MM_FS_CNJ_0352出口食品 B群链球菌 CAMP试验法MM_FS_CNJ_0352出口食品中B群链球菌检验方法1.适用范围本方法适用于出口肉类、奶和奶制口中B群链球菌的检验。其他食品可参照使用。2.主要试剂和仪器.主要试剂(包括培养基)Todd,Hewitt肉汤〔参见附录A(补充件)A1〕;牛心汤培养基〔参见附录A(补充件)A2〕;牛心汤增菌培养基〔参见附录A(补充件)A3〕;选择性牛心汤琼脂〔参见附录A(补充件)A4〕;绵羊血琼脂平板〔参见附录A(补充件)A5〕;β-溶血素带〔参见附录A(补充件)A6〕;溶血素带〔参见附录A(补充件)A7〕; β-绵羊血球〔参见附录A(补充件)A8〕;生理盐水:灭菌的;(补充件)A9〕; 革兰氏染色液〔参见附录A接触酶(过氧化氢酶)试验〔参见附录B(补充件)〕。.仪器离心机5000r,min,离心管50mL,10mL;蔡氏滤器;微孔滤膜,孔径μm;玻璃抽滤瓶;玻璃水循环真空泵;电热恒温箱;温度20,60?;显微镜;定性滤纸;不锈钢厌氧菌培养罐;电冰箱;乳钵、研棒或均质器;L形玻璃棒;金黄色葡萄球菌菌体ATCC,25923。3.样品的制备.肉类.冷冻产品应在2,5?过夜解冻,或在45?及以下经15min解冻,立即检验。若不能及时检验,应置于,15?左右暂存。其他非冷冻易腐的食品,亦应置于4?冰箱保存。.以无菌操作称取剪碎的肉类样品25g,置于灭菌之乳钵内或均质杯内,加入25mL灭菌生理盐水进行研磨或均质(8000,10000r,min,均质1min),移1/5页入盛200mL生理盐水的5000mL广口瓶内,混合均匀,制成1?10稀释液。.奶和奶制品类.鲜奶、酸奶:以无菌手续去掉瓶罩纸盖,瓶口经火焰灭菌后,用无菌操作吸取25mL检样,放入装有225mL灭菌生理盐水的三角烧瓶内,振摇均匀。.奶粉:以无菌手续开封取样,称取25g放入盛有225mL温热的灭菌生理盐水且装有适量玻璃珠的灭菌广口瓶内,振摇使其充分溶解混匀。.奶酪:先用灭菌刀削去部分表面封蜡,然后用点燃的酒精棉球灭菌表面后,用灭菌刀切开奶酪,再用无菌操作切取表层和深层检样25g,置于灭菌乳钵内切碎,加入25mL生理盐水研成糊状,移入盛有200mL灭菌生理盐水的广口瓶内,混合均匀。制成1?10的稀释液。.其他食品样品的制备取决于食品的种类和状态。固体或半固体食品按或进行。液体食品按进行。4.过程简述.1.增菌培养 4将上述制备的检样各取10mL分别接种于100mL牛心汤培养基内,如检样污染较严重,可同时按上述量接种于选择性牛心汤增菌液内,经35?1?培养15h,-带或CAMP-点试验。 再进行试验的条件?1?培将CAMP试验的绵羊血琼脂平板置于不锈钢厌氧菌培养罐内,在35养。带试验取β-溶血素带1,2条平行轻贴于绵羊血琼脂平板上,间距20mm,将样品或经过增菌的培养物直接在β-溶血素带两侧(相距3,5mm)处垂直划线3,4条或涂布接种,经14,18h培养后观察结果。如在接种线与β-溶血素带周围朦胧溶血区重叠处能见到协同产生清晰的“箭头”状的增强溶血区为阳性反应,可鉴定为B群链球菌。不见增强溶血为阴性反应,判为B群链球菌阴性。点试验将样品或经过增菌的培养物直接划线或用L形玻璃棒涂布接种于绵羊血琼脂平板上,经14,18h培养后,用接种环取β-溶血素滴加在圆形突起,细小的可疑为链球菌的单个菌落边缘,再将平板进行孵育,分别在30,45,60min检查溶血变化情况。在滴加β-溶血素的菌落边缘有协同产生“扇形”增强溶血区的为阳性反应,可鉴定为B群链球菌。不出现增强溶血现象的为阴性反应,判为非B群链球菌。每次检验时都要用已知阳性菌株作为对照试验。 带或CAMP-点试验阳性反应,再进行革兰氏染色,镜检和接触酶试验,以此来与其他溶血性细菌如李斯特氏菌,肉毒梭状芽胞杆菌和葡萄球菌等区别开。