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Tm值的计算有多种方法，如按公式Tm＝4（G＋C）＋2（A＋T），在Oligo软件中使用的是最邻近法（thenearestneighbormethod）。尽可能使用两条引物的Tm值相同（最好相差不要超过5℃），退火温度根据较低的Tm值选定，也可以通过改变引物的长度来平衡两条引物的退火温度。
变性过程在94℃进行，一般来说预变性3～5min；退火温度在35～38℃，也可根据引物Tm值来确定，一般退火温度比引物Tm值低3～5℃；延伸温度在72℃，在此温度下Taq酶的效率约为2000bp／min（Kumari等
故图中Tm值介于82°C-87℃之间的熔解峰为非标记探针与不对称PCR扩增的后几十个循环,浓度相对较低的下游引物耗尽时,由浓度相对较高的上游引物扩增得到的单链产物结合形成的局部双链结构的熔解峰,即探针熔解峰。探针峰与产物峰之间的Tm值差异明显。
我用oligo6设计出的引物Tm值要比引物公司给的值高很多，在CNBI上BLAST得到的信息其Tm值又是不一样，到底以哪个为准比较好，我基本按引物公司给的Tm值做一个梯度实验，但是有时候却什么也得不到，RNA肯定是没有问题的，因为内参的目的片段可以扩增...
Tm值★★★两条引物的Tm值尽量接近，应用专用软件计算Tm值序列★整体上碱基不能过偏个别部分避免GCrich或ATrich(特别是3’端)避免T/C连续，A/G连续3'末端序列★3’末端避免GCrich或ATrich3’末端碱基最好为G或C3’末端碱基尽量避免为T互补性
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实时荧光定量PCR技术的原理及应用.800免费电话：800-810-2177tiangenPCR(RealtimeQuantitativePCR)800免费电话：800-810-2177tiangen实时荧光定量PCR原理实时荧光定量PCR的几种方法介绍实时荧光定量PCR原理实时荧光定量PCR的几种方法介绍实时荧光定量技…
药品的限日剂量在抗菌药物利用评价中的应用-限定日剂量是世界卫生组织药物利用研究小组推荐的药物测量单位.为达到主要治疗目的的成人用药平均日剂量。解剖-治疗-化学的药物分类／限定日剂量现已成为…
基于MATLAB的二维TM波FDTD研究.王立颜俐.【摘要】：目前,电磁场时域计算方法越来越引人注目。.时域有限差分(FiniteDifferenceTimeDomain,简称FDTD)法作为一种主要的电磁场时域计算方法,随着计算机技术的飞速发展,已经广泛应用到各种电磁问题的分析之中。.本文...
麻疹病毒属6种重要病毒目视化基因芯片检测方法的建立及其初步应用,基因芯片,麻疹病毒属,种特异性,目视化,临床检测。麻疹病毒属在病毒学分类上位于单负链RNA病毒目,副粘病毒科,副粘病毒亚科。根据国际病毒学委员会第8次分类会议的病毒分类目...
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