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太麻烦的，要有条件，把样品稀释后，例如估计含乳酸菌的量，稀释到每毫升大约30-300个左右，再用特殊的平板培养基，添加了1%碳酸钙的平板培养基，采用倾注法与呈液体状态的40度含碳酸钙的琼脂营养培养基混合，倒制于90毫米在小平皿中，培养后，长出菌落，同时，菌落周围有透明圈的，就是乳酸菌，还可以计数，再剩稀释倍数，还可得含量。
提供有氧环境霉菌和酵母菌可存活，提供无氧环境乳酸菌和酵母菌可存活。 1酵母菌富集培养基
酵母菌是真核单细胞生物，具有成行的细胞核,是用来发酵面粉或酿酒时的发酵的真菌乳酸菌是酸化食品保护自己的,但被人类利用, 是典型的原核生物，具有拟核与仅有的细胞器‘核糖体’的细菌,虽都是微生物,但菌种不同,生活地区不同,作用不同
酵母菌是真核单细胞生物，具有成型的细胞核，也具有如‘线粒体’‘核糖体’等真核生物才具有的细胞器，酵母菌的生殖方式分无性繁殖和有性繁殖，以无性繁殖为主，主要为出芽生殖。而乳酸菌则是典型的原核生物，具有拟核与仅有的细胞器‘核糖体’，是一类以糖为料发酵产生乳酸的细菌, 革兰氏染色呈阳性, 生殖方式为裂殖，即‘二分裂’. 一定记牢哦 1酵母菌富集培养基 葡萄糖5% 尿素0.1% 硫化铵0.1% 磷酸二氢钾0.25% 磷酸氢二钠0.05% 七水合硫酸镁0.1% 七水合硫酸铁0.01% 酵母膏0.05% 孟加拉红0.003% pH4.5 2 Ashby无氮培养基 富集好养自生固氮菌 甘露醇1% 磷酸二氢钾0.02% 七水合硫酸镁0.02% 氯化钠0.02% 二水合硫酸钙0.01% 碳酸钙0.5% 酵母菌在自然界中广泛分布，主要生长在偏酸性的含糖环境中，以水果、蔬菜的表面和果园的土壤中最为常见。酵母菌主要营腐生生活，在生态系统中属于分解者。酵母菌的用途相当广泛，涉及到工业、农业、畜牧业、医学和现代生物学技术等诸多领域。在现行的高中生物学教材中，常以酵母菌作为一种代表生物，在历届高考中也常以“酵母菌”为素材来命题。考查的知识面广，命题角度多样，并且与现实生活联系紧密。因此，应将高中生物教材中有关“酵母菌”的知识进行归纳、整理，构建知识结构体系，才能达到高三复习应有的广度和深度。下面就根据自己的教学体会来谈谈对酵母菌的复习，谨供老师和同学们在复习时参考。一、形态结构：酵母菌是典型的单细胞真核微生物，无鞭毛，不能运动。其细胞直径一般比细菌直径粗10倍。一般呈球形、卵圆形或柱形，大多数酵母菌菌落呈圆形，比细菌大而厚。菌落的色泽、质地、表面和边缘形状等特征，是酵母菌菌种鉴定的重要依据。细胞结构类似高等生物，由细胞壁、细胞膜、细胞质、细胞核构成，在成熟的酵母菌细胞中，有一个大型的液泡，其内含有一些水解酶等物质。
具体我也没做过。不过可以提供你两个思路。第一是镜检，看形态。第二就是PCR，P它的16S亚基，可以很精确的分类。
我也在做这个，下面是我整理的，时间关系只能这样了，可以看看。都要求无菌操作 菌种的分离 取lmL卤汁以10倍递增稀释方法（一份酸奶，九份无菌水，再取一份第一只管中溶液，加九份无菌水，依次类推），将其稀释至1/10～10的-10次幂（我打不上去），然后从不同浓度稀 释液中分别取lmL倾注在平皿中，再倒入培养基相混合，待培养基凝固后倒置于30~C恒温下 培养48h。挑取长势良好的单个茵落划线分纯，直至纯化(茵落单个大小一致，革兰氏染色镜 检，茵体一致)。结果分离得到3株不同菌株，分别编号为菌株1、菌株2、菌株3。再分别转移 到试管斜面上进行保存。 分离用培养基：牛肉膏5g，蛋白胨10g，氯化钠5g，蒸馏水1 000 mL，琼脂20g，pH7．0—7．2 ；保存用斜面培养基：酵母膏1％ ，碳酸钙2％ ，葡萄糖1％ ，琼脂2％ ，pH 7．0。 培养条件 将分离出的菌株1、菌株2、菌株3分别接种在上述4种不同的培养基上， 在30。【=恒温条件下培养48h后观察并测定其培养结果。 测定方法 菌落总数采用逐级稀释法来计数；pH值用pHS一2C酸度计测定；乳酸定性 及含量测定依据食品检验技术 1I．2．1乳酸菌的分离与筛选的试验程序 自然发酵酸奶---稀释---培养---挑起单菌落染色、镜检一挑 选革兰氏阳性球菌单菌落一Ⅲ号培养基一挑选溶钙圈大的球菌反复在Ⅲ号培养基上几次纯化筛选一单菌落优 良菌株一试管穿刺低温保存。 1．2 1．2 乳酸菌的鉴定 用光学显微镜、放大镜进行乳酸菌的形态特征鉴定。生理生化特征鉴定：产乳 酸定性试验——乳酸纸层析法0- 、过氧化氢酶(接触酶)反应�6�8、明胶水解反应 、硫化氢反应 、乳酸菌 发酵营养型试验0 、耐盐、酸、温度试验。 1．2．I．3 乳酸菌的保存�6�8 采用定期移植低温保藏法。培养基配方：葡萄糖1％ 、蛋白胨0 2％ 、 l(}l2PQ|0．2％、琼脂20％、pH值7 0，分装试管，121。c灭菌30min。将使用对数生长期后期的细胞进行穿刺 培养，然后密封存于冰箱玲藏室内(5qc左右)，2个月移植1次。 1．2．2 分离乳酸菌的生理特点试验 1 2 2．1 最适生长温度的测定OD值以同温下不接种培养基作对照，定期取出接种培养基在721分光光度 计上，用最大吸收光波长 =6001RIifl测定。 1．2．2．2 生长周期的测定oD值(方法同上)；pH值：PHB一4pH计；可滴定酸(以乳酸计)：吸取ImL菌液 加入9Ⅱ1L蒸馏水，加入1～2滴酚酞，用0．1NNaOH滴定。 1．2 2．3 最适pH值的测试、最适盐浓度的测试。 供试样品及培养基 分离用样品：酸奶、酸奶及西红柿均为市售 分离用培养基：①BCP培养基：酵母膏2 5g，蛋白胨5g，葡萄糖5g，溴甲酚紫0 04g，琼脂15g， 蒸槽水lO00ml，pH7 0；②MRS培养基见文献 。 菌种保藏用培养基：脱脂乳培养基：新鲜牛乳离心去掉上层乳脂，下层奶液分装试管，105℃ 灭菌20mln。 菌利 鉴定用培养基见文献 6。 1 2 方法 1 2 1 乳酸菌的分离纯化 取泡菜汁、酸奶、西红柿表面洗液进行梯度稀释，分别用倾注法、涂布 法和划线法在BCP和MRS培养基平板上进行菌种分离。挑取在BCP平板上有透明目的菌落，在 MRS平扳上有溶钙圈的菌落，反复纯化至纯种，挑菌至脱脂牛奶试管中保存 1．2 2 乳酸菌复筛对初筛菌株进行革兰氏染色，保留革兰氏阳性菌株．并对其所产乳酸能力进 行定性、定量分析，筛选出产酸高的菌株保存，再把产酸高的菌株经萝l、汁发酵 】，进一步选择产 酸高、_l】味纯正的菌株保存鉴定 1 2 3 乳酸定性测定果用纸层析法。溶剂系统为乙醇：浓氨水：水=80：5：15，显色剂为0 04％ 的溴甲酚紫酒精溶液。层析时将乳酸、柠檬酸配成1％ 的标准溶液，两种标准溶液 及乳酸发酵液 均点样3 ．上行层析，显色与标准样比较 1．2 4 乳酸的定量测定采用气相色谱法，利用苄酯化法制备乳酸衍生物，将待测乳酸菌株在产 酸培养基内37"C培养3d，离心。取上清液剃备衍生物，气相色谱分析含量。气相色谱工作条件为： EGS色谱柱，柱温160'C，气化温度180'17．，检测器温度l70"C，载气为N，。 1．2 5 菌种鉴定根据《简明第八版伯杰细菌鉴定手册》 和《一般细菌常用鉴定手册》[6 对复筛 出的菌株的形态、生理生化、碳源利用等方面进行系统鉴定，并提取乳酸菌株DNA，采用熔链温度
国际会议特邀报告：1. 2009年8月，第7届中日韩反刍动物瘤胃生理与调控学术研讨会Keynote speech，韩国，首尔。2. 2008年9月，第13届亚澳动物科学代表大会 (13th AAAP Animal Science Congress)作动物营养专题报告（invited paper），越南，河内。3. 2007年9月，第七届国际草食动物营养研讨会，大会特邀报告(plenary paper)，北京；发表的主要论文 (* 为通讯作者)1) Dai ZL, Zhang J, Wu G, Zhu W-Y*, 2010. Utilization of amino acids by bacteria from the pig small intestine. Amino Acids, 39 (5): 1201-1215.2) Huang RH, Qiu XS, Shi FX, Hughes CL, Lu ZF, Zhu W Y*. 2010. Effects of dietary allicin on health and growth performance of weanling piglets and reduction in attractiveness of faeces to flies. Animal, (first view)3) Pei CX, Mao SY, Cheng YF, Zhu W-Y*, 2010. Diversity, abundance and novel 16S rRNA gene sequences of methanogens in rumen liquid, solid and epithelium fractions of Jinnan cattle. Animal, 4(1):20–294) Sun YZ, Mao SY, Zhu W-Y*. 2010. Rumen chemical and bacterial changes during stepwise adaptation to a high concentrate diet in goats. Animal, 4(2):210–2175) Cheng Y F, Edwards J E., Allison G G., Zhu W-Y* and Theodorou M K., 2009. Diversity and activity of enriched ruminal cultures of anaerobic fungi and methanogens grown together in consecutive batch culture. Bioresource Technology, 100 (2009) 4821–4828.6) Lu Y, Sarson AJ, Gong J, Zhou H, Zhu W-Y, Kang Z, Yu H, Sharif S, Han Y. Expression profiles of genes in Toll-like receptor-mediated signaling of broilers infected with Clostridium perfringens. Clinical and Vaccine Immunology, 2009, 16(11):1639-1647.7) Iqbal MF, Zhu W-Y*, 2009. Characterization of newly isolated Lactobacillus delbrueckii –like strain MF-07 isolated from chicken and its role in isoflavone biotransformation. FEMS Microbiology Letters, 291 (2): 180-187, FEB 20098) Iqbal MF, Zhu W-Y*, 2009. Bioactivation of flavonoid diglycosides by chicken cecal bacteria. FEMS Microbiology Letters, 2009, 295, 30-41.9) Cheng YF, Mao SY, Liu JX, Zhu WY*, 2009. 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1.形态和培养特征观察 采用牛肉膏蛋白胨培养基,将已纯化后的甘油菌种活化后于37℃下培养20～24h ,并进行革兰氏染色及菌体形态和菌落特征的观察。染色方法参照微生物鉴定实验指导 2.生长条件试验 (1)耐盐性试验(NaCl 浓度:0. 85 、1. 20 和1. 71) (mol/ L) ; (2)耐酸碱试验(p H :4. 3 、5. 7 、6. 8 、8. 4 、8. 6 和8. 7) ; (3)温度梯度试验(温度: 10℃、30℃、40℃、50℃、55℃、60℃和65℃) 。 分别将参试菌接种于以上处理的液体培养基中培养48 h ,记录生长状况。 3.生理生化试验 ⑴过氧化氢酶测定 将实验菌接种于PGY培养基斜面上,37℃培养20h—24h,取一环接种的培养物,涂于干净的载玻片上,然后在其上滴加3%－—15%的过氧化氢,有气泡则为阳性反应,无气泡为阴性反应。⑵葡萄糖产酸产气实验 在PY基础培养基内加入30g葡萄糖和5%吐温-80,1.6g/100mL的溴甲酚紫1.4mL作指示剂, 在培养基内放置一小倒管,分装试管置37℃培养24h, 经培养后,指示剂变黄表示产酸,倒管内出现气泡,表示产气。⑶淀粉水解实验 接种新鲜的菌种于含有0.5g可溶性淀粉的PY基础培养基中,取少许培养液于比色盘内,同时取未接种的培养液作对照,分别在其中加入卢哥氏碘液.不显色表示淀粉水解,显蓝黑色或蓝紫色时,表示淀粉未水解或水解不完全。⑷明胶液化实验 将实验菌接种于明胶基础培养基中,置37℃培养,以一支未接种的试管作为对照。将接种的和未接种的对照管置于冰箱或冷水中,等待对照管凝固后记录实验结果,反复观察对比多次。如对照管凝固时,接种管液化为阳性反应,凝固为阴性反应⑸甲基红（M.R）试验 接种实验细菌于PYG培养基，于37℃培养2天后，于培养物中加入几滴甲基红酒精溶液，如呈红色，表示阳性。⑹乙酰甲基甲醇V-P实验 接种新鲜的实验菌种于培养基中, 37℃培养2天后,取培养液1mL在其中 加入1ml 10％的NaOH，混匀，再加入3－4滴2%氯化铁溶液。数小时后，培养基表面的下层出现红色者，为阳性⑺柠檬酸盐 取幼龄菌种接种于柠檬酸盐斜面培养基上，适温培养3－7天，培养基呈碱性（蓝色）者为阳性反应，不变者则为阴性⑻酪素水解试验 牛奶平板的制备：取5g脱脂奶粉加入50mL蒸馏水中（或用50mL脱脂牛奶），另称1.5g琼脂溶于50mL蒸馏水中，将两液分开灭菌。待冷至45－50℃时，将两液混匀倒平板，即成牛奶平板。将平板倒置过夜，使表面水分干燥，然后将菌种点接在平板上，每皿可点接3－5株菌。适温培养1、3、5天，记录菌落周围和下面酪素是否已被分解而呈透明。配制该培养基时，切勿将牛奶和琼脂混合灭菌，以防牛奶凝固⑼厌氧生长测定 将菌种接入营养肉汤平板后,用密封带包好放入CO2培养箱37℃培养2天后,观察生长情况,生长则为阳性(10)厌氧硝酸盐产气 接种封油：以斜面菌种用接种环接种后，用凡士林油（凡士林和液体石蜡为1:1）封管，封油的高度约1厘米。必须同时接种不含有硝酸钾的肉汁胨培养液作对照。 观察结果：培养2－7d，观察在含有硝酸钾的培养基中有否生长和产生气泡。如有气泡产生，表示反硝化作用产生氮气，为阳性反应。但如不含硝酸钾的对照培养基也可产生气泡，则只能按可疑或阴性处理。(11)石蕊牛奶的反应 牛奶中主要含有乳糖和酪蛋白，在牛奶中加入石蕊是作为酸碱指示剂和氧化还原指示剂。石蕊在中性时呈淡紫色，酸性时呈粉红色，碱性呈蓝色，还原时则自上而下地褪色变白。观察其产酸、产碱、胨化、酸凝固、凝乳酶凝固、还原情况(12)糖发酵实验 将需要测定的糖或醇类等碳水化合物加入PY基础培养基中,按表分装含5mL培养基的试管.分别取0.2mL,被鉴定菌株接到灭菌后的碳水化合物培养基中37℃培养24h,振荡培养。检测时取培养液少许置于比色盘内,同时取未加碳水化合物的PY培养液作为对照,滴加试剂比较颜色的变化,记录产酸的强弱. 附一些培养基： ①PY培养基（100mL）：蛋白胨1.0g,酵母提取物1.0g,无机盐溶液4.0mL[盐溶液成分:无水CaCl2 0.2g,MgSO4 20.0g ,K2HPO4 1.0g, ,KH2PO4 1.0g,NaHCO3 10.0g,NaCl 2.0g](将CaCl2和MgSO4一起溶解于300mL蒸馏水中,再加500mL蒸馏水,一边搅拌一边缓慢加入其他盐类.继续搅拌直到全部溶解,加蒸馏水定容至1000mL,混合后贮备于4℃) ②PYG培养基:PY在基础培养液内加入1.0g葡萄糖 ③营养明胶 蛋白胨5g、牛肉膏3g、明胶120g、蒸馏水1000mL、pH6.8～7.0；加热溶解、校正至pH7.4～7.6，分装小管，121℃高压灭菌10min，取出后迅速冷却，使其凝固。复查最终pH应为6.8～7.0 ④柠檬酸盐斜面培养基：柠檬酸钠 3g NH4H2PO4 1g MgSO4 0.2g K2HPO4 1g NaCl 5g 琼脂15—20g 水1000mL 加热溶解后，调pH至7，再加入1.6%溴麝香草酚蓝指示剂10mL,培养基呈绿色，分装试管，每管5mL，121灭菌30min ⑤含硝酸钾的营养肉汤 加入2g硝酸钾入营养肉汤 4.16S rDNA 序列分析 5.生长曲线 活菌计数方法：采用涂布法,进行菌落计数，每隔一段时间（2-4小时）。
你可以查阅产蛋白酶菌株筛选方面的文献，里面都会对菌株的分解蛋白的能力进行测定，我做过几个着方面的实验，知道一些基本方法：方法一、水解圈法：将你的菌株涂布干酪素平板培养基（配方在网上或一般的微生物学教科书上都能找到），适宜的温度下培养至菌落周围有明显的水解圈出现（培养温度根据你的菌株而定）。测定水解圈直径（D）和菌落直径（d），计算HC值（HC=D/d），菌落的HC越大说明此菌落分解蛋白的能力越强。方法二、明胶穿刺培养法：用明胶在试管内配置半固体培养基（注意不能有气泡），穿刺接种你的菌株到里面，适宜温度下培养，直至可观察到明显的水解小泡。水解小泡大的说明水解蛋白的能力强。方法三、蛋白酶活力测定法：将你的菌株涂布平板，分离单菌落，摇瓶发酵（发酵的时间最好作个优化），然后直接取发酵液的测定酶活（可用 Follin法测）。此外还有好几种方法，不过以上几种比较常用。第一和第二中比较好操作，但只能是对菌株的蛋白酶分解能力进行粗略估计，第三种如果操作的好的话，得到结果相对比较精确。有关这些操作的具体步骤、试剂和各种所需培养基配方可在相关文献中查到。我的QQ是258612400，如果在具体的操作中遇到困难，可在QQ上交流。
具体我也没做过。不过可以提供你两个思路。第一是镜检，看形态。第二就是PCR，P它的16S亚基，可以很精确的分类。
是的，更是中文核心期刊。荣誉如下：
《中国乳品工业》为专业性科技期刊，报道国内外乳品工业科技成果，介绍新技术，新设备和新产品，开展学术技术交流。主要栏目有研究报告、专题综述、译文综述等。读者对象为乳品工业的有关人员。
中文核心期刊(2014)中文核心期刊(2011)中文核心期刊(2008)
代表著作与论文1．在国内外重要学术会议及国家一级学报与核心期刊发表学术论文50余篇，其中代表性15篇论文如下：[1] “Tian hongtao et al．Techniques for improving the survival ability of bifidobacteria”．In 29th Europe International symposium on“Food Biotechnology”Poland，1999，5．55～56．（第1作者）[2] “双歧杆菌酸奶冻干发酵剂不同菌株特性的研究”．中国食品学报（一级学报），2007，7（3）：69～72．（第1作者）[3]“双歧杆菌菊芋复合汁增菌培养基的优化筛选”．中国食品学报（一级学报），2007，7（4）：37～41．（第1作者）[4]“双歧杆菌纯种发酵胡萝卜汁牛乳工艺研究”．中国食品学报（一级学报），2007，7（5）：108～112．（第1作者）[5] “不同来源食品级乳酸菌及双歧杆菌对乳酸链球菌素敏感性的研究”．中国食品学报（一级学报），2009，9（3）：26～31．（第2作者—通讯作者）[6]“双歧杆菌在冷冻乳中存活特性的研究”．微生物学通报（重点核心期刊），2000，（2）：115～119．（第1作者）[7] “海藻糖在双歧杆菌冻干菌粉制备和保藏中生物保护作用的初探”．河北农业大学学报（核心期刊），2000，（2）：62～65．（第1作者）[8]“浓缩型乳酸菌发酵剂制备中几个技术关键问题的探讨”．中国乳品工业（核心期刊），2002，（5）：66～69．（第1作者）[9] “嗜热链球菌与保加利亚乳杆菌麦芽复合汁增菌培养基的优化筛选”．食品与发酵工业（重点核心期刊），2006，（6）：51～55．（第2作者—通讯作者）[10] “直投式酸奶发酵剂制备过程中乳酸菌离心分离条件的研究”．食品工业科技（核心期刊），2006，（11）：69～71．（第2作者—通讯作者）[11]“双歧杆菌微胶囊喷雾干燥工艺的影响因素研究”．食品与发酵工业（重点核心期刊），2007，（8）：89～91．（第2作者——通讯作者）[12]“几个影响新鲜软质干酪品质的因素研究”．食品与发酵工业（重点核心期刊），2007，（9）：161～163．（第2作者——通讯作者）．[13] “构建面向21世纪食品微生物学教学新模式”．河北农业大学学报（核心期刊），2004，（2）：51～54．（第1作者）[14]“食品微生物学教学方法的改革与探讨”．教育理论研究与实践（核心期刊），2005，（3）：19～20．（第1作者）[15] “食品微生物学教学方法的改革与探讨”．教育理论研究与实践（核心期刊），2005，（3）：19～20．（第1作者）2．编写面向21世纪课程教材或国家“十五”、“十一五”重点规划教材及专著共12部（其中主编3部、副主编4部、参编5部）：[1]主编《现代发酵工艺原理与技术》，化学工业出版社，2007．（国家“十一五”重点规划教材）[2]主编《啤酒生产问答》，化学工业出版社，2008．（国内啤酒生产领域最新专著）[3]主编《发酵工程学》，中国农业大学出版社，2009．（面向二十一世纪课程教材和国家“十二五”重点规划教材，待出版）[4]副主编《食品微生物学》，中国轻工业出版社，2001．（国家“十五”轻工职业类教材）[5]副主编《发酵工程与设备》，中国农业出版社，2007．（国家“十一五”重点规划教材）[6]副主编《生物工程设备》，科学出版社，2008．（国家“十一五”重点规划教材）[7]副主编《生物分离工程技术概论》，科学出版社，2008．（国家“十一五”重点规划教材）[8]参编《食品微生物学原理与技术》，中国农业出版社，2005．（面向二十一世纪课程教材和国家“十一五”重点规划教材）[9]参编《食品生物技术导论》，化学工业出版社，2006．（面向二十一世纪课程教材和国家“十一五”重点规划教材）[10]参编《食品微生物学》，中国轻工业出版社，2006．（国家“十一五”重点规划教材和全国第一套食品质量与安全专业重点教材）[11]参编《益生菌生物技术及应用》，科学技术出版社，2007．（国内外益生菌领域最新专著）[12]参编《转基因食品安全评价与检测技术》，科学出版社，2009.(国内食品安全领域最新专著）
xuè qīng rǔ suān tuō qīng méi
Lactic Dehydrogenase
乳酸脱氢酶（LDH或LD）是糖无氧酵解及糖异生的重要酶系之一，可催化丙酮酸与L乳酸之间的还原与氧化反应，也可催化相关的α酮酸。LDH广泛存在于人体组织中，以心、肾、骨骼肌含量最高，肝、脾、胰和肺组织次之，各组织的细胞浆内该酶活力为血清的500～1000倍，红细胞内酶活性为血清的100倍。LDH测定方法主要有比色法和连续监测法。
血液生化检查 > 酶类测定
血液
（1）比色法：LDH以NAD＋作氢的受体，催化乳酸脱氢，生成丙酮酸，后者与2，4二硝基苯肼作用，生成丙酮酸二硝基苯腙，在堿性溶液呈红色，根据颜色深浅求出酶活性。
（2）连续监测法：LDH可催化L乳酸生成丙酮酸，同时NAD＋还原成NADH，在340nm处吸光度的增高速率与酶活力成正比。
（1）比色法：
①底物缓冲液（含0.3mol/L乳酸锂，pH8.8）：取乳酸锂2.88g，二乙醇胺2.1g，加蒸馏水约80ml溶解，以1mol/L HCl调pH8.8，加水至100ml。
②11.3mmol/L辅酶Ⅰ（NAD）溶液：称氧化型辅酶Ⅰ 15mg，溶于20ml蒸馏水中，冰箱保存可用2周。
③1mmol/L 2，4二硝基苯肼（DNPH）溶液：称取DNPH 200mg，加10mol/L HCl 100ml，溶后加水至1000ml，置棕色瓶内室温保存。
④0.4mol/L NaOH溶液。
⑤1mmol/L丙酮酸标准液：称取丙酮酸钠（AR级）11.0mg，以底物缓冲液溶解并稀释至100ml，临用前配制。
（2）连续监测法：
①55mmol/L乳酸锂Tris缓冲液：称取乳酸锂5.28g，Tris 6.68g，溶于800ml蒸馏水中，在37℃水浴箱中用1mol/L HCl调pH至8.9（约需46ml），加水至1000ml，冰箱保存。
②12mmol/L NAD溶液：称取NAD 79.6mg，溶于10ml蒸馏水中，冰箱保存可用2周。
③基质应用液（含NAD 6mmol/L）：根据当天用量将上述NAD溶液和乳酸钾Tris缓冲液等量混合即可。商品试剂盒按其说明溶解，恢复至室温25℃使用。
（1）比色法：按表1操作。
混匀，室温放置5min后，在440nm波长，比色杯光径1.0cm，蒸馏水调零点，读取各管吸光度，以AUAC之差值查标准曲线，求出LDH活力单位。
附注：
①乳酸钾、乳酸钠也可作为LDH底物，但因其为水溶液，含量不够准确，且保存不当易产生酮酸类物质，抑制酶促反应。而乳酸锂为固体，稳定，易于称量。
②除二乙醇胺缓冲液外，也可用Tris或焦磷酸缓冲液，避免了原金氏法中甘氨酸缓冲液对LDH的抑制作用，提高了阳性检出率。
③比色应在5～15min内完成，否则吸光度降低。
④结果＞2500U时，可用生理盐水稀释标本后再测，其结果乘以稀释倍数。
（2）连续监测法：各实验室可根据本室生化自动仪型号及说明书操作。主要参数为340nm波长，37℃，吸样量500μl，连续监测时间60s，标本与试剂体积之比为1∶50。
附注：
①标本勿溶血，当溶血达Hb 0.8g/L时，LDH活性可升高58%。
②标本于室温（25℃）保存，2天内酶活性稳定，冰箱保存酶活性降低，－20℃过夜LDH3、LDH4则全部失活。
③用血清或肝素抗凝血浆测定结果满意，草酸盐可抑制LDH活性。
④复溶后溶液变浊或初始吸光度＞0.5应弃去。
⑤利用正逆双向反应均可测定乳酸脱氢酶活性，但因反应温度、底物和缓冲液浓度不同，其参考区间也有差异。以乳酸和NAD为底物，在340nm监测吸光度增高速率为正向反应，以LDL表示；以丙酮酸和NADH为底物，监测340nm吸光度下降速率为逆向反应，以LDP表示。正逆反应两法相比，LDL法的主要优点是：A.正向反应底物液的稳定性比逆向反应的稳定性大，前者冰箱可保存6个月以上，而后者仅几天；B.速率反应的线性范围（吸光度对监测时间t作图）较宽；C.重复性比LDP好。由于逆向反应速度比正向反应速度快，其参考值约为LDL的2倍。
（1）比色法：150～450U/L。
（2）连续监测法：男80～280U/L
女100～230U/L
LDH测定常用诊断心肌梗死、肝病和某些恶性肿瘤。
（1）心肌梗死：发病10～12h升高，24～48h达高峰，8～9天后恢复正常。与CK相比，虽然酶活性出现较迟，阳性率较低，但持续时间长，且活性增高的程度与心肌梗死的病情密切相关，梗死范围越大，其酶活性越高。若LDH增高后恢复迟缓，或在病程中再次增高，提示梗死范围扩大，预后不良。
（2）肝脏疾病：急性肝炎或慢性活动性肝炎LDH常显著或中度升高。其敏感度略低于ALT。肝癌时LDH活性明显升高，尤其是转移性肝癌增高更显著。可达1000U/L。
（3）血液病：白血病、巨幼红细胞贫血、恶性淋巴瘤等LDH活性升高。
（4）其他：营养不良、横纹肌损伤、胰腺炎、肺梗塞等LDH活性也升高。
临床上可根据酶浓度的变化用以辅助诊断。若酶浓度变化由细胞坏死或细胞膜通透性变化引起，表示脏器或组织损伤；若为细胞内酶合成增加所致，提示组织再生、修复、成骨或异位分泌，或提示有恶性肿瘤的可能；若为酶排泄障碍引起者说明有梗阻存在。同工酶的分析与鉴定则能反应疾病的部位、性质和程度。一、转氨酶及其同工酶（一）生物化学特性转氨酶或称氨基转移酶是一组催化氨基在氨基酸与a-酮酸间转移的酶类，丙氨酸氨基转移酶（ALT）和（天）门冬氨酸氨基转移酶（AST）是其中最重要的两种，前者俗称为谷丙转氨酶（GPT），后者为谷草转氨酶（GOT）。（二）体内分布AST广泛存在于多种器官中，按含量多少顺序为心、肝、骨骼肌和肾等，肝中70%存在于肝细胞线粒体中。AST有两种同工酶ASTs 和ASTm，分别存在于可溶性的细胞质和线粒体。细胞轻度损伤时ASTs 升高显著，而严重损伤时，则ASTm大量出现于血清中。正常血清所含AST的同工酶主要为ASTs，但在病理状态下，如细胞坏死，则血清中以ASTm为主。ALT大量存在于肝脏组织中，其次为肾、心、骨骼肌等。血清ALT活性升高，通常表示肝脏损伤。ALT有两种不同活性的同工酶a（ALTs）、b（ALTm），分别存在于细胞质及线粒体，后者的活性为前者的16倍。肝细胞坏死血清中以ALTm为主。（三）测定方法转氨酶的测定方法有许多种，其中以赖氏法最常用，由于此法操作简便、经济，一些小型实验室仍在使用。目前，国内外实验室多采用连续监测法进行测定。ALT速率法测定中酶偶联反应式为： ALTL-丙氨酸 + a-酮戊二酸 L-谷氨酸 + L-丙酮酸 LD 丙酮酸 + NADH + H+ L-乳酸 + NAD+ AST速率法测定中酶偶联反应式为： AST L-门冬氨酸 + a-酮戊二酸 草酰乙酸 + L-谷氨酸 MD 草酰乙酸 +NADH + H+ L-苹果酸 + NAD+ 上述偶联反应中，NADH的氧化速率与标本中酶活性呈正比，可在340nm检测吸光度下降速率。根据线性反应期吸光度下降速率(-DA/min)，计算出ALT、AST的活力单位。（四）临床意义ALT是反映肝损伤的一个很灵敏的指标，临床上主要用于肝脏疾病的诊断。各种急性病毒性肝炎、药物或酒精中毒引起的急性肝损害时，血清ALT 水平可在临床症状（如黄疸）出现之前就急剧升高，且ALT＞AST。一般而言，急性肝炎时血清ALT高低与临床病情轻重相平行，且往往是肝炎恢复期最后降至正常的酶，是判断急性肝炎是否恢复的一个很好指标。假如能同时测定AST，并计算DeRitis比值，即AST/ALT之比，则对于急、慢性肝炎的诊断和鉴别诊断以及判断肝炎的转归也特别有价值。急性肝炎是时DeRitis比值＜1，肝硬化时DeRitis比值≥2，肝癌时DeRitis比值≥3。重症肝炎时由于大量肝细胞坏死，血中ALT逐渐下降，而胆红素却进行性升高，出现所谓“酶胆分离”现象，常是肝坏死的前兆。AST主要存在于心肌，以往多用于AMI的诊断。AMI发病6～8h即升高，48～60h达到高峰，4d～5d恢复正常。但由于AST在AMI 时升高迟于CK，恢复早于LD，故诊断AMI价值不大。在急性肝炎时，AST虽亦显著升高，但升高程度不及ALT，而在慢性肝炎，特别是肝硬化时，AST升高程度超过ALT。胆道疾患时AST亦可升高。二、g-谷氨酰转移酶及其同工酶（一）生物化学特征g-谷氨酰转移酶（g-GT或GGT）又称g-谷氨酰转肽酶（g-GTP或GGTP），是一种含巯基的线粒体酶。组织分布以肾脏含量最多，其次为胰、肺、肝等。血清中的g-GT则主要来自肝胆，红细胞中几乎无g-GT，因此溶血对其测定影响不大。（二）测定方法目前国内外多采用连续监测法测定血清g-GT活性。IFCC参考方法采用L-g-谷氨酰-3-羧基-对硝基苯胺作为底物，以甘氨酰甘氨酸（双甘肽）作为g-谷氨酰基的受体。在pH7.7的条件下，g-GT催化底物生成g-谷氨酰双甘肽和黄色的2-硝基-5-氨基苯甲酸，在410nm波长处直接连续监测，吸光度的增高速率与g-GT活性成正比关系。（三）临床意义g-GT是肝胆疾病检出阳性率最高的酶。g-GT 还可用于判断恶性肿瘤有无肝转移，肿瘤患者如有g-GT 的升高，常说明有肝转移。g-GT与乙醇的摄取量有关，对乙醇性中毒的判定有相当的价值。长期接受巴比妥类药物、含雌激素的避孕药者常有g-GT升高。用醋纤膜电泳可将g-GT同工酶分为g-GT1、g-GT2、g-GT3和g-GT4四种，正常人只见g-GT2和g-GT3。重症肝胆疾病和肝癌时常有g-GT1出现，乙醇性肝坏死和胆总管结石时常有g-GT2增加，胆总管结石及胰腺炎时g-GT2也增加。g-GT4与胆红素增高密切相关。