摘 要：目的：探讨逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术在超短程化疗治疗脊柱结核中的应用价值。方法：应用RT-PCR技术检测27例超短程化疗治疗的脊柱结核患者抗痨治疗前、治疗5～6个月及治疗后1～2年外周血中的结核分枝杆菌Ag85B mRNA。结果：抗痨治疗前、治疗5～6个月及治疗后1～2年外周血Ag85B mRNA检测阳性率分别为74.07%（20/27）、22.22%（6/27）、18.52%（5/27），抗痨治疗前与治疗5～6个月、治疗1～2年的阳性率比较，差异均有统计学意义（P＜0.01），治疗5～6个月与治疗1～2年阳性率比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。结论：RT-PCR技术能够监测脊柱结核患者外周血Ag85B mRNA的变化，从分子水平证明超短程化疗治疗脊柱结核的有效性。
关键词：Ag85B mRNA；超短程化疗；脊柱结核
结核病是全球较为严重的传染性疾病之一，我国是全球第2大结核病高负担国家，近年来全国结核病报告发病人数在法定传染病报告中位居前列[1]。PCR技术具有较高的敏感性和特异性，已逐步应用到临床结核病的细菌学检测，该方法能够将诊断时间从几周缩短到几天，是发现传染源的主要途径和手段，也是结核病诊治的重要依据[2]。研究应用RT-PCR技术检测超短程化疗治疗脊柱结核患者血液中的结核分枝杆菌Ag85B mRNA，从分子水平探讨RT-PCR技术在超短程化疗治疗脊柱结核中的应用价值。
1 资料与方法
1.1 一般资料：选取2010年8月～2011年9月宁夏医科大学总医院脊柱外科住院治疗及门诊复查采取超短程化疗治疗的脊柱结核患者27例，男12例，女15例，年龄11～72岁，平均（39±2.3）岁。
1.2 方法：采用美国BOI-RAD公司PCR仪进行脊柱结核患者Ag85B mRNA检测，RNA提取试剂盒、逆转录试剂盒均购自大连宝生物公司，引物序列由上海生工公司合成，按仪器和试剂相关说明书进行操作，PCR产物经凝胶电泳进行结果判定。
1.3 统计学处理：所有数据采用SPSS 11.0软件进行χ2检验。
2 结果
脊柱结核患者血液Ag85B mRNA的检测结果：抗痨治疗前与治疗5～6个月、治疗1～2年的阳性率比较，差异均有统计学意义（P＜0.01），治疗5～6个月与治疗1～2年阳性率比较，差异无统计学意义（χ2=0.1142，P＞0.05），详见表1。
表1 脊柱结核抗痨治疗前、治疗5～6个月、治疗1～2年Ag85B mRNA的检测结果
组别 | 样本例数 | 阳性例数 | 阳性率（%） | χ2值 | P值 |
抗痨治疗前 | 27 | 20 | 74.07 |
|
|
治疗5～6月 | 27 | 6 | 22.22 | 14.5385 | ＜0.01 |
治疗1～2年 | 27 | 5 | 18.52 | 16.7586 | ＜0.01 |
3 讨论
脊柱结核手术前后均需进行抗结核治疗已达到共识，大部分学者认为术前抗结核药物有效治疗至少在术前应用2周以上，才能基本达到抑制和控制体内结核菌的活动，使骨病变趋于静止或相对稳定，使机体体质有所恢复，有利于手术治疗的实施和病变的治愈；未经术前化疗的脊柱结核手术是危险的，可导致手术的失败[3-5]。而王自立等采用超短程化疗方案及病变椎体部分切除术治疗脊柱结核，术前化疗时间为15～20 d，平均21 d，术后脊柱结核患者同样取得了较好的治疗效果[6]。
目前随着检测技术的发展，基因水平的检测不断应用到脊柱结核的诊疗中，并取得了良好的效果。Ag85B（antigen 85 complex B）是结核分枝杆菌的特异性分泌蛋白，是在液体培养基和巨噬细胞系统中最丰富表达的蛋白之一，与结核分枝杆菌的细胞壁合成有关，分子量30 kD，其编码基因fbpB（fi-bronectin-binding protein B）为978 bp[7]。Ag85B是结核分枝杆菌分泌的保护性蛋白，对于结核病病情好转有一定的预警作用，可作为结核治疗监测的指标，一般认为mRNA是一活性增殖细胞的很好的分子标记物。国内外研究发现有应用RT-PCR方法作为结核分枝杆菌活菌检测及药敏检测的成功报道[8-11]。因此，本研究通过RT-PCR技术对27例脊柱结核患者外周血中结核分枝杆菌Ag85B mRNA检测，结果发现抗痨治疗前、治疗5～6个月及治疗后1～2年外周血Ag85B mRNA检测阳性率分别为74.07%（20/27）、22.22%（6/27）、18.52%（5/27），抗痨治疗前与治疗5～6个月、治疗1～2年的阳性率比较，差异均有统计学意义（P＜0.05），治疗5～6个月与治疗1～2年阳性率比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。结果表明治疗5～6个月的超短程化疗与治疗后1～2年的化疗效果是一样的，证明超短程化疗治疗脊柱结核的有效性及可行性，同时RT-PCR技术可以作为化疗监测指标、指导结核抗痨时间选择的一种客观、灵敏、特异性高的方法。
4 参考文献
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