biorxiv上预发表论文啥意思

韩春雨在预印本网站BioRxiv上发表了一篇关于基因编辑的新文章：Background free tracking of single RNA in living cells using catalytically inactive CasE。

文章共有5名作者，依次为Feng Gao， Yue Sun， Feng Jiang， Xiaoyue Bai， Chunyu Han，工作单位均为河北科技大学基因编辑研究中心。其中，韩春雨为通讯作者。

据了解，论文中提到的CasE是Ⅰ-E型 CRISPR复合物的核心成分，它通过结合特定的茎环区域单独处理pre-crRNA，称之为 CasE Binding S，简称为CBS。CasE保守His20参与催化活性，ΔHis26-TtCse3突变的CasE（dCasE）则失去了催化活性，但仍然与其靶标紧密结合。

在该研究中，通过将 split 荧光与dCasE的N端和C-末端（ΔHis20）融合，构建了活体RNA跟踪工具VN-dCasE-VC。该系统仅在存在靶RNA时才发出荧光，从而增强信噪比。

在活细胞中进行可视化的RNA追踪，不需要特定的亚细胞分布。CasE-GFP和dCasE-GFP在HEK293T细胞中的高水平表达和均匀分布表明CasE和dCasE适合于活细胞中的RNA操作。

为了测试CasE在哺乳动物细胞中表达时是否具有强活性，作者构建了“关闭”报告基因质粒CBS-GFP-N1。它由5′-UTR中的GFP mRNA和CasE结合位点（CBS）组成。当CasE被引入系统时，GFP表达水平急剧下降。

同时，为了进一步测试CasE活性，作者还构建了“开启”报告基因质粒RED-16×CBS-Lin28-C1，其中CBS插入RED单体基因的3′-UTR区和Lin28的上游。Lin28是RNA核保留信号，在其3′-UTR中具有lin28信号的RED单体mRNA几乎不能翻译成蛋白质。

CBS-CasE依赖限制性切断lin28信号并从核释放靶mRNA用于翻译（图1E和图1F）。这些表明CasE可以结合并切割哺乳动物细胞中的CBS。

另外，为了将dCasE-CBS相互作用设计到RNA追踪系统中，作者通过将split-FP5-7与dCasE蛋白结合。发现一个版本，即VN-dCasE-VC很难发出荧光，这可能是由于不正确的折叠或不稳定的状态，但是当与靶RNA（CBS）结合时，可以在荧光显微镜下清楚地捕获荧光信号，即使VN-dCasE-VC表达质粒的转染剂量非常低。

接下来，作者使用VN-dCasE-VC系统追踪哺乳动物细胞中过表达的β-肌动蛋白（β-Actin）的mRNA，VN-dCasE-VC系统在细胞质中显示出强荧光。此外还观察到，向靶mRNA添加更多CBS可改善信号，荧光追踪更清晰，因此，可以通过增加CBS的数量来检测低丰度的mRNA。

总的来说，韩春雨团队发明了一种新的RNA追踪工具，将其命名为VN-dCasE-VC，该系统能够追踪活细胞中没有背景的特定RNA，通过荧光将其可视化。

目前已有两种活细胞RNA追踪成像工具，一种是MS2，一种是Cas13a，韩春雨团队开发的dCasE系统，成像效果由于MS2，而且，dCasE蛋白的分子量为22kDa，远小于Cas13a的130kDa，dCasE的小分子量更容易递送至细胞内，因此更适合用于活细胞的RNA追踪。

这篇论文中所值得关注的就是将有一种新的技术将被进行研发，这些技术就是基于cas6的rna荧光追踪技术，从中可以看出这是一个非常强大的生物科学技术，并且这项技术目前已经经过了一定的实验，正处于新技术的研发过程中，但是从中也可以看出，目前并没有突破性的研究。

时隔六年，韩春雨再发表新论文，文中哪些信息值得关注？下面就我们来针对这个问题进行一番探讨，希望这些内容能够帮到有需要的朋友们。

2022年1月21日，韩春雨在期刊（IF=16.971）发布了全新研究论文，落款企业为河北科技大学基因编辑研究中心。这间距他那时候造成极大的关注和异议的NgAgo研究论文早已过去快6年时间。

在这篇新论文中，韩春雨团队开发设计了一种新的根据Cas6的RNA荧光追踪服务平台，其具备更多的精确度和非特异。

该研究称NgAgo对真核生物（包含人）具备基因编辑技术工作能力。该研究取得成功迅速在全世界范畴内爆红，韩春雨教师先前籍籍无名，几乎一夜之间变成学界网络红人，被赞扬为“在三流学校获得全球一流原创设计成效，摆脱国际性基因编辑技术垄断性”。

该论文通讯作者为韩春雨，第一作者为高峰期，浙江大学专家教授沈啸为一同通讯作者，但在后面改动版本号中，沈啸从创作者名册中去除开。

2016年8月，河北科技大学创立基因编辑研究中心，方案资金投入资产逾2亿人民币。但NgAgo的研究成效引起普遍怀疑。

2017年8月3日，韩春雨撤销该论文。2018年8月31日，河北科技大学取消了韩春雨所获取的光荣称号，停止了韩春雨团队担负的科研课题并取回了科研费，取回了韩春雨团队所获校科学研究业绩考核奖赏。

2019年4月4日，预印本bioRxiv发表了一篇来源于美国普渡大学研究工作人员的研究论文，表明NgAgo根据Dna内切酶活力受体提高大肠埃希菌的同源重组。该研究表明NgAgo可以编写原核生物，但不可以编写真核生物基因。详细信息点一下：NgAgo可在原核生物上基因编辑技术

RNA在体细胞中的精准定位与其说作用息息相关，因而，开发设计用以追踪RNA在体细胞中遍布的技术性巨大地推动了RNA分子生物学的研究。近期，荧光蛋清标识的Cas9和Cas13在体细胞RNA追踪中的自主创新运用进一步充实了这一行业的研究辅助工具。

殊不知，Cas9和Cas13服务平台及其普遍采用的MS2-MCP技术性无法处理高声音分贝的问题。Cas6是I-E型CRISPR分子伴侣的关键部件，它根据鉴别具备Cas6融合结构域的茎环RNA完成融合并激光切割pre-crRNA。pre-crRNA的Cas6融合结构域与Cas6融合后可诱发Cas6的构像更改，造成其N端和C端并排。运用这一特点，韩春雨等人设计方案了一个根据Cas6的电源开关服务平台，用以在身体内检验和追踪总体目标RNA。

将split-Venus片段与来源于大肠埃希菌的内切圆核酸酶活力缺失的Cas6（dEcCas6）的N端（Venus-N，VN）和C端（Venus-C，VC）融合，结合的嵌合体VN-dEcCas6-VC与目地RNA融合时才会造成荧光。

因为其荧光相辅相成是由Cas6的变构电源开关受体的，因而韩春雨团队将其取名为根据Cas6的荧光相辅相成服务平台（Cas6FC）。

在体细胞中，Cas6FC可以几乎没有声音分贝的检验总体目标RNA。除此之外，只需在有兴趣的RNA中标识一个长为29nt的CBS团本，就能开启Cas6FC荧光，这极大降低了总体目标RNA构想和市场定位的潜在性更改的概率。

总体来说，韩春雨团队开发设计了一种新的根据Cas6的RNA荧光追踪服务平台，其具备更多的精确度和非特异。

值得一提的是，这篇论文的具体内容早在2019年7月份，就在预印本bioRxiv上线。如今这也是通过同行评议后宣布发布。

新的论文发表了关于DNA荧光追踪技术，发现了新的组成、排列，灵敏性、特异性、遗传性这些都是韩春雨发表的新论文看到的信息。

这次的病毒牵动着整个中国人的心，由于目前病毒的来源、自然宿主、中间宿主的来源没有搞清楚，所以引起了一些人开始造谣“阴谋论”，认为该病毒是在实验室中被制造出来的生化武器。

1月31日，印度德里大学和印度理工学院的研究人员，在生物预印本网站bioRxiv上发表一篇论文名为《2019病毒棘突蛋白中含有独特的插入序列，并与（艾滋病毒的）HIV-1 gp120和Gag蛋白有奇特的相似性》。

在该论文中，作者指出：该病毒的棘突蛋白与HIV-1 gp120和Gag蛋白的相似性不太可能是偶然现象，更不可能在自然界中偶然发生，暗示这里可能存在着某些阴谋。后来，这篇论文遭到了国内外学者的强烈不满和谴责。

制止谣言最好的办法，是了解真相。今天，我们就好好反驳一下这个阴谋论。

刺突蛋白

这个事我们要从刺突蛋白说起。刺突蛋白位于冠状的病毒表面，也就是病毒表面的“冠”。刺突蛋白能够与宿主受体结合，入侵人体细胞。

在此次病毒中，刺突蛋白可以与宿主受体细胞受体血管紧张素转化酶2（ACE2）结合进入细胞，我们可以把受体当作是锁，而刺突蛋白是钥匙，刺突蛋白只有找到对应的锁，才可以开启，并进入人体。

印度德里大学的研究人员发表的论文中，该作者对比了此次病毒与SARS病毒的刺突蛋白序列，结果发现该病毒的刺突蛋白，相对于SARS病毒，多了4小段新的插入序列。

该作者直接将这4小段新插入的序列，在数据库中进行大数据对比，结果发现，这4个新插入的序列，能够在艾滋病毒序列中被找到。

我们知道，艾滋病毒和此次病毒病不属于同一种病毒，亲缘关系也非常远，按理说不可能拥有相同的序列。

再加上这4个新序列，可以造成该病毒具备更强的感染能力。所以该作者认为，在自然环境下，此次病毒不可能拥有艾滋病毒的某个片段，于是发表论文声称：“该现象在自然条件下很难发生”。

同行评审

该论文一经发表，根本没有办法通过同行的评审。而且还瞬间引起同行人的批评和指责，甚至有科学家认为该篇论文的作者是在蹭关注度。

之所以这样讲，是因为从自然界其他生物中，找到这4个序列也是一件容易的事情。在该论文发表之后，有一批科学家利用大数据，从果蝇、植物以及真菌体内都找到了这4个序列。

我们要知道，虽然人类和老鼠的生物特征完全不一样，但却有85%的基因相似度。

浙江大学王立铭用一个很形象的比喻反驳道：“你居然和去年那个杀人犯长的一样，你看你们都有两只耳朵！你一定是那个杀人犯的孪生哥哥！”但问题是，每个人都有两个耳朵。

除此之外，我们知道突触蛋白的序列非常长，大概有1277个序列，而仅仅只有4个序列与艾滋病毒相同，相似性实际上非常低，而且这4个序列不仅仅存在于艾滋病毒内，还存在其他生物体内。因此无法证明与艾滋病毒具有同源性，更不能证明亲缘关系。

正是因为以上种种都经不起推敲，所以该作者目前已经撤稿。

虽然我们很想从科学角度上给此次病毒为什么会爆发，以及从什么途径感染人类做出一个解释，但在追求答案的过程中，也要保持一丝理性，不要动不动就想到阴谋论。