对PCR引物设计问题的研究.张洪福.【摘要】:核酸体外扩增思想是由Khorana及其同事于1971年提出,并由美国PE-Cetus公司的人类遗传研究室Mullis等人于1985年发明了具有划时代意义的聚合酶链反应(PolymeraseChainReaction,PCR)后才得以实现。.PCR技术具有特异、敏感、产率...
引物设计原则1.引物应用核酸系列保守区内设计并具有特异性。要设计引物首先要找到DNA序列的保守区。同时应预测将要扩增的片段单链是否形成二级结构。如这个区域单链能形成二级结构,就要避开它。如这一段不能形成二级结构,那就可以在这一区域设计
摘要:PCR的第一步就是引物设计。引物设计的好坏,直接影响了PCR的结果,因此这一步很关键。成功的PCR反应既要高效,又要特异性扩增产物。目前可以使用的引物设计软件很多,但仍有许多细节需要注意。
Q问题:普通PCR和QPCR引物是否一样?A回答:二者的设计原则有相同也有不同;相同处:•序列的查找是一致的;•序列选取应在基因的保守区段;•选取合适的扩增片段大小•避免引物自身或与引物之间形成4个或4个以上连续配对;•避免引物自身形成环状发卡结构;•Tm值…
RTPCR引物设计原则和方法.RT-PCR引物设计原则和方法在NCBI上搜索到该基因,找到该基因的mRNA,在CDS选项中,找到编码区所在位置,在下面的origin中,Copy该编码序列作为软件查询序列的候选对象。.打开PrimerPremier5,点击File-New-DNAsequence,出现输入序列窗口...
其实这里qPCR引物的设计和常规PCR的设计也是大同小异。和常规引物设计一样,并不能死磕原则,灵活选择更为重要。这里可以使用以下软件和在线网站进行设计:1.PrimerPremier5.0设计方法和常规引物设计一样,只需根据实验需求设置几个必要参数即可。
RealtimePCR引物设计原则.1、引物长度(primerlength)为18-27bp(18-30bp);2、Tm(退火温度)为55~65℃(55℃~75℃),尽量保证上下游引物Tm值一致,二者差异最好不要超过5℃;.3、GC含量(composition)为40-60%,上下游引物的GC含量不能相差太大,四...
一、PCR引物设计原则1、引物长度一般在15-30bp。引物长度一般为15-30bp,常用的为18-27bp,但不应大于38bp,因为过长会导致其延伸温度大于74℃,不适于TaqDNA聚合酶进行反应;
聚合酶链式反应(PCR)的技术原理及结果分析PCR引物设计原理及相关软件的使用(PrimerPremier5.0聚合酶链式反应(polymerasechainreaction,PCR),是一种在体外快速扩增特定基因或DNA序列的方法,故又称为基因的体外扩增法。
对PCR引物设计问题的研究.张洪福.【摘要】:核酸体外扩增思想是由Khorana及其同事于1971年提出,并由美国PE-Cetus公司的人类遗传研究室Mullis等人于1985年发明了具有划时代意义的聚合酶链反应(PolymeraseChainReaction,PCR)后才得以实现。.PCR技术具有特异、敏感、产率...
引物设计原则1.引物应用核酸系列保守区内设计并具有特异性。要设计引物首先要找到DNA序列的保守区。同时应预测将要扩增的片段单链是否形成二级结构。如这个区域单链能形成二级结构,就要避开它。如这一段不能形成二级结构,那就可以在这一区域设计
摘要:PCR的第一步就是引物设计。引物设计的好坏,直接影响了PCR的结果,因此这一步很关键。成功的PCR反应既要高效,又要特异性扩增产物。目前可以使用的引物设计软件很多,但仍有许多细节需要注意。
Q问题:普通PCR和QPCR引物是否一样?A回答:二者的设计原则有相同也有不同;相同处:•序列的查找是一致的;•序列选取应在基因的保守区段;•选取合适的扩增片段大小•避免引物自身或与引物之间形成4个或4个以上连续配对;•避免引物自身形成环状发卡结构;•Tm值…
RTPCR引物设计原则和方法.RT-PCR引物设计原则和方法在NCBI上搜索到该基因,找到该基因的mRNA,在CDS选项中,找到编码区所在位置,在下面的origin中,Copy该编码序列作为软件查询序列的候选对象。.打开PrimerPremier5,点击File-New-DNAsequence,出现输入序列窗口...
其实这里qPCR引物的设计和常规PCR的设计也是大同小异。和常规引物设计一样,并不能死磕原则,灵活选择更为重要。这里可以使用以下软件和在线网站进行设计:1.PrimerPremier5.0设计方法和常规引物设计一样,只需根据实验需求设置几个必要参数即可。
RealtimePCR引物设计原则.1、引物长度(primerlength)为18-27bp(18-30bp);2、Tm(退火温度)为55~65℃(55℃~75℃),尽量保证上下游引物Tm值一致,二者差异最好不要超过5℃;.3、GC含量(composition)为40-60%,上下游引物的GC含量不能相差太大,四...
一、PCR引物设计原则1、引物长度一般在15-30bp。引物长度一般为15-30bp,常用的为18-27bp,但不应大于38bp,因为过长会导致其延伸温度大于74℃,不适于TaqDNA聚合酶进行反应;
聚合酶链式反应(PCR)的技术原理及结果分析PCR引物设计原理及相关软件的使用(PrimerPremier5.0聚合酶链式反应(polymerasechainreaction,PCR),是一种在体外快速扩增特定基因或DNA序列的方法,故又称为基因的体外扩增法。