【摘要】 目的探讨x连锁凋亡抑制蛋白（xiap）在宫颈鳞状细胞癌中表达的意义及动脉介入化疗对宫颈鳞状细胞癌（xiap）表达的影响。方法选取50例宫颈鳞癌患者介入化疗前后宫颈组织，以30例正常宫颈组织为对照，采用免疫组化染色sp法检测xiap表达水平的变化，采用dna缺口原位末端标记法（tunel）检测细胞凋亡指数（ai）。结果xiap在宫颈鳞癌细胞的表达明显高于正常宫颈组织(p<0.05)，且在低分化癌组织中表达明显高于高、中分化癌组织，ⅲ期鳞癌明显高于ⅱ期(p<0.05)，介入化疗前xiap表达水平明显高于介入化疗后(p<0.05)，而介入化疗前ai明显低于介入化疗后(p<0.05)。结论xiap在宫颈鳞状细胞癌的发生发展中起着重要作用，动脉介入化疗可能通过有效下调xiap表达，从而诱导宫颈鳞癌细胞凋亡。
【关键词】 宫颈癌；xiap;动脉介入化疗
effect of intraarterial influsion chemotherapy(iaic) on expression of xlinked inhibitor of apoptosis protein (xiap) in squamous cell carcinoma of cervix
gong yi,liu zhaoxia，cai liping
department of gynecology,the first affiliated hospital of nanchang university ,nanchang 330006,chinaabstract：objective to investigate the expression of the xlinked inhibitor of apoptosis protein (xiap) in squamous carcinoma of cervix and the effect of intraarterial influsion chemotherapy on xiap. methodssamples from 30 normal cervical tissues and 50 cervical squamous carcinoma tissues before and after intraarterial influsion chemotherapy were collected. the expression of xiap was detected in these samples by sp immunohistochemical technique. apoptosis index(ai) was detected by dna in situ terminaldeoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling (tunel). resultsthe xiap expression in squamous carcinoma of cervix was significantly higher than that in normal cervical tissue (p<0.05). samples with welldifferentiated tumor had lower xiap expression than poorly differentiated one(p<0.05).it was also coincident increased with squarmous cell carcinoma staging or degree of malignancy. patients after the treatment by iaic had lower expression of xiap than the one before iaic treatment (p<0.05). conclusionabnormal expression of xiap may contribute to the pathogenesis and development of the squamous carcinoma of cervix.it suggested that apoptosis induced by intraarterial influsion chemotherapy may mediated by the downregulation of xiap in cervical squamous cell carcinoma.
key words：cervical squamous carcinoma;xiap; intraarterial influsion chemotherapy
1资料与方法
1.1资料选取1999年1月~2008年1月本院收治经病理确诊的宫颈鳞癌患者50例，年龄30～66岁，平均48.28±6.68岁,患者行介入化疗前均未接受任何治疗,所选病例均符合以下条件（1）figo分期在ⅱ～ⅲ期； (2)肝肾功能良好； (3)心电图、胸片正常；（4）血常规正常；（5）凝血酶原时间正常；（6）无其他内外科并发症。Www.133229.cOm
1.2分组所选50例患者分别于化疗前、后取宫颈肿瘤组织，设为化疗前组和化疗后组；按照who病理分级标准分为：g1级11例，g2级22例，g3级17例；按照figo临床分期标准分组为：ⅱa期9例，ⅱb期13例，ⅲa期13例,ⅲb期15例。另取30例正常宫颈组织作为对照组。
1.3试剂鼠抗人xiap单克隆抗体为bd biosciences公司产品；原位细胞凋亡检测试剂盒购自德国boehringer mannheim公司。
1.4方法在宫颈肿瘤组织上取活检组织块约0.3 cm×0.3 cm×0.3 cm大小，用10％福尔马林液固定后送病理科常规包埋，制成蜡块。患者行介入化疗后14天，再次同上法取组织制成蜡块。另取30例因良性病变行全子宫切除术者正常宫颈组织作对照组。xiap免疫组化检测设阴性对照(pbs代替一抗)、阳性对照(由试剂盒公司提供) ,标本依次经过脱蜡、梯度酒精水化、过氧化物酶活性阻断、抗原修复、正常非免疫动物血清工作液封闭、一、二抗孵育、滴加链霉菌抗生物素蛋白—过氧化物酶溶液、dab显色、苏木素复染，梯度酒精脱水，中性树胶封片后,显微镜下观察。tunel检测方法按试剂盒说明进行，标本依次经过脱蜡、梯度酒精水化、蛋白酶k孵育、过氧化物酶活性阻断、tunel反应混合溶液孵育、辣根过氧化物酶标记的抗荧光素抗体孵育、dab显色、苏木素复染，梯度酒精脱水，中性树胶封片后,显微镜下观察。
1.5结果判断xiap蛋白阳性的肿瘤细胞胞浆中出现浅黄色至深棕色的颗粒，见图1。每张切片随机观察10个高倍镜视野(×400),根据胞浆着色程度记分,染色深度以多数细胞的呈色反应为准，胞浆不着色为0分,浅黄色为1分,中黄色为2分,棕黄色为3分,深棕色为4分，然后将10个视野的积分之和除以10,结果四舍五入取整数作为胞浆染色强度的最后积分。然后再对每张切片的染色细胞数进行积分,随机选取1 000个细胞,总染色细胞数＜25 %记为1分, 25%～50%记为2分,50%～75%记为3分,＞75%记为4分。将胞浆染色强度积分与染色细胞数积分的乘积作为每个标本的最后积分[5]。凋亡细胞计数：细胞核中有棕黄色颗粒为阳性，即凋亡细胞，见图2。随机观察10个高倍视野，每个视野连续计数100个细胞中的凋亡细胞数，以平均数为凋亡指数（apoptotic index,ai）图1xiap在宫颈鳞癌中的表达(sp×400)
1.6统计学方法实验结果应用spss 13.0统计软件进行分析,阳性率比较采用卡方检验,均数间的比较采用独立样本及配对样本的t检验。
2结果
2.1介入化疗前后xiap表达率、xiap积分、ai的比较介入化疗前、后组的xiap表达率、xiap积分、ai均明显高于正常对照组(p<0.05)；介入化疗后xiap表达率与介入前比较差异无统计学意义(p＞0.05)，而xiap积分明显低于介入化疗前，ai高于介入化疗前(p<0.05) ，见表1。表1各组xiap表达率、积分及ai的比较
2.2病理分级与介入化疗前后xiap积分、ai的关系xiap积分、ai在介入化疗前后随病理分级的增高而逐渐增高，且同一病理分级介入化疗后xiap表达水平低于介入化疗前,ai高于介入化疗前，差异具有统计学意义(p<0.05) ，见表2。表2化疗前后各病理分级xiap积分、ai比较
2.3临床分期与介入化疗前后xiap积分、ai的关系xiap积分在介入化疗前后随临床分期的增高而增高，同一临床分期介入化疗后xiap表达水平低于介入化疗前,ai高于介入化疗前，差异具有统计学意义(p<0.05)，但ai在各临床分期间的差别无统计学意义(p＞0.05) ，见表3。表3化疗前后各临床分级xiap积分、ai比较
3讨论
近年来，动脉介入化疗作为宫颈癌新辅助化疗的一种模式，由于该方法能提高肿瘤局部药物浓度,减少药物的毒副作用并可以超选择地阻断瘤体的血供，所以得到了越来越广泛的应用。宫颈癌治疗的近期疗效评价主要依靠临床症状、肿块消退情况、病理学检查、影像学检查等。而某些分子生物学标记如：细胞凋亡指数（ai）、bax和cox2等则被用来评价介入化疗的远期疗效[6]。本研究通过免疫组化方法检测50例宫颈鳞癌介入化疗前后xiap表达水平、细胞凋亡指数并进行了配对研究,结果发现xiap在宫颈鳞癌中高表达，介入化疗后xiap表达水平低于介入化疗前,细胞凋亡指数高于介入化疗前，提示动脉介入化疗可能通过下调xiap的表达促进肿瘤细胞的凋亡，因此xiap表达水平可能作为判断动脉介入化疗疗效的客观依据之一。近年来研究发现xiap在多种恶性肿瘤中表达明显升高,且其表达水平与肿瘤的侵袭性明显相关[34]。一般而言，肿瘤细胞分化程度越低，侵袭性越强。本研究发现xiap在治疗前宫颈鳞癌中表达率高达86％，且其在低分化宫颈鳞癌组织中表达水平明显高于高、中分化者，由此推测xiap在宫颈鳞癌的发生、侵袭乃至转移中可能起着重要的作用。宫颈鳞癌的预后与其临床分期密切相关。本研究表明，临床分期增高，xiap表达水平亦相应增高，由此推测xiap表达可能与宫颈鳞癌预后有一定的相关性，是否可将其作为宫颈鳞癌的独立预后指标尚有待进一步研究。宫颈鳞癌细胞对常规化疗方案耐药严重影响了新辅助化疗的疗效。研究发现，过度表达的xiap对caspases的抑制是导致肿瘤细胞对多种化疗药物产生耐药性的重要原因之一 [7]，通过各种手段下调xiap表达或拮抗xiap的抗凋亡作用以减少耐药的产生已成为当前肿瘤治疗的热点[89]。本研究发现xiap表达水平与宫颈鳞癌发生发展关系密切，为今后设计以下调xiap为方向的耐药宫颈鳞癌的治疗研究打下良好的实验基础。
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［编辑：贺文；校对：刘红武］doi:10.3971/j.issn.10008578.2009.02.018·临床应用·
