包头医学院学报2021年3期

目的 探讨不同的标本处理和储存条件对蛋白指纹图谱技术检测血清多肽及低分子量蛋白质(1～30 ku)的影响.方法 将血液凝固后马上分离得到的血清分装后分别置于-80 ℃ 6个月以上以及室温、4 ℃条件下2～72 h进行蛋白质质谱分析.结果 血清样本在-80 ℃6个月以上以及4 ℃或者25 ℃保存2 h或者反复冻溶1次,对多肽及低分子量蛋白质的影响相对较小.将血清用U9缓冲液稀释后放置于室温,在24 h内结果稳定.溶血会对蛋白质组的结果造成很大影响.结论 建议血液标本的处理、运送、操作及储存的蛋白质质谱分析的标准条件是:4 ℃下处理血液标本,2 h内尽快分离血清及细胞.用U9缓冲液稀释血清后,可以24 h内在室温下运送或对血清及WCX磁珠结合过程进行操作.血清应分装并长期储存在-80 ℃,但限冻溶1次.溶血标本应弃用,建议重新取血.

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肽指纹图谱：每个蛋白都有理论上消化后所得出的不同肽段，这些肽段的质量（分子量）就是这个蛋白的肽指纹图。当一个未知蛋白被酶解，用质谱可以检测出其中所含有几乎所有肽段的质量。然后把这些质量与数据库中已知的所有蛋白指纹进行匹配。匹配分值高过一定的 就可以认为索要坚定的蛋白就是那个目的蛋白。步骤：2DE 切点 消化 送入质谱仪分析 质谱仪自动获得质量数 送入数据库进行搜索 得出结果。关键：要知道质谱仪是用于检测小分子质量的仪器，只可以检测质量。