灵芝中的粗多糖测定的研究论文

灵芝菌丝体多糖的提取（一）材料⒈菌种：湖南省食用菌研究所提供的韩国灵芝母种。⒉种子培养基：玉米粉2% 大米粉2%蔗糖2% 磷酸二氢钾硫酸镁 ph值自然⒊发酵培养基：麦麸浸出液10% 葡萄糖2%硫酸铵磷酸二氢钾 ph值自然（二）方法 1.种子培养：⒉发酵培养生产菌丝体。⒊测定干、湿菌丝体。将发酵液进行离心，然后取其沉淀物，加人60%蔗糖，进行高速（3000转/分）密度梯度离心5分钟，取上层菌丝体，洗净蔗糖再压干，即得湿菌体，然后再将湿菌体于高温下烘干即为干菌体。分别称取其重量。⒋多糖的提取。菌丝体预处理。取适量的灵芝湿菌体，用乙醇等有机溶剂进行处理，以除去湿菌体中的脂类物质，同时使糖苷酶失去活性，防止多糖的降解。⑵用热水提取多糖。取上面经预处理的灵芝湿菌体，放人1：20的热水（95℃）中浸提，一次3小时，连续浸提3次，合并3次的水浸提液减压、浓缩至一定体积，再用3倍体积的95%乙醇混合，静置10－12小时，再离心，最后加入75%的乙醇反复洗涤，以沉淀多糖。此沉淀物为粗多糖，其中混杂有蛋白质、色素、低聚糖等小分子杂质，一般要经过纯化。⑶多糖的纯化，去蛋白质和deae纤维素柱层析。去蛋白质一般采用sevag法：加入倍多糖溶液体积的氯仿和倍体积的正丁醇混合振荡半小时进行分离，直至氯仿与水的界面无沉淀为止，且要重复处理2-3次才能有效除去多糖中的蛋白质。多糖纯化一般采用硼酸型deae纤维素柱层析法：取脱蛋白后的多糖，分别以、的硼砂，的氢氧化钠溶液进行洗脱，然后用恿铜硫酸液比色测定吸收度，收集有多糖的洗脱液，再浓缩脱盐即得所需的多糖。⑷多糖纯度的鉴定。可用电泳法进行鉴定，如果存在单一带，说明为纯多糖。⒌多糖与多糖中蛋白质含量的测定：取一定量菌丝体粗多糖，加水煮沸溶解，用sevag方法脱去蛋白考马斯亮兰法测其粗多糖中蛋白质和多糖的含量。测得菌丝体中粗多糖含、多糖含、蛋白质含量。灵芝子实体多糖的提取（一）材料 1.菌种：韩国灵芝栽培种。⒉子实体栽培生产料：木屑78%，米糠20%，蔗糖1%，石膏1%，ph值自然。（二）方法⒈子实体栽培。⒉灵芝子实体预处理。⒊子实体多糖的提取。取适量的灵芝子实体，捣碎成粉末，用80目筛过筛，然后用热水提取法进行提取。具体操作同菌丝体多糖的提取。提取出的粗多糖含有色素、蛋白质等小分子杂质，也须除去。⒋去除蛋白质和色素。子实体粗多糖去除蛋白质也采用se阴法。去除色素，目前尚未发现很理想的方法。一般用乙醇进行反复冲洗，但效果不很理想。⒌多糖纯度的鉴定。同菌丝体多糖纯度的鉴定。⒍子实体粗多糖、多糖及蛋白质含量的测定。具体方法同菌丝体多糖及蛋白质含量的测定。测得子实体中粗多糖、多糖，蛋白质，其含量均低于菌丝体中的含量。可见菌丝体阶段就形成了灵芝多糖的有效成分，为灵芝液体深层发酵生产菌丝体提供了科学依据。

序号论文题目刊物名称位次年，卷（期）：页码1pH对灰树花液体深层发酵的影响中国食用菌11999，26（3）：29－312杏鲍菇对不同碳源和氮源的利用食用菌学报12001，8（4）：10－143灰树花不同菌株液体深层培养蛋白质含量的测定食用菌学报12002，9（3）：9－124台湾樟芝对碳素营养源利用的研究中国食用菌12002，21（5）：41－435灰树花发酵液多糖的辐射保护作用研究食用菌22002（5）：35－366灰树花发酵液多糖对小鼠S180肉瘤的抑制作用食用菌22003，25（1）：42－437灰树花发酵液提取多糖的比较研究中国食用菌22003，22（3）：45－468灰树花发酵液多糖对小鼠S180肉瘤的抑制作用食用菌：42-439用正交试验法筛选樟芝菌适宜发酵培养基菌物研究通讯作者2004，2（3）：33-3810磷酸二氢钾对杨树菇不同pH液体培养中国食用菌12004，23（1）:37-3911温度对樟芝菌丝体生长的影响试验中国食用菌通讯作者2005，24（5）:51-5712四个杏鲍菇品种的氨基酸分析与比较菌物研究通讯作者2005,3(4):11-1413樟芝菌丝体的氨基酸成分分析菌物研究通讯作者2006,4(2):45-481415个灰树花菌株的酯酶同功酶分析中国食用菌通讯作者2007,26（1）：40-4215起始pH对樟芝菌丝体液体深层培养的影响食用菌通讯作者2007,29(3):11-1216树舌灵芝发酵液中灵芝酸的提取及测定食用菌学报通讯作者2008,15(3):68-7117火针层孔菌(桑黄)粗多糖对荷瘤小鼠的免疫调节研究菌物学报12009,28(2):295-29818桦褐孔菌诱变菌株的拮抗试验及酯酶同工酶检测中国农业科技导报通讯作者2009,11(2):129-13219八个樟芝菌株液体培养两种胞外酶活性的测定中国食用菌通讯作者2009,28(2):43-4520灰树花胞内粗多糖提取条件的优化及其提取物的抑瘤作用食用菌学报通讯作者2009,16(1):51-54

灵芝粗多糖是灵芝孢子最主要的有效成分。以粗多糖的检测方法为例进行说明。 灵芝粗多糖的检测方法如下：1）试剂：浓硫酸；无水乙醇；5％苯酚溶液；80％乙醇溶液2）样品处理取样品于200ml容量瓶中，加入约150ml水，沸水浴提取40min，取出，放冷，用水定容，摇匀后过滤，取滤液10ml，加入40ml无水乙醇，3000转/分离心5min，弃去上清液，残渣用80％乙醇洗涤，离心（重复此过程2次），用水溶解残渣，定容为20ml。此液即为样品处理液。3）标准曲线取葡萄糖标准溶液, , , , , ，用水定容为，加入苯酚溶液，10ml浓硫酸，混匀，放置至室温，于L= 1ml，波长＝485nm测定吸收光度，绘制标准曲线。4）样品测定取样品处理液于具塞比色杯中，以下同标准曲线操作。测定吸光度。5）计算 C×200×20/10/ (mg/g) = ———————— M x 1000 式中：X：为样品粗多糖含量(mg/g) C：为从标准曲线上查出的含量（μg） M：为取样量（g）