叶绿素含量的测定方法如下:
叶绿素含量跟光合作用速率、植物营养状况等指标密切相关,通常,我们会通过对叶绿素含量的测定,来了解植物的生长状况。一般,植物叶绿素含量测定有三种:分光光度法,活体叶绿素仪法和光声光谱法。其中分光光度法是应用最广泛的叶绿素含量测定方法。
叶绿素含量的计算:
叶绿素含量测定首先得提取叶绿体色素,叶绿体 色素中含有叶绿体a,叶绿体b,胡萝卜素和叶黄素。在提取叶绿体色素时,我们使用不同的试剂,如丙酮,乙醇等有机物。
当试剂不同时,所得到的结果也会不 同。上图中我们使用四种不同的溶剂,进行叶绿体色素的提取。图中通过对四种溶剂在600nm-700nm波长间的吸光量进行比较,从而计算叶绿素含量,而 从图中,我们可以大致得到,这四种叶绿素提取液的光吸收性质基本相同。
利用分光光度法测定叶绿素含量是依据Lambert-Beer定律,数学表达式为A=Kbc。其中,A为吸光度;K为吸光系数;b为溶液的厚度;c为溶液浓度。
叶绿素a,b的丙酮溶液在可见光范围内的最大吸收峰分别在663nm和645nm处。叶绿素a和b在663nm处的吸光系数分别为和;在645nm处的吸光系数分别为和。根据Lambert-Beer定律,我们可以列出方程:
D663 =
D645 =
根据以上方程组,可以求得:
Ca = –
Cb = –
然后我们又可求得叶绿素总量CT =(D652 × 1000)/
95% 丙酮2乙醇(匀浆)的提取效果最佳,因此,我们在进行叶绿素含量测定的时候,可以考虑运用95% 丙酮2乙醇(匀浆)作为提取液。
目前已经发明了比较方便的用于测量叶绿素含量的仪器—叶绿素含量测定仪,它是通过测量植物的叶绿素相对含量来了解土壤的性能指标和植物的硝基需求量,并了解植物的生长状况。