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各位老师：请教一下，我把目的基因转到毕赤酵母里了，现在在做表达，每24小时取样一次，连续取样6天，然后跑SDS--PAGE,我取的这些样在上样之前具体该怎么处理呢？比如说反复冻融、超声裂解之类的，请 …
近日，华南理工大学林影教授和暨南大学张弓教授的团队在Biotechnology for Biofuels杂志（生物工程类一区）上发表文章，使用翻译全局控制方法，改善外源蛋白质在毕赤酵母中表达的折叠效率，有效提高活性蛋白质产量。
蛋白表达是指利用细菌、酵母、昆虫细胞、哺乳动物细胞或者植物细胞表达外源基因蛋白的一种分子生物学技术，是基因工程技术中的重要组成部分之一。毕赤酵母表达系统由于其低成本高产出并具有一定翻译后修饰等优点而被越来越多的使用。
我最近构建毕赤酵母X-33工程菌表达干扰素（20KD左右），摇瓶用BMMY表达时，蛋白很纯，没有40KD以上的蛋白，但是上罐后用基础盐离子培养基发酵后杂蛋白很多；之前还做过甘露聚糖酶（47KD左右）的表达，用基础盐离子上罐发酵时，表达蛋白 ...
有个问题一直很困惑，现在想对一种微生物酶进行改造，如果从生产和将来的应用成本角度来说，在大肠杆菌中表达（质粒表达，IPTG诱导）和在真核生物（酿酒酵母和必赤酵母）中表达，如果表达量一样的话，哪种生产成本更高，哪种更划算？请高手不吝赐教，谢谢！
最近半年一直在做酵母表达，前面一切正常，最后表达跑蛋白胶却看不出目的条带，重复好几次依然如此，看着和空菌空载的条带没有什么明显区别，做western有了印迹，位置也差不多，却是三条细带，求大神赐教啊。酵母GS115，载体pPicZaA,温度30，转速250，诱导表达时间72和96h都是如此，经鉴 …
1.镍柱和Q柱不挂柱有多方面原因，比如柱子没平衡好，上样缓冲液有待优化等。 2.建议纯化流程。 1）发酵液固液分离后直接超滤浓缩，超绿浓缩的时候用你镍柱或Q柱的平衡缓冲液洗涤，然后不用冻干，直接溶在你的柱子平衡缓冲液中，然后直接上柱。
我用PPICZahphaA表达目的蛋白，但是少部分分泌到培养基中，是蛋白本身的性质决定的还是由于发酵条件的原因呢？. 我认为可能是前者，不知大家有何看法。. 我是抽提酵母基因组,用的上海华舜的酵母抽提试剂盒,然后作PCR鉴定,用5AOX和3AOX引物.阳性可隆应该是目的 ...
各位老师：请教一下，我把目的基因转到毕赤酵母里了，现在在做表达，每24小时取样一次，连续取样6天，然后跑SDS--PAGE,我取的这些样在上样之前具体该怎么处理呢？比如说反复冻融、超声裂解之类的，请 …
近日，华南理工大学林影教授和暨南大学张弓教授的团队在Biotechnology for Biofuels杂志（生物工程类一区）上发表文章，使用翻译全局控制方法，改善外源蛋白质在毕赤酵母中表达的折叠效率，有效提高活性蛋白质产量。
蛋白表达是指利用细菌、酵母、昆虫细胞、哺乳动物细胞或者植物细胞表达外源基因蛋白的一种分子生物学技术，是基因工程技术中的重要组成部分之一。毕赤酵母表达系统由于其低成本高产出并具有一定翻译后修饰等优点而被越来越多的使用。
我最近构建毕赤酵母X-33工程菌表达干扰素（20KD左右），摇瓶用BMMY表达时，蛋白很纯，没有40KD以上的蛋白，但是上罐后用基础盐离子培养基发酵后杂蛋白很多；之前还做过甘露聚糖酶（47KD左右）的表达，用基础盐离子上罐发酵时，表达蛋白 ...
有个问题一直很困惑，现在想对一种微生物酶进行改造，如果从生产和将来的应用成本角度来说，在大肠杆菌中表达（质粒表达，IPTG诱导）和在真核生物（酿酒酵母和必赤酵母）中表达，如果表达量一样的话，哪种生产成本更高，哪种更划算？请高手不吝赐教，谢谢！
最近半年一直在做酵母表达，前面一切正常，最后表达跑蛋白胶却看不出目的条带，重复好几次依然如此，看着和空菌空载的条带没有什么明显区别，做western有了印迹，位置也差不多，却是三条细带，求大神赐教啊。酵母GS115，载体pPicZaA,温度30，转速250，诱导表达时间72和96h都是如此，经鉴 …
1.镍柱和Q柱不挂柱有多方面原因，比如柱子没平衡好，上样缓冲液有待优化等。 2.建议纯化流程。 1）发酵液固液分离后直接超滤浓缩，超绿浓缩的时候用你镍柱或Q柱的平衡缓冲液洗涤，然后不用冻干，直接溶在你的柱子平衡缓冲液中，然后直接上柱。
我用PPICZahphaA表达目的蛋白，但是少部分分泌到培养基中，是蛋白本身的性质决定的还是由于发酵条件的原因呢？. 我认为可能是前者，不知大家有何看法。. 我是抽提酵母基因组,用的上海华舜的酵母抽提试剂盒,然后作PCR鉴定,用5AOX和3AOX引物.阳性可隆应该是目的 ...
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