不同盐处理对黄瓜幼苗生长及生理特性的影响: 利用溶液培养方法研究了Ca(NO3)2、KNO3、NaNO3和NaCl 4种盐在阴离子浓度为14、56、98、140、182 mmol/L 5个水平下对黄瓜幼苗生理特性的影响。结果表明:随着阴离子浓度的升高,4种盐处理均使黄瓜幼苗的生长受到抑制,质膜透性增大,脯氨酸含量增加,不同盐对保护酶系活性的影响有差异; 3种含硝酸盐类的阳离子的影响大小依次为:钠盐>钾盐>钙盐;在相同水平的Na+离子条件下,NaNO3处理对黄瓜幼苗生长的影响大于NaCl处理。 在设施蔬菜栽培过程中,由于特殊的栽培、灌溉、施肥以及环境条件,形成了一种人为条件的特殊土壤,使土壤表层盐分聚集,引起土壤次生盐渍化,影响蔬菜的正常生长。目前土壤次生盐渍化已成为国内外设施栽培中普遍存在的问题。有研究表明,设施栽培条件下产生的次生盐渍化土壤的盐分组成特点和滨海盐土、内陆盐土不同,阴离子以NO-3为主,约占阴离子总量的67%~76%,阳离子则以Ca2+为主。而一般研究盐害的作用机理多利用高浓度NaCl对作物胁迫,主要是由于NaCl影响植物对必需营养元素的吸收、分配,引起植株水分亏缺及破坏质膜的结构和功能等[4-6]。而设施蔬菜栽培过程中使用的氮肥多为Ca(NO3)2或KNO3。为此,本研究主要探讨在NO-3积累的同时,其阳离子的作用及其与NaCl胁迫在生理特性等方面的差异。1 材料与方法1·1 材料培养试验于2005年3~12月在山东农业大学玻璃温室进行。供试黄瓜品种为“新泰密刺”。按常规方法浸种催芽,挑选发芽整齐的种子播于装有洗净沙子的营养钵中(8cm×8cm),子叶展平后用营养液浇灌,待幼苗长至四叶一心时,选取生长一致的健壮幼苗转移至盛有10L营养液的聚氯乙烯水培盆(50cm×40cm)中,每盆定植两行,共10株。处理前营养液中大量元素参照山崎配方略加修改,微量元素参照Arnon配方,营养液中NO-3的浓度为14 mmol/L,pH值用H2SO4调节,保持在5·5~6·5之间。1·2 试验处理试验营养液阴离子浓度设5个水平,分别为14、56、98、140和182 mmol/L,即在常规营养液NO-3浓度14 mmol/L[Ca(NO3)2∶KNO3=1∶2](对照)的基础上,分别用Ca(NO3)2、KNO3、NaNO3和NaCl四种盐配制的处理营养液,使其阴离子浓度调至56、98、140和182 mmol/L,对照为常规营养液培养,共17个处理,重复3次。移栽缓苗3 d后开始处理,为防止高浓度盐刺激,阴离子浓度每天递增最终浓度的1/4,当达到处理浓度时,重新更换一次处理营养液,处理1周后采样测定相关指标。1·3 测定项目和方法电导率用电导率仪(ORION conductivity TDS me-ter,日本)测定;酶活性用pH 7·8的磷酸缓冲液(0·05 mol/L)提取酶液,SOD活性用NBT还原法测定,POD活性用愈创木酚法测定,CAT活性的测定参照Chance的方法, MDA含量用硫代巴比妥酸法测定,脯氨酸用磺基水杨酸法测定,其均用UV-160A分光光度计进行测定。2 结果与分析2·1 对黄瓜幼苗生长的影响2·1·1 对黄瓜幼苗干重的影响 黄瓜幼苗地上部干重随着阴离子浓度的增加均有降低的趋势,其中NaNO3处理下降明显,KNO3处理次之,NaCl处理的黄瓜幼苗地上部干重在Cl-浓度增加初期下降的幅度与Ca(NO3)2处理的相同,但在高浓度处理时,下降明显,并且比KNO3处理的下降幅度还大。在3种NO-3-N肥中,随着NO-3浓度的增加,对黄瓜幼苗地上部干重的影响则是钠盐>钾盐>钙盐,其中NaNO3处理下降的幅度高达40·70%。黄瓜根系干重随着阴离子浓度的增加,根系干重先增大,而后再下降。在KNO3处理区,NO-3浓度增至56 mmol/L时,根系干重最大,随后开始下降,NaNO3和Ca(NO3)2处理区则在阴离子浓度增至98mmol/L时根系干重达最大,随后则下降;而NaCl处理区虽根系干重随阴离子浓度升高而增加,直至98mmol/L又开始下降,但仍稍高于对照1·06%。根干重下降明显的是NaNO3处理区;其次是KNO3和Ca(NO3)2处理区,下降幅度分别为36·25%,14·48%和9·82%。在3种NO-3-N肥中,高浓度对根干重的影响同样是钠盐>钾盐>钙盐。NaCl处理有助于黄瓜幼苗干重的增加。2·1·2 对黄瓜幼苗株高和茎粗的影响 黄瓜幼苗的株高和茎粗随阴离子浓度的增加,各处理均呈下降趋势,对株高的影响是NaNO3和KNO3处理明显大于NaCl和Ca(NO3)2处理。而对茎粗的影响则是KNO3处理和NaCl处理比较接近。在相同的NO-3阴离子条件下,黄瓜幼苗的株高在NaNO3处理区下降最快,其次是KNO3处理区。Ca(NO3)2处理区下降较慢。而在相同的Na+离子条件下,NaNO3处理分别使株高和茎粗降低,为对照的56·92%和17·72%;NaCl处理也分别降低,但只为对照的45·98%和11·66%,可见,NaNO3处理对株高和茎粗的影响远大于NaCl处理。2·2 对黄瓜幼苗叶片保护酶系活性的影响黄瓜幼苗叶片中SOD活性均随阴离子浓度的升高而升高。其中NaNO3处理区SOD活性最高,KNO3次之,Ca(NO3)2处理的SOD活性升幅最小,分别高出对照的3·75、3·61、2·44、和1·51倍。说明在阴离子均为NO-3时,对SOD活性的影响为钠盐>钾盐>钙盐。在低浓度范围内,POD活性均随处理浓度的升高而增大,且NaNO3处理区升幅最大,为12·6%; KNO3次之,Ca(NO3)2处理升幅仅为4·5%;当NO-3浓度达到140 mmol/L时,随着胁迫强度增加,NaNO3和KNO3处理的黄瓜幼苗的POD活性下降,但Ca(NO3)2处理的POD活性继续升高。说明Ca2+可能对盐胁迫有一定的缓解作用。Ca(NO3)2和NaCl处理使幼苗叶片CAT活性升高,而KNO3和NaNO3处理使CAT活性先升高,在处理浓度超过98 mmol/L活性降低。而同为钠盐,对SOD活性的影响则是NaNO3>NaCl。总之,从各处理保护酶活性的变化可以看出,在相同的阴离子处理水平上 ,NaNO3处理对保护酶系活性影响最大,对黄瓜幼苗生长的胁迫也最大,KNO3处理次之,Ca(NO3)2处理较小。而同为钠盐对保护酶系活性的影响为NaNO3 >NaCl。2·3 对黄瓜幼苗叶片质膜过氧化水平和细胞质膜透性的影响黄瓜幼苗叶片中丙二醛(MDA)含量均随阴离子浓度的升高而增加,在阴离子浓度达到182 mmol/L时,Ca(NO3)2、KNO3、NaNO3和NaCl等4种盐处理的黄瓜幼苗叶片MDA含量依次增加为对照的24·4%、38·7%、46·9%和25·7%,说明不同盐处理均加剧了膜质过氧化水平。黄瓜质膜透性也随着处理浓度的升高而增大,增幅分别为26·84%、98·91%,115·01%和94·02%。NaNO3处理对黄瓜质膜透性的影响最大,KNO3次之,Ca(NO3)2处理影响最小,说明在3种NO-3-N肥中,对质膜的破坏作用钠盐>钾盐>钙盐。2·4 对黄瓜幼苗脯氨酸含量的影响植株受盐胁迫时,细胞质会积累一些可溶性物质降低渗透势,提高植物的耐盐性。脯氨酸是一种重要的渗透调节物质和抗氧化物质。黄瓜幼苗脯氨酸含量随着阴离子浓度的升高,黄瓜幼苗叶片和根系中积累的脯氨酸含量均不同程度提高。其中NaNO3处理提高的幅度大且明显,分别提高16倍和69%, NaCl处理的次之,Ca(NO3)2处理的升高幅度最小,分别为99·77%和5·04%。在3种NO-3-N肥中,随NO-3浓度的增加,阳离子对黄瓜幼苗脯氨酸积累的影响为钠盐>钾盐>钙盐。根系中脯氨酸提高的幅度低于叶片,说明盐胁迫对叶片的影响程度大于根系。3 讨论各种离子胁迫对不同植物的毒害程度有所差异,不同种类离子对同一植物的毒害程度随离子浓度的改变而变化。盐胁迫不仅使植物整体生长变慢甚至死亡,还影响到质膜的组分、透性、运输、离子外渗等变化,导致细胞膜的正常功能受损,使细胞代谢和生理功能受到不同程度的破坏。本试验研究表明,不同盐处理均对黄瓜幼苗植株的生长产生抑制。从3种NO-3-N盐比较看,在阴离子浓度等量的情况下,随着NO-3浓度的增加,对黄瓜幼苗生长的影响大小依次是钠盐>钾盐>钙盐。这可能是作物的生长对K+和Ca2+需求较多,只有在较高浓度时才产生毒害;本试验设计中为了确保阴离子等量,Ca(NO3)2处理中Ca2+的浓度较其他处理的阳离子少50%;在阴离子等量的条件下3种硝态氮肥对黄瓜幼苗生长的胁迫方式和机制有所不同。盐对植物的毒害首先表现为对细胞膜的破坏作用,引起质膜过氧化,膜透性增加。MDA含量和相对电导率大小可反映质膜受伤害的程度。本试验结果表明,4种盐在阴离子浓度大于56 mmol/L的处理均导致过氧化产物MDA含量增加,质膜透性增大。在阴离子NO-3浓度相同的条件下,NaNO3处理对质膜的破坏程度最大,KNO3次之,Ca(NO3)2处理破坏程度最小,说明质膜结构破坏的另一个主要原因可能是由于Na+的过度积累影响了K+和Ca2+的吸收,从而影响质膜结构。在植物遭遇逆境胁迫时,植物自身保护酶活性增加,以此来清除体内产生的大量自由基,维护膜系统的完整性,以减轻对植物的伤害。不同离子胁迫时,对膜起保护作用的酶类活性变化也不完全相同。本研究表明,一定浓度范围内,不同盐分胁迫均可诱导黄瓜幼苗叶片保护酶系活性,其中3种硝酸盐对SOD活性影响程度依次为钠盐>钾盐>钙盐,两种钠盐的影响程度依次为NaNO3>NaCl。而在低浓度范围内,对POD活性的影响与SOD活性变化相似,而当NO-3浓度继续升高时,对POD活性的影响则为NaCl钾盐>钙盐。可以认为,钠盐对植物的保护膜系具有一定的破坏作用;钾盐能促进蛋白质的合成;钙盐能减缓渗透胁迫下的质膜过氧化程度,对生物膜具有一定的保护作用,但钾盐和钙盐浓度过高也会对植物产生离子毒害。NO-3是营养元素,对生长有促进作用。於丙军等人报道,氯是高等植物的必需元素,两种阴离子对植物的生长发育必不可少,但过多仍会造成毒害。从本试验结果看,同为钠盐,对黄瓜幼苗生长的影响是NaNO3>NaCl,原因可能是: 1)NaNO3处理,浓度过高的阴离子NO-3与阳离子Na+共同胁迫作用,而NaCl处理,其阴离子是由营养液中所必需的NO-3离子和大部分Cl-离子组成,在阴离子浓度胁迫方面会有一定的缓解作用;2)施用硝态氮肥使植物体内阳离子含量明显升高,笔者在最近的试验中发现,NaNO3处理中浓度过高的NO-3的大大促进阳离子Na+的吸收,从而使NaNO3处理的Na+毒害加重; 3)4种盐对黄瓜幼苗生长的胁迫方式和胁迫机制不同,此问题有待进一步研究