旋毛虫病论文

旋毛虫病是一种严重的人畜共患疾病，是英国人Peacock于1828年首次在人体中发现并由Owen（1835）命名为旋毛线形虫。我国于1965年在西藏地区发现首例人体旋毛虫病。旋毛虫病研究的重点在于诊断方法。旋毛虫病的诊断主要分为病原学诊断方法和免疫学诊断方法。病原学诊断主要都是采用活检方式，漏检率较高，并且会造成创伤，效果不好。而免疫学诊断灵敏度高，已经广泛被利用于人体旋毛虫病血清流行病学的调查。本文主要介绍间接荧光抗体试验（1FAT）、免疫酶染色试验（1EST）和酶联免疫吸附试验（ELISA）等免疫学诊断方法。1诊断方法间接荧光抗体试验（IFAT）感染肌肉组织抗原片的制备取感染旋毛虫病猪的膈肌作材料，经10%中性福尔马林固定，常规石蜡包埋切片，切片厚度5～10微米，明胶-钾明矾溶液作粘片粘附剂。每张载玻片排放2～4块切片。烘干后常规脱蜡，用摩尔洗3次后切片，分别经过氧化氢-甲醇溶液及1∶20倍稀释的正常兔血清37℃各处理20分钟，如上用PBS洗后用滤纸条吸干水分或自然干燥即为诊断用抗原片，置4℃冰箱保存备用。荧光抗体的制备兔抗猪IgG的制备健康猪血清经饱和硫酸铵盐析，Sephadex～G25脱盐后用DEAE纤维素纯化。用纯化后的猪IgG免疫家兔制得兔抗猪血清后，再按提纯猪IgG的方法提纯兔抗猪IgG。抗体的标记精取异硫氰酸荧光素（FITC）3毫克，加入摩尔/升碳酸钠溶液毫升，使FITC充分溶解。取10毫克/毫升的兔抗猪IgG6毫升，在室温下逐滴加入FITC溶液，边加边搅拌，加完后，室温下继续搅拌3小时。荧光抗体的纯化及质量鉴定将标记后的荧光抗体溶液在4℃下用摩尔透析4～5天，直到再无荧光色素透出为止。经过透析的荧光抗体再经Sephadex－G25层析。用紫外分光光度计分别测495纳米及280纳米处的密度值后算得标记的荧光抗体F/P值为2。测试方法及结果判定抗原片滴加含20%正常兔血清及1%牛血清白蛋白的PBS，37℃孵育20分钟；用PBS冲洗后滴加用含5%正常兔血清的PBS作1∶100稀释的待检血清，37℃孵育45分钟；PBS冲洗后再滴加1∶10倍稀释的荧光抗体溶液，37℃孵育45分钟。PBS冲洗后滴加无荧光甘油缓冲液置荧光显微镜下检查，以切片中肌幼虫切面出现黄绿色荧光者判为阳性。每批试验应设阳性、阴性参考血清对照和猪正常肌组织切片对照。免疫酶染色试验（IEST）待检血清实验室感染8周旋毛虫豚鼠血清35份。抗原的制备剖杀经人工感染旋毛虫幼虫2个月的大白鼠，取膈肠肌及后腿内侧肌肉，镜下压片每个视野平均7条幼虫，用磷酸缓冲液冲洗后，用冰冻切片机切成6微米厚的幼虫冰冻切片，每张载玻片裱贴5块组织片，经丙酮固定后；即为IEST抗原片，保存-20℃备用。操作步骤在旋毛虫幼虫冰冻切片上，将测试血清用摩尔/升～（含吐温～20）稀释成5，10，20，40，80，160比例的浓度（起始浓度为血清原液），分别滴于切片上，每次试验设阴性血清对照。置湿盒中，35℃孵育60分钟，用摩尔/升～洗涤3次，每次5分钟，吹干，滴加酶标葡萄球菌蛋白A（HRP～SPA），同上孵育洗涤，滴加底物溶液（3′3-二氨基联苯胺四盐酸盐-过氧化氢），室温反应15～20分钟，弃底物，用蒸馏水速洗，趁湿片在普通光学镜下观察反应结果。结果判断根据感染大鼠肌肉切片上的幼虫切面显色的深浅，记录结果。反应不着色（-），反应呈现淡棕色（＋）、棕色（＋＋）、棕褐色（＋＋＋）。若待检血清lEST滴度≥1∶10（＋）时，即为lEST阳性。酶联免疫吸附试验（ELISA）酶联免疫吸附试验按非均相测定法可分为10种类型，但常用的有4种：直接型、间接型、双抗体夹心型、固相抗体竞争型。本文主要介绍间接型（常规ELISA试剂盒法）。试剂盒准备根据情况选用合适的ELISA试剂盒。检样的准备在受检猪耳静脉采血2滴，滴于1厘米×2厘米的滤纸片上，将其浸泡于摩尔/升（含吐温-20）2毫升，37℃2小时或4℃过夜，备用。阴阳性血清作1∶200稀释，被检血清作1∶100稀释。操作方法与结果判断加样于诊断盒每孔加检样100微升，室温（25℃）静置2分钟。反应甩去被检液，每孔加1号试液1滴（40微升），室温静置2分钟。洗涤甩去1号试液，每孔加2号试液1滴（40微升），立即用蒸馏水或自来水反复冲洗5次以上。显色拍干反应板上的残液，每孔先加3号试液1滴，再加4号试液1滴，轻轻混匀，室温静置2～3分钟。判定在白色背景下，兰色为阳性，吸收度≥，无色为阴性，吸收度≤。2比较间接荧光抗体试验（IFAT）、免疫酶染色试验（IEST）、酶联免疫吸附试验（ELISA）是旋毛虫病当前诊断常用的免疫学方法。间接荧光抗体试验（IFAT）较早用于诊断旋毛虫病，优点是制备的荧光标记抗体，可以用于多种抗原、抗体系统的检测。初期用全虫作抗原，用试管法检测后发展为用虫体或带虫肌肉切片作抗原。崔晶等应用旋毛虫幼虫冰冻切片抗原，以IFAT检测216份旋毛虫病人血清，抗体阳性率为，发病后第1周抗体阳性率，第2周升至，有显著差异（P＜），至第3、4周分别达和100%。旋毛虫幼虫抗原片在-20℃至少可保存年而不失活。免疫酶染色试验（IEST）与ELISA的原理基本相似。陈雅棠等用人工感染旋毛虫大鼠肌肉的冰冻切片作为抗原，用1EST检测待检血清，在11例肌肉活检证实有旋毛虫感染的病人中，阳性率为，与正常对照组和其它寄生虫感染有明显差别。试验者认为其特异性和灵敏性不低于ELISA。张玉光等用人工感染3个月以上大鼠的膈肌及腿内侧肌制成冰冻切片作为抗原，用IEST和皮内试验对比检测1412名中学生，IEST阳性率为，皮试阳性率为。酶联免疫吸附试验（ELISA）是目前公认的检测旋毛虫特异抗体的较好的方法，有极高的敏感性和特异性。国外已将检查旋毛虫的ELISA方法作为猪只屠宰前的常规检查。我国经过长期实践，实验技术也得到了不断地改进，已从常规的ELISA发展为SPA-ELISA、DOT-ELISA等，旋毛虫ELISA诊断试剂盒也研究成功并推广试用。现今ELISA已广泛应用于旋毛虫病的流行病学调查和临床诊断。但是ELISA也有缺陷：其操作相对较繁琐且要求的实验条件也较高，基层应用尚有一定困难。

（1）严格执行屠宰猪的卫生检疫制度，病猪严重感染时，在成虫寄生期内或大量幼虫钻入肌肉时，可能出现体温升高、肠炎、腹泻、呕吐、迅速消瘦等症状，有的因呼吸肌麻痹而死亡。有的呈慢性病程，表现肌肉疼痛，眼睑或四肢水肿，长期躺卧不起，故仅凭症状不易确诊，要进行尸体剖检，镜检出现虫体时才能确诊。旋毛虫主要寄生在猪的膈肌和肋间肌。检验时常用的压片方法是：取横膈膜肌角，先用肉眼观察肌纤维内是否有小白点样病灶，剪下24个似麦粒大小的肉块，并列夹在两个小玻璃片中，将小肉块压薄后，用低倍镜检查，观察肌纤维间有无旋毛虫幼虫的包囊。按规定，若24个小肉块中发现不超过5个包囊钙化了的幼虫时，可将病猪肌肉和心脏切成小片煮熟食用，若超过5个则销毁。（2）养猪设圈，不让猪乱跑，扑灭鼠类，对犬、鼠尸体应焚烧或深埋处理，同时注意保持猪舍卫生。（3）发现疫源时，应做调查，以便制订措施。（4）本病可用药物治疗：①丙硫咪唑，每千克体重80～100毫克，一次内服。②噻苯咪唑，每千克体重50毫克，内服，连服5～10天。184.什么是猪囊虫病？猪囊虫病是由寄生在人体内的有钩绦虫的幼虫所致。多寄生在猪的横纹肌，肠、眼、其他脏器也常有寄生。成熟的猪囊尾蚴外形椭圆，约黄豆大，有半透明的包囊，长径6～10毫米，短径约5毫米，囊内充满液体，囊壁为一层薄膜，壁上有一个圆形黍粒大的乳白色小结，其内有一个内翻的头节。因囊虫的形状像豆粒，所以又名“豆猪”或“米心肉”。有钩绦虫可长达3米左右，呈乳白色，头很小，有米粒大，前端细而后端长，全身由800～1000个节片组成。前端的节片短而小，后端的节片长而大，里面包含很多虫卵，称为孕卵节片。虫卵为圆形或略为椭圆形，直径为35～42微米，有钩绦虫寄生于人肠道里，孕卵节片不断脱落，随着人的粪便排出，猪吃了这种有虫卵的粪便后，24～72小时内，虫卵就在猪肠内孵化出幼虫，幼虫穿过肠壁，进入血液到身体各部，在肌肉内发育成为囊虫。人吃下未杀死囊虫的猪肉，进入小肠，经2个多月就会变成绦虫，绦虫又产卵，卵随粪便排出。这样人传给猪，猪传给人，循环不已。一般猪患囊虫病多不出现症状，也不容易发现，只有在极强的感染或某个器官受害时才能见到症状。

旋毛虫是一种很细小的线虫，一般肉眼不易看出，为雌雄异体。成虫寄生在宿主的小肠内，幼虫寄生在宿主的横纹肌内，卷曲呈螺旋形，外面有一层包囊呈柠檬状，大小为(～)毫米×(～)毫米。人、猪、犬、猫、鼠及野生动物都能感染。

当人食用含有旋毛虫幼虫的食品后，幼虫由囊内逸出进入十二指肠及空肠，迅速生长发育为成虫，并在此交配繁殖，每条雌虫可产1500条以上幼虫，这些幼虫穿过肠壁，随血液循环被带到宿主全身横纹肌内，生长发育到一定阶段卷曲呈螺旋形，周围逐渐形成包囊。

当人食用患旋毛虫病的畜肉1周左右，出现胃肠炎症状及肌肉疼痛，甚至使肌肉运动受到限制。如果幼虫进入脑、脊髓，也可引起脑膜炎样症状。其幼虫不但寿命长（有的可活10～20年），而且数目多（每克肌肉可有数千万只），致病力强、危害性大、感染率高，能形成地方性流行病。近年来，旋毛虫病在我国有蔓延趋势，如云南省1960～1985年，发病区由5个上升到10个，商品猪宰后旋毛虫检出率上升了近1倍。包囊内幼虫的抵抗力很强，盐腌、烟熏都不能杀死肉块深部的虫体。在盐腌肉块深层中的包囊幼虫可保持活力1年以上，腐败的肉中的幼虫能活100天以上，甚至肉块腐败分解呈糊状，具恶臭，包囊仍然完整，幼虫仍未死亡。所以，控制此病的关键在于预防，不吃未熟透的肉，做好防止粪便污染的卫生工作。在流行地区特别要加强对易感动物肉品的旋毛虫检验。