摘 要：目的：研究EGCG诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡前后，其蛋白质的差异表达。方法：采用SELDI-TOF-MS技术检测EGCG诱导SMMC-7721细胞凋亡后的相关蛋白变化。结果：EGCG作用前的人肝癌SMMC-7721细胞与作用后的SMMC-7721细胞相比，蛋白分子量高表达的有16个，低表达的也有16个。结论：EGCG作用肝癌细胞前后确实存在差异表达蛋白，这可能有助于EGCG诱导肝癌细胞凋亡机制的研究。
关键词：EGCG;SELDI-TOF-MS;肝癌
原发性肝癌是临床上最常见的恶性肿瘤之一，根据最新统计，全世界每年新发肝癌患者约六十万，居恶性肿瘤的第五位。目前我国的肝癌患者占全球的55%，发病人数约占全球的半数以上，已经成为严重威胁我国人民健康和生命的一大杀手，其危险性不容小视。表没食子儿茶素没食子酸酯（Epigallocatechin gallate，EGCG）是绿茶茶多酚中含量最高，活性最强的单体。大量的体内外实验及流行病学调查证实EGCG具有抑制肿瘤细胞增殖和诱导肿瘤细胞凋亡的作用[1]。研究旨在探讨EGCG诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡后相关蛋白变化，这可能有助于进一步探讨EGCG诱导肝癌细胞凋亡的机制。
1 资料与方法
1.1 一般资料：试剂：EGCE（纯度95%）购自美国sigma公司，用无血清的RPMI-1640培养基配制成浓度为1 mg/ml的工作液，并用0.22 μm的滤头过滤除菌，4℃避光保存；ProteinChip?Biology System（PBSⅡC）型SELDI蛋白质谱仪及其配套的WCX2弱阳离子交换芯片购自美国Ciphergrn Biosystems公司；Ciphergen protein统计软件。
1.2 细胞系：人肝癌细胞SMMC-7721购自中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库。
1.3 SELDI-TOF-MS技术检测EGCG作用前后的SMMC-7721细胞裂解液：实验组为EGCG（浓度125 mg/L）作用后的SMMC-7721细胞，对照组为未经EGCG处理的SMMC-7721细胞，然后将细胞培养在终体积为4 ml的培养液中。培养24 h后，倾倒培养液，裂解细胞。裂解后液体用Brandford法检测其蛋白浓度。最后参见文献[1]方法，进行SELDI-TOF-MS检测。
2 结果
实验结果显示EGCG能影响到人肝癌SMMC-7721细胞蛋白的表达。采用SELDI-TOF-MS技术检测EGCG作用前后的人肝癌SMMC-7721细胞裂解液，共捕获到32个有统计学意义的差异蛋白峰（P＜0.05）。其中，EGCG作用前的人肝癌SMMC-7721细胞与作用后的SMMC-7721相比，蛋白分子量高表达的有16个，低表达的也有16个，其相对分子质量见表1。
表1 EGCG作用前的SMMC-7721细胞与作用后的SMMC-7721细胞比较
SMMC-7721细胞低表达的差异蛋白分子量 | SMMC-7721细胞高表达的差异蛋白分子量 | ||||||
3049.97 | 3822.02 | 4532.58 | 6631.87 | 3032.10 | 3392.57 | 4091.91 | 4938.13 |
3141.68 | 3930.77 | 5977.03 | 6850.42 | 3107.72 | 3737.91 | 4138.25 | 4964.18 |
3154.56 | 4106.17 | 6066.47 | 8562.11 | 3275.71 | 3910.86 | 4226.02 | 5639.09 |
3202.02 | 4152.85 | 6431.82 | 8690.90 | 3329.59 | 4078.52 | 4283.74 | 9182.34 |
