血细胞形态识别究论文研究背景

血细胞分析仪检测血小板影响因素影响策略论文

在当前医疗技术的发展与促进作用之下，血细胞分析仪被广泛应用于基层医院的检验科室当中。实践经验显示：血细胞分析仪作用于检验，具有操作简单，响应迅速、重复性好、以及数据精确度高在内的多方面确切优势[1-2]。但受到自身检测原理的限制性影响，导致在临床对血细胞分析仪进行应用的过程当中，会受到大量内外部因素的影响。特别是对血小板的检测而言，计数结果会受多种因素影响而出现偏差，成为了临床中反应较多的问题之一。从这一角度上来说，如何明确血细胞分析仪在检测血小板过程当中的影响因素，落实相应的纠正与控制方法，这一问题备受医务工作者的关注与重视。本文选取2014年1-3月，健康体检对象共计50例作为研究对象，应用血细胞分析仪对其血小板计数结果进行分析，具体总结如下。

1 资料与方法

一般资料

选取自2014年1-3月，健康体检对象共计50例作为研究对象。对所有入选对象的一般资料进行回顾分析：男27例，女23例，年龄1～72岁，平均(±)岁。

方法

使用希森美KX-21型全自动血细胞分析仪，对所有入选对象进行血小板计数检测工作。由希森美公司提供溶血剂以及稀释液。在空腹状态下，分别实施静脉抽血(血样剂量为2 ml)以及末梢采血(血样剂量为120 μl)，使用 mg单位EDTA抗凝管储存分析。分别实施仪器法以及手工法两种检测方案。计数作业分别进行3次，取平均值作为最终计数结果。

观察指标

对仪器法以及手工法下，不同时间状态下所对应的血小板计数情况进行观察对比，同时对静脉血以及末梢血下的血小板计数检测结果进行对比。

统计学处理

采用SPSS 软件对所得数据进行统计分析，计量资料用均数±标准差(x±s)表示，比较采用t检验;P<为差异有统计学意义。

2 结果

在分别应用仪器法以及手工法进行血小板计数的过程当中，即刻测定状态下，仪器法检出数据明显低于手工法检出数据，对比差异有统计学意义(P<);静置10 p="">);静置8 h后，仪器法检出数据明显低于对照组，对比差异有统计学意(P<)，见表1。在不同采血区域进行血小板计数的过程当中，采集静脉血血小板计数为(±)×109 p="">)。

3 讨论

血浆中血小板体积小，无色，且黏附性高。当血液自血管破损位置流出后，血小板一旦与破损血管的内皮细胞或组织成分发生接触反应，则势必会迅速粘附于血管壁之上。再加上在应用血细胞分析仪对血小板进行检测的过程当中，血浆标本需要与抗凝管表面发生接触反应，故而最终导致血小板大量粘附于抗凝管内壁并发生聚集反应，造成血小板计数上的偏差问题[3]。从这一角度上来说，无论是在仪器法还是手工法作用下，所采集血小板数均较实际数据更低。同时，本次研究中数据显示：采集末梢血与静脉血进行对比中，两者所对应的血小板计数结果差异无统计学意义(P>)。但需要注意的是：相较于静脉血而言，末梢血采集中潜在大量的影响因素(包括扎针深度、取血速度等等在内)，都将对最终所生成的血小板计数结果产生影响。因此，在条件允许的情况下，推荐采集静脉血样完成血细胞分析工作。若必须以末梢血进行分析，则要求满足扎针3 mm深度，且血样应当自然流出，以保障血小板检出数据的精确性。

同时，有关研究报道中显示：对于抗凝剂而言，在应用血细胞分析仪对血小板展开检测作业的过程当中，检测结果很大程度上会受到抗凝剂类型的影响[4]。当前，国际化学标准委员会所推荐的抗凝剂为EDTA二钾抗凝，应用该推荐抗凝剂，可最大限度的保障检测结果的`精确性。同时，血液与抗凝剂之间的比例关系也会对检测质量产生相当重大的影响。有关临床研究中指出：在受检血液比例过高的情况下，由于抗凝剂无法与之形成匹配关系，进而可能导致待检测血浆样本当中出现微血块。而微血块的产生势必会导致血细胞分析仪被堵塞，造成检测结果上的偏差。反过来说，在受检血液比例过低的情况下，抗凝剂同样无法与之形成匹配关系，主要表现为浓度的提升，带动血浆样本当中血小板的肿胀与崩解反应，产生大量与血小板大小基本一致的碎片，导致计数过程当中容易发生偏差[5-6]。

同时，本次研究数据中显示：在分别应用仪器法以及手工法进行血小板计数的过程当中，即刻测定数据以及放置8 h后的测定数据组间对比差异有统计学意义(P<)。这一研究数据提示：一方面，在抗凝剂对血小板黏附性以及聚集性进行一致的同时，会导致血小板形态自双凹模式转变为球形模式，体积明显增大，即刻上机测试下，导致血小板测定数据明显较低。而在放置10 p="">)。同时，随着放置时间的延长，血小板计数有一定的下降趋势，且在8 h开始呈现出显著差异，提示测定时间同样是造成血小板计数偏差的关键影响因素之一。

结合相关研究数据而言，无论是对于光散法还是对于阻抗法而言，在应用血细胞分析仪对血小板进行计数的过程当中，结果基本可靠且稳定。但对于存在血小板形态异常以及明显降低的对象而言，不同方法下的计数结果往往会产生较大的差异。因此，在病理因素影响下，血浆中会产生大量的非血小板颗粒，最终导致计数结果假性增多。当前相关报道当中认为能够确保血小板计数准确的方法有两种类型：第一类是建立在免疫学基础之上的计数方法，即使用荧光对血浆样本中的抗血小板抗体进行标记;第二类是建立在激光散射基础之上的测定方法，在激光散射计数干预下，分离非血小板颗粒以及血小板，从而确保计数的准确性[7-8]。但以上两种方法成本较高，普及性较差。故而当前所选取的复查方式主要以手工计数法为主。针对本方法计数精确性上的却是可以增加一项在血涂片上间接计数血小板的方法作为补充，使用抗凝血液推血片，在瑞氏蚺蛇处理下计数1000个红细胞及对应的血小板，根据两者之间的比值，按照血小板计数/红细胞计数×红细胞计数的方式，求得最终数据[9-10]。根据以上措施的落实，配合与临床医师之间的密切联系，能够达到消除血小板计数误差，提高血细胞分析精度的目的。

综上所述，实践工作中需要重视对抗凝剂类型、采血区域、放置时间等影响因素的分析与控制，必要时进行涂片以及直接计数复查，配合与临床医师之间的密切联系，能够达到消除血小板计数误差，提高血细胞分析精度的目的。

参考文献

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[2]胡明定.病毒性肝炎所致肝硬化患者血小板检测的临床意义[J].中国医药指南，2013，11(19)：600-601.

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[5]吴君霞，范贤峰，许赣，等.肝豆状核变性患者血凝指标与血小板检测的临床意义[J].临床输血与检验，2011，13(3)：231-233.

[6]李勇，慕悦意，夏永辉，等.SysmexXE-5000血液分析仪对血液疾病血小板检测的应用价值[J].中国血液流变学杂志，2011，21(2)：329-332，369.

在列文虎克使用显微镜观察血液细胞后相当长一段时间内，血液形态学的观察基本上停滞不前，主要是由于显微镜制造技术没有改进，显微镜在当时更多地是作为一种上流社会、家庭的摆设，而不是科学研究的工具。18世纪中叶，英国医学家黑森应用他自己改进了的显微镜，测量了不同动物血细胞的大小和形状。他发现红细胞通常是扁平状而不是球形的。他还发现血液的凝集发生的血浆中，而不是在红细胞中。由于黑森的这些开创性的研究，在英国他被称为血液学之父。

到了19世纪30年代，科学家研制成功了消色差透镜和复式显微镜，为科学观察者提供了更清晰的观察视野。新工具的出现激起了科学家进一步深入观察微观世界的热情，这时有位法国医生安德烈开始注意到某些疾病与血液中细胞成分变化之间有着密切的联系。当时布朗学说在医学中占据着主导地位，布朗学说认为人体的大多数疾病是由于胃肠道不良刺激的结果，提出通便和放血是这类疾病的基本治疗手段。这一学说的流行程度可以从下面的数据得到验证：当时医生除使用静脉切开放血之外，更大量的放血方法是利用水蛭吸血，因为静脉切开毕竟还是有一定的危险性的。由于大量的放血治疗，造成法国的水蛭供不应求。1833年，法国在一年内进口水蛭4150万条。

由于放血治疗的流行，贫血因此成为一种常见的症状。安德烈在临床研究中，发现许多贫血病人的红细胞数量、浓度、大小和形状都在不同程度上表现出异常。安德烈首先提出贫血可能是红细胞被破坏(溶血)的结果，他把贫血描述为红细胞数量的减少，他认为贫血与萎黄病——由于患此病的病人肤色昏暗，又被称为“处女菜色”——有关。他首先观察到萎黄病病人的红细胞变小。现在医生认为这种疾病主要可能是缺铁性贫血，神经性厌食的病人也会出现萎黄病症状。同时，安德烈还仔细观察了多血症、炎症、热病、出血以及水肿病人的血液变化，并测定了血液中球蛋白和白蛋白的含量，是血液学定量研究的开拓者。在法国安德烈被称为血液学之父。

虽然在18世纪已有人描述了白细胞的形态，但直到19世纪英国医生阿迪森和德国医学家维尔肖发现白细胞与炎症之间的关系之前，人们似乎不太重视白细胞的研究。阿迪森在研究观察炎症时发现，血液中有一种“五色颗粒”可穿过血管壁，移向炎症发生的部位并形成脓液。19世纪末，新的染色技术使白细胞形态学得到发展。1880年，德国医学家艾利希利用染料使白细胞着色，并发明了根据白细胞染色性质的不同而给白细胞命名的方法，例如嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞。至今人们依然使用这种命名方法。

白细胞具有重要的生理功能。艾利希认为白细胞起着保护机体免于细菌侵入的作用。在巴黎巴斯德研究所工作的俄国科学家梅契尼柯夫也提出了白细胞有免疫功能的观点。他还发现了吞噬细胞的功能，即一种细胞可以吞噬另一种细胞。梅契尼柯夫对医学研究的着迷程度使得一般人认为他的行为似乎有点怪异。一位著名分子生物学家回忆说，在他童年时，梅契尼柯夫到他家做客，梅契尼柯夫外衣口袋里装着含有血液的试管和其他实验用品。给他留下了深刻的印象。梅契尼柯夫敏锐的洞察力使他赢得了1908年诺贝尔医学奖。

我们现在都知道血小板是血液中第三类重要的细胞成分。然而，当初医学界对血小板是否是一类独立的细胞成分这一问题存在着激烈的争论。这一是因为血小板太小，只有红细胞直径的四分之一大小，二是因为它的形态多变。

1842年，法国医生多勒首先提出血小板是血液中第三类重要的细胞成分。1868年，意大利解剖学家比佐泽罗也认为这些微小的血液细胞产生于骨髓，代表着一个独特的细胞系列。他还提出了血小板可能引起血液凝固的连锁反应。但是，当时法国著名医学家、法国医学科学院院士哈姆耶则认为血小板是红细胞的前体。虽然他在实验中正确地阐明了血小板与止血之间的关系，但在血小板的形态学研究上却得出了错误的结论。由于哈耶姆的学术地位很高又生性固执，直至20世纪血小板的细胞形态学已经得到了充分的实验证明后，他依然顽固地坚持自己的观点。哈耶姆所犯妁错误是那些处于医学权威位置上的人按照自己的观点判断事实，进而制造偏见的结果。

在现代社会，脑血管和心血管栓塞已成为现代人死亡的主要原因之一，在研究血小板的文献日益增加的同时，科学家对血小板功能的遗传学和生物化学特性的认识也日渐深入。他们将这些认识应用到抗血小板作用药物的开发中，所取得的最重要的成果之一是加拿大科学家在1980年报告一项长期研究结果，即科学家提出阿司匹林能预防男性的冠状动脉的血栓形成。然而，近30年来的研究表明，抗血小板药物在预防心脏病和卒中中的作用仍未完全解决。

根据研究内容和范畴的不同可细分为：①血细胞形态学：研究对象为血液中有形成分的形态。②血细胞生理学：研究对象为细胞来源、增殖、分化和功能。③血液生化学： 研究对象为血细胞代谢和血浆成分。④血液免疫学： 研究对象为血细胞免疫和体液免疫。⑤遗传血液学： 研究对象为血液病遗传方式和信息传递。⑥血液流变学： 研究对象为血液流动性和血细胞变形性。⑦实验血液学： 研究对象为实验技术和实验方法。 临床血液学（clinical hematology）是以来源于血液和造血组织的原发性血液病以及非血液病所致的继发性血液病为主要研究对象，基础理论与临床实践紧密结合的一门综合性临床学科。临床血液学重点研究各种血液疾病（如白血病、再障、血友病、深静脉血栓形成等）的致病原因、发病机制、临床表现、和诊治措施等。此外，也研究临床其它各科疾病（如肝脏病、肾脏病、冠心病、糖尿病、脑血管病、呼吸病、传染病、产科病、恶性肿瘤、遗传病以及外科手术、严重创伤、药物治疗等）所引起的血液学异常。