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实时荧光定量PCR在生殖泌尿道疾病诊断中的应用

2015-12-13 11:50 来源:学术参考网 作者:未知

摘 要:目的:探讨荧光定量PCR在生殖泌尿道疾病诊断中的应用。方法:采用FQ-PCR法对4 160例泌尿生殖道感染疑似患者同时进行UU、CT、HSVⅡ型、NG和HPV检测。结果:5种性病病原体的感染率比较差异有统计学意义(P<0.01);另外男女的UU感染率比较差异有统计学意义(P<0.05),而CT感染率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:荧光定量 PCR技术检测常见性病病原体,具有简便、快捷、准确、特异性高等优点,对临床诊断治疗及流行病学调查有重要意义。

关键词:性病传播;实时荧光PCR;疾病诊断
  与性行为传播相关的疾病,统称为性传播疾病(Sexually transmitted disease,STD),它是当前世界上流行最广泛的传染病,而且由过去的5种性病演变为与性行为接触密切相关的20余种传染病。目前,通过性传播解脲支原体(UU)、沙眼衣原体(CT)、单纯疱疹病毒(HSVⅡ型)、淋球菌(NG)和人乳头瘤病毒(HPV)所致的泌尿生殖道感染者,在我国成快速增长趋势[1]。文章应用荧光定量 PCR 技术,对在广西北海市第二人民医院门诊4 160例疑似泌尿生殖道感染患者分别进行了UU、CT、HSVⅡ型、NG和HPV检测,现将结果报告如下。
1 资料与方法
1.1  一般资料:选择2009年10月~2009年12到广西北海市第二人民医院妇科门诊和男性科门诊就诊,疑为泌尿生殖道感染的患者4 160例,其中男404例,女3 756例,取其分泌物用实时荧光PCR法分别进行UU、CT、HSVⅡ型、NG和HPV(HPV包括低危和高危型检测)。
1.2  标本采集及处理方法:所有标本均由临床医师采集。男性:取尿道分泌物,用细小棉拭子伸入尿道约2~4 cm,略捻拭子取出分泌物;女性:用无菌生理盐水棉球洗去宫外分泌物,再用无菌棉拭子插入宫颈内,停5 s后旋动棉拭子采取宫颈分泌物;尿道口或患病部位刮片:用刮片刮取病灶脱落细胞,密闭于无菌样品管送检。
1.3  检测方法:按照说明书使用杭州博日科技有限公司生产的LineGeneⅠ荧光定量PCR检测系统和中山大学达安基因股份有限公司生产的PCR试剂盒,严格按照卫生部颁发的《临床基因扩增 PCR 诊断实验室工作规范》要求进行检测;每次试验设阴性、临界阳性、强阳性对照,处理方法同标本,根据设置的基线和阈值,仪器自动显示检测结果。
1.4  统计学方法:采用SPSS 13.0对数据进行χ2检验。
2 结果
  4 160例疑为泌尿生殖道感染患者用荧光定量PCR法分别检测UU、CT、HSVⅡ型、NG和HPV,阳性检出总例数为1 826例,阳性率36.68 %,且每种病的具体情况分别为1 434例/78.53%,337例/18.46%,28例/1.53%,11例/0.60%,16例/0.88%,经比较5种性病病原体的感染率比较差异有统计学意义(P<0.01);另外(UU+CT)和(UU+CT+HSVⅡ)的混合感染分别有148例和12例,阳性率分别为8.10%,0.66%。UU和CT的男、女感染情况见表1,可以看出女性的UU感染率远远超过男性(P<0.05),而男、女CT感染率比较差异无统计学意义(P>0.05)。
表1  UU和CT的男、女感染情况 [例(%)]

性别

UU(n=1 434)

CT(n=337)

402(28.03)

156(46.29)

1 032(71.97)

181(53.71)

3 讨论
  UU、CT、HSVⅡ型、NG和HPV是导致生殖泌尿道感染的主要病原体。传统的临床微生物检测方法,存在检出率低、特异性差、灵敏度较低、易交叉污染、周期长等缺点,给临床诊断带来困难[2]。实时荧光定量PCR是在常规PCR基础上加入荧光基团或荧光染料,利用荧光信号积累,实时监测整个PCR 过程,对核酸进行定量分析,具有使用简便、高灵敏性、高精确定量、高特异性以及能准确地反映体内病原体感染情况等优点本研究用过利用FQ-PCR对疑似病例进行UU、CT、HSVⅡ型、NG和HPV检测,结果表明阳性检出总例数为1 826例,阳性率为43.89%,存在混合感染情况;且5种性病病原体的感染率比较差异有统计学意义(P<0.01)以及男女的UU感染率比较差异有统计学意义(P<0.05),而CT感染率比较差异无统计学意义(P>0.05),与文献报道相似[3-4]
  综上所述,FQ-PCR检测技术克服了传统常规检测方法的许多缺点,能同时对一份标本进行多种检测,且操作简单,结果客观准确,可及时为临床提供可靠的诊治依据,在临床诊断和治疗中的具有很高的应用价值。
4 参考文献
[1] 中华人民共和国卫生部防疫司.实用皮肤性病学手册[M].成都:四川科学技术出版社,1999:38.
[2] Schmittgen D.Real-time quantitative PCR[J].Methods,2001,25(4):383.
[3] 黄  敏,龚小云,郑  江.荧光定量 PCR 检测常见3种性病病原体结果分析[J].重庆医学,2005,34(2):271.
[4] 苏学飞,左中越,程  刚.荧光定量PCR检测性病病原体的临床价值[J].实验医学杂志,2001,17(6):561.
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