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在百度搜索框中输入你发表文章的标题或是网址，如果你的文章没有被收录则搜索不到，需要在浏览器中直接输入网址访问。百度所展现的文章是需要被百度收录才可以展现的，提高收录率有两种通用的方法。1.需要往权重比较高的网站发布，比如新浪网，人民网等。2.文章的原创性，就是这篇文章是你自己手写的，不能再网上直接粘贴复制。
分类: 电脑/网络 >> 百度 >> 百度知道 问题描述: 我想在网上发布我的文章，希望别人只要在百度上只要打上关键词就能搜索出来，可是我在博客网站上发布了好几遍都提示已经提交，我在百度上试着搜索了一下，为什么搜索不到我自己发布的东西那，请朋友们帮帮我好吗？怎么才能把我发布的东西放在百度里让别人都能看见那 ． 解析: 百度能搜索到的话，除非你发表文章的那个网站采取了网站推广，也就是同百度公司签约。百度就可以帮那网站推广了。但是这个又涉及到一个金额和关键字的问题。不过这些都是废话。是官方的问题。你不必考虑。因为你是在人家的网站里面发文章。 如果你想达到你的效果可以采取以下方式。 在一些推广了的论坛里发文章。 这样也许看到的人不多，但是被百度搜索出来的几率很大。在一些大型网站发文章。比如各地的门户网站。。 你自己建网站发文章。然后把你的网站推广。
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百度一下 你就知道 哈哈哈、
发表论文，首先需要看你们学校对期刊的要求大家如果从来没接触过发表论文，初次准备的时候可能都会有点懵，CN刊号、ISSN刊号、核心、学报、JCR分区、省级期刊......都是什么意思？这些都搞不清楚，何谈选择适合的期刊投稿呢？所以这篇文章就给大家科普一些期刊行业的基础知识，让大家在准备的时候不至于被各种名词绕晕。话不多说，下面就来介绍常见的期刊名词。一、学术期刊首先介绍下什么是学术期刊，一般在职作者评职称、学生作者评优评奖保研发表论文，都是需要发表在学术期刊上的。提到期刊，可能我们首先想到的是《读者》、《青年文摘》、《意林》这些面向大众发行的读物，此类期刊收录的都是通俗易懂的故事、散文、人物采访等文章，适合大众阅读，属于非学术期刊，此类刊物订阅量大，流量多，所以可以通过订阅和广告获得收入，其运营模式是商业化的。而学术期刊，顾名思义，就是刊登各专业领域学术性文章的期刊，此类文章通常专业性强，枯燥乏味、晦涩难懂，相较于大众读物而言，订阅量很少，除了各大高校、科研机构、图书馆以及某些专业相关的研究者，基本没有人会订阅，没有订阅量就没有流量，也就无法获得广告收入，所以，除了部分有国家拨款的期刊（核心、学报居多，难度大）外，剩下的，为了维持杂志社的运营，只能向作者收取版面费。二.正式期刊/非正式期刊正式期刊是由国家新闻出版署与国家科委在商定的数额内审批，并编入“国内统一刊号”，面向全国公开发行。非正式期刊是指通过行政部门审核领取“内部报刊准印证”作为行业内部交流的期刊，一般只限行业内交流，不公开发行，但也是合法期刊的一种。简单来说，两者区别在于是否公开发行，一般正式期刊都是从非正式期刊而来的。三、CN类刊物与ISSN类刊物CN（中国非正式简称）是国内统一连续出版物号（国内刊号），ISSN （International Standard Serial Number）国际标准连续出版物编号（国际刊号）CN类刊物是指在我国境内注册、国内公开发行的刊物，CN刊号格式如下——CN：XX-XXXX/G4，因为刊号均标注有“CN ”两个字母，所以大家习惯称之为CN类刊物；ISSN类刊物是指在我国境外注册、国内外公开发行的刊物，ISSN刊号格式如下——ISSN：XXXX-XXXX，因为刊号均标注有“ISSN ”，所以大家习惯称之为ISSN类刊物。目前国内正规的学术期刊都同时拥有CN和ISSN两个刊号。四、论文数据库（检索网站）目前国内主要有知网（CNKI）、万方、维普等三个主流的论文收录平台，知网认可度最高，版面费相对而言也最贵，有的单位会要求作者必须发知网收录的期刊，所以到底选择哪个数据库收录的期刊，需要综合考虑单位和自己的要求。特别说明：有些作者会存在这样的误区，觉得只有知网收录的期刊才是正规期刊，这是完全错误的想法！期刊到底由哪个数据库收录是由每个杂志社与数据库协商决定的，其正规性与其是否知网收录没有必然关系，只要期刊在国家新闻出版总署可查，并且在知网、万方、维普（至少）三个之一更新正常，那么就是正规期刊。五、出刊周期出刊周期就是出刊频率，常见的有周刊、旬刊、半月刊、月刊、双月刊、季刊等（当然半年刊、年刊也有），顾名思义，就是每周出一期、每十天出一期、每半月出一期......一般来说，出刊周期越长，质量越高，而出刊周期比较频繁（周刊、旬刊）的大多以盈利为主要目的，收的稿件多、审核时间短、要求不高，基本查重过关、主题合适都能通过，而像月刊、双月刊，在收费的同时也注重文章质量，审核时间长、审核要求高，所以期刊水平一般也不低。特别提醒：个别单位在评审时对期刊的出刊周期有要求，只认月刊及以上期刊，对于周刊、旬刊等并不认可，因此，但大家在投稿的时候要提前注意单位、学校是否有此类要求，不要出刊后才发现刊物不符合要求。六、刊期和出刊时间刊期是指录用、期刊上标注的时间，而出刊时间则是指实际出刊拿到期刊的时间，可以看下这篇文章，两者的区别以及投稿时的注意事项说得很详细。七、期刊等级国外期刊等级主要有SCI、SSCI、A&HCI、EI（源刊），这些都是核心，发表难度很大，还有EI会议，会议有好有差，收录的文章质量也是参差不齐，除此之外的就是一般的国际普刊。国内期刊按照质量高低一般分为以下几个等级：核心、非核心的本科学报、专科学报、普刊，质量和发表难度依次降低。1.核心期刊国内核心主要有这么几个公认的体系：南核、北核、CSCD、科技核心。1.南大核心，南京大学“中文社会科学引文索引（CSSCI）来源期刊”，也称C刊；2.北大核心，北京大学图书馆“中文核心期刊”；3.CSCD，中国科学院文献情报中心“中国科学引文数据库来源期刊”；4.统计源核心，中国科学技术信息研究所“中国科技论文统计源期刊（CSTPCD）”，又称“中国科技核心期刊”，简称“科技核心”；下面这几种认可度不高，或者说其实根本算不上核心：5.RCCSE，武大核心，由武汉大学中国科学评价研究中心（Research Center for Chinese Science Evaluation）研制，南方的认可度比北方的高一点；6.SCD，（科学引文数据库，Science Citation Database）。7.社科院核心（中国人文社会科学引文数据库，CHSSCD），由中国社会科学评价研究院评审、发布。从影响力来讲，南核的等级在同类划分中属于最高的一种，入选难度、发表难度都高于北核。2.学报学报一般是指各大高校主办的刊物，根据高校层次不同分为本科学报和专科学报。学报是个特殊的类别，从主管主办单位的角度来看，很难说学报属于省级还是国家级，因为我国高校位于各省市，却又统一归于国家教育部管理，但依照惯例，一般这样划分：如果某学报是核心，那么就将其认定为核心期刊，而不是简单地说它是学报，非核心的学报分为本科学报和专科学报，一般来说，本科学报优于专科学报，在各方面的要求上也更严格。3.普刊普刊就是普通期刊，简单来说，除了核心、本科学报、专科学报，剩下的都是普刊。从收录的数据库来看，可以将普刊分为知网收录的期刊、万方刊、维普刊；从影响因子角度来看，可以将普刊期刊分为有影响因子期刊和无影响因子期刊。所谓影响因子，是指某期刊前两年发表的论文在该报告年份（JCR year）中被引用总次数除以该期刊在这两年内发表的论文总数，这是一个国际上通行的期刊评价指标。一般来说，影响因子越高，期刊的学术影响力越大、质量越高。而”一般“的意思就是并不意味着有影响因子的期刊质量绝对高于无影响因子的期刊，某期刊质量到底如何，要结合期刊等级、审核时间、出刊周期、每期收录文章的篇数等综合判断。我们通常以知网上的影响因子为准，其他比如万方也有影响因子，但因为知网权威性最高，我们在谈论期刊的影响因子的时候，默认的都是知网的，除非某个高端的期刊只上万方，那么这个期刊的影响因子可以只看万方的。八、省级期刊/国家级期刊省级期刊是指由省级机构主办的，包括各省、自治区、直辖市的各部门、委办、厅、局、所，省级社会团体和机构等，比如黑龙江省XX、马鞍山市XX、共青团贵州省委。[1]国家级期刊是指由国家级机构主办的，包括党中央、国务院及所属各部门，或中国科学院、中国社会科学院、中国**协会、各民主党派和全国性人民团体等主办的期刊。[2]一般我们只会对普刊做省级期刊和国家级期刊的划分，而辨别某期刊是省级期刊还是国家级期刊也很简单，直接去以下两个链接查查就行，主管主办单位里只要有一个是国家级单位，那么该期刊就是国家级期刊，否则就是省级期刊。由此可见：省级期刊和国家级期刊的区别只在于主管主办单位是省级还是国家级，和期刊质量没有任何必然的关系，并不意味着国家级期刊一定就优于省级期刊，国家层面也从来没有对期刊进行过此类划分，甚至核心和非核心期刊也不是总署划分的，只是这类划分标准大家都默认遵守罢了。所以，除非单位、学校明文规定必须要发表国家级期刊或者说发表国家级期刊加分更高（这其实也是一种误区），否则不必过于纠结某个期刊是不是国家级期刊，也不要以此作为选择期刊的标准。特别提醒下：以上的划分标准在大部分情况下都是如此，但也有例外，比如某地区工程师职称评审对期刊的要求是只要市级以上的刊物就行，那么可能类似《读与写》这种主办单位里带有“市”字样的期刊就会被其认定为是市级期刊。
有省级期刊，国家级期刊，核心期刊。省级期刊是由各省、自治区、直辖市的各部门、委办、厅、局、所，省级社会团体和机构以及各高等院校主办，在新闻出版部门有登记备案，国内外公开发行的学术期刊。私：六零16四八26四国家级期刊，即由党中央、国务院及所属各部门，或中国科学院、中国社会科学院、各民主党派和全国性人民团体主办的期刊及国家一级专业学会主办的会刊。
本科生可以发表的期刊很多，《魅力中国》《长江丛刊》《改革与开放》《价值工程》发表要先确定1、期刊收录网站（知网、万方、维普、龙源）一般情况下知网收录的价格高于其他的，是因为知网整改后都要2版-3版起发，万方维普的大多数还是1版起发。
文章字符数，一般1版字符数在2500左右，2版的话字符大概在3800~4000左右，如果文章中有图表，需要看排版所占的字符数来计算版面，一般小图是300-600字符左右。期刊的级别（价格）：省级、国家级普刊<学报和第一批第二批学术期刊<高端刊、核心、地方目录期刊（也有部分是免费的）
发表首先要根据单位的要求先确定好要发的杂志，然后根据杂志的要求来写作，必须保证原创，抄袭率不过关首先就被刷下来了，望文章都能顺利发表成功
本科生可以发表的期刊很多,《魅力中国》《长江丛刊》《改革与开放》。
期刊，定期出版的刊物。如周刊、旬刊、半月刊、月刊、季刊、半年刊、年刊等。由依法设立的期刊出版单位出版刊物。期刊出版单位出版期刊，必须经新闻出版总署批准，持有国内统一连续出版物号，领取《期刊出版许可证》。
以《中国大百科全书》新闻出版卷为代表，将期刊分为四大类：
(1)一般期刊，强调知识性与趣味性，读者面广，如我国的《人民画报》、《大众电影》，美国的《时代》、《读者文摘》等;
(2)学术期刊，主要刊载学术论文、研究报告、评论等文章，以专业工作者为主要对象;
(3)行业期刊，主要报道各行各业的产品、市场行情、经营管理进展与动态，如中国的《摩托车信息》、《家具》、日本的《办公室设备与产品》等;
(4)检索期刊，如我国的《全国报刊索引》、《全国新书目》，美国的《化学文摘》等。
昆虫人工饲料配方研究概况及问题探讨 Advances and Problems in Insect Artificial Diet Studies [四川林业科技 Journal of Sichuan Forestry Science and Technology] 方杰 , 朱麟 , 杨振德 , 赵博光 家蚕人工饲料研究进展 Research Progress in Artificial Diet of Silkworm [安徽农业科学 Journal of Anhui Agricultural Sciences] 张月华 , 徐安英 同翅目昆虫人工饲料饲养技术 Artificial rearing technique of homopterans. [昆虫知识 Chinese Bulletin of Entomology] ZHANG Zhi-Tao 植食性昆虫诱导的植物抗性最新研究进展 Recent Advances of Herbivorous Insect Induced Resistance in Plants [林业科学 Scientia Silvae Sinicae] 朱麟 , 杨振德 , 赵博光 , 方杰 , Zhu Lin , Yang Zhende , Zhao Boguang , Fang Jie 异色瓢虫人工饲料研究进展 Advances of artificial diet for Harminia axyridis [山地农业生物学报 Journal of Mountain Agriculture and Biology] 杨洪 , 熊继文 , 张帆 家蚕对人工饲料摄食性的生理遗传学研究与展望 Studies and Prospects of Physiology and Genetics on Feeding Habit of Artificial Diet of Silkworm,Bombyx mori [蚕业科学 Science of Sericulture] 崔为正 家蚕人工饲料摄食性遗传模式研究 STUDIES ON INHERITANCE MODEL OF ARTIFICIAL DIET EATING HABIT OF SILKWORM [山东农业大学学报（自然科学版） Journal of Shandong Agricultural University(Natural Science)] 王彦文 , 胡增娟 , 李卫国 蚁形郭公虫人工饲料及繁殖饲养研究 Artificial diet and rearing technique for Thanasimus formicarius [中国森林病虫 Forest Pest and Disease] 吕军 , 叶辉 , 刘宏屏 , 母其爱 烟青虫人工饲料的筛选 Selection of Artificial Diet of Heliothis assulta larval [安徽农业科学 Journal of Anhui Agricultural Sciences] 王方晓 , 薛泽春 , 徐庆丰 , WANG Fang-xiao 天蚕人工饲料的配制及饲养试验 Preparation of Artificial Diet and Trial Rearing on Antheraea yamamai [安徽农业大学学报 Journal of Anhui Agricultural University] 刘朝良 , 蔡之军 , 王佛桑 , 穆莉 , 李东升 , 林青松 生物碱化学生态学与害虫管理 Chemical Ecology of Alkaloids and its Application in Pest Management [江西农业大学学报 Acta Agriculturae Universitatis Jiangxiensis(Natural Sciences Edition)] 杨振德 , 朱麟 , 赵博光 , 方杰 , YANG Zhen-de , ZHU Lin , ZHAO Bo-guang , FANG Jie 光肩星天牛的人工饲养(Ⅰ) Artificial Rear of Anoplophora glabripennis (Motsch.) (I) [北京林业大学学报 Journal of Beijing Forestry University] 矶野昌弘 , 小仓信夫 , 赵军 中国野桑蚕人工饲料育研究初报 Report on Chinese Bombyx mandarina Moore Fed on Artificial Diet [蚕业科学 Science of Sericulture] 赵华强 , 许雅香 , 王东 , 卫正国 , 陈玉华 , 李兵 , 宋宏图 , 沈卫德 , ZHAO Hua-Qiang , XU Ya-Xiang , WANG Dong , WEI Zheng-Guo , CHEN Yu-Hua , LI Bing , SONG Hong-Tu , SHEN Wei-De 一种饲养效果更佳的甜菜夜蛾人工饲料 Studies on the Artificial Diet for Beet Armyworm, Spodoptera exigua [中国生物防治 Chinese Journal of Biological Control] 温小昭 , 苏志坚 , 陈其津 , 庞义 , 李广宏 鲍人工配合饲料稳定性的研究 STUDIES ON THE STABILITY OF THE ABALONE ARTIFICIAL DIETS [海洋科学 Marine Sciences] 吴永沛 更多相似文献... <<昆虫人工饲料配方研究概况及问题探讨>>引用的文献 Handbook of Insect Rearing 《New York,Tokyo》 Sing P 1985 / / P 昆虫、螨类和蜘蛛的人工饲料 《北京:科学出版社》 忻介六 1979 / / P 昆虫、螨类和蜘蛛的人工饲料(续篇) 《北京:科学出版社》 忻介六 1986 / / P 棉铃虫的紫云英-麦胚人工饲料 《昆虫学报》 吴坤君 1985 / 28 / 01 P 22-29 红纹粉蝶半合成人工饲料研究 《华南农业大学学报》 应霞玲 庞雄飞 庞雄飞 1999 / 20 / 04 P 24-27 棉铃虫营养生态学研究 《昆虫学报》 吴坤君 1993 / 36 / 01 P 21-28 Theeffect of dietaryprotein on thegrowth anddigestivephysiology of larvalHeliothis zea andSpodoptera exigus 《Journal of Insect Physiology》 Broadway R M 1986 / 32 / 08 P 673-680 甜菜夜蛾人工饲料的研究 《中山大学学报(自然科学版)》 李广宏 庞义 庞义 1998 / 37 / 04 P 1-5 甜菜夜蛾人工饲料及饲养技术研究 《昆虫知识》 李腾武 何将绪 何将绪 2001 / 38 / 05 P 383-386 稚蚕低成本人工饲料的改进-配方中蔗糖删除的效果试验 《北方蚕业》 王安皆 张亚平 张亚平 2000 / 21 / 02 P 13-14 《Insect Physiol》 Schaefler C H J 1968 / 14 / P 171-178 《Entomologia Experimentalis et Applicata》 Sivapalan P 1979 / 26 / P 55-60 玉带凤蝶人工饲料初步研究 《华南农业大学学报》 陈思源 梁广文 梁广文 1999 / / 01 P 13-16 亚洲玉米螟对常见植物甾醇代谢利用研究 《昆虫学报》 祁云台 2000 / 43 / 01 P 7-11 棉铃虫人工饲料概述 《昆虫知识》 姜兴印 仪美芹 仪美芹 2000 / 37 / 03 P 183-185 棉铃虫人工饲料的研究 《昆虫学报》 卓乐姒 杨家荣 杨家荣 1981 / 24 / 01 P 108-110 昆虫的人工饲料 《昆虫知识》 忻介六 1976 / 13 / 02 P 62-63 甜菜夜蛾的饲养方法介绍 《昆虫知识》 黄春霞 倪金萍 倪金萍 2002 / 39 / 03 P 229-231 烟青虫人工饲料的研究 《昆虫学报》 吴坤君 李秀珍 李秀珍 1990 / 33 / 03 P 301-308 《Journal of Economic Entomology》 Vanderzant E S Fort S W Fort S W 1972 / 55 / P 140 斜纹夜蛾半合成人工饲料的研究 《华南农业大学学报》 卢文华 1986 / 7 / 02 P 33-42 饲养五种夜蛾科昆虫的一种人工饲料 《昆虫知识》 陈其津 庞义 庞义 2000 / 37 / 06 P 325-327 粘虫的简易人工饲料及防腐剂对其生长发育的影响 《昆虫知识》 毕富春 1983 / 30 / 06 P 260-263 小蚕人工饲料中若干物质添加效果的研究 《江苏蚕业》 崔为正 2000 / 22 / 01 P 11-13 家蚕味觉的电生理学研究:下颚栓锥感器的感受性 《蚕丝实验场报告》 石川成男 1963 / 18 / 05 P 297-357 家蚕食性的研究(I)宿主植物选择性特别是摄食抑制机制的分析 《蚕丝实验场报告》 石川成男 1966 / 203 / P 291-321 不同蚕品种对桑叶粉含量不同的人工饲料摄食性 《蚕业科学》 徐俊良 袁碧华 袁碧华 1993 / 19 / 01 P 44-46 家蚕味觉电生理反应的个体差异 《昆虫学报》 崔为正 王彦文 王彦文 2002 / 45 / 01 P 41-46 家蚕对人工饲料的味觉与摄食Ⅱ摄食抑制要因 《日蚕杂》 平尾常男 1978 / 47 / 03 P 186-192 桑蚕摘除部分感觉器对人工饲料摄食性的影响 《蚕桑通报》 崔为正 胡增娟 胡增娟 1999 / 30 / 03 P 15-17 大豆粉中家蚕忌避因子的阻食机理及理化性质研究 《蚕业科学》 崔为正 李卫国 李卫国 1999 / 25 / 02 P 102-107 人工饲料育不同激素添食对饲料效率的影响 《蚕桑通报》 徐俊良 黄健辉 黄健辉 1998 / 29 / 03 P 21-25 湖北沔阳县微生物实验站昆虫病毒组 《昆虫知识》 1980 / 17 / 01 P 13 家蚕人工饲料防腐剂的研究 《粮食与饲料工业》 朱金娥 1999 / / 01 P 38-39 家蚕人工产防腐剂和抗菌素的筛选研究 《山东农业大学学报(自然科学版)》 崔为正 张国基 张国基 1999 / 30 / 03 P 219-225 《Annals of the Entomological Society of America》 Brewer F D 1979 / 72 / P 415-417 蚕桑人工饲料加工调制工艺对饲料质量的影响 《蚕桑通报》 崔为正 王洪利 王洪利 1998 / 29 / 01 P 15-18 昆虫人工饲料的发展、应用和前途 《昆虫知识》 王延年 1990 / 27 / 05 P 308-312 利用半合成人工饲料饲养小菜蛾的研究 《华南农业大学学报》 莫美华 1999 / / 02 P 13-17 棉铃虫营养生态学研究 《昆虫学报》 吴坤君 1993 / 36 / 01 P 21-28 棉铃虫食性和营养的某些特点 《昆虫学报》 钦俊德 魏定义 魏定义 1962 / 11 / 04 P 327-338 一种饲养效果更佳的甜菜夜蛾人工饲料 《中国生物防治》 李广宏 陈其津 陈其津 2002 / 18 / 03 P 132-134 以玉米粉为成型剂的稚蚕人工饲料的研究 《蚕业科学》 崔为正 王洪利 王洪利 1998 / 24 / 04 P 210-214 Effect of gallic acid on the growth of the silkworm larvae Bombyx moril L 《NATURE》 Hamamura Y Masada H Masada H 1966 / 212 / P 1386-1387 iLib推荐的刊物 西部 West 城市问题 Urban Problems 理论界 Theory Circle 感光科学与光化学 Photographic Science and Photochemistry 昆虫学报 Acta Entomologica Sinica 福建中医药 Fujian Journal of Traditional Chinese Medicine 昆虫分类学报 Entomotaxonomia 郑州经济管理干部学院学报 Journal of Zhengzhou Economic Management Institute 建筑结构学报 Journal of Building Structures 特区经济 Special Zone Economy 版权所有 北京万方数据股份有限公司 京ICP证010071号
昆虫人工饲料是昆虫学研究的基本技术.100多年来,在饲料配方的改良、廉价成型剂的筛选、防腐剂和抗菌素的筛选、叶粉的添加效果、刺激和抑制取食物质、人工饲料的含水率和酸碱度等方面均取得了重要的进展.本文简述了昆虫人工饲料研究所取得的进展,分析了当前昆虫人工饲料中存在的问题,并提出了人工饲料的前景和发展方向.
文章标题：论植物组织培养褐变产生的因素及对策摘要:本文针对植物组织培养中常见的褐变现象,详细地分析了其产生的机理及影响因素,并提出了相应的对策,为科研和生产提供了一定的理论和实践依据。关键词:植物组织培养，褐变，对策目前，在许多植物组织培养过程中，常遇到褐变问题。褐变主要发生在外植体，在植物愈伤组织的继代、悬浮细胞培养以及原生质体的分离与培养中也经常发生。褐变产物不仅使外植体、细胞、培养基等变褐，而且对许多酶有抑制作用，从而影响培养材料的生长与分化，严重时甚至导致死亡。本文探讨植物组织培养中褐变现象的影响因素、机理及防范措施，对我们进行科学研究或工厂生产，包括植物组织的培养,原生质体、悬浮细胞和植物器官的培养都有着十分重要的现实意义。1褐变产生的影响因素影响植物组织培养褐变的因子是复杂的，因植物的种类、基因型、外植体部位及生理状态等不同，褐变的程度也有所不同。1.1植物种类及基因型不同的植物和不同的基因型决定了不同的褐化程度。在组织培养中，品种褐化难易可能是与该品种中多酚类物质含量的多少及多酚氧化酶(PPO)活性的差异有关。1.2外植体部位及生理状态外植体的部位及生理状态不同其褐化程度不同，同时，不同时期和不同年龄的外植体在培养中褐变的程度也不同。1.3培养基成分培养基成分中的无机盐、蔗糖浓度、激素水平等对褐变的程度的影响尤为重要。另外，其pH值也与褐变程度有较大关系。1.4培养条件温度过高或光照过强，均可加速被培养组织的褐变。不利环境条件都能造成细胞的程序化死亡，温度是诱导程序化死亡的主要因素[1]。2褐变产生的机理2.1非酶促褐变非酶促褐变是由于细胞受胁迫或其他不利条件影响所造成的细胞程序化死亡或自然发生的细胞死亡，即坏死形成的褐变现象，并不涉及酚类物质的产生。徐振彪等[1]将生长正常的愈伤组织转移到含NaCl的培养基中，组织周围尤其是接触培养基部分发生褐变，但培养基中没有看到扩散的褐化物质。当温度升高时继代保存时间过长，也会发生此类现象。但这种褐变若采取适当措施或者愈伤组织适应了胁迫环境就不再发生了[3]。2.2酶促褐变目前认为植物组织培养中的褐变主要是由酶促褐变引起的，培养材料变褐主要是由伤口处分泌的酚类化合物引起的[4]。酶促褐变如同一般的酶促反应，其发生必须具备三个条件，即酶、底物和氧。引起褐变的酶有多酚氧化酶(PPO)、过氧化物酶(POD)、苯丙氨酸解氨酶等。从初次培养和继代培养过程中试管苗的褐变程度和PPO的活性来看，表明PPO活性的高低是引起培养材料褐变的关键。引起褐变的酶的底物主要是酚类化合物，按其组成可分成3类:苯基羧酸（包括邻羟基苯酚、儿茶酚、没食子酸、莽草酸等），苯丙烷衍生物（包括绿原酸、肉桂酸、香豆酸、咖啡酸、单宁、木质素等），第三类是黄烷衍生物（包括花青素、黄酮、芸香苷等），但并非所有的酚类物质都是PPO的底物。在正常发育的植物组织中,底物、氧气、PPO同时存在并不发生褐变，是因为在正常的组织细胞内由于多酚类物质分布在细胞的液泡内，而PPO则分布在各种质体或细胞质中，这种区域性分布使底物与PPO不能接触。而当细胞膜的结构发生变化和破坏时，则为酶创造了与PPO接触的条件，在氧存在的情况下使酚类物质氧化成醌，进行一系列的脱水、聚合反应，最后形成黑褐色物质，从而引起褐变。3防止外植体产生褐变的对策从理论上讲,酶促褐变可以通过以下三种方法加以抑制:一是除去引起氧化的物质——氧；二是捕捉或减少聚合反应的中间产物；三是抑制有关的酶。实际操作上，下列措施是被认为行之有效的。3.1适当外植体的选择取材时应注意选择褐变程度较小的品种和部位作外植体。成年植株比幼苗褐变程度厉害，夏季材料比冬季及早春和秋季材料的褐变要严重。冬季的芽不易生长，宜选用早春和秋季的材料作为外植体。王异星[5]用荔枝无菌苗不同组织的诱导试验表明，茎最容易诱导出愈伤组织，培养2周后长出浅黄色的愈伤组织；叶大部分不能产生愈伤组织或诱导出的愈伤组织中度褐变；而根极大部分不产生愈伤组织，诱导出的愈伤组织全部褐变。3.2对外植体的处理通过对较易褐变的外植体材料的预处理能减轻醌类物质的毒害作用。处理方法如下：外植体经流水冲洗后，在2-5℃的低温下处理12-24小时，再用升汞或70酒精消毒，然后接种于只含有蔗糖的琼脂培养基中培养5-7天，使组织中的酚类物质部分渗入培养基中。取出外植体用0.1漂白粉溶液浸泡10分钟，再接种到合适的培养基中。若仍有酚类物质渗出，3-5天后再转移培养基2-3次，当外植体的切口愈合后，酚类物质减少，这样可使外植体褐变减轻或完全被抑制。何琼英等[6]用抗坏血酸预处理香蕉吸芽外植体，能减轻外植体褐变，从而提高芽丛诱导率。3.3适宜的培养基培养基的成分与褐变程度有关，要考虑所选培养基的状态和类型。3.3.1适当的无机盐浓度张妙霞等[7]在柿树组织培养防止褐变所进行的试验中，4种培养基的无机盐以改良MS(大量元素减半)和1/2MS的效果最好，MS的效果较差，结果证明低浓度的无机盐可促进外植体的生长与分化，减轻外植体褐变的程度。徐振彪[1]在对玉米幼胚耐NaCl愈伤组织的筛选表明，随NaCl浓度升高，褐变现象加重。3.3.2适当和适量的激素王异星[5]在荔枝的组织培养过程中，培养基中添加1mg/LBA 0.5mg/L2,4-D时，愈伤组织较坚硬，增殖缓慢，易产生褐变。培养基中添加1mg/LBA 1mg/L2,4-D时，愈伤组织浅黄疏松，增殖也快。3.3.3培养基的硬度在一定范围内，琼脂用量大，培养基硬度大，褐变率低[8]，这可能是培养基的硬度影响了酚类物质的扩散速度的缘故。3.3.4培养基中水的硬度的影响硬度低的蒸馏水褐变率低,而使用硬度较高的自来水,褐变严重,甚至会出现褐变死亡[8]。这可能是配制培养基的水改变了培养基中无机盐的浓度,间接地影响了植物外植体的褐变。3.3.5培养基的pH值在水稻体细胞培养中，pH值为4.5-5.0时MS液体培养基可保持愈伤组织处于良好的生长状态，其表面呈黄白色，而pH值为5.5-6.0时，愈伤组织严重褐变[9]。一般来说，酸性环境(pH值为4.5-5.0)不利于褐变过程的发生[10]。3.3.6培养条件如温度过高或光照过强，光照会提高PPO的活性，促进多酚类物质的氧化，从而加速被培养的组织褐变。高浓度CO2也会促进褐变，其原因是环境中的CO2向细胞内扩散，细胞内CO32-增多，CO32-与细胞膜上的CO32-结合，使有效CO32-减少，导致内膜系统瓦解，酚类物质与PPO相互接触，产生褐变[11]。因此，初期培养要在黑暗或弱光下进行。3.4添加褐变抑制剂和吸附剂褐变抑制剂主要包括抗氧化剂和PPO抑制剂。在培养基中加入偏二亚硫酸钠、L-半胱氨酸、抗坏血酸、柠檬酸、二硫苏糖醇等抗氧化剂都可以与氧化产物醌发生作用，使其重新还原为酚[12]。由于其作用过程均为消耗性的，在实际应用中应注意添加量，其中L-半胱氨酸和抗坏血酸均对外植体无毒副作用，在生产应用中可不受限制。在水稻细胞的培养基中，添加植酸(PA)，可防止褐变，PA分子中众多的羟基产生抗氧化作用，使生色物质的含量下降或PA与PPO分子中的Cu2 结合，从而降低了其活力。陈学森等[13]在对植酸在银杏组织培养中应用的研究中也证实了植酸具有抑制多酚氧化酶活性的作用。常用的吸附剂有活性炭和聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。活性炭是一种吸附性较强的无机吸附剂，能吸附培养基中的有害物质，包括琼脂中的杂质、培养物在培养过程中分泌的酚、醌类物质以及蔗糖在高压消毒时产生的5-羟甲基糠醛等,从而有利于培养物的生长。粉末状的活性炭与颗粒状的活性炭相比吸附性更强，一般在培养基中加入1-4g/L的活性炭。在使用过程中应注意，尽量用最低浓度的活性炭来对抗褐变的产生，因为活性炭的吸附作用是没有选择性的，在吸附物质的同时，也会吸附培养基中的其他成分，对外植体的诱导分化会产生一定的负面影响[14]。而聚乙烯吡咯烷酮(PVP)是酚类物质的专一性吸附剂，在生化制备中常用作酚类物质和细胞器的保护剂，可用于防止褐变[15]。3.5进行细胞筛选和多次转移在组织培养过程中，经常进行细胞筛选，可以剔除易褐变的细胞。在外植体接种1-2天后应立即转移到新鲜培养基中，能减轻酚类物质对培养物的毒害作用，降低抑制作用，使外植体尽快分生，连续转移5-6次，可基本解决外植体的褐变问题。参考文献：[1]徐振彪等.植物组织培养过程中的褐化现象.国外农学——杂粮作物,1997(1):55～56.[2]符近.三种不同类型种子休眠萌发及马占相思种子老化过程的研究.北京农业大学硕士研究生论文,1996.[3]傅作申，玉米耐NaCl幼胚愈伤组织的筛选及特性分析，长春农牧大学硕士论文，1996.[4]颜昌敏编著，植物组织培养手册，上海科学技术出版社,1990.[5]王异星.荔枝细胞培养的初步研究.暨南大学学报,1997,18(5)：84～85.[6]何琼英等.抗坏血酸预处理阻止香蕉吸芽外植体褐变的研究初报.华南农业大学学报,1995,16(3):79～82.[7]张妙霞.柿树组织培养防止外植体褐变的研究.河南农业大学学报,1999,33(1):87～91.[8]金坚敏.水稻幼穗和成熟种子诱导胚状体时的有关因子探讨.植物学通报，1992,9(2):53～54.[9]金坚敏.水稻幼稿和成熟种子诱导胚状体时的有关因子探讨.植物学通报,1992.[10]王东霞等,如何对抗植物组织中的组织褐变，中国花卉盆景,2002,12:29～30.[11]姚洪军,罗晓芳,田砚亭.植物组织培养外植体褐变的研究进展.北京林业大学学报,1999,21(3):78～83.[12]蔡金星等.不同品种梨多酚氧化酶特性及其抑制剂的研究.河北农业技术师范学院学报,1999,13(1):55～57.[13]陈学森,张艳敏等，植酸在银杏组织培养中应用的研究.天然产物研究与开发,1997,9(2):24～27.[14]刘用生.植物组织培养中活性炭的使用.植物生理学通讯,1994,30(3):214.[15]姚洪军等.植物组织培养外植体褐变的研究进展.北京林业大学学报,1999,21(3):78～84.《论植物组织培养褐变产生的因素及对策》来源于文秘114网，欢迎阅读论植物组织培养褐变产生的因素及对策。－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－ 植物组织培养 植物组织培养即植物无菌培养技术，是根据植物细胞具有全能性的理论，利用植物体离体的器官、组织或细胞，如根、茎、叶、花、果实、种子、胚、胚珠、子房、花药、花粉以及贮藏器官的薄壁组织、维管束组织等，在无菌和适宜的人工培养基及光照、温度等条件下，能诱导出愈伤组织、不定芽、不定根，最后形成完整的植株。至今，世界各国在无性系繁殖、花卉育种、植株脱病毒和种质保存等方面，广泛应用组织培养技术。 （一）组织培养技求的应用 1．无性系繁殖无性系繁殖是植物组织培养应用的主流之一，用植物组织培养进行无性繁殖的优点是，用材少，速度快，不受气候、季节、基质等自然条件的影响，比传统的常规繁殖方法要快得多，人们又叫它'快速繁殖'或'微型繁殖'。其常见繁殖方式有短枝扦插、芽增殖、原球茎、器官分化和胚状体发生。其中芽增殖在盆栽花卉繁殖中应用最为普遍，如草本植物四季秋海棠、鸡冠花、万寿菊、长春花，观叶植物蟆叶秋海棠、网纹草、花叶芋、天鹅绒竹芋，木本植物三角花、比利时杜鹃、月季、八仙花等，在生产实践中，均已取得较好的经济效益。原球茎培养在大花蕙兰、蝴蝶兰、美丽兜兰、石斛、春兰等兰科植物和肾蕨、凤尾蕨、鹿角蕨等观赏蕨的规模性生产中得到广泛应用。胚状体培养，据报道目前已在30个科150种植物上观察到它们的愈伤组织可以分化出胚状体，而盆栽花卉中的花叶芋、山茶花都是成功的范例。器官分化主要是从外植体直接产生不定芽或不定根，一般不通过从愈伤组织进行器官分化形成植株，因为其性状有可能发生变化或经过多次继代培养后，会丧失再生植株的能力。 2．花卉育种当今盆栽花卉育种中，也广泛应用组培技术。 胚培养：在花卉种间杂交或远缘杂交中，有时虽然能正常受精，但胚往往发育不完全或胚与胚乳间不亲和，不能得到种子，可采用胚的早期离体培养促使胚正常发育，培养出杂交后代。如山茶花、百合和鸢尾杂交中均采用幼胚培养，成功地收到了杂交种子。同时，在杂交中受精困难，也可把未受精的胚珠分离出来，在试管内用花粉受精来解决，这在草本花卉花菱草中已取得成功。 单倍体育种：利用花药培养诱导花粉形成单倍体，在试管培养中通过秋水仙素处理，使染色体加倍，而成为纯合二倍体植物，从而缩短新品种育种的时间，还有利于突变中隐性突变的分离。这在花卉的株型、花色、花型的大小或重瓣，叶型、叶色等产生变异，往往有直接利用价值。这在矮牵牛的育种中已应用。 体细胞杂交和植物基因工程：利用原生质体遗传操作技术，可以从原来不大可能进行杂交的不同属植物间获得体细胞杂种或核质杂种。可以通过摄取外源目的基因，定向改造植物的某些重要性状。 3．植株脱病毒用无性繁殖方法来繁衍的花卉种类如菊花、香石竹、郁金香、百合、白鹤芋等，不能通过种子途径去除病毒，用化学方法防治和高温处理往往成效不稳定。作为组织培养的无性繁殖材料，最好是去病毒组织，否则易导致病毒积累，危害加重。而植物的茎尖部分无维管束，病毒难以侵入。所以，茎尖培养是获得无病毒植株的最好途径。至今，茎尖培养脱毒法已在菊花、百合、香石竹、郁金香等盆栽花卉上推广使用。 4．种质保存用无性繁殖的植物，因没有种子，只能在植物园内长期栽培保存，耗费大量的土地和劳力。种质材料还易受自然环境的变化和病虫危害而流失。若用组织培养方法，保存愈伤组织、胚状体、茎尖等组织，可节省大量人力和物力。 （二）组织培养的几个步骤 1．材料的选用一般用于组织培养的材料称为外植体。常分为两类。一类是带芽的外植体，如茎尖、侧芽、鳞芽、原球茎等，组织培养过程中可直接诱导丛生芽的产生。其获得再生植株的成功率较高，变异性也较小，易保持材料的优良性状。另一类主要是根、茎、叶等营养器官和花药、花瓣、花轴、花萼、胚珠、果实等生殖器官。这一类外植体需要一个脱分化过程，经过愈伤组织阶段，再分化出芽或产生胚状体，然后形成再生植株。 外植体的取用与组织部位、植株年龄、取材季节以及植株的生理状态、质量，都对培养时器官的分化有一定影响。一般阶段发育年幼的实生苗比发育年龄老的栽培品种容易分化，顶芽比腋芽容易分化，萌动的芽比休眠芽容易分化。在组织培养中，最常用的外植体是茎尖，通常切块在0．5厘米左右，太小产生愈伤组织的能力差，太大则在培养瓶中占据空间太多。培养脱毒种苗，常用茎尖分生组织部，长度为0．1毫米以下。 2．外植体的消毒植物组培能否取得成功的重要因素之一，就是保证培养物在无菌条件下安全生长。为此，必须抓好外植体的消毒和实行无菌操作。 由于培养的植物材料大都采集于田间栽培植株，材料上常附有各种微生物，一旦被带入培养基，即会迅速繁殖滋长，造成污染，培养失败。所以培养前必须对外植体进行严格的消毒处理，消毒的尺度为既能全都杀灭外植体上附带的微生物，但又不伤害材料的生活力。因此，必须正确选择消毒剂和使用的浓度、处理时间及程序。目前，常用的消毒剂有次氯酸钙、氯化汞、次氯酸钠、双氧水、酒精（70％）等。具体消毒方法如下： （1）茎尖、茎、叶片的消毒消毒前先用清水漂洗干净或用软毛刷将尘埃刷除，茸毛较多的用皂液洗涤，然后再用清水洗去皂液，洗后用吸水纸吸干表面水分，用70％酒精浸数秒钟，取出后及时用10％次氯酸钙饱和上清液浸泡10～20分钟。或用2％～10％次氯酸钠溶液浸泡6～15分钟。消毒后用无菌水冲洗3次，用无菌纱布或无菌纸吸干接种。 （2）根、块茎、鳞茎的消毒这类材料大都生长在土中，常带有泥土，挖取时易遭损伤。消毒前必须先用净水清洗干净，在凹凸不平处以及鳞片缝隙处，均用毛笔或软刷将污物清除干净，用吸水纸吸干后，在70％酒精中浸一下，然后用6％～10％次氯酸钠溶液浸5～15分钟，或用0．1％～0．2％氯化汞消毒5～10分钟，最后用无菌水清洗3～4次，用无菌纱布或无菌纸吸干后接种。 （3）果实、种子的消毒这类材料有的表皮上具有茸毛或蜡质，消毒前先用70％酒精浸泡几秒钟或2～10分钟，然后用饱和漂白粉上清液消毒10～30分钟或2％次氯酸钠溶液浸10～20分钟，消毒后去除果皮，取出内部组织或种子接种。直接用种子或果实消毒，经消毒后的材料均须用无菌水多次冲洗后接种。 （4）花药、花粉的消毒植物的花药外面常被花瓣、花萼包裹着，一般处于无菌状态，只需采用表面消毒即可接种。通常先用70％酒精棉球擦拭花蕾或叶鞘，然后将花蕾剥出，在饱和漂白粉上清液中浸泡10～15分钟，用无菌水冲洗2～3次，吸干后即可接种。 3．组织培养的条件接种后的培养容器置放培养室，室温应控制在23～26℃，每天12～16小时光照，光照度为1000～3000勒克斯。 4．外植体的增殖接种后的外植体要分化出丛状芽、愈伤组织或胚状体，必须对培养基及激素的种类和浓度进行严格的设计和筛选。常用的基本培养基为MS培养基，激素的种类和浓度对外植体的分化和增殖起到重要的作用。也就是说不同的花卉种类对激素的种类和浓度是有差别的（表4－－3）。 5．诱导生根继代培养形成的不定芽和侧芽等一般没有根，要促使试管苗生根，必须转移到生根培养基上，生根培养基一般应用1／2MS培养基，因为降低无机盐浓度有利于根的分化。同时，不同盆栽花卉诱导生根时所需要的生长素的种类和浓度是不同的（表4－4）。一般常用吲哚乙酸（IAA）、萘乙酸（NAA）和吲哚丁酸（IBA）三种。一般在生根培养基中培养1个月左右即可获得健壮根系。 6．组培苗的移栽生根或形成根原基的试管苗从无菌，温、光、湿度稳定环境中进入到自然环境中，从异养过渡到自养过程，必须经过一个炼苗过程。首先打开试管瓶塞放阳光充足处让其锻炼1～2天，然后取出幼苗用温水将琼脂冲洗掉，移栽到泥炭、珍珠岩、蛭石、砻糠灰等组成的基质中，基质使用前需高温消毒，移栽后要适当遮荫，可用塑料薄膜覆盖，保持较高空气湿度，温度维持在25℃左右，勿使阳光直晒，7～10天后要注意通风和补充浇水，约20～40天，新梢开始生长后，小苗可转入正常管理。
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