抑制效果但不都是。

图6：ALK抑制剂对ROS1-CD74融合基因的抑制情况

在图1上我们可以知道CD74是ROS1的主要融合伴侣基因，所以表达该融合基因的细胞系被用来测试ALK的抑制剂。从图6我们可以看出，克唑替尼、色瑞替尼（LDK378）、AP26113对ROS1-CD74的抑制效果很不错。ASP3026具有中度的抑制效果，艾乐替尼（CH5424802）没有显示出具有抑制活性，这个是为主要注意的，因为艾乐替尼在ALK中和克唑替尼的头对头临床试验效果很好，但是这并不能完全复制到ROS1阳性的患者上，最起码不能复制到CD74-ROS1的融合突变的患者上。

很多病友都熟悉3922这个ALK抑制剂，有资料称这个药物对于ROS1的抑制力度比克唑替尼强几十倍。我们查询了很多的文献，终于找到了一篇3922对ROS1的报道，给大家呈上。

图7：不同ALK抑制剂对ROS1的抑制活性，3922最优

从图7中我们可以再次了解ALK抑制剂对ROS1突变的抑制活性，其实3922可以说是一骑绝尘。当然在这里我们再一次看到艾乐替尼对ROS1抑制不力，这个是需要着重注意的，不是所有的ALK抑制剂对ROS1都能起到好的抑制效果。

对于ROS1突变导致的克唑替尼耐药，体外实验表明3922可以ROS1基因上的G2032R突变、G2026M突变具有抑制效果。在动物模型的体内实验上，3922对于FIG-ROS1、CD74-ROS1和存在G2032R耐药突变的CD74-ROS1都具有抑制活性。另外对于FIG-ROS1阳性胶质母细胞瘤的老鼠上也展示出抑制效果。这里需要注意ROS1有多个耐药突变，目前报道的是其中两种是可以用3922控制的，当然这是动物实验，后续仍需要进行跟踪了解。

结语：

我们就本帖进行一次重点总结：

ROS1的突变频率不是很高，在非小细胞肺癌里的频率仅为2%左右，但是目前有靶向药物克唑替尼批准。需要明确的是ROS1的突变形式是与其他基因发生融合。但是ROS1本身会产生一些耐药突变对克唑替尼耐药，这些耐药位点可以被其他靶向药物所解决，如卡博替尼、3922等。目前ROS1在其他癌种也有发现，但是跨癌种用药的疗效如果目前没有较为全面的报道，有胶质母细胞瘤脑的ROS1阳性老鼠对3922敏感。其他癌种如果检测出来ROS1阳性，且没有获准的靶向药物，跨癌种用药也是可以考虑的。

编者：翱宇

参考文献;

1、Kurtis D. Davies, et al., Clin Cancer Res. 2013 August 1; 19(15): 4040–4045.

2、Gainor JF, et al., Oncologist. 2013;18(7):865-75.

3、Song A,et al.,Clin. Cancer Res. 21, 2379–2387(2015).

4、Katayama R, et al.,Clin Cancer Res. 2015 Jan 1;21(1):166-74

5、Zou HY, et al., Proc Natl Acad Sci U S A. 2015 Mar 17;112(11):3493-8.

谣言：

服用靶向药物后没有感觉到副作用，说明药物没有效果。

辟谣：

近年来，我国恶性肿瘤的发病率明显上升，严重威胁了人们的生命健康。肿瘤的常规治疗手段包括手术、化疗和放疗，传统的化疗药物在杀死癌细胞的同时对正常细胞也有巨大的杀伤力。随着肿瘤生物学及相关学科的发展，有观点认为细胞癌变原因之一是细胞信号转导通路的失调，从而导致细胞的无限增殖。因此，针对肿瘤细胞内异常信号系统靶点发挥作用的肿瘤靶向药物不断涌现，越来越多的靶向药物进入临床。

什么是靶向药物？

在细胞分子水平上，靶向药物进入人体后特异地选择肿瘤细胞的靶点结合后发生作用，造成肿瘤细胞的特异性死亡，但不影响肿瘤周围的正常组织细胞，这种药物即为靶向药物。分子靶向药物以肿瘤细胞区别于正常细胞的改变作为作用靶点，不仅可以发挥更强的抗肿瘤作用，而且还能降低对正常细胞的伤害[2]。正因为靶向药物不良反应小，疗效显著，在抗肿瘤药物中所占的市场份额增长迅速，众多靶向药物的临床实验也在全球范围内如火如荼地开展。不同于化疗药物的“杀敌一千，自损八百”，靶向药物带领我们进入了抗肿瘤的精准治疗时代，让越来越多的肿瘤患者能够延长生存期，提高生存质量。

靶向药物的疗效如何评价？

靶向药物属于抗肿瘤药物，抗肿瘤药物治疗的目的是杀灭肿瘤细胞，主要通过观察肿瘤退缩情况以判定疗效。例如实体瘤的治疗，抗肿瘤药物治疗前要有肿瘤基线的影像学（CT或MRI）资料，治疗2个周期（或6-8周）后，再次进行影像学检查与基线资料进行对比来评价疗效[3]。

实体瘤疗效评定标准（RECIST标准）：

a.完全缓解（CR）：所有目标完全消失；

b.部分缓解（PR）：基线病灶长径总和缩小30%以上；

c.病情稳定（SD）：线病灶长径总和缩小但未达到PR或病灶增大但未达到PD；

d.病情进展（PD）：基线病灶长径总和增大20%以上或出现新病灶。

如果病情缓解（CR或PR）或病情稳定（SD）则继续当前的药物治疗方案，如果出现病情进展（PD）则需要重新评估患者情况，重新选择药物治疗方案。

以上内容仅为实体瘤的简单疗效评价，在临床实践中疗效评价要更加复杂和细致。但可以肯定的一点是，靶向药物疗效的判断与副作用大小无关。

怎样正确看待靶向药物的副作用？

俗话说“是药三分毒”，靶向药物也是如此。虽然相比化疗药物，其不良反应已经小了很多，但仍然不可能避免。既然靶向药物的疗效评价与副作用的大小无关，那我们必然希望靶向药物能够“高效低毒”。但是由于每个患者的疾病状态和个体差异，每个人表现出来的副作用大小也会不同。如果没有感觉到明显的副作用，就应该积极配合治疗，定期监测评效。如果用药期间感觉到明显不适，不要认为是靶向药物起效的表现而放任不管，而是应该及时就诊或咨询医生，因为这时可能需要调整药物剂量，甚至需要停药或进行治疗，以免造成更大伤害。

辟谣专家：贾晨虹，河北省儿童医院抗肿瘤专业临床药师，主管药师

复核专家：张古英，河北省儿童医院药学部主任，主任药师

参考文献：

[1] 叶佳丹, 余克富, 朱斌, et al. 肿瘤靶向药物的分类与研究进展[J]. 药学进展, 2018（5）.

[2] 张露, 刘相良, 陈晓. EGFR突变型非小细胞肺癌脑转移的靶向治疗和免疫治疗进展[J]. 中国肿瘤生物治疗杂志, 2019, 26（9）:1035-1041.

[3] 董坚. 实体肿瘤靶向药物疗效评价标准的现状和展望[J]. 中国肿瘤生物治疗杂志, 2015, 022（004）:413-419.