菌株研究论文

食用菌栽培技术的不断发展，使得食用菌不仅成为了富含人类生活所需的各种蛋白质，还能够广泛用于医药等领域。下面是由我整理的食用菌栽培技术论文，希望能对大家有所帮助。食用菌栽培技术论文篇一：《食用菌(平菇)的温室栽培技术》 摘要：食用菌的生长发育是由其生长习性和所处环境两种因素共同影响的，这两种因素共同作用影响着食用菌的产量和质量。随着国民经济的迅速发展，人们的物质生活极大丰富，进而导致人们的消费需求大幅度增加，从而对于食物的要求也从原来追求的吃饱转向吃好，大都讲究营养均衡。食用菌味道鲜美，营养价值高，越来越得到人们的青睐。生产食用菌的厂商为了获得更多的经济效益，也为了满足人们日益增长的多样化需求，由此开始采用温室栽培技术培育食用菌。本文以平菇为代表，从平菇的基本情况、鄂尔多斯达拉特旗王爱召镇地区的气候、地理位置条件出发，对食用菌温室栽培的技术要求和益处进行了综合论述。 1 平菇的基本情况 类型 平菇可以分为三种类型伞菌目、口蘑科、侧耳属。 品种类型多 除了平菇之外，还可以栽种许多侧耳属科目的菌类，例如凤尾菇、红平菇等等。 营养丰富 平菇营养丰富，味道鲜美。研究表明，平菇中含有多种微量元素和丰富的维生素，食用后可以给人补充丰富的营养，有极高的营养价值和食用价值。 药用价值高 平菇具有较高的药用价值，例如平菇可以抑制人体内癌细胞的产生和发展;降低血液中血脂、胆固醇等物质的浓度;促进人体肠胃蠕动，从而帮助消化;可以起到改善人体生理机能、促进新陈代谢等作用。 2 内蒙古鄂尔多斯达拉特旗王爱召镇地区的概述 地理位置 内蒙古鄂尔多斯达拉特旗王爱召镇地区位于鄂尔多斯高原北边、黄河中游地区的南岸部分，是“金三角”经济中心地带的中心处;并且当地所跨地形区域类型复杂，由此导致海拔相对高度差较大，进而使得温差较大，还有就是内蒙古鄂尔多斯达拉特旗王爱召镇地区经济发达，综合下来可以很好地满足食用菌温室培养所需的温度、水源、交通、经济等方面的因素，非常有利于食用菌的买卖流转。 气候条件 内蒙古鄂尔多斯达拉特旗王爱召镇地区是典型的温带大陆性气候，具有冬冷夏热，昼夜温差大，全年干燥少雨，降水主要集中在夏季，日照时间长等气候特点。特别是在冬季时节，昼夜温差大，更有利于子实体的分裂分化，促进食用菌的生长发育。 人口因素 内蒙古鄂尔多斯达拉特旗王爱召镇地区土壤资源丰富，灌溉便利，是我国有名的粮食产地和农业开发区。而且是经济发达的中心地带，人口聚集，人口数目众多。人口众多，对食用菌的需求量较大。 3 食用菌温室栽培的选用标准 位置要求 在冬天，温室栽培是最有效的栽培方式，应将大棚位置选在比较冷的地方。在比较冷的地方可以实行管道、暖气或者人工供暖，应采用最适合的供暖方式，冷暖的交替，可以促进子实体的生长发育，实现低成本、高利润的栽培。且在冬季栽培出来的平菇等食用菌病虫危害少，产量高、质量好、营养价值高。 原料要求 生料栽培是平菇温室栽培的首选 方法 。搭配合适的比例，将营养料在适当的条件下加工进行平菇栽培。让平菇在高温的条件下快速生长。 管理 措施 平菇等食用菌应采用定位出菇法，且装袋时应该提前留出孔，为食用菌提供氧气供其生长。还有就是定位出菇法可以减少水分的蒸发、平菇质量受损等现象，这种方法的应用有效地提升了食用菌的质量。 4 食用菌温室栽培的技术要求 营养要求 平菇等食用菌生长发育需要吸收的营养包括：有机酸、酶类、无机盐、氮元素、碳元素和其他微量元素(磷、钾、钙等)。 温度要求 平菇等食用菌生长发育需要在适宜的温度范围内。在内蒙古鄂尔多斯达拉特旗王爱召镇地区昼夜温差大，可以促进平菇的子实体快速分化，但需注意温度要保持在平菇的承受阈限内。 水分和湿度要求 水是生命之源，对于菇类也是如此。平菇的生长对于水分和湿度的要求比较高，在栽培中，应该将大棚内的水分和湿度控制在合适的范围内。达拉特旗王爱召镇地区位于黄河中游的南部，水资源丰富，易于灌溉，对平菇的培育生长极为有利。 空气要求 平菇好氧。要保证空气中的氧气含量，氧气浓度应较高。应选择在通风条件良好的地方利于空气的流通转换，并定时地进行通风。如果空气中二氧化碳的含量过高，会抑制子实体的呼吸活动，从而影响其生长发育。 光照要求 适度的光照对于平菇的生长发育极为重要。强光会影响到平菇的生长发育，温室大棚里边应该将光线调到较暗的状态。因为强光会刺激到子实体的分裂生长。 管理要求 要致力于追求规范化、精细化的管理。在食用菌的生长发育阶段应对湿度、水分、光照强度等指标做好监控记录工作，将其严格控制在食用菌生长的最佳范围内，以此来确保食用菌的健康生长。 播种要求 将已经按比例调配好的培养料按照严格的标准铺好，且相互之间的宽度间隔应合理规划，最后应该覆盖上保鲜膜进行栽种。 采摘要求 食用菌成熟后的采摘工作也是一项技术活，应该严格按照采摘标准来进行。且应该对食用菌是否成熟进行正确的评判，当食用菌菇盖的颜色由深变浅，孢子处在尚未放射的状态时就是成熟了，此时是进行采摘的最佳时机。 5 食用菌温室栽培的益处 食用菌有较高的营养价值和药用价值，食用后会给人们的身体带来极大的好处。食用菌温室栽培可以满足较高的产量需求和质量要求，通过调节温室大棚内的光照、温度、湿度、水分等条件让其达到食用菌适宜生长的最佳范围，以此来促进食用菌的生长发育。这是一种通过人为调控影响食用菌生长因素的方式来促进其生长的办法。这种方法既促进了食用菌产量的增加，质量的提高，又给人们增加了收入，提升了人们的生活水平，促进了国民经济的发展。此外，温室栽培食用菌的方式也打破季节的限制，打破了人们对新鲜蔬菜需求的限制，让人们能够在一年四季都能吃到新鲜美味的食用菌，避免了自然因素的影响。 6 结论 食用菌的温室栽培技术有效地改善了自然因素对食用菌栽培的限制，利用温室大棚对食用菌生长发育的环境进行了改造，既满足了人们的食用要求，让人们吃上了高质量、高营养的食用菌;还满足了市场需求，使批量化生产成为可能，增加了人民的收入，带动了当地经济的飞速发展。由此可见，温室食用菌(平菇)的温室栽培技术是值得大家学习的、值得推广的。 食用菌栽培技术论文篇二：《果园间套种食用菌栽培技术》 摘要 总结 了果园间套种食用菌的栽培技术，主要包括木耳、金福菇、姬菇等，以供参考。 关键词 果园套种;木耳;金福菇;姬菇;栽培技术 果园内空气湿度大，光照强度低，富含氧气，正符合食用菌生长，食用菌生长所释放出大量的二氧化碳又能使果树加强光合作用，促进果树的生长，食用菌菌渣成为有机肥施进果园，有效改善果园土壤结构，在干旱季节食用菌管理过程中多余的水又可以使果树再利用，果园里建棚栽培食用菌，可以抑制果园杂草滋生，减少水土流失，提高土地利用率，促进生产发展，增加经济收入。近几年来，贵港市农业科学研究所一直从事果园食用菌间套种栽培技术方面的研究，探索出一种创新的农业 种植 模式，果菌结合，做到了树上长果，树下结菇，取得了较好的经济效益和社会效益。现将具体栽培技术总结如下。 1 食用菌栽培场地的选择与建棚 选择树龄较大、遮荫较好的果园建棚，一般用铁管拱成1个长30～40 m，宽～ m、高～ m的拱形棚，距离地面1 m高的周边(除门外)用60目的防虫网围住，棚顶用薄膜盖好(与防虫网相交接)，然后盖上遮光率为90%的遮阳网[1-2]。 2 木耳栽培技术 木耳是一种木腐生型食用菌，其生长发育需要的主要营养为纤维素、半纤维素、木质素，还需要适量的蛋白质、维生素和无机盐。菌丝的最适宜温度为20～28 ℃，子实体生长的最适温度为15～25 ℃，按照贵港地区的气候，出菇季节安排在4―5月出菇，装袋提前50～60 d。 培养基配制 使用的培养基配方为玉米芯20%、桑枝30%、棉籽壳、麦皮5%、石灰2%、石膏1%、防霉剂。 原料处理 按配方所需的已粉碎的玉米芯、桑枝淋湿铺在已淋湿的棉籽壳上，放置1 d让多余的水流走，洒上所需的石灰、石膏，用拌料机将料充分搅拌均匀建堆。 装袋、灭菌与接种 料建堆3～4 d后可进行装袋。先调湿度，把料堆表面的干料淋湿，使料的含水量达料水比为∶(～)，加上配方所需的防霉剂、麦皮，用拌料机把料搅拌均匀即可进行装袋，用聚乙烯塑料袋装袋，装袋时要使培养料松紧适宜，上下均匀一致，周围丰满无空隙，装料过实过紧容易使塑料袋破损，料过松菌丝生长纤细无力。一般1袋装湿料重～ kg，装好袋后用绳子扎紧袋口装进铁框，每框9袋。装袋完毕，立即装炉灭菌，灭菌采用常压灭菌，温度到达100 ℃时保压9 h。灭菌结束后，炉温下降至60～70 ℃时进行御炉，把菌包移入已清洁消毒好的接种培养室的培养架上摆好，待菌包温度降至30 ℃以下时进行接种，1个菌包用种为8～10 g，接种完毕，把培养室打扫干净[3-4]。 发菌管理 培养室的湿度为50%～70%即可，春季气温较低，气温低于20 ℃时要注意加温，使培养室的温度为20～25 ℃，温度高于30 ℃时注意通风换气，以利于菌丝生长。 出菇管理 菌包接种后45～60 d，菌包菌丝吃透料，部分菌包出现耳芽时就可以把菌包移入出菇棚出菇。菇包入棚前首先把菇棚周围的杂草清除干净，把树叶清扫干净烧掉，菇棚及周边杀虫杀螨1次，棚内再撒一些石灰粉后即可把菌包移入出菇棚摆包出菇。摆包时，1个棚留1条纵向的人行道以便喷水和采菇，菌包用绳子把袋口扎紧后摆放成行，行距一般为20～24 cm，菌包摆成行后用小刀在每一个菌包上割3～4个长10 cm、深～ cm的竖裂口，裂口一般距菌包顶部4 cm、距菌包底部5 cm。摆包完毕，向地面洒水以增加空气湿度。割包5～7 d后木耳陆续现蕾，此时期注意加强水分的管理工作，随着耳片的增多增大，逐渐加大喷水量和通风量，喷水量要根据天气变化而变化，晴天多喷，雨天少喷，注意菇体的干湿交替，有利于木耳的正常生长。 采收及转潮管理 当耳片充分展开、边缘起皱就可以采收了，采收的原则是摘大留小，不伤小耳，一般采2～3次把一潮的木耳全部采完。采完一潮后，清除菌包上的残留耳根，将耳床清理干净，杀虫杀螨1次，停水2～3 d，以利于菌丝的恢复，4～5 d第2潮木耳现蕾，又像第1潮一样管理。一般木耳可采3～4潮，生物学转化率可达88%～94%。 3 金福菇的栽培技术 金福菇菇体硕大，菌肉肥厚嫩白，营养丰富，味微甜而鲜，耐贮性好，适宜鲜销。菌丝生长温度15～38 ℃，最适温度为27～30 ℃，子实体形成温度范围为18～30 ℃，最适温度为20～28 ℃，金福菇对低温较敏感，昼夜温差大时对出菇不利。一般在4月上旬湿料、装袋、接种，7月上旬覆土，覆土后10～15 d现蕾出菇。 培养基配制 使用的培养基配方为玉米芯、棉籽壳55%、麦皮5%、石灰2%、石膏1%、防霉剂。 原料处理 方法与木耳的原料处理方法一样。 装袋、灭菌、接种 除了灭菌时间保压6 h不同外，其他的与木耳的装袋、接种方法一样。 发菌管理 在菌包的发菌过程中，气温较高时注意通风换气，及时清除感染杂菌的菌包。 出菇管理 菌包菌丝培养60～65 d后，菌丝吃透料就可以把菌包脱袋覆土，覆土的泥土最好选择塘泥土，它透气性好，富含有机质。覆土前先对塘泥进行调湿与消毒，把土粒敲成～ cm大小的颗粒，调成含水量为 20%～30%，边喷5%福尔马林溶液，建堆，用薄膜密封24 h后揭膜让福尔马林的气味挥发掉，2 d后即可以覆土。覆土前把菌包薄膜全部脱掉侧卧摆成畦，菌棒之间留1～2 cm的空隙，然后盖上3～4 cm厚的已消毒的泥土，把畦面弄平，覆土结束。覆土后可大量淋水，使土壤含水量达饱和状态。6～8 d后白色的菌丝爬出土面，12～14 d后菌丝扭结，保持空间含水量达80%～90%，加强通风换气，促进原基的形成。15～17 d形成菇蕾，菇蕾阶段在小气候中生长，一般不喷水，干燥时喷雾化水于空间使空气相对湿度达80%～90%，当菇体长到3 cm高时每天喷水1～2次，喷水时要掌握菇多菇大的地方多喷，菇小菇少的地方少喷或不喷[5-6]。 采收及转潮管理 从菇蕾形成到成熟采收一般需要5～7 d，当菌盖肥厚紧实、菌膜尚未破伞时采收，品质最好;采收过迟，成熟过度，品质下降;过小采收，会影响产量。采收时成丛拔起，把菇体分开，用小刀削去菇体上的泥土。一潮菇采收结束之后，清除料面的残留菌柄、菇脚和死亡的菇蕾，用泥土把外露菌包的畦面填平，停水2～3 d养菌，然后像第1潮一样管理，2周内会形成第2批原基。一般可采2～3潮，生物学转化率达50%～70%。 4 姬菇的栽培技术 姬菇的菌盖为贝壳状或扇状，侧生，嫩滑可口，是百姓餐桌上的佳品，耐储运，投资少，见效快，收益高，市场前景很好。菌丝的生长温度为6～28 ℃，最适温度为20～26 ℃，高于32 ℃菌丝生长不良;出菇温度为4～26 ℃，最适温度为6～20 ℃，夏季炎热的季节不出菇，低于4 ℃时不易形成原基[1]。根据贵港地区的气候与市场销售情况，一般安排9月中下旬至11月上旬做出菇袋，10月中下旬至翌年的3月收菇结束。 培养基配方 使用的培养基配方为棉籽壳、玉米芯、玉米粉5%、石灰3%、防霉剂。 原料处理 方法与木耳的原料处理方法相同。 装袋、灭菌、接种及发菌管理 料建堆2～3 d后可进行装袋。先调湿度，把料堆表面的干料淋湿，使料的含水量达料比水为∶(～)，加上配方所需的防霉剂、玉米粉，用拌料机把料搅拌均匀即可进行装袋，用36 cm×13/23 cm的聚乙烯塑料袋装袋，装袋时要使培养料松紧适宜，上下均匀一致，周围丰满无空隙。一般1袋装湿料重～ kg，装好袋后用绳子扎紧袋口装进铁框，每框9袋。装袋完毕，立即装炉灭菌，灭菌采用常压灭菌，温度到达100 ℃时保压6 h。灭菌结束后，炉温下降至60～70 ℃时进行御炉，把菌包移入已消毒的清洁的果园里的出菇棚里，待菌包温度降至30 ℃以下时进行接种，1个菌包用种为8～10 g，套上套环，用胶圈把报纸(已灭菌的)扎紧在套环外封口，然后把菌包单个直立成行摆放培养菌丝，菌包之间留1～2 cm的空隙以便散热。在此期间要注意如果气温过高，可以把菇棚的防虫网掀起以通风降温。 出菇管理 菌包菌丝培养30 d左右，菌丝吃透料，少数菌包现蕾，就可以叠包解报纸出菇，叠包时菇棚中间留1条便于淋水和采菇的人行道，在人行道两侧把菌包垒成4～6个菌包高单排或双排的墙式堆码，把菌包口的报纸解完后立即淋水进入第1潮的出菇管理工作，每天喷水2次，3～4 d现蕾，菇棚的空气湿度保持85%～95%，喷水的次数与多少应根据天气情况、出菇数量和菇体大小而定，宜喷雾状水，子实体珊瑚期不宜直接向菇体喷水[2]。 采收及转潮管理 当一丛菇中大部分子实体菌盖直径达2～3 cm、菌柄长度4～5 cm时，及时采收，用手握住整丛菇的基部，拔下整丛菇体，小心放入框内，避免损伤，然后在距菌盖3～4 cm处剪去菌柄基部，将连接的菇体分为单个，去掉小菇，分级真空包装，每袋 kg。采完一潮后，清理菇脚，停水2～3 d让菌丝休复，5～7 d即可转潮，又像第1潮一样管理。姬菇一般可采5～7潮，生物学转化率可达90%～110%。 5 参考文献 [1] 储利慧，陈生良，俞田华.姬菇栽培技术[J].上海农业科技，2007(6)：92-93. [2] 陈建辉.珍稀食用菌真姬菇栽培技术[J].科技致富向导，2004(9)：34-35. [3] 刘岩岩，张敏，宋莹.北方林下黑木耳栽培技术[J].现代农业科技，2014(2)：130-131. [4] 张怀荣.黑木耳立森261菌株的生物特性及其栽培技术要点[J].食用菌，2014(1)：23-24. [5] 沈渊，姚明军，沈新芬.大棚草莓-金福菇栽培技术初探[J].上海农业科技，2014(1)：144-145. [6] 赖育斌，郭明，巫世芬，等.金福菇高产栽培技术[J].现代园艺，2013(15)：41. 食用菌栽培技术论文篇三：《浅谈食用菌高产栽培技术》 摘要：食用菌不仅富含人类生活所需的各种蛋白质，还能够广泛用于医药等领域。目前我国的食用菌培植技术目前正处于飞速发展阶段，如何科学合理的进行食用菌的栽培成为了发展白色农业的重要课题。 关键词：食用菌;栽培技术 食用菌是人类食用的大型真菌，2000年统计中国的食用菌达938种，人工栽培的50余种，中国广泛栽培的食用菌有蘑菇、香菇、草菇、木耳、银耳、平菇、滑菇等7类，它们分别生长在不同的地区、不同的生态环境中。食用菌产业是一项集经济效益、生态效益和社会效益于一体的农村经济发展项目，食用菌又是一类有机、营养、保健的绿色食品。发展食用菌产业符合人们消费增长和农业可持续发展的需要，是农民快速致富的有效途径。因此，食用菌产业作为一种适应社会市场经济的产业日益发展壮大起来，人们对于食用菌的栽培技术研究也是越来越多，既要达到绿色自然、无公害的目标，又要做到保质保量的要求。 一、培养料的配置 食用菌培养料的配制要注意以下问题，首先将原料的干料按照比例要求进行充分的搅拌混合，需要添加的一些微量元素先要用水化开之后再拌入料中，接着进行反复的搅拌，将存在的团料尽量打散，确保料的干湿程度均匀;其次，影响菌丝生长的另一个重要因素就是培养料的含水量，一般培养料的含水量在55%左右就非常适合食用菌的生长，如果培养料的含水量偏低将会导致出菇产量大幅降低，如果培养料的含水量偏高，则会让处于下层的菌丝缺氧而不能正常吃料，导致原料浪费。因此必须要按照培养料原料的木屑情况灵活的调整含水量，在这个过程中，主要是注意木屑的粗细以及质地的软硬、空气湿度等具体情况对含水量进行配比;最后，培养料配置工作结束后，要尽快进行装袋，一般装袋时间不超过培养料配置 完成的7小时左右，装袋完成后要注意及时灭菌。灭菌时先把装袋完成的培养料放入锅中，用猛火快速加热到100℃，之后利用冷气阀降温到0℃，再重新将温度加热到100℃左右。进行灭菌作业时一定要确保猛火加热、温火保温，定时查看灭菌锅内的温度情况，防止漏气的现象，否则无法达到有效的灭菌效果。经过这些阶段，培养料的配置工作已经算是初步完成，培养料的配置对于提高食用菌的产量，降低生产成本具有重要意义。 二、选择优质的菌种及接种 要挑选优质的菌种来培养，根据要栽培的食用菌的生长特点以及适宜的生长环境来选择选择适宜本地生长的优质、高产、高抗的优良菌株。在挑选菌 种时一定要严格查看菌种，确保其没有杂质污染和虫害，适用于栽培养育。必须按照科学、严谨的接种程序来为所要栽培的食用菌接种，并在接种后及时将装菌种的袋子放入无污染、空气适宜的培养室内进行发菌培养。 三、培育环境的要求 在经过几个月的生长后，菌袋就要搬入出菇棚进行培育，但是受到培育环境等因素的影响，菌袋的出菇时间也不尽相同，只有保持培育环境适合菌袋成长才能让菌袋在一定的时间范围内正常出菇。而将菌袋搬入出菇棚的时间要尽量避免午间气温较高时进行，因为过高的温度容易影响出菇时间;入棚的时间一般选在晴天的早晚进行，要防止人棚过程中菌袋受到雨淋。菌袋人棚后的摆放要按照一定的规范进行操作，菌袋要并列排放整齐，且其间需要留5厘米左右的间隔以保持菌能够正常呼吸，只有创造出一个有利于菌袋出菇的环境才能保证出菇更加优质、高产。 (1)空气湿度。作为影响子实体生长的重要因素，如果培育环境的空气湿度太低，子实体表面的水分蒸发就会加快，其基质中的含水量就会大幅度降低，进而影响食用菌的产量;相反空气湿度如果偏高，子实体表面的水份蒸发作用不明显，菌体内的营养运输受到阻碍，造成子实体无法进行呼吸作用而停止生长。如果栽培环境中的空气湿度长期处于偏高的状态，子实体会因为倒吸空气中的水份而出现腐烂的情况，严重时甚至会造成大范围的细菌传染。 (2)保持通风。食用菌的生长发育需要足够的氧气，和我们人需要呼吸一样，食用菌也会进行呼吸作用，它们吸人空气中的氧气释放出二氧化碳。虽然适量程度的二氧化碳对某些特别种类的食用菌菌丝生长有利，但是很多食用菌如果长期处在二氧化碳过多的环境下，它们很有可能停止生长，而高浓度的二氧化碳环境甚至会让菌丝体死亡。因此，出菇棚必须要保持通风，将二氧化碳的浓度控制在合适的范围之内，确保空气流通。 (3)光照环境。多数食用菌在出菇时需要散射光进行刺激，只有极少数品种要较强的散射光。通常情况下，光照越强时子实体的颜色就越深，光照越弱时子实体的颜色就越浅。栽培人员需要根据食用菌种类的差异对出菇棚的光照进行调节，如可以采用遮阳网、草帘等物品来调节室内光照。 四、使用无污染的肥料对食用菌进行施肥 (1)喷洒酵母膏以及蛋白胨等溶液。用的酵母膏和的蛋白胨喷洒在食用菌的表面，能够使食用菌的身体变厚变肥，促进转潮，在温度为14℃～l6℃时效果最佳。 (2)人粪或人尿的喷洒。在喷洒人粪人尿时应当注意对人粪及人尿的加热，最适合的人粪和人尿应该是煮熟20分钟后的，对其进行对水，比例为1：10或者是1：20进行喷洒，或者也可以用新鲜的牛畜尿液，煮熟与没有泡沫即可，进行对水，比例在l0倍～17倍之间。 (3)米醋的喷洒 在食用菌生长的中后期，可以用300倍的米醋对其进行喷洒，在采摘前的1～3天，每天必须喷洒一次，通常情况下可以使食用菌产量提高6%，而且色泽会呈现出洁面。 (4)豆浆水的喷洒 黄豆一千克，将其磨成豆浆后加入75千克～UI00千克的水，喷洒到食用菌表面，喷洒完成后再用清水喷洒一遍。 五、科学合理的管理方式 在管理栽培养育的食用菌时，要严格按照科学的管理方式进行管理。通过以往的栽培 经验 ，并结合实际的培育现状，研究出最适合、最科学的食用菌栽培管理方式。以无公害、绿色健康为前提，运用无农药危害的病虫害的防治措施，栽培工具和培育工作人员进出时要做好清洁和消毒工作。根据食用菌的实际生长状况及时对周围环境 做出处理，调节培育室内的通风、通气、采光条件，掌控好温度和湿度情7兕，在培育长成后采取时，也需要做好消毒工作，要以正确的方式、适时地采收。 六、结语 食用菌已经成为人们日常生活中不可缺少的食用产品，食用菌产业也是社会市场上不可忽视的市场经济发展项目无公害、高产的食用菌栽培技术是目前社会市场发展的需要，是促进社会市场经济发展的一部分，也是人们高品质的日常生活的需求，必将得到大力的推广和应用。 猜你喜欢： 1. 食品保藏技术论文 2. 农学论文范文 3. 人工栽培桑黄的技术 4. 双孢菇种植的技术 5. 平菇栽培技术论文 6. 平菇的栽培技术论文

0引言脆性X综合征（fragile X syndrome, FXS）是一种最常见的遗传性智力发育不全综合征，有超过99%的FXS是由脆性X智障基因1（fragile X mental retardation, FMR1）中5′端非编码区CGG三核苷酸重复序列不稳定扩增及其CpG岛异常甲基化导致. FMR1基因的表达产物FMRP的缺乏导致FXS的发生［1-2］. 本实验对编码基因存在于3号染色体［3］，能与FMR1 基因5′ d (CGG)n3′重复序列特异性结合的蛋白CGGBP1进行原核表达，并对其DNA结合活性进行研究.1材料和方法材料大肠杆菌DH5α, BL21（ DE3）和表达载体pRSET A均为本实验室保存. 质粒提取试剂盒购自Sigma公司； 限制性内切酶BamH I和KpnI购自宝生物工程公司；T4 DNA连接酶购自Promega公司； Ni2+NTA金属螯合蛋白质纯化系统购自Qiagen公司；链酶亲和素磁珠购自Dynal公司；低分子质量蛋白标准购自上海西巴斯生物技术有限公司. 方法 表达载体的构建根据CGGBP1基因起始密码子和终止子邻近序列设计PCR引物：CGGBP1F CGC GGA TCC GAG CGA TTG TAG TAA CAG CA，CGGBP1R GGG GTA CCT CAA CAA TCT TGT GAG TTG AG. 其上游及下游引物分别加入BamHI和KpnI酶切识别位点序列(引物序列下划线部分). PCR反应以人淋巴细胞cDNA文库为模板，扩增编码CGGBP1的基因序列. 设计PCR扩增体系25 μL，灭菌去离子水10 μL，10×反应缓冲液 μL，25 mmol/L MgCl2 μL，DMSO μL，4× dNTP混合物（每种 mmol/L）2 μL，CGGBP1F和CGGBP1R各10 pmol，模板 μL（50 ng/μL）， Taq DNA（5 μ/μL）聚合酶 μL. 扩增条件：95℃预变性5 min，再94℃ 30 s， 53℃ 1 min，72℃ 1 min循环40次，最后72℃终末延伸产物10 min. PCR产物经琼脂糖电泳分离，用胶回试剂盒回收目的基因. 用BamHI和KpnI酶切PCR产物和pRSET A，酶切产物电泳后回收，在T4连接酶作用下，目的片段定向克隆至pRSET A的BamHI和KpnI克隆位点. 将重组质粒转入大肠杆菌DH5α，接种到含氨苄青霉素的LB培养基平板并挑取单菌落.融合蛋白的诱导表达将测序正确的重组质粒转入BL21（ DE3）. 挑取携带目标质粒的单菌落接种于含100 mg/L氨苄青霉素的LB培养基中， 37℃振荡培养12 h， 按10 mL/L比例转接于新鲜培养基，37℃振荡培养至对数生长期时，加入IPTG至终浓度1 mmol/L，32℃诱导振荡培养4 h，离心收集菌体，SDSPAGE分析重组蛋白的表达.蛋白表达形式的分析取5 mL菌液离心，用500 μL的裂解液（10 mmol/L 咪唑，300 mmol/L NaCl及50 mmol/L磷酸二氢钠 pH ）重悬，加溶菌酶至终浓度为1 mg/mL，冰浴30 min，超声波裂菌，离心后分别将上清和沉淀进行SDSPAGE分析.融合蛋白的纯化将1 mL 500 mL/L Ni2+NTA悬液和4 mL细菌裂解上清液轻轻混匀4℃放置60 min，直接过柱. 过柱结束后，用4 mL漂洗液（20 mmol/L 咪唑，300 mmol/L NaCl及50 mmol/L 磷酸二氢钠 pH ），洗脱未和Ni珠结合的杂蛋白. 经过2次漂洗后再用 mL洗脱液(250 mmol/L 咪唑，300 mmol/L NaCl及50 mmol/L 磷酸二氢钠 pH ) 3次洗脱特异结合的目的蛋白，分步收集. 取收集液，进行SDSPAGE分析.与（CGG）29重复序列双链DNA结合实验取10 μL磁珠用1 mL的无RNA酶的三蒸水清洗磁珠2次，除去防腐剂. 1×生物素亲和素结合缓冲液（10 mmol/L TrisHCl，2 mol/L NaCl，1 mmol/L EDTA，1 g/L Tween 20）15 μL重悬磁珠，各5 μL分3组实验. 其中一组加入25 μL（100 ng/μL）生物素化的（CGG）29重复序列双链DNA，另外两组分别加入25 μL（100 ng/μL）非生物素化的（CGG）29重复序列双链DNA和25 μL三蒸水做对照；三组分别再加入2×生物素亲和素结合缓冲液30 μL，25℃轻摇1 h. 经磁力吸附后，弃上清. 重复上述步骤3次；加入纯化后CGGBP1（500 μg/mL）15 μL 和2×核酸蛋白结合缓冲液（20 mmol/L HEPES，100 mmol/L NaCl， mmol/L DTT，100 g/L甘油）20 μL，室温下静置30 min；经磁力吸附后，弃上清；用1×核酸蛋白结合缓冲液清洗磁珠2次；加三蒸水10 μL，沸水煮10 min，进行SDSPAGE分析.2结果原核表达载体的构建及鉴定扩增产物在15 g/L的琼脂糖凝胶电泳，可观察到一条约504 bp的条带（图1）； 重组质粒pRSET A/CGGBP1及质粒pRSET A分别用BamHI和KpnI酶切，pRSET A/CGGBP1分为两个片段，分别为 ku和504 bp（图2），均与预计结果相同.的表达用BamHI和KpnI双酶切pRSET A/CGGBP1表达质粒，筛选阳性重组质粒. 携带有pRSET A/CGGBP1质粒的 BL21(DE3)菌株，经IPTG诱导后，在Mr 约25 000处出现1条表达条带；而未经IPTG诱导的菌体则无此条带. 诱导后的菌体经溶菌酶及超声波裂解，离心后分为上清和沉淀两部分. 经SDSPAGE分析表明，CGGBP1部分存在于细菌裂解液的上清中，为可溶性蛋白，上清液中的目标蛋白相对较少（图3）. 蛋白纯化在表达质粒pRSET A多克隆酶切位点的上游， 插入有连续6个组氨酸的序列 —(His )6 tag. 重组质粒经诱导表达后，(His )6 tag可以和外源插入片段共同表达. 利用(His )6 tag 和金属Ni2+的螯合所设计的固定化金属配体亲和柱层析方法，是纯化目的蛋白的一种高效而简单的方法. SDSPAGE显示，CGGBP1得到较高程度的纯化（图4）.与5′d（CGG）293′重复序列双链DNA结合实验生物素化的5′d（CGG）29 3′重复序列双链DNA被固定到链酶亲和素磁珠上，非生物素化的5′d（CGG）293′重复序列双链DNA因无法固定到链酶亲和素磁珠上而被洗脱掉. 同理，加入CGGBP1后，未和5′d (CGG）293′重复序列双链DNA结合的蛋白也被洗脱（图5）.3讨论关于微卫星的产生机制，普遍认为是DNA复制过程中DNA聚合酶的滑动［4］，或DNA复制和修复时滑动链与互补链碱基错配，导致一个或几个重复单位的插入或缺失. 已发现微卫星可能是一种非常活跃的碱基序列，通常各种简单的重复序列成簇地聚集在一个染色体区域，这个染色体区形成特异染色体结构的能力将会增强. 这些区域在核糖体RNA基因中非常复杂，同时这些重复序列所折叠形成的结构还能与特异的蛋白质相结合，成为“染色质折叠密码”［5-6］，参与遗传物质的结构改变，基因调控及细胞分化等过程. 脆性X综合征是Igarashi等［7］研究报道的与三核苷酸重复片段扩增突变有关的7种神经变性疾病其中的一种. 该蛋白只和（CGG）n重复序列发生特异性结合，而与其它类型的三核苷酸重复序列不结合［8］. 因此，对该蛋白功能的研究具有重要的理论研究意义. 本实验成功地构建了含CGGBP1的重组质粒，以可溶性蛋白形式获得较高表达. 通过Ni2+NTA柱纯化，获得纯化的目标融合蛋白质，同时证明了该蛋白能和人FMR1基因5′d (CGG)293′重复序列双链DNA特异性结合. 这将为进一步开展真核生物蛋白CGGBP1功能的研究和阐释CGG三核苷酸动态突变的致病机理奠定基础.

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