【关键词】 非肌肌球蛋白ⅱa型;肺肿瘤;免疫组织化学
【摘要】 目的 探讨非肌肌球蛋白ⅱa(myh9蛋白)在肺癌组织中的表达及临床意义。方法 采用免疫组化sp法检测90例手术切除肺癌组织中myh9蛋白的表达，并分析其与临床病理特征的关系。结果 myh9蛋白在肺癌组织阳性表达显著高于癌旁组织(uc=9.53，p<0.01);myh9蛋白在肺癌的不同病理类型即鳞癌和腺癌中表达，差异有显著性(χ2=16.29,p<0.01);t1+t2与t3+t4分期myh9蛋白的表达差异有显著性(χ2=9.88,p<0.05)。myh9蛋白的表达与肺癌病人的年龄、性别、肿瘤的分化程度、临床分期及淋巴结转移无关(p>0.05)。结论 myh9蛋白在肺癌组织表达上调，其表达可能参与了肺癌发生，可能成为诊断肺癌一个新指标。
【关键词】 非肌肌球蛋白ⅱa型;肺肿瘤;免疫组织化学
expression of myh9 protein in lung cancer and its clinical significance wang cuihong, sun lichao, liu tong, et al (department of histology and embryology, qingdao university medical college, qingdao 266021, china); [abstract] objective to investigate the expression of myh9 protein in lung cancer and its clinical significance. methods immunohistochemical staining (sp method) was applied to detect myh9 protein and analyze its association with clinical pathology in 90 cases of lung cancer resected. results the expression of myh9 in cancer tissue was significantly higher than that in the paraneoplastic (uc=9.53,p<0.01); the differences of that expression were significant between different types of pathology, i.e. squamous cell carcinoma and adenocarcinoma (χ2=16.29,p<0.01), and between different stages, such as t1+t2 and t3+t4 (χ2=9.88,p<0.05). the expression of myh9 in lung cancer was not correlated with the patients’ age, sex, tumor differentiation, clinical stage or lymph node metastasis (p>0.05). conclusion upregulation of myh9 expression was manifested in lung cancer, the expression might involve the occurrence of the cancer and become a new marker for diagnosing this condition.
[key words] nonmuscle myosin type ⅱa; lung tumor; immunohistochemistry
肺癌的发病率和死亡率居高不下，其中75%～80%病人就诊时就已处于ⅲ～ⅳ期，5年生存率仅为12%[1]。www.133229.COm探寻肺癌特异表达的蛋白可为肺癌的诊治提供更多的理论依据。非肌肉肌球蛋白重链ⅱa(myh9蛋白)基因定位于人类染色体22q13.1，由myh9基因编码[23]， dammwelk 等[4]的研究结果显示，myh9蛋白为儿童间变性大细胞淋巴瘤表达间变性淋巴瘤激酶(alk)时的融合基因，而在mdamb231乳癌和b16f2黑色素瘤细胞系中myh9蛋白则依赖某些因子表达[5]。进一步研究显示，myh9是乳癌的候选癌基因,可能在癌细胞的转移中发挥作用[6]。然而，目前国内外尚未见关于myh9蛋白的表达与恶性肿瘤(包括肺癌)相关性的深入研究报道。为了初步明确myh9蛋白表达与肺癌的关系，本研究采用免疫组织化学方法检测myh9蛋白在90例肺癌及相应癌旁组织中的表达情况，探讨myh9蛋白与肺癌各项临床病理特征之间的相关性。现将结果报告如下。
1 材料与方法
1.1 标本来源
收集2006年3月—2007年10月在中国医学科学院肿瘤医院因肺癌住院接受手术治疗90例病人的肺癌组织及相应癌旁组织，男68例，女22例，年龄36～79岁，中位年龄61岁。其中鳞癌44例，腺癌46例。病人术前均未行放、化疗，术后均有明确的病理诊断。所有标本经甲醛固定，常规石蜡包埋制成蜡块保存备用。
1.2 试剂
一抗兔抗人myh9蛋白多克隆抗体购于sigma公司，sp免疫组化试剂盒系福州迈新生物技术公司产品。
1.3 方法
石蜡包埋的标本4 μm厚连续切片，取一张行苏木精伊红(he)染色，用于肿瘤病理观察;另取一张采用免疫组化sp两步法检测myh9蛋白的表达情况，染色步骤按照试剂说明书进行。同时，采用预实验抗体浓度梯度筛选中已明确myh9蛋白表达阳性的切片作为阳性对照，用pbs代替一抗作为阴性对照。
1.4 结果判定
染色结果以细胞核或细胞浆内出现阳性信号为判断标准，以阳性细胞的百分率与细胞着色强度得分的乘积进行结果判断。阳性细胞百分率计分：着色细胞占计数细胞百分率≤5%为0分，6%～25%为1分，26%～50%为2分，>50%为3分。着色强度计分：无色为0分，浅黄色为1分，黄色为2分，棕黄色或棕褐色为3分。最后得分为上述计分的乘积：0～1分为阴性(-)，2～3分为弱阳性(+)，4～6分为中等阳性()，6分以上为强阳性()。
1.5 统计学处理
采用spss 17.0及ppms 1.5[7]统计软件进行统计学分析，数据间比较采用u检验及χ2检验。
2 结 果
2.1 myh9蛋白在肺癌及相应癌旁组织中的表达
myh9蛋白阳性信号定位于细胞浆和(或)细胞核中，以中等阳性为主。myh9蛋白在肺癌组织的阳性表达强度显著高于癌旁组织(uc=9.53，p<0.01)。见表1。表1 myh9蛋白在肺癌和相应癌旁组织中的表达
2.2 肺癌组织中myh9蛋白的表达与肺癌临床病理特征的关系
myh9蛋白在肺癌的不同病理类型即鳞癌和腺癌中表达，差异有显著性(χ2=16.29,p<0.01);t1+t2与t3+t4分期myh9蛋白的表达差异有显著性(χ2=9.88,p<0.05);myh9蛋白的表达与肺癌病人的年龄、性别、肿瘤的分化程度、临床分期和淋巴结转移情况无关(p>0.05)。见表2。
3 讨 论
表2 肺癌组织中myh9蛋白的表达与临床病理特征的关myh9蛋白除参与细胞的一些重要功能，包括胞质分裂、细胞运动和维持细胞形态外，有研究结果显示，myh9蛋白为乳癌基因系统分析的候选基因[6]，因此推测该蛋白的表达可能与肿瘤的发生有关。基于此本研究首次检测了myh9蛋白在肺癌组织中的表达，结果显示myh9蛋白在肺癌组织中高表达，而在肺癌相应癌旁组织中不表达或低表达，两者间比较差异有显著性。提示该蛋白可能在肿瘤的发生发展中起重要作用。本研究对肺癌组织中myh9蛋白的表达与临床病理特征的相关性进行了分析，结果显示myh9蛋白在肺癌的不同病理类型即鳞癌和腺癌中表达差异有显著性，提示这种差异可能与肿瘤的异质性有关。同时，本文结果也显示，myh9蛋白的表达在肺癌t1+t2期与t3+t4期间存在显著统计学差异，表现为在t1+t2期的表达强度弱于t3+t4期，提示出myh9蛋白在早期癌中有表达，且可能与肺癌的发生发展有相关性，可作为肺癌诊断尤其是早期诊断的潜在靶标。本研究结果还显示，myh9蛋白的表达与肺癌病人的年龄、性别、肿瘤分化程度、临床分期和淋巴结转移无关，这有待扩大样本进行进一步的研究。
总之，本研究结果提示，myh9蛋白与肺癌的发生发展存在相关性。但是，由于此次研究仅仅采用了免疫组化的方法，属于初步探讨，应进一步采用多种研究方法探讨myh9蛋白是否能够成为诊断肺癌的靶标，研究myh9蛋白能否成为有价值的靶向治疗肺癌的靶位。
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