【关键词】 胸导管引流;重症急性胰腺炎;肝损伤
【摘要】 目的 观察胸导管淋巴引流在重症急性胰腺炎(sap)诱发肝损伤的作用，为指导临床治疗提供实验依据。方法 大鼠随机分为假手术组(s组)、重症胰腺炎模型组(sap组)、胸导管引流组(td组);每组又分为2、6、12 h 3个时间点。采用经胰胆管逆行注射5%牛磺胆酸钠法制备大鼠急性胰腺炎模型，检测大鼠腹水情况、血浆中肝功能指标(alt、ast、tbil)、tnfα和il10的含量及胰腺和肝脏的病理变化。结果 与sap组比较，td组腹水量明显减少，颜色变浅;alt、ast、tbil的含量明显下降(p<0.05或0.01);tnfα和il10的含量明显下降(p<0.05或<0.01);显著改善胰腺和肝脏的病理损伤。结论 胸导管引流可减轻重症急性胰腺炎合并的肝脏损伤。
【关键词】 胸导管引流;重症急性胰腺炎;肝损伤
the protective effect of the thoracic duct drainage on liver injury due to severe acute pancreatitis in rats wang dong, li yong, li shaoyi,et al.department of general surgery,the fourth hospital of hebei medical university,shijiazhuang 050011, china
【abstract】 objective to investigate the protective effect of thoracic duct drainage on liver injury due to severe acute pancreatitis (sap) in rats. methods the rats were randomly divided into sham operation group, severe acute pancreatitis model group, thoracic duct fistula group,then every group was subdivided into 3 small groups according to time points of 2h, 6h, 12h. the sap rat models were established via retrograde injection of 5% sodium taurocholate to the pancreatic duct.the ascites amount,the serum levels of alt,ast,tbil,tnfα,il10 were detected .the changes of pancreas and liver tissue were observed. results as compared with those in model group, the amount of ascites, the levels of alt,ast,tbil,tnfα,il10 were decreased, and the psthological changes of pancreas and liver tissue were significantly improved in thoracic duct fistula group. conclusion the neck fistula intervention can decrease hepatic injury in sap rats.
【key words】 the neck fistula intervention;sap;hepatic injury
重症急性胰腺炎(sap)是一种病情凶险、并发症多、易导致多器官功能衰竭的外科常见急腹症。WwW.133229.coM临床及动物实验研究显示胸导管淋巴引流能减轻失血性休克后或烧伤后肺损害[1]，但对类似烧伤和严重感染的sap合并肝损伤是否有作用笔者目前尚未见报道。本实验通过手术方法制备大鼠sap模型，并在此基础上制作胸导管淋巴引流模型，观察胸导管淋巴引流在sap发病及早期的干预作用，为指导临床治疗提供实验依据。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 动物： 健康sd大鼠72只，雄性，体重350～400 g，购于河北省动物实验中心，动物许可证号：scxk(冀)20081003。
1.1.2 主要试剂： 牛磺胆酸钠购自包头化学制品厂;肿瘤坏死因子α(tnfα)酶联免疫试剂盒、白介素10(il10)酶联免疫试剂盒购自晶美生物;丙氨酸氨基转移酶(alt)、天冬氨酸氨基转移酶(ast)、总胆红素(tbil)购自北京九强。
1.1.3 主要仪器:全自动生化检测仪(日立7080);ws9b型微循环显微镜(徐州光学仪器总厂);微循环视图像分析系统(徐州光学仪器总厂);leica光学显微镜(德国)。
1.2 实验方法
1.2.1 分组与造模： 大鼠随机分为假手术组(s组)、胰腺炎模型组(sap组)、胸导管引流组(td组)，每组24只。每组分为2、6、12 h 3个时间点各8 只。模型大鼠的建立[2]：大鼠禁食12 h，戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，动脉夹夹闭胰胆管近端和远端，注入5%牛磺胆酸钠0.11 ml/100 g，速度0.24 ml/min，注射后保持压力3 min，拔出穿刺针，取出动脉夹。s组仅于开腹翻动十二指肠后缝合腹壁。td组在建立模型后于左颈干距胸导管入口约1 cm将左颈干结扎，并在结扎线近心侧，以24号留置针穿刺左颈干至胸导管，拔出针芯，使导管进入约5～10 mm，一般情况下可见浅乳白色淋巴液缓缓流出。大鼠分别在造模后2、6、12 h 剖杀取材。
1.2.2 腹水情况： 抽取腹水，记录腹水量、观察腹水混浊度。
1.2.3 大鼠肝功能检测：大鼠取血，用全自动生化分析仪测定血浆中alt、ast、tbil的含量。
1.2.4 血浆tnfα和il10含量的检测：大鼠取血，按酶联免疫试剂盒说明书进行操作。
1.2.5 肝组织和胰腺组织的病理学观察：留取肝组织和胰腺组织，多聚甲醛固定后，常规石蜡包埋切片，he染色，光镜下观察组织病理学改变。
1.3 统计学分析 计量资料以±s表示，采用t检验，p<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 腹水情况 s组各时点组无腹水，sap组各时点组存在大量红色至暗红色腹水，td组与sap组比腹水颜色比较减轻;与s组比较，sap组腹水量明显增加(p<0.01);与sap组比较，td组12 h时腹水量明显减少(p<0.05)。见表1。表1 3组大鼠腹水量变化比较注：与s组比较，*p<0.01;与sap组比较，#p<0.05
2.2 血浆alt、ast、tbil含量比较 与s组比较，各时间点模型组alt、ast、tbil的含量明显上升(p<0.01)，与sap组比较，td组各时间点alt、ast、tbil的含量明显下降(p<0.05或<0.01)。见表2。表2 3组大鼠alt、ast、tbil含量变化比较注：与s组比较，*p<0.01;与sap组比较，#p<0.05，△p<0.01
2.3 血浆tnfα和il10的含量 与假手术组比较，各时间点模型组tnfα和il10的含量明显上升(p<0.01)，与模型组比较，胸导管引流组12 h时tnfα含量明显下降(p<0.05)、2 h时il10的含量明显下降(p<0.05)。见表3。表3 3组大鼠血浆tnfα和il10含量比较 注：与sap组比较，*p<0.05;与s组比较，#p<0.01
2.4 胰腺及肝脏病理形态学改变 模型组肉眼可见胰腺存在不同程度充血水肿，片状出血及黑色坏死，散在皂化斑，光镜下可见胰腺有程度不同间质水肿、红细胞漏出、炎细胞浸润;肝脏明显增大，边缘变钝，颜色逐渐由暗红转变为棕黄色，质地由软变硬，光镜下可见点状出血，水肿，部分细胞空泡变性，汇管区炎细胞浸润增多，胶原结缔组织增生;以上改变随时间延长而加重。胸导管引流组胰腺及肝脏组织病理改变均较sap 组明显减轻，假手术组无上述病理学改变。见图1。
3 讨论
本实验采用经胰胆管逆行注射5%牛磺胆酸钠法制备sd大鼠sap模型[2]，观察到胰腺和肝脏不同程度水肿、充血、出血、坏死、炎性细胞浸润，且上述变化随2 h，6 h，12 h各时点的延长而逐渐加重，且血清中alt、ast 和tbil水平亦明显升高，表明成功建立了大鼠sap 模型。tnfα被认为是在急性胰腺炎中最早升高并起着重要作用的细胞因子, 是与sap 的严重性相关并可作为sap预后的指标之一[3]，较高浓度的tnfα不但具有直接损伤机体细胞的作用, 还能诱发和调控多种炎性细胞因子如il10、il6、il8等的释放, 诱发炎症瀑布样级联反应, 进而导致急性胰腺炎的各种并发症[4]。chen等[5]通图1 3组大鼠12 h 胰腺和肝脏病理学变化 (he×200)
a：s组胰腺;b：sap组胰腺;c：td组胰腺;d：s组肝脏;e：sap组肝脏;f：td组肝脏
过研究sap大鼠模型发现，tnfαmrna在肝组织中的表达升高，并且其程度与胰腺炎的严重程度呈正相关，miter等[6]利用腺病毒转染人或病毒的il10 基因治疗cde诱导的sap小鼠，结果小鼠肝脏中的il10含量明显升高。本实验结果显示sap 模型组tnfα和il10含量明显高于s组，与上述文献报道一致，提示tnfα和il10在sap的早期对肝脏产生了损害作用。
大量实验表明，肠源性非细菌性炎性因子主要通过肠系膜淋巴液释放出肠道，肠源性毒性因子和炎性因子通过肠道淋巴到达血液循环的观点与大量临床证据一致[7]。我们实验观察到胸导管引流后，大鼠腹水量明显减少，颜色变浅，alt、ast 和tbil水平及tnfα和il10的含量明显下降，胰腺和肝脏组织病理学亦有了很大程度上的改善，提示胸导管引流可以减轻sap合并的肝脏损伤。
我们分析胰腺局部的炎症一方面释放大量的炎性介质和胰酶入淋巴循环，一方面导致肠道的炎症改变，从而导致肠淋巴液内含有大量的炎性介质，这些介质通过胸导管进入血液循环，并作用于肝脏，导致肝损伤的发生,早期胸导管引流可以降低上述过程引发的损伤，减轻sap合并的肝脏损伤。但其相关问题仍需进一步深入研究。
【参考文献】
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