1971 年, paulk 和taylo r 首次将胶体金引入了免疫化学,建立以胶体金标记抗原(或抗体) 检测相应抗体(或抗原) 的免疫学新方法, 为研制特异、敏感、快速(5～ 10 m in 出结果) 和便捷的免疫学检测技术和临床诊断方法奠定了基础。经过几十年的发展, 作为一门成熟的技术被广泛应用于生物医学等领域,特别是胶体金免疫层析试纸条以其便捷、快速、准确和无污染等特点被广泛应用医学检测和临床诊断, 成为目前进行快速诊断的主要方法之一。本文就胶体金免疫层析试纸条医学检测和诊断中的应用综述如下。
1 病原微生物的检测
1. 1 病毒的检测
1988 年李富春等人报道建立了固相免疫金银法用于检测血清中的hb sa g。随后, petel 等用胶体金标记成功标记了羊抗人igg, 并用该标记抗体检测了血液中的抗风疹igg。wwW.lw881.com1999 年a nke b rüning 等[1 ]用快速层析试纸条直接检测牛瘟病毒, 并对该方法进行评价, 用试纸条检测的阳性率为89. 47% , 比免疫捕获- el isa (78. 95%) 高, 提示该方法适合于现场快速检测牛瘟病毒。2004 年m ing guan 等用胶体金标记试纸条对康复期的74 例sars 患者体内的igg 抗体进行了检测,该试纸条的敏感性、特异性以及准确率分别达100% , 99. 5%和
99. 6%, 与el isa 的符合率为99. 6% , 这一方法的建立为预防和及时诊断非典型性肺炎(sars) 患者提供了重要的技术支撑。徐葛林等研制出了快速检测狂犬病毒的金标试纸条, 与e ia 方法同时对48 份可疑狂犬病犬唾液样品进行了检测, 两法的符合率为88. 2%。有报道称, 用研制的检测猪瘟病毒试纸条对11 份猪瘟病料进行了实验性检测, 检出率为36. 36% , 虽然比直接猪瘟荧光抗体实验的检出率45. 45%和猪瘟特异性rt 2pcr 检出率72. 73%低, 但是试纸条操作简单、出结果快, 适合现场使用, 可以作为一种快速的现场诊断方法使用[2 ]。除此之外, 已经研制出的检测病毒的试纸条还有新城疫[3 ]、细小病毒[4 ]以及口蹄疫[5 ]等。
1. 2 细菌的检测 首次将免疫胶体金标记技术用于细菌检测是kalvatchev 等[6 ] , 他们利用胶体金标记的抗立克次体的多克隆抗体、单克隆抗体对标本中的立克次体进行了检测。已经建立的结核胶体金免疫层析检测方法灵敏度达2 mgöl , 特异性好, 无交*反应, 与el isa 法相比阳性符合率达93. 8% , 试剂稳定性达6 个月。2002 年, 许青田等[7 ]用研制的胶体金标记快速诊断试纸条对霍乱进行了临床研究, 结果表明最小检出菌量为106öml , 霍乱患者大便中, 一般含菌量可达106～ 108öml , 因而可用于这类患者的快诊。结果提示, 采用该方法可对霍乱患者进行快速准确的诊断, 避免了漏诊、误诊现象的发生, 使其得到及时、合理的治疗, 对防治该烈性传染病具有重要的意义。2005年朱虹等[8 ]用研制的鼠疫胶体金法快速诊断试剂盒对用间接血凝法检测300 份阳性血清样品和100 份阴性样品进行了检测, 结果显示, 此两种方法的符合率为100% , 而且不与假结核耶尔森氏菌等相关细菌的免疫血清发生交*反应, 认为鼠疫胶体金法快速诊断试剂盒较好的特异性和敏感性, 操作简便, 适合基层单位现场使用。2006 年王鹏等[9 ]对研制的鼠疫单抗胶体金标记试纸条进行了评价, 结果表明, 该试纸条不仅特异性高
达100% , 出结果快(在15 m in 内出结果) , 而且具有高敏感性即能够检测浓度为0. 5 ngöml 粗制f1 抗原, 最小检出菌量为10万个。最近, 研制的快速诊断大肠杆菌o 157 株的胶体金试纸条, 不仅敏感性高, 可检测范围为1×105 cfu öml , 特异性好, 不与其他24 种肠道菌(包括除o 157 外的大肠杆菌属、沙门氏菌属、耶尔森氏菌属等) 不发生交*反应。除此之外, 该试纸条还能检测出诸如奶粉、面粉、咖啡、点心以及蔬菜和水果等诸多样品中的o 157 大肠杆菌。
1. 3 寄生虫的检测 吴锦雅等[10 ]用抗sjp 38 的单克隆抗体建立血吸虫感染的金标试纸条对实验感染小鼠体内血吸虫抗原rsjp 38 进行了检测, 结果显示, 尽管在整个实验过程中, 血清抗体检测为阴性, 但是对小鼠体内抗原进行实时动态检测后发现, 随着感染时间的延长, 检出率逐渐增高。2004 年, 李学伍等[11 ]采用免疫金标技术成功研制出旋毛虫病快速检测试纸条,结果显示该试纸条具有良好的特异性, 不与猪肺线虫、猪囊尾蚴、猪细颈囊尾蚴、猪米氏住肉孢子虫、猪蛔虫发生交*反应,其敏感性与el isa 相当, 与el isa 及消化法的检测结果符合率为100% , 5 m in 内肉眼观察获得结果, 该方法具有特异、敏感、快速、简单等特点。最近报道的还有检测弓形虫[12 ]、日本血
吸虫等寄生虫的金标试纸条。实用诊断与治疗杂志2008 年第22 卷第1 期·39·
2 医学诊断
beggs 等[13 ]于1990 年报道用斑点免疫层析技术对孕妇尿液中的hcg 进行检测, 结果显示, 该方法可以作为早孕诊断的快速技术。刘煜凯[14 ]用抗hgc 亚基的单抗研制的早孕诊断试纸条对538 例临床样品进行了检测, 并与国外检测早孕的试纸条进行了比对, 发现两种试纸条的符合率为100% , 检测敏感性达到了50 iuöl 。2000 年李志梁等[15 ]用研制人心肌肌钙蛋白t (ctnt)的金标试纸条检测30 例急性心肌梗死(am i) 患者血清ctnt 水平, 并与国外同类产品比较, 符合率达92%。结论本方法特异性强、灵敏度高、简便快速, 可广泛应用于急性心肌梗死的早期诊断, 灵敏度可达0. 5 ngöml。可以快速早期诊断心肌损伤。2005年蔡家利等[16 ]用研制的心肌损伤肌球蛋白金标试纸条对30 例心肌梗死患者血清中的肌球蛋白进行了检测, 并对该方法进行了评价, 结果显示, 该试纸条特异性强, 灵敏性高, 与国内外同产品的符合率为84. 2%。最近报道有关于用金标试纸条检测血清甲胎蛋白[17 ]以及检测尿液ck20 蛋白的胶体金试纸条[18 ]等。
3 结 语
胶体金免疫层析技术作为当今检测病原体和诊断疾病方面最为敏感的免疫学技术之一, 不仅操作简便、快速、特异, 更为重要的是特别适用于广大基层单位并能在现场作检测和诊断, 这些特点都是其他免疫学方法所无法比拟的。因此, 可以说该技术不仅具有巨大的发展潜力, 而且还具有广阔的市场和应用前景。
4 参考文献
〔1〕a nke bruning, kath ryn bellamy, duncan talbo t, et al. a rap idch romatograph ic strip test fo r the pen2side diagno sis of rinderpestvirus[j ]. j v iro lm ethods, 1999, 81 (12) : 1432154.
〔2〕 徐葛林, 胡巧玲, 吴杰, 等. 检测狂犬病毒的胶体金免疫层析法的建立及应用[j ]. 中国人兽共患病杂志, 2004, 20 (3) , 2362240.
〔3〕 高玲美, 田夫林, 牛钟相, 等. 新城疫快速诊断金标准试纸条的研制及初步应用[j ]. 中国动物检疫, 2004, 21 (8) : 22224.
〔4〕 王中立, 宋晓辉, 陈西召, 等. 犬细小病毒病免疫胶体金诊断技术的研究[j ]. 中国预防兽医学报, 2004, , 26 (1) : 62266.
〔5〕 sco ttm reid, n igel p ferris, a nke bruning, et al. developmentof a rap id ch romatograph ic strip test fo the pren2side detection offoo t2and2mouth disease virus antigen[j ]. j v iro lm ethods, 2001,96 ( 2 ) : 1892202.
〔6〕 kalvatchev z. u se of immunogo ld assay fo r a rap id evalution ofntigens of spo tted fever group rickettsia [j ]. act v iro, 1993, 37(223) : 1842186.
〔7〕 许青田, 崔中锋, 刘春礼, 等. 体金标记免疫层析法快速诊断霍乱临床研究[j ]. 中国误诊学杂志, 2002, 6 (2) : 9002901.
〔8〕 朱虹, 张春华, 檀华, 等. 鼠疫胶体金法快速诊断试剂盒的研制[j ].中国地方病防治杂志, 2005, 20 (4) , 2062207.
〔9〕 王鹏, 杜春红, 郭英, 等. 胶体金免疫层析法快速诊断鼠疫的实验研究[j ]. 地方病通报, 2006, 21 (1) : 123.
〔10〕 吴锦雅, 杨培良, 周晓红, 等. 应用抗sjp38 的单克隆抗体建立血吸虫感染的胶体金免疫层析检测体系[ j ]. 第一军医大学学报,2005, 25 (5) , 5382541.
〔11〕 李学伍, 张改平, 邓瑞广, 等. 猪旋毛虫病快速检测试纸条的研制及特性测定[j ]. 畜牧兽医学报, 2004, 35 (3) : 3432346.
〔12〕 司进, 朱荫昌, 徐明, 等. 快速胶体染料试纸条法检测弓形虫病igm抗体的研究[j ]. 中国血吸虫病防治杂志, 2005, 17 (2) : 93296.
〔13 〕 beggs m , novo tny m , sampedro s. a self perfo rm ingch romatograph ic immunoassay fo r the qualitative determ ination of human cho rionic gonado troph in (hcg) inurine and serum [j ]. clin chem, 1990, 36 (11) : 1084 2 1085.
〔14〕 刘煜凯, 陈伟明, 马以秀, 等. 免疫层析法作早孕快速诊断[j ]. 中华医学检验杂志. 1995, 18 (6) : 3642367.
〔15〕 李志梁, 钱洪津, 焦保明, 等. 人心肌肌钙蛋白t 胶体金免疫层析法的建立[j ]. 免疫学杂志, 16 (5) 2000: 3802382.
〔16〕 蔡家利, 周维英, 姜和, 等. 早期诊断心肌损伤肌球蛋白胶体金免疫层析法研究[j ]. 免疫学杂志, 2005, 21 (6) : 5282531.
〔17〕 杨书豪, 张云汉, 王玉金, 等. 血清甲胎蛋白胶体金免疫层析快速检测法的建立及应用[j ]. 实用肿瘤杂志, 2004, 19 (1) : 48250.
〔18〕 刘彦慧, 罗春丽, 吴小侯, 等. 检测尿液ck20 的胶体金试条研制及初步应用[j ]. 临床检验, 2007, 25 (3) : 1742176.
收稿日期: 2007205228
(本文编辑: 刘界平)
