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CRISPR/Cas9基因敲除技术介绍1987年，日本大阪大学(OsakaUniversity)的科研人员在对一种细菌编码的碱性磷酸酶(alkalinephosphatase)基因进行研究时，发现在这个基因编码区域的附近存在一小段不同寻常的DN段，这些片段是由简单的重复序列组成
【摘要】：在传统的基因敲除方案中,同源重组法通常用来可以敲除一个或多个外显子。这种基因敲除方法有几个缺点,如需要胚胎干细胞、载体构建复杂、耗时且花费大、敲除片段通常较短。近年来利用锌指核酸内切酶(ZFN)、转录激活样效应因子(TALEN)和成簇间断短回文重复序列及其相关内切酶(CRISPR...
基因敲除靶点应设计在起始密码子附近（包括起始密码子）或者起始密码子下游的外显子范围内。不同Cas9/gRNA靶点在基因敲除效率上有较大差异，因此同时设计构建2～3个靶点的基因敲除载体再从中选出敲减效果较佳的靶点。
一、CRISPR-Cas系统简介图1CRISPR-Cas9系统介绍CRISPR-Cas9系统是一种被广泛运用的基因组编辑工具，它来源于细菌的适应性免疫系统。CRISPR-Cas9系统包括：Cas9酶和一个向导RNA。向导RNA作用是引导cas9到基因组的特异性位点上切割。如图...
CRISPR/Cas9基因敲除原理及实验建议CRISPRCas9已经成为了最受欢迎的基因编辑技术之一，在2016年的国自然基金中也有很多项目是关于CRISPRCas9的。目前在市场上已经有很多Cas9的基因敲除试剂盒，这些试剂盒的操作流程较为简单，客户可让公司直接帮忙设计gRNA，乃至最后的载体验证…
【图6】改进版的重组工程[5]这个方法的创新之处在于编辑模板的设计。传统的重组工程所用到的编辑模板由两个同源臂、一个待插入基因(做基因插入时需要)和一个两端带有FRT序列的抗性基因组成；而新的方法所用到的编辑模板去掉了FRT序列，添加了一个人为设计的Cas9靶位点(N20+PAM)和一…
经CRIPSR/Cas9-NHEJ介导，在ULK1和FAT10基因中同时插入双荧光报告基因进行目的基因敲除原文Figure.2A；Zhangetal.BMCBiology,2018
Crispr/Cas9在植物系统中的应用（基因敲除或者定点整合）已经有23人回复植物Crispr-Cas9基因敲除技术已经有182人回复CRISPR/Cas9开启基因定点修饰的新篇章!已经有9人回复想要证明一个启动子是受到氧气调控，怎么设计基因敲除？已经有7人回复
清华大学生命科学学院欧光朔研究组在《DevelopmentalCell》上发表利用体细胞CRISPR-Cas9技术实现线虫条件性基因敲除方法的论文.2014/08/285015.2014年8月21日，清华大学生命科学学院欧光朔研究组在《DevelopmentalCell》杂志上在线发表题为“ConditionalKnockoutsGeneratedby...
最后通过PCR、基因测序和WesternBlot等方法对得到的单克隆细胞株进行鉴定,结果表明我们成功构建了PTPN12基因敲除的A549稳定细胞株。此外,我们为研究PTPN12的功能,对最终得到的PTPN12基因敲除的A549稳定细胞株进行了一系列体外实验。
CRISPR/Cas9基因敲除技术介绍1987年，日本大阪大学(OsakaUniversity)的科研人员在对一种细菌编码的碱性磷酸酶(alkalinephosphatase)基因进行研究时，发现在这个基因编码区域的附近存在一小段不同寻常的DN段，这些片段是由简单的重复序列组成
【摘要】：在传统的基因敲除方案中,同源重组法通常用来可以敲除一个或多个外显子。这种基因敲除方法有几个缺点,如需要胚胎干细胞、载体构建复杂、耗时且花费大、敲除片段通常较短。近年来利用锌指核酸内切酶(ZFN)、转录激活样效应因子(TALEN)和成簇间断短回文重复序列及其相关内切酶(CRISPR...
基因敲除靶点应设计在起始密码子附近（包括起始密码子）或者起始密码子下游的外显子范围内。不同Cas9/gRNA靶点在基因敲除效率上有较大差异，因此同时设计构建2～3个靶点的基因敲除载体再从中选出敲减效果较佳的靶点。
一、CRISPR-Cas系统简介图1CRISPR-Cas9系统介绍CRISPR-Cas9系统是一种被广泛运用的基因组编辑工具，它来源于细菌的适应性免疫系统。CRISPR-Cas9系统包括：Cas9酶和一个向导RNA。向导RNA作用是引导cas9到基因组的特异性位点上切割。如图...
CRISPR/Cas9基因敲除原理及实验建议CRISPRCas9已经成为了最受欢迎的基因编辑技术之一，在2016年的国自然基金中也有很多项目是关于CRISPRCas9的。目前在市场上已经有很多Cas9的基因敲除试剂盒，这些试剂盒的操作流程较为简单，客户可让公司直接帮忙设计gRNA，乃至最后的载体验证…
【图6】改进版的重组工程[5]这个方法的创新之处在于编辑模板的设计。传统的重组工程所用到的编辑模板由两个同源臂、一个待插入基因(做基因插入时需要)和一个两端带有FRT序列的抗性基因组成；而新的方法所用到的编辑模板去掉了FRT序列，添加了一个人为设计的Cas9靶位点(N20+PAM)和一…
经CRIPSR/Cas9-NHEJ介导，在ULK1和FAT10基因中同时插入双荧光报告基因进行目的基因敲除原文Figure.2A；Zhangetal.BMCBiology,2018
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清华大学生命科学学院欧光朔研究组在《DevelopmentalCell》上发表利用体细胞CRISPR-Cas9技术实现线虫条件性基因敲除方法的论文.2014/08/285015.2014年8月21日，清华大学生命科学学院欧光朔研究组在《DevelopmentalCell》杂志上在线发表题为“ConditionalKnockoutsGeneratedby...
最后通过PCR、基因测序和WesternBlot等方法对得到的单克隆细胞株进行鉴定,结果表明我们成功构建了PTPN12基因敲除的A549稳定细胞株。此外,我们为研究PTPN12的功能,对最终得到的PTPN12基因敲除的A549稳定细胞株进行了一系列体外实验。
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