发布时间：
浅议《格尔尼卡》及作者毕加索作者：毕加索（1881～1973）出生在西班牙，是当代西方最有创造性和影响最深远的艺术家，他和他的画在世界艺术史上占据了不朽的地位。毕加索的一生辉煌之至，他是有史以来第一个活着亲眼看到自己的作品被收藏进卢浮宫的画家。《格尔尼卡》，毕加索作，1937年，布面油画，349.3×776.6厘米，索菲亚皇后博物馆藏。油画《格尔尼卡》，是立体主义的领导人毕加索作于20世纪30年代的一件具有重大影响及历史意义的杰作。此画是受西班牙共和国政府的委托，为1937年在巴黎举行的国际博览会西班牙馆而创作，是表现战争题材且具有纪念意义的作品。画中表现的是1935年纳粹德国空军疯狂轰炸西班牙小城格尔尼卡的暴行。作为一个具有强烈正义感的艺术家，毕加索对于这一野蛮行径表现出无比的愤慨。他仅用了几个星期便完成这幅巨作，作为对法西斯兽行的谴责和抗议。毕加索他那潜在的变现主义再次迸发出来，线条扭曲着，膨胀着，激情在奔腾驰骋，这便是《格尔尼卡》。作品以强音奏出了悲怆曲，在西方绘画史上第一次单纯的以造型标注经历过的事件，并使我们感到极端的恐惧。我们看到悲剧与诙谐，挖苦与怜悯，生命的颤动与死亡的静止。作品充分表现了法西斯暴行的残酷和人民受难的痛苦。整幅画用黑白灰三色绘成，错综复杂的黑白灰色块造成画面阴郁、恐怖的效果；不规则的线条形成的角和弧的交错，给人一种支离破碎和动乱的感觉。画面沉重又压抑，充满了悲剧气氛。这幅画控诉了法西斯的罪恶，对战争给人民带来的灾难表示了悲哀和同情。这幅画曾到挪威、英国、美国各地展出，反响非常强烈。创作背景西班牙杰出画家、法国现代画派的主要代表毕加索，1881年出生于西班牙一个图画教师的家庭，1904年定居巴黎。他最初的画比较写实，绘画的主题主要是对乞丐、流浪艺人、演马戏者等人物的深切同情；后来他从形式上求奇异，成了立体派的代表人物。所谓立体派，是把物体分割成各种几何形体，然后再重叠、堆砌在一个平面的画幅上，因此完全改变了物体原有的形态，他创作的油画《格尔尼卡》就是他的代表作。1937年4月26日，那本应该是“人间四月天”，德国法西斯空军恣意轰炸了西班牙历史名城——风光旖旎的小镇格尔尼卡，当时恰逢集市，2000名无辜平民丧生，格尔尼卡被夷为平地。这一事件震撼了全世界，也震撼了毕加索。愤怒的画家毕加索，挥笔创作了大型油画《格尔尼卡》。七十年过去，这幅杰作已经成为警示战争灾难的文化符号之一，也使格尔尼卡的悲剧永远留在了人类伤痕累累的记忆中。画面里没有飞机，没有炸弹，却聚集了残暴、恐怖、痛苦、绝望、死亡和呐喊。被践踏的鲜花、断裂的肢体，号啕大哭的母亲、仰天狂叫的求救，断臂倒地的男子、濒死长嘶的马匹……这是对法西斯暴行的无声控诉，撕裂长空。画家以半抽象的立体主义手法，以超时空的形象组合，打破了空间界限，蕴含了愤懑的抗议，成就了史诗的悲壮；在支离破碎的黑白灰色块中，散发着无尽的阴郁、恐惧，折射出画家对人类苦难的强大悲悯。面对痛彻心扉的人间惨剧，不同的艺术家有不同的反应，格尔尼卡被法西斯空军轰炸，就是给了艺术家们一道无声的考题。有没有慈悲的情怀，就是能不能触动心灵创作的前提。毕加索说：“我是依我所想来画对象，而不是依我所见来画的。”当时侨居巴黎的毕加索，受西班牙政府委托，正准备为参加巴黎国际博览会的西班牙馆创作绘画作品。德军轰炸格尔尼卡的消息传来，毕加索震怒了，他就以格尔尼卡被轰炸为题材，依他所想来为西班牙馆作画，将法西斯惨无人道的罪行彻底曝光在世人面前。艺术的创作者，是必须悟透艺术真谛的。就像中国漫画家丰子恺所说的：艺术不是技巧的事业，而是心灵的事业。《格尔尼卡》问世后，曾在一些国家展出，受到爱好和平者的高度评价，毕加索也因此备受世界人民的尊敬。佛朗哥独裁统治时期，《格尔尼卡》无法在画家的祖国展出。直到1981年，《格尔尼卡》才回到西班牙，实现了毕加索的遗愿。在巴黎毕加索艺术馆，曾发生了一件小事：一天，一些德国军人来此参观，毕加索发给他们每人一幅《格尔尼卡》的复制品。一名军官问毕加索：“这是您的杰作吗？”毕加索回答：“不，这是你们的杰作！”画作赏析毕加索虽然热衷于前卫艺术创新，然而却并不放弃对现实的表现，他说：“我不是一个超现实主义者，我从来没有脱离过现实。我总是待在现实的真实情况之中。”这或许也是他选择画《格尔尼卡》的一个重要原因吧。然而他此画的对于现实的表现，却与传统现实主义的表现方法截然不同。他画中那种丰富的象征性，在普通现实主义的作品中是很难找到的。毕加索自己曾解释此画图像的象征含义，称公牛象征残暴，代表的是凶残的德国和法西斯，受伤的马象征受难的西班牙，闪亮的灯火象征着光明与希望……当然，画中也有许多现实情景的描绘。画的左边，一个妇女怀抱死去的婴儿仰天哭号，她的下方是一个手握鲜花与断剑张臂倒地的士兵。画的右边，一个从楼上跳下来的人高举双手仰天尖叫，在他后面，是熊熊的火焰。离他不远处，那个俯身奔逃的女子是那样地仓惶，以致她的后腿似乎跟不上而远远落在了身后。这一切，都是可怕的空炸中受难者的真实写照。 零乱的肢体从各个角度诉说着当时德国法西斯人性的残忍画中的诸多图像反映了画家对于传统绘画因素的吸收。那个怀抱死去孩子的母亲图像，似乎是源自哀悼基督的圣母像传统；手持油灯的女人，使人联想起自由女神像的造型；那个高举双手仰天惊呼的形象，与戈雅画中爱国者就义的身姿不无相似之处；而那个张臂倒地的士兵形象，则似乎与意大利文艺复兴早期某些战争画中的形象，有着姻亲关系。由此可以看出，毕加索不仅是一位富于叛逆精神的大胆创新者，同时也是一位尊崇和精通传统的艺术家。乍看起来，这幅画在形象的组织及构图的安排上显得十分随意，我们甚至会觉得它有些杂乱。这似乎与轰炸时居民四散奔逃、惊恐万状的混乱气氛相一致。然而，当我们细察此画，却发现在这长条形的画面空间里，所有形体与图像的安排，都是经过了精细的构思与推敲，而有着严整统一的秩序。虽然诸多形象皆富于动感，可是它们的组构形式却明显流露出某种古典意味。我们看见，在画面正中央，不同的亮色图像互相交叠，构成了一个等腰三角形；三角形的中轴，恰好将整幅长条形画面均分为两个正方形。而画面左右两端的图像又是那样地相互平衡。可以说，这种所谓金字塔式的构图，与达芬奇(最后的晚餐)的构图，有着某种相似的特质。另外，全画从左至右可分为四段：第一段突出显示了公牛的形象；第二段强调受伤挣扎的马，其上方那盏耀眼的电灯看起来好似一只惊恐、孤独的眼睛；第三段，最显眼的是那个举着灯火从窗子里伸出头来的“自由女神”；而在第四段，那个双臂伸向天空的惊恐的男子形象，一下于就把我们的视线吸引，其绝望的姿态使人过目难忘。毕加索以这种精心组织的构图，将一个个充满动感与刺激的夸张变形的形象，表现得统一有序，既刻画出丰富多变的细节，又突出与强调了重点，显示出深厚的艺术功力。在这里，毕加索仍然采用了剪贴画的艺术语言。不过，画中那种剪贴的视觉效果，并不是以真正的剪贴手段来达到的，而是通过手绘的方式表现出来。那一块叠着另一块的“剪贴”图形，仅限于黑、白、灰三色，从而有效地突出了画面的紧张与恐怖气氛。《格尔尼卡》问世后，曾在一些国家展出，受到爱好和平者的高度评价，毕加索也因此备受世界人民的尊敬。佛朗哥独裁统治时期，《格尔尼卡》无法在画家的祖国展出。直到1981年，《格尔尼卡》才回到西班牙，实现了毕加索的遗愿。这幅画中给人印象深刻的“点灯眼”、和“比目牛”成为日后毕加索的代表形象。向作者致敬毕加索是位多产画家，据统计，他的作品总计近37000件，包括：油画1885幅，素描7089幅，版画20000幅，平版画6121幅。毕加索的一生辉煌之至，他是有史以来第一个活着亲眼看到自己的作品被收藏进卢浮宫的画家。在1999年12月法国一家报纸进行的一次民意调查中，他以40％的高票当选为20世纪最伟大的十位画家之首。对于作品，毕加索说：“我的每一幅画中都装有我的血，这就是我的画的含义。”全世界前10名最高拍卖价的画作里面，毕加索的作品就占据4幅。毕加索是个不断变化艺术手法的探求者，印象派、后期印象派、野兽的艺术手法都被他汲取改选为自己的风格。他的才能在于，他的各种变异风格中，都保持自己粗犷刚劲的个性，而且在各种手法的使用中，都能达到内部的统一与和谐。他有过登峰造极的境界，他的作品不论是陶瓷、版画、雕刻都如童稚般的游戏。在他一生中，从来没有特定的老师，也没有特定的子弟，但凡是在二十世纪活跃的画家，没有一个人能将毕加索打开的前进道路完全迂回而进。他静静地离去，走完了九十二岁的漫长生涯，如愿以偿地度过了一生。
创新能力是当今企业在竞争激烈的全球化市场中生存和发展的关键因素,而创新设计作为产品设计中的核心内容,很大程度上决定着企业的竞争力。下面是我为大家整理的服装创新论文，供大家参考。
服装创新论文 范文 一：小议针织服装的创新设计
一、针织服装发展现状
(1)个性化。正如范思哲所说，“如果不能穿出自我，我宁可不穿衣服”。在现今社会当中，自由民主的政治体系加强了消费者自我意识，大学生则是鲜明代表。“破洞”、“铆钉”、“色彩的碰撞”、“拼接”等一系列的设计手段，也将进一步运用到针织服装设计领域，打造别样的个性化服装。
(2)休闲化。相较于文艺复兴时期的服饰，现代服饰最大的特点便是舒适，便于日常生活。为了适应快节奏的现代生活，“服装人体工程学”被推上一个新的高度，舒适度成为消费者最为关注的要素之一，就此针织服装备受青睐。
二、大学生针织服装喜好
为了迎合大学生消费者的不同喜好，市面上的针织服装主要分为“欧美简约风”、“日系甜美风”、“创意另类风”，三种风格在款式、色彩上都具有其鲜明的设计特点。“欧美简约风”主张大气，款式简约，“镂空”、“拼接”等设计手法强调其强烈设计感。“日系甜美风”崇尚自然而反对虚假的华丽、烦琐的装饰和雕琢的美。款式可爱俏皮，圆润的领形、条纹或是可爱图案是日韩风针织服装主要设计点。“创意另类风”多数运用了另类的图案或是朋克摇滚风的设计元素，如“铆钉”、“皮革”、“金属”等，色彩为深色系，黑红色偏多。就“欧美简约风”、“日系甜美风”、“创意另类风”，我们利用眼动仪对一千多名志愿者进行测试，分析测试所得十组有效数据(如下表所示)。以上数据足以说明在所分的三类针织衫风格中，最受消费者欢迎的是“日系甜美风”，其次为“欧美简约风”，而“创意另类风”的针织服饰由于其本身具有的特定元素以及当代大学生的心理接受等因素，并不是非常被关注。基于“日系甜美风”是最受大学生关注的服装风格，我们同样运用眼动仪针对此类款式进行了研究，数据如图1、图2所示。我们不难发现，在针织服装中，现阶段带图案的针织服装占据市场主导地位，在“日系甜美风”中尤为明显。再者，其消费者所关注图案设计的比重占整件服装的各局部细节设计的比重的50%以上。由此我们得出结论，对于针织衫而言，图案、色彩是很重要的设计元素，在设计针织衫时，应该突破大多数针织衫黑白灰等浊色调的桎梏，使针织面料的色彩尽可能地丰富多彩。
三、趋势下的创新设计
经过上述调查及数据显示，我国大学生针织服装设计尚不成熟，其主要表现为针织服装款式不够新颖脱俗。但事实上，由于其特有的弹性与针织肌理，针织面料的可塑性极强。时代在发展，针织服装设计也将被赋予新的使命———打破穿同款式限制，寻求创新设计。
1面料设计新思路
俗话说得好，“巧妇难为无米之炊”，服装面料是设计的第一要素，往往一个好的设计师的设计工作从面料就已经开始。而对于针织面料而言，纱线的设计、特殊的 编织 方式赋予它更多变化的可能。在针织服装设计中，选择有表现力的纱线是一件针织服装设计成功的一半。设计师必须对纱线的发展潜力和可塑性以及针织机的性能都有足够的认识，才能把他们的创意发挥得淋漓尽致。从常规纱线入手，利用不同数量比例的不同品种纱线进行混合编织，从而展示针织面料的节奏与韵律，这早已算不上是创新之法。而通过纱线色彩和外形上的变化，结合相应其他材料(如梭织面料、串珠、亮片、蕾丝、金银线等)，运用多种多样的编织方式(即钩织、棒织等)有机结合可打破常规针织服装设计局限性，创造出丰富多变的视觉效果。
2造型设计新突破
由于传统针织服装的造型款式太过单一，现代针织衫必须在原有造型基础上加以改变，赋予其时尚年轻化的造型感。例如:袖形，可以采用宽松的蝙蝠袖;领形，设计为荷叶领、自由领等。甚至，在造型廓形上可以有更为大胆的设计，力求通过结构和服装组合形式打造针织服装立体造型，并且利用针织面料本身的弹性，在服装穿着上进行适当调整，呈现不同的形态，实现针织服装“一衣多穿”的功能。从而让“朴素、平板”针织服装，从轮廓上逐步接近梭织服装的多样化设计。
3图案运用新主张
色彩与图案非常讨巧，且具有鲜明视觉冲击力，是服装设计中的两大重要元素，也是设计师在针织服装设计过程中的常用手法，“条纹、菱形格、图案”则是其钟爱的。随着工业化生产及此类针织服装的普及，仅仅是这样的图案似乎已经不能满足消费者的好奇心，在原有的图案上进行创新则是针织服装图案设计的必然选择。使用梭织服装的图案设计手法，如印花、染色等二次设计;平面与立体相结合，运用钉珠、绣花、烫钻等手法使服装在保持原有风格的同时，丰富服装平面设计感，使服装整体更显趣味性。
四、结论
在不知不觉中，针织服装已变成一个极具发展潜力的服装门类，以其独特的视觉效果和穿着的舒适性吸引着大学生消费者。然而，国内针织服装尚且存在设计朴素、死板等问题。针织服装创新设计是立足于市场现状、消费者喜好的一次思考，只有打破常规，从根本上提高针织服装设计水平，才能使针织服装实用性与艺术性相结合，跟上时代的步伐。
服装创新论文范文二：审美法则与服装创新设计研究
所谓的绘画和表现，其实是一种后天可以弥补的表达工具而已。唯有这种对思想的训练，是非自己不能修炼的。因此，我们把它称之为设计的天赋。当你有了这种习惯思考的天赋，那么整个人都变成了易燃体，只等着灵感的火花把你引爆。但是，对于把设计当成常态如一日三餐一样的设计工作者，相比与等待灵感，更需要学会储存灵感，或者寻找、制造灵感。
灵感可能只是一个物象，也可能直接是一段技术上的想法。以服装设计为例，灵感分为直接灵感和间接灵感。直接灵感看似好用，但其实比较忌讳直接的使用，因为直接使用在无形中就会限制你的发挥空间，例如面对一块面料，第一眼见它的印象，会引导你做出常规式设计，这源于人们约定俗成的 经验 ，能获得习惯性认可，但是很有可能新意不足，没有惊喜。而间接灵感的运用，则需要丰富的联想和打散重构，在设计过程中不可控的因素较多，略有难度，但是却可能创造出感染力非常强的作品。二者各有利弊，需要根据具体的设计目的而进行权衡选择。市场化的服装设计以运用直接灵感来源为主，间接灵感参考为辅，可以很好的在规矩之内尽显方圆;而创意服装设计则尽量避免运用直接灵感，如以某大师的风格甚至是某款服装成为设计的灵感来源，在接下来的设计创作中，就会很难摆脱人们对此作品固有的印象。但是如果尝试将经典高雅的可可•香奈儿套装，解构成薇薇安•韦斯特伍德的叛逆摇滚，这种反常规的嫁接，通过联想能力，将灵感理念和服装元素联系到一起，通过颠覆性的思维舞蹈过程，如果做得巧妙，就很可能有如新星爆炸一样的效果。
俗语说，没有规矩，不成方圆。真正的强者，不会惧怕规则，而是会让规矩成就自己。首先，所有视觉设计艺术工作者共同的规则就是：形式美法则。早在人们思想蒙昧茹毛饮血的远古时代，就有敏感的艺术家们观察到了自然界中不可言说的美妙规律，例如松果，凤梨上螺旋交叉的分割，花瓣的排列，游鱼的形状等，并从实物中提取出共同的特点，用点、线、面这几种基本的符号表达在了自己的泥瓦灌上。直到人类文明高度发达后，一些智者找到了这些触动人类天生敏感的审美触觉的规律，是斐波那契数列，也是著名的黄金分割比。
黄金分割为公元前六世纪古希腊数学家毕达哥拉斯所发现，是一个数字的比例关系，它具有严格的比例性、艺术性、和谐性，蕴藏着丰富的美学价值。为什么人们对这样的比例，会本能地感到美的存在?其实这与人类的演化和人体正常发育密切相关。据研究，从猿到人的进化过程中，人体中有许多比例关系接近0.618，从而使人体美在几十万年的历史积淀中固定下来。人类最熟悉自己，势必将人体美作为最高的审美标准;于是黄金分割律作为一种重要形式美法则，成为世代相传的审美经典规律，至今不衰。而这就成为了艺术设计界的黄金法则，更是服装设计中需要遵循的视觉准则。
除了单纯视觉上的审美需求，人们对服装同样有着最基本的审美原则要求，通过审美法则，从而实现人与服装、人与环境之间以及“形式美”与“功效性”在服装设计中的和谐与统一，使服装介质的各个指标与人体各种要求相适应，让服装的艺术成分与穿着效果达到最佳匹配。因此，仅仅从造型上论，无论多么惊世骇俗的作品，哪怕前卫设计作品中常见的将服装的材质替换成塑胶或者金属，哪怕比基尼只有几寸的面料相连接，这些作品还想被称之为“服装”，就必须在人体上有支撑挂靠的点，就一定能够穿戴到人体上。常用人体支撑点有很多，例如肩颈，后背，上胸围，腰跨等处，也可以通过一定的力学设计开发其他支撑点。创意服装的创新造型天马行空，但是最终需要如同寄生植物一样与人体穿插交缠，才能够展现服装的魅力。
创意服装设计作品除了造型上需要考虑与人体之间的关系，人自身内心的桎梏也会影响对作品的判断。大千世界千人千面，人们被各种不同的 方法 分成很多的群种。国籍，民族，地域，阅历，身份，学识，性格，性别等等，每个群种又相互交叠，不同的群种对服装的审美都有大致相同的选择，也有微小的区别。服装设计有着一套成熟的审美法则，例如从风格对应到品类、搭配、面料、色彩、图案的表现形式，都有着相对固定的程式化色彩。但是成功的服装创新设计作品中，小心机无处不在，给予人惊喜又满足使用者的需求。所以从某种角度来说，成功的服装设计者，能够玩转规则，使之为自己服务，成就自己。这种 逆向思维 需要在保证上述所说的符合审美法则的同时，发挥神奇的作用，将服装设计这门传统艺术点石成金，成就视觉盛宴。
服装创新论文的范文相关 文章 ：
1. 广东服装行业“互联网+”模式创新探讨论文
2. 浅谈中国服装产业的现状及创新发展
3. 关于创新的议论文5篇
4. 创新论文散文
5. 关于写创新的议论文5篇
6. 成功源于创新论文3篇
黑色透明度100%-灰色- 白色0%
1、、同学们根据自己的构思先确定构图，三角形构图、圆形构图或多边形构图。2、确立构图后，画面上的物体之间要有主次之分，主体物要放在画面的主体位置上，并且重点描绘，但有一点同学们得明白，主体物不分大小，这要根据画面的需要而定。物体形与形之间的联系和前后关系，一定要交代清楚，形与形之间可以遮挡。几何形之间的黑白关系要明确。3、所画物体的构图和形确立后，再根据画面需要进行黑、白、灰的着色。着色时根据画面需要可以加上自己的主观色调，注意形与形之间的黑白搭配与变化。4、出示同龄人的作品让学生进行分析，讲解设计要求，指导学生创作。5、充分运用黑白色的特性大胆创作，具有创新精神；构图美观新颖。图形是一样的，只是装饰的图案不同，效果就不一样。 利用点、线、面的疏蜜关系表示黑、白、灰、的关系。 疏蜜关系、黑、白对比的方法。学生观察后回答，说出自己的设计思路。学生借助范画进行创作和想象相结合的绘画练习。重在通过黑白灰来表现物体并进行装饰、体会创作的激情。黑白装饰画手法简单，表现力强。我们可以把彩色的风景画改为黑白装饰画，把色彩静物画改为黑白装饰画，出示课件。生活中具有色彩事物都可以用黑白灰进行表现，如长颈鹿、豹子、老虎、七星瓢虫等，课件展示。黑白装饰画具有独特的高度概括和朴实的艺术特色，单纯的语言、概括的外形、平衡的秩序及和谐的平面，给人以艺术美的享受。提高学生的创作能力，拓展知识面黑白装饰画具有简单易画，手到擒来，不受材料的局限，同学们可以随时进行装饰表现，美化我们的教室、校园以及我们的生活。
下文是为大家精选的平面广告设计毕业论文开题报告，希望对大家有帮助! 平面广告设计毕业论文开题报告 题目：留白在平面广告设计中的多重效应 一、课题的来源及意义 (一)、课题的研究来源 在平面广告设计中，通常都会以各种图形符号常作为意象的载体出现，来表达内在特定含义和信息。除掉具象等一些常见的意象表现形式外，还有一类特殊的意象表现形式，那就是“留白”意象。留白可被视为意象表达的一类特殊形式，借鉴中国传统绘画艺术中“留白”的特殊表现方法，利用留白来营造出相关意象。如果设计师把这种处理手法引入到平面广告设计中，可以更好的提升和强化作品的传达效果，加强作品的格调情趣，增强作品的意蕴美和形式美，使平面广告作品获得最佳的画面表现效果。作为一名平面设计班的毕业生，我发现在设计中留白的运用可以传达更丰富的意蕴和信息，从而获得更好的设计效果。 (二)、课题的研究意义 1、“留白”并不是代表着没有，它是版式设计中不可缺少的一部分。留白艺术在平面广告设计中有重要的价值，它同时也意味着在广告设计中一种新的挑战。它摆脱了图形语言和文字的束缚，以“无”代替“有”的审美价值。在看似空白的地方展现“有”的无限意境。这种以“虚”的处理手法，不仅简明扼要的展现作品，而且使得设计达到以少胜多的目的。 2、在设计中，在画面上插入适当的空白，就可以起到缓冲的作用，减轻视觉疲劳，满足人们心理上的需求。特别是在如今现代生活节奏的加快，被各种各样的，五花八门的信息所包围着。很容易在视觉上和心理上产生疲倦。适当的留出“空白”,有利于强化观者的感受，唤起人们情感上的共鸣，并获得视觉上的轻松。 3、平面广告设计都是以传达信息为目的，直接的表达法往往会显得单调无味，意境是设计师在创作中孜孜以求的艺术效果，通过留白获取意象以加强作品的格调情趣可以更好地凸显画面中的虚与实。只有具有深远意境的作品才有感染力，才能引人遐想、引人入胜，才能使观者产生心灵的共鸣。 二、课题的国内外发展状况 (一)国内发展状况 中国传统艺术并不像西方美学那样过多讲究对理性的认知和推理，而更多的是以感性的方式来领悟自然体味人生。早在中国古代，许多画家都能将留白巧妙地运用到自己的创作之中，留白的技法已成为中国极具传统影响力的一种特殊艺术审美心理，具有含蓄而又独特的审美境界，最终成为现代艺术的一种重要手段。比如齐白石画虾，几只透明活泼的小虾周围大片空白，没有画水，但人们觉得周围空白处都是水。以少胜多、由此及彼、言简意赅、以一当十，正所谓空白的力量。我们可以将留白艺术引入平面设计中，研究其在平面设计中的运用，就可以创作出效果更好的平面设计作品。在香港着名平面设计大师靳埭强的设计作品中以《跨越中西》为例，在画面上运用大量的黑白两色留白，而正是这些留白空白的运用而营造出具有中国传统美学风格的情绪意向，体现我国博大精深的传统文化以及历史印象。由此看来，从中国传统艺术中提炼的“空白”这种艺术表现形式对现代设计有一定的借鉴作用是毋庸置疑的。 (二)国外发展状况 美国的《时代》周刊就是娴熟地运用空白的典型。该周刊标题是简单“TIME”,以高调特写照片为主打，居于中间，与之呼应的文字则置于中下位置，?正好与图片中浅色调的部分衔接，而图片深色调的周围则紧靠着大片的空白，仿佛给人留下广阔的梦想空间。美国《财富》图片总监米切尔。麦克娜丽对于《财富》设计的封面为何可以抓住读者的视线是这样回答的：“我们在色彩的使用上是很谨慎的，一般多以黑、白、灰为主，对其他色彩的使用也有限度。我们多采用白色，也就是留白。”所以，不一定用得色彩越多就越好，在如今的平面广告设计中，应该尽可能的用较少的色彩去表现更完美的艺术效果，合理的运用留白艺术是很重要的，可提高设计的品味，更能展现出平面广告设计的魅力。 三、课题的研究目标与内容 (一)研究目标 留白可被视为意象表达的一类特殊形式，借鉴中国传统绘画艺术中“留白”的特殊表现方法，利用留白来营造出相关意象。让传统的留白艺术和平面广告设计的理论相结合，形成了独具特色的设计意象，让设计师在平面广告设计中更好的运用留白艺术的表现手法。 (二)研究内容 1、“留白”可以丰富平面广告设计的构图形式 (1)我国古代绘画论说：“疏可走马，密不透风。”也就是说在疏密的布局上走点极端。该密则密，该疏则疏，该隔离则隔离，以强化观众的某种感受，创造自己的风格。画家极其注重“留白”,以虚实相生的处理手法形成一种特殊的画面意境形式。 (2)现如今大多数广告设计的构图都比较“密”,没有空间感，显得很压抑。而构图是绘画的基础，也是广告设计的基础。广告构图的成功与否直接影响广告的视觉传达，不同的广告构图风格体现出不同的广告氛围;独特而由创见的构图能产生意想不到的广告效果。留白带给人轻松感，最大的作用是引人注意。在广告设计中，巧妙地留白，讲究空白之美，是为了更好地衬托主题、集中视线和造成版面的空间层次。 (3)版面中的空白与建筑中的虚实空间相似，实形、虚形是一个矛盾的两个方面，它们是同等重要。在一个版面中，不能只看到图形，字组而不注重空白;不能只看到字体的笔画，而忽视笔画之间的空挡。正是由于空白的衬托，才使得视觉得以集中。我们可以把平面广告作品中的二维空间分为实空间和虚空间。其中实空间是指画面各实体视觉元素所占空间的部分，虚空间则是指除此之外的其余部分。虚空间则是指的“留白”的空间部分。 2、“留白”可以提升平面广告设计的信息传达 (1)平面广告设计以传达信息为主要目标。设计作品往往需要在短时间内引起观众的注意，给人们留下深刻的印象。仅靠直接的表述往往显得单调乏味，而且意象的意是难以穷尽的，因此恰当地运用“虚”与“实”的对比可以达到很好的传达效果。也就是说设计师通过对画面进行特殊的表现处理可以更好的实现传达的目的。实践证明，画面通过留白获取意象以加强作品的格调情趣来提升平面广告的吸引力是设计中屡试不爽的利器之一。 (2)设计师在作品中通过精心营造出留白的空间生成一种含蓄的意象来传达特定的广告主题内容，由于这种处理方法所能起到特殊的画面效果，使得作品更加容易吸引观众的视角，激起听他们强烈的好奇心，一步步的引导观众去把握和接受画面传达的种种信息内涵，从而使平面广告作品的信息传达效果能够逐步的提升和强化。 3、“留白”可以增强广告设计的文化内涵 (1)优秀的广告设计不仅仅与人的情感建立了深层联系，还由此延伸出其它情趣，这些情趣虽然不能称作情感，但是可以唤起观者积极的心理感受，通过留白的意象处理手法可以更好的感染大众，唤起人们情感上的共鸣，使他们在感受作品格调情趣的同时不经意间把握住主题内涵。 (2)通过留白获取意象以加强作品的格调情趣来提升平面广告的吸引力并且可以更好、更丰富的增强设计作品中的文化内涵。使画面获得了一种“此时无声胜有声”的效果，也使画面流入出一种浓浓的意蕴美，不仅明确清晰的传达了主题内容也加强了画面的艺术性，给观众视觉以及心理一种美的享受。 四、课题的方法和手段 本论文采用的理论与实践、文献收集和实地调研、案例的比较等研究的方法。一步一步的归纳和总结留白在平面广告设计中的多重效应，运用各种形式的手法。来启发阅读者的想象。从而得出利用留白艺术，可以让设计师和阅读者更好地根据自己的创意想法，去创造出更优秀的平面作品。 五、课题的进度安排 (一)20xx年xx月xx日-20xx年xx月xx日：收集资料并思考论文题目; (二)20xx年xx月xx日-20xx年xx月xx日：确定论文题目; (三)20xx年xx月xx日-20xx年xx月xx日：填写《开题报告》和《计划进程》表; (四)20xx年xx月xx日-20xx年xx月xx日：完成论文初稿; (五)20xx年xx月xx日-20xx年xx月xx日：毕业论文中期检查，并填写《中期报告》; (六)20xx年xx月xx日-20xx年xx月xx日：毕业论文定稿，并形成完整的文本; (七)20xx年xx月xx日-20xx年xx月xx日：根据学院领导审核，反馈意见，毕业论文左后整改; (八)20xx年xx月xx日-xx月xx日：毕业论文答辩。 六、课题研究的可行性分析 (一)现代社会，平面设计在人们心中占据了大部分的位置，时时刻刻与人们打交道，在平面广告设计中使用“留白”艺术，空白不仅是题材内容的需要，而且利用“空白”的无形力量和无声的美可以创造意境，使作品具有深远意境，才有感染力，才能引人入胜，才能使观者产生心灵的共鸣。 (二)通过学校的图书馆，查阅相关的书籍，收集重要资料。并通过网上查询，找到平面广告设计中创造留白的相关资料，加以研究和总结。为以后研究人士提供重要资料，给予参考及借鉴 七、具体参考文献 [1]祝莹，张宝，许凯明。平面广告设计中的空白艺术[J].电子学报，2007,4:182-184. [2]王受之。世界平面设计史[M],北京：中国青年出版社，2002:95. [3]尹定邦。设计学概论[M].长沙：湖南科学技术出版社，2009:38-41. [4]马铁俪。中国绘画艺术中“空白、虚实”之魅力[J],临沂师范学院学报，2003,4:77-79. [5]威廉。荷加斯美的分析[D]中国美术学院出版社，1984.12 [6](美)科斯特尼克。罗伯茨。视觉语言设计：职业传播者策略。[M]周勇译。北京：中国人民大学出版社，2005.06.01 [7]段永智。空白：通向艺术之美的窗口[J],昭鸟达蒙族师专学报，2003:89 [8]冯柯。试论视觉传达设计中“空白”留取的艺术价值[J].平顶山工学院学报，2005,3:1-3. [9]马本和。艺术空白与审美意境的生成[J],美苑，2009,(3)：91-92. [10]王战，田中阳。现代广告设计理念与方法[M].长沙：湖南师范大学出版社，2008:233-235.
随着分子生物学的飞速发展，最为世人瞩目的人类基因组计划即将提前完成。人类将向了解自己的生命奥秘这一目标迈进一大步。但是，由于基因是遗传信息的携带者，而生命活动的执行者却是蛋白质，即基因的表达产物。因此，即使得到人类全部基因序列，也只是解决了遗传信息库的问题。人类揭示整个生命活动的规律，就必须研究基因的物产——蛋白质。相对于基因组而言，后者称为蛋白质组。1 蛋白质组概述及其相关研究技术和方法鉴于基因组研究的局限性，1994年澳大利亚Macquaie 大学的Wilkins和Williams等在意大利的一次科学会议上首次提出了蛋白质组（Proteome）这个概念。定义为“蛋白质组指的是一个基因组所表达的蛋白质”，即“PROTEOME”是由蛋白质的”PROTE”和基因组的“OME”字母拼接而成[1].这个新术语很快得到了国际生物学界的认可。目前对蛋白质组的分析工作大两个方面。一方面，通过二维胶电泳等技术得到正常生理条件下的机体、组织或细胞的全部蛋白质的图谱，相关数据将作为待测机体、组织或细胞的二维参考图谱和数据库。另一方面是比较分析在变化了生理条件下蛋白质组所发生的变化。目前蛋白质组研究技术常用以下手段：（1）用于蛋白质分离技术方面的如双向凝胶电泳（2-DE）、双向“高效”柱层析等。（2）用于蛋白质鉴定的技术如质谱技术、凝胶图像分析、蛋白质和多肽的N端、C端测序及氨基酸组成分析等。（3）用于蛋白质相互作用及作用方式研究的双杂交系统。（4）用于分析大量数据的生物工程信息学等[2].。2 蛋白质组在医学研究中的现状和前景自蛋白质组概念提出以来，已发表相关论文及论著数篇。并于是1997年举行了第一届国际性的“蛋白质组学”会议。同年出版式了第一部蛋白质组学的专著。目前蛋白质组在医学方面的研究重点在于对人类疾病的发病机制、早期诊断及治疗，对致病微生物的致病机理、耐药性及发现新的抗生素为主。现将这两方面的进展情况综述如下。2.1 人类疾病的蛋白质组研究2.1.1 直肠癌 直肠癌的发生是因多个基因的突变，导致肿瘤抑制基因失能所致，但确切机制仍不清楚。为探讨其发病机制，Sanchez等对15例结肠癌和13例正常人的结肠上皮进行2-DE，每个多肽模式用Melanie I12-DE分析软件进行分析。据此建立了包括882和861个斑点的结肠癌及正常人结肠粘膜的标准胶图。结果发现在分子量为13kD和pI值为5.6处的蛋白质仅出现在结肠癌的组织中。15例结肠癌患者中13/5.6蛋白有13例（87%）。此外，发现13/5.6蛋白不仅在中度、低度分化的结肠癌及有24年病史的溃疡性结肠炎过度表达，而且出现在7例分化程度不同的腺瘤的癌前病灶。但对照组则极少出现。这表明该蛋白的出现对检测早期直肠癌有很强提示。通过对该蛋白HPLC及测序等分析后，发现与钙粒蛋白B（calgranulin B）及钙卫蛋白（calprotectin）有很大关系[3]。2.1.2 肝癌 醛糖还原酶（aldose reductase, E.C.1.1.1.21）是醛酮还原酶超家族中的一个成员。它催化葡萄糖还原为山梨醇，通过减少内源或外源性代谢产物而起到解毒作用。Peter R等在用N-甲基-N-亚基脲诱导（N-methly-N-nitrosourea-induced）的小鼠肝癌中，用2-DE及氨基酸微型测序可分辩出一种肝癌诱导的醛糖还原酶样的蛋白质（35Kd/P17.4）。而在小鼠的晶状体中，则发现一种醛糖还原的同工酶，该酶与已知的小鼠醛糖还原酶有98%的同源性，而与肝癌诱导的醛糖还原酶样的蛋白质截然不同。这表明两种蛋白质是由相关的两条基因编码，在小鼠不同的器官中表达不同。肝癌诱导的醛糖还原酶蛋白质优先表达在肝癌及胎肝中，它们均受到纤维细胞生长因子的刺激，但随小鼠鼠器官的生理及病理环境而表现不同的形式。经免疫组化证实，肝癌诱导的醛糖还原酶样的蛋白质在成人肝脏中不表达，但在小鼠的肝癌 中又重新表达。同时发现该蛋白在癌前病变及肝癌中表达强烈，而在肝脏周围的正常组织不表达[4]。表明该蛋白可能与肝癌的发病有很大关系。2.1.3 扩张型心肌病 扩张型心肌病是一种严重的可导致心衰的心脏病，大多数患者需行心脏移植术。目前其发病机理不明，推测可能为多种因素所致。1990年已有两组人员进行该病的蛋白质组分析。其后不久心肌的2-DE数据库建成，并进入国际互联网络。Knecht等采用2-DE取得了3300个心肌蛋白条带，通过氨基酸序列分析、Edman降解法及基质辅助的激光解吸离子化质谱（MALDI-MS）等分析了其中150条。经活检及术后病理证实，有12条为扩张性心肌病特有的蛋白。但具体资料尚在进一步分析之中[5]。Arnott D等对新福林诱导的肥大心肌细胞进行蛋白质组分析，同对照相比亦发现有8种蛋白质的表达水平发现了变化[6]。2.1.4 膀胱癌 IFN-γ除抗病毒外，还有一项重要的功能即抗肿瘤作用。目前其抗肿瘤作用机制不明。有资料表明，IFN-γ可能通过在相关细胞中增强或抑制有关基因而发挥抗肿瘤作用。重组IFN-γ和IL-2已开始应用于膀胱癌的治疗中。为探明其作用机制，George等将四种分级程度不同的人膀胱癌新鲜活检标本，用50U/ml IFN-γ作用20个小时后，采用2-DE、微型序列分析、等电聚集、蛋白质印迹等方法，对标本进行蛋白质组分析。结果表明有五种蛋白质（色按酸-tRNA合成酶、IFN-γ诱导的r3，超氧化物歧化酶及两种分子量为35.8kD和11.2kD的未知蛋白）的表达量增加了75%，而醛糖还原酶表达量则下降。为研究IFN-γ对治疗膀胱癌的作用机制提供了一种方法[7]。此外，由于缺乏对膀胱鳞状细胞癌客观可靠的组织学分级标准，因而很其进行早期诊断。为此，Morten等对150例膀胱癌进行双盲法2-DE，并结合了蛋白质印迹法、微型序列分析及质谱等技术，建立了新鲜膀胱癌标本的2-DE数据库，且发现角蛋白10、14及银屑病相关的脂肪酸结合蛋白（psoriasis-associated fatty acid-binding protein,PA-FABP）等可以作为膀胱癌不同分化程度的标记物[8]。为早期诊断提供了一种新的手段。[ 本帖最后由 snow_white 于 2007-7-20 16:32 编辑 ]查看完整版本请点击这里：蛋白质组学研究〔综述〕05我也来说两句 查看全部回复 最新回复snow_white (2007-7-20 16:31:50)2.1.5 其它 目前人的各种组织、器官、细胞乃至各种细胞器已被广泛研究。以期为疾病诊治及了解发病机制提供新的手段。在一项利用蛋白质组研究技术进行的酒精对人体毒性的研究中发现，乙醇 会改变血清蛋白糖基化作用，导致许多糖蛋白的糖基缺乏，如转铁蛋白[9]。Jagathpala等对免疫所致的不孕症的男性精子蛋白质进行蛋白质组分析，发现了导致不孕症的6种自体及异体抗 精子抗体[10]。在对肾癌的研究中，发现有4种蛋白质存在于正常肾组织而在肾癌细胞中缺失。其中两种分别是辅酶Q蛋白色素还原酶和线粒体乏醌氧化还原复合物I。这提示线粒体功能低下可能在肿瘤发生过程中起重要作用[11]。Ekkehard Brockstedt等利用2-DE、Edman微型序列法、MALDI-MS等对人BL60-2伯基特淋巴瘤细胞系进行了细胞凋亡机制的研究，结果发现RNA聚合酶转录因子3a（BTF3a）和/或BTF3b与抗IgM抗体介导（anti-IgM antibody-mediated）的细胞凋亡有很大关系[12]。2.2 致病微生物的蛋白质组研究 近年来，WHO越来越重视感染性疾病对人类健康的影响。除结核、多重耐药链球菌感染及机会致病菌外，出现了一些新的感染因素如HIV、博氏疏螺旋体及埃博拉病毒等。因此这些致病微生物的蛋白质组分析，对于了解其毒性因子、抗原及疫苗的制备非常重要，此外对疾病的诊断、治疗和预防也同样重要。现已获得18种微生物的全部基因组序列，另有60余种的基因序列正在研究之中。这些工作的开展为蛋白质组的研究提供了有利条件。2.2.1 检测博氏疏螺旋体与免疫有关的蛋白质 博氏疏螺旋体（Borrelia burgdorferi）是莱姆病的主要病因，表现为环形红斑及流感样症状，大约有50%的未治患者发展为神经系统及关节系统疾病。该螺旋体可分为3种类型：B.burgdorferi sensu stricto,B.garinii, B.afzelii。其诊断需依靠血清学检查，但存在敏感性及特异性变化的缺点。为获得更可靠的血清学检查，Peter等用2-DE从B.garinii得到217个银染的蛋白斑点。从中国兔多克隆抗体鉴别出6个已知的讥原。将不同临床表现莱姆病患者的血浆用b.garinii 2-DE图杂交。用抗IgM及抗IgG作为第二抗体，在10例有游走性红斑的患者血浆中，检测出60~80个抗原。同时发现在有关节炎的患者血浆中，包含有抗15种抗原的IgM抗体及抗76种不同抗原的IgG抗体。而晚期有神经系统症状的患者血浆中，则包含有抗33种抗原的IgM抗体及抗76种抗原的IgG抗体。上述3种类型患者的血浆中均包含有抗6种已知抗原的抗体，且被SDSPAGE杂交所证实。这些抗原均是潜在的具有特异性诊断的标志物。2.2.2 弓形体抗原的检测 弓形体病是由鼠弓形体虫引起的寄生虫病。全球人口大约有30%是携带者，在欧洲是最常见的寄生虫病。如果妊娠者感染，该虫可通过胎盘引起胎儿的感染。且随着妊娠时间的增加，感染的机会也增加。大约50%母体的感染可引起新生儿先天性疾病。因此诊断及治疗越早越好。目前要依靠血清学及PCR，而单独采用血清学如用IgG，IgM,或IgA抗体对疾病活动期敏感性不够，尤其对于妊娠或有免疫抑制的患者。潜在感染常发生在有免疫抑制的患者中。对AIDS患者来说，鼠弓形体虫是最主要的致命性脑损伤的病因。因此，能否早期诊断对治疗来说尤为关键。Jungblut等将鼠弓形体虫RH株在人羊膜细胞系FL521中传代后，用2-DE得到300个银染的斑点。再将其与以下3种患者的血浆进行免疫杂交：（1）患有急性弓形体病的妊娠女性（n=11）; (2)患急性弓形体病的非妊娠者（n=6）(3)有潜在感染的患者（n=9）。结果有9个斑点对各阶段的弓形体感染均反应，这9种斑点被用来当作弓形体感染的标记。其中7种标记可用作区别疾病的不同阶段。但对区别急性期与潜在期仍需联合应用多种抗原[4]。2.2.3 白色念珠菌 芽管结构是白色念珠菌向菌丝体转变的早期阶段，该结构能增强白色念珠菌对宿主细胞的粘附力、穿透力及破坏性。目前通过蛋白质组分析方法如2-DE、质谱等已检测出在芽管结构所表达的一组特异蛋白如DNA结合蛋白等，为致病提高了一些参考指标[13]。Monkt等发现，在conA反应后的SDS-PAGE图中，在芽管结构的膜上，分子量为80kD复合糖处，出现很淡的考马斯亮蓝染色，而在孢子时则未出现。提示膜的整合、出现未与ConA结合的80kD复合糖可能与芽管结构的发生及生长有关。粘附素（adhesin）是白色念珠菌表面的组成部分，介导其与宿主的结合，是侵入宿主所需的重要蛋白，包含多种成分如白色念珠菌胞壁上的疏水蛋白等，通过增强菌株的粘附性而在其致病机制中发挥一定作用。但由于这些蛋白有很大同源性、多种糖基化作用及与胞壁或胞浆膜上其它成分形成共价结合，故提纯及分析很难。现通过等电聚集、2-DE及洗脱电泳等方法，可使这些蛋白得到很好的纯化、分离及分析[14]。抗真菌药通过改变真菌胞壁组分的生物合成和重组胞壁相关酶的结合位置而发挥作用。抗真菌药远少于抗细菌药就在于对真菌细胞壁蛋白分析了解太少。现在临床上用于抗真菌的药物多为咪唑类（咪康唑、酮康唑）及三唑类（氟康唑、伊曲康唑），但有很多患者出现耐药现象。在白色念珠菌中，目前发现至少有8种CDR家族的基因可产生耐药株的表现型。且有55种基因分别表达ABC及MFS蛋白（菌内药物输出泵）[15.16]。但这些基因、蛋白与耐药之间的关系仍未清楚。应用2-DE、免疫检测蛋白质等技术，对这些蛋白在菌内的表达量进行分析，发现Cdrlp及CaMdrlp蛋白在耐咪唑类菌株中过量表达。在对咪唑类每感及去除CDR1基因的白色念珠菌株CA114中，提取并检测耐氟康唑突变子（FL3）的表达。结果发现FL3对氟康唑的耐是去除CDR1的基因的白色念珠菌株CA114的500倍 ，是CA114的250倍。且CDR1 mRNA在FL3的量是Ca114的8倍[17]。同时，对敏感性及耐药株蛋白质的2-DE图分析发现，在耐中有25种蛋白质增加，有76种蛋白质减少。推测白色念株菌是通过改变染色体数目或染色体重组来调节基因的表达量，进而产生耐药性[18]。随着蛋白质组技术成熟完善，将对真菌壁及耐药基因分泌的各种蛋白组成分析带来重大突破，并对抗真菌的研制提供重要资料。虽然蛋白质组学还处在一个初期发展研段，但我们相信随着其不断地深入发展，蛋白质组（学）研究在提示诸如生长、发育和代谢调控等生命活动的规律上将会有所突破，对探讨重大疾病的机理、疾病诊断、疾病防治和新药开发将提供重要的理论基础。[ 本帖最后由 snow_white 于 2007-7-20 16:33 编辑 ]snow_white (2007-7-20 16:34:25)二、蛋白质组学的研究进展蛋白质组学强调的是针对蛋白质的一个整体思路。从整体的角度看，蛋白质组研究大致可分为两种类型：一种是针对细胞或组织的全部蛋白质，也就是着眼点是整个蛋白质组；而另一种是以与一个特定的生物学机制或机制相关的全部蛋白质为着眼点，在这里整体是局部性的。针对细胞蛋白质组的完整分析的工作已经比较全面地展开，不仅如大肠杆菌、酵母等低等模式生物的蛋白质组数据库在建立之中，高等生物如水稻和小鼠等的蛋白质研究也已开展，人类一些正常和病变细胞的蛋白质数据库也已在建立之中。与此同时，更多的蛋白质组研究工作则是将着眼点放在蛋白质组的变化或差异上，也就是通过对蛋白质组的比较分析。首先发现并去鉴定在不同生理条件下或不同外界条件下蛋白质组中有差异的蛋白质组分。限于篇幅，本文不对这方面的工作做进一步论述。本文接下来重点介绍近期发表的关于蛋白质组学的几个工作，从中可以看到蛋白质组学的思想方法在蛋白质整体（或局部整体）水平上是如何解决生理学的一些重要问题的。1999年11月《Nature》杂志发表了一篇用蛋白质组学方法研究蛋白质折叠的研究论文[10]。在这篇文章中，Houry等报道了在大肠杆菌胞质中的2500种新生多肽链种只有近300种以GroEL作为分子伴侣来帮助其折叠成正确构象。在以往的相关研究中，通常只是针对某个或某些特定的蛋白质，观察它（们）在折叠过程中是否需要诸如GroEL等分子伴侣的帮助。而在这个工作中，研究是从一个整体的思路出发，首先通过免疫共沉淀的方法获得所有与GroEL结合的肽链，再通过二维电泳和数据库比较等蛋白质研究的手段对这些肽链进行分析鉴定，从而实现了对大肠杆菌近2500条新生多肽链与分子伴侣GroEL的关系的全面分析。在这个工作中，研究者还通过对其中50种与GroEL作用的肽链的鉴定，进一步揭示了决定这些蛋白质能与GroEL相互作用的关键结构特征。应该说，这个工作很好地体现了蛋白质组学的思想方法和技术手段的运用。过去在细胞生物学领域还没有得到过一个主要亚细胞结构的完整的分子图。核孔复合体是一个巨大的跨核膜的八角形结构，是控制大分子在胞质和核质间运输的通道。多年来，很多方法被用来分析这一复合体的组成成分。虽然这些工作取得了很大的进展，但究竟在多大程度上反映了这一复合体的分子原貌仍然是一个未知数。最近通过使用蛋白质组学的手段，Rout等[11]鉴定了完整的酵母核孔复合体所有能检测到的多肽，并系统地对每种可能的蛋白质组分在细胞中定位，结合免疫电镜的方法将各组分在复合体内定位并定量，从而揭示了酵母核孔复合体的完整分子构造，并在此基础上揭示了其工作原理。这个工作可以说是蛋白质组学解决构造生物学问题的一个典范，为揭示其他巨大分子机器的"构造"和工作原理指出了一条新路[12]。通过分析一个蛋白质是否跟功能已知的蛋白质相互作用可得到揭示其功能的线索。因为经验告诉我们，如果两个蛋白质相互作用，那么它们一般参与相同或相关的细胞活动[13]。从近期国际上蛋白质组学研究的发展动向可以看出，揭示蛋白质之间的相互作用关系，建立相互作用关系的网络图，已成为揭示蛋白质组复杂体系与蛋白质功能模式的先导，业已成为蛋白质组学领域的研究热点。2000年初，《Science》登载了一篇应用蛋白质组学的大规模双杂交技术研究线虫生殖器发育的文章[14]。在这个工作中，Walhout等以线虫的生殖发育过程作为研究对象，从已知的27个与线虫发育的蛋白质出发，构造了一个大规模的酵母双杂交系统，得到了100多个相互作用的结果，初步建立了与线虫生殖发育相关的蛋白质相互作用图谱，从而为深入研究和揭示线虫发育的机制等提供了丰富的线索。这个工作不同于一般的应用酵母双杂交进行研究的地方在于，它出于对一个生物学问题的整体思考，尽可能地从所有已知的蛋白质而不只是个别的蛋白质为出发点。这一个工作为以前专注于信号转导过程中单个蛋白质作用的科学家们提供了一个新的思路，即将整个途径的相关蛋白质一起考虑。那么，能否通过酵母双杂交系统来分析一种细胞或特定组织的所有可能的蛋白质之间的相互作用呢？在今年初，《Nature》发表了一篇通过大规模双杂交技术研究酵母近6000个蛋白质之间相互作用的论文[15]。啤酒酵母基因组DNA的全序列业已测定，这为通过双杂交技术来鉴定酵母基因组编码的全部6000种左右的蛋白质间的可能相互作用提供了非常有利的条件。在这个工作中，研究人员采用了两种不同的策略对酵母的蛋白质间的相互作用作了全面分析。一是所谓的列阵筛选法（array screening）。在此方法中，6000株表达不同"猎物"蛋白的酵母单克隆分别加在微滴定板上，带有不同的"诱饵"蛋白的酵母株与前面6000株细胞一一接合形成二倍体细胞，"猎物"蛋白与"诱饵"蛋白的相互作用通过报道基因的表达而被鉴定。这篇文章中报道了192种不同的"诱饵"蛋白与近6000种"猎物"蛋白的相互作用的结果。另一种方法是文库筛选法。该方法与前一种方法的区别是，将表达6000种不同"猎物"蛋白的酵母细胞混在一起构成文库，再将这个文库分别与6000株表达不同"诱饵"蛋白的酵母细胞接合，再进一步筛选鉴定阳性克隆，即"诱饵"与"猎物"发生相互作用的克隆。根据这篇报告，上述两种策略得到了不同的结果，相比之下阵列筛选法更为有效，而文库筛选法的长处是通量大。这一工作的重要意义在于我们已经看到，在基因组序列被了解的基础上，可以利用大规模双杂交技术全面地，当然也是初步地，分析其物种或其细胞、组织的所有蛋白质之间的相互作用关系。相信类似的工作将很快针对其他物种开展，特别是基因组序列已被揭示的物种。由此可见，蛋白质组学已经开始从建立数据库走向解决生命科学的重大问题，成为研究生物学问题或机制的强有力手段。snow_white (2007-7-20 16:37:32)三、蛋白质组学研究进展与趋势曾 嵘 夏其昌（中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所蛋白质组学研究分析中心 上海 200031）如果在五年前提到蛋白质组学（Proteomics），恐怕知之者甚少，而在略知一二者中，部分人还抱有怀疑态度。但是，2001年的Science杂志已把蛋白质组学列为六大研究热点之一，其“热度”仅次于干细胞研究，名列第二。蛋白质组学的受关注程度如今已令人刮目相看。1．蛋白质组学研究的研究意义和背景随着人类基因组计划的实施和推进，生命科学研究已进入了后基因组时代。在这个时代，生命科学的主要研究对象是功能基因组学，包括结构基因组研究和蛋白质组研究等。尽管现在已有多个物种的基因组被测序，但在这些基因组中通常有一半以上基因的功能是未知的。目前功能基因组中所采用的策略，如基因芯片、基因表达序列分析(Serial analysis of gene expression, SAGE)等，都是从细胞中mRNA的角度来考虑的，其前提是细胞中mRNA的水平反映了蛋白质表达的水平。但事实并不完全如此，从DNA mRNA 蛋白质，存在三个层次的调控，即转录水平调控(Transcriptional control )，翻译水平调控(Translational control)，翻译后水平调控(Post-translational control )。从mRNA角度考虑，实际上仅包括了转录水平调控，并不能全面代表蛋白质表达水平。实验也证明，组织中mRNA丰度与蛋白质丰度的相关性并不好，尤其对于低丰度蛋白质来说，相关性更差。更重要的是，蛋白质复杂的翻译后修饰、蛋白质的亚细胞定位或迁移、蛋白质－蛋白质相互作用等则几乎无法从mRNA水平来判断。毋庸置疑，蛋白质是生理功能的执行者，是生命现象的直接体现者，对蛋白质结构和功能的研究将直接阐明生命在生理或病理条件下的变化机制。蛋白质本身的存在形式和活动规律，如翻译后修饰、蛋白质间相互作用以及蛋白质构象等问题，仍依赖于直接对蛋白质的研究来解决。虽然蛋白质的可变性和多样性等特殊性质导致了蛋白质研究技术远远比核酸技术要复杂和困难得多，但正是这些特性参与和影响着整个生命过程。传统的对单个蛋白质进行研究的方式已无法满足后基因组时代的要求。这是因为：(1) 生命现象的发生往往是多因素影响的，必然涉及到多个蛋白质。(2) 多个蛋白质的参与是交织成网络的，或平行发生，或呈级联因果。(3) 在执行生理功能时蛋白质的表现是多样的、动态的，并不象基因组那样基本固定不变。因此要对生命的复杂活动有全面和深入的认识，必然要在整体、动态、网络的水平上对蛋白质进行研究。因此在上世纪90年代中期，国际上产生了一门新兴学科－蛋白质组学（Proteomics），它是以细胞内全部蛋白质的存在及其活动方式为研究对象。可以说蛋白质组研究的开展不仅是生命科学研究进入后基因组时代的里程碑，也是后基因组时代生命科学研究的核心内容之一。虽然第一次提出蛋白质组概念是在1994年，但相关研究可以追溯到上世纪90年代中期甚至更早，尤其是80年代初，在基因组计划提出之前，就有人提出过类似的蛋白质组计划，当时称为Human Protein Index计划，旨在分析细胞内的所有蛋白质。但由于种种原因，这一计划被搁浅。90年代初期，各种技术已比较成熟，在这样的背景下，经过各国科学家的讨论，才提出蛋白质组这一概念。国际上蛋白质组研究进展十分迅速，不论基础理论还是技术方法，都在不断进步和完善。相当多种细胞的蛋白质组数据库已经建立，相应的国际互联网站也层出不穷。1996年，澳大利亚建立了世界上第一个蛋白质组研究中心：Australia Proteome Analysis Facility ( APAF )。丹麦、加拿大、日本也先后成立了蛋白质组研究中心。在美国，各大药厂和公司在巨大财力的支持下，也纷纷加入蛋白质组的研究阵容。去年在瑞士成立的GeneProt公司，是由以蛋白质组数据库“SWISSPROT” 著称的蛋白质组研究人员成立的，以应用蛋白质组技术开发新药物靶标为目的，建立了配备有上百台质谱仪的高通量技术平台。而当年提出Human Protein Index 的美国科学家Normsn G. Anderson也成立了类似的蛋白质组学公司，继续其多年未实现的梦想。2001年4月，在美国成立了国际人类蛋白质组研究组织（Human Proteome Organization, HUPO）,随后欧洲、亚太地区都成立了区域性蛋白质组研究组织，试图通过合作的方式，融合各方面的力量，完成人类蛋白质组计划（Human Proteome Project）。snow_white (2007-7-20 16:37:49)2．蛋白质组学研究的策略和范围蛋白质组学一经出现，就有两种研究策略。一种可称为“竭泽法”，即采用高通量的蛋白质组研究技术分析生物体内尽可能多乃至接近所有的蛋白质，这种观点从大规模、系统性的角度来看待蛋白质组学，也更符合蛋白质组学的本质。但是，由于蛋白质表达随空间和时间不断变化，要分析生物体内所有的蛋白质是一个难以实现的目标。另一种策略可称为“功能法”，即研究不同时期细胞蛋白质组成的变化，如蛋白质在不同环境下的差异表达，以发现有差异的蛋白质种类为主要目标。这种观点更倾向于把蛋白质组学作为研究生命现象的手段和方法。早期蛋白质组学的研究范围主要是指蛋白质的表达模式（Expression profile）, 随着学科的发展，蛋白质组学的研究范围也在不断完善和扩充。蛋白质翻译后修饰研究已成为蛋白质组研究中的重要部分和巨大挑战。蛋白质-蛋白质相互作用的研究也已被纳入蛋白质组学的研究范畴。而蛋白质高级结构的解析即传统的结构生物学，虽也有人试图将其纳入蛋白质组学研究范围，但目前仍独树一帜。
【关键词】 蛋白质组 【关键词】 线粒体；蛋白质组 0引言 线粒体拥有自己的DNA（mtDNA），可以进行转录、翻译和蛋白质合成. 根据人类的基因图谱，估计大约有1000~2000种线粒体蛋白，大约有600多种已经被鉴定出来. 线粒体蛋白质只有2%是线粒体自己合成的，98%的线粒体蛋白质是由细胞核编码、细胞质核糖体合成后运往线粒体的，线粒体是真核细胞非常重要的细胞器，在细胞的整个生命活动中起着非常关键的作用. 线粒体的蛋白质参与机体许多生理、病理过程，如ATP的合成、脂肪酸代谢、三羧酸循环、电子传递和氧化磷酸化过程. 线粒体蛋白质结构与功能的改变与人类许多疾病相关，如退行性疾病、心脏病、衰老和癌症. 尤其是在神经退行性疾病方面，线粒体蛋白质的研究日益受到关注. 蛋白质组研究技术的产生与发展为线粒体蛋白质组的研究提供了有力的支持，使得从整体上研究线粒体蛋白质组在生理、病理过程中的变化成为可能. 1线粒体的结构、功能与人类疾病 线粒体一般呈粒状或杆状，也可呈环形、哑铃形或其他形状，其主要化学成分是蛋白质和脂类. 线粒体由内外两层膜封闭，包括外膜、内膜、膜间隙和基质四个部分. 线粒体在细胞内的分布一般是不均匀的，根据细胞代谢的需要，线粒体可在细胞质中运动、变形和分裂增殖. 线粒体是细胞进行呼吸的主要场所，在细胞代谢旺盛的需能部位比较集中，其主要功能是进行氧化磷酸化，合成ATP，为细胞生命活动提供直接能量. 催化三羧酸循环、氨基酸代谢、脂肪酸分解、电子传递、能量转换、DNA复制和RNA合成等过程所需要的一百多种酶和辅酶都分布在线粒体中. 这些酶和辅酶的主要功能是参加三羧酸循环中的氧化反应、电子传递和能量转换. 线粒体具有独立的遗传体系，能够进行DNA复制、转录和蛋白质翻译. 线粒体不仅为细胞提供能量，而且还与细胞中氧自由基的生成、细胞凋亡、细胞的信号转导、细胞内离子的跨膜转运及电解质稳态平衡的调控等有关. 许多实验证实，线粒体功能改变与细胞凋亡〔1〕、衰老〔2〕、肿瘤〔3，4〕的发生密切相关；另外，有许多人类疾病的发生与线粒体功能缺陷相关，如线粒体肌病和脑肌病、线粒体眼病，老年性痴呆、帕金森病、2型糖尿病、心肌病及衰老等，有人统称为线粒体疾病〔5〕. 2线粒体蛋白质组学研究现状 2.1线粒体蛋白质组的蛋白质鉴定Rabilloud等〔6〕在1998年，以健康人的胎盘作为组织来源，分离提取线粒体进行蛋白质组研究，试图建立线粒体蛋白质组的数据库，为研究遗传性或获得性线粒体功能障碍时线粒体蛋白质的变化提供依据. 他们使用IPG（pH 4.0~8.0）双相电泳技术, 共获得1500个蛋白点. 通过MALDITOFMS和PMF等技术鉴定其中的一些蛋白点，鉴于当时基因组信息的局限性，只有46种蛋白被鉴定出来. 随着人类基因组图谱的完成，应该有更多的蛋白点被鉴定出来. Fountoulakis等〔7〕从大鼠的肝脏中分离线粒体，并分别利用宽范围和窄范围pH梯度IPG对线粒体蛋白质进行双相电泳，通过MALDIMS鉴定出192个基因产物，大约70%的基因产物是具有广谱催化能力的酶，其中8个基因产物首次被检测到并且由一个点构成，而大多数蛋白质都是由多个点构成，平均10~15个点对应于一个基因产物. Mootha等〔8〕从小鼠大脑、心脏、肾脏、肝脏中分离提取线粒体蛋白质，进行线粒体蛋白质组研究，他们参照已有的基因信息共鉴定出591个线粒体蛋白质，其中新发现了163个蛋白质与线粒体有关. 这些蛋白质的表达与RNA丰度的检测在很大程度上是一致的. 不同组织的RNA表达图谱揭示出线粒体基因在功能、调节机制方面形成的网络. 对这些蛋白与基因的整合分析使人们对哺乳动物生物起源的认识更加深入，对理解人类疾病也具有参考价值. 2.2线粒体亚组分的研究线粒体对维持细胞的体内平衡起着关键作用，因此加速了人们对线粒体亚组分的研究. 线粒体内膜不仅包含有呼吸链复合物，它还包含多种离子通道和转运蛋白. 对线粒体发挥正常的功能起着重要作用. Cruz等〔9〕专注于线粒体内膜蛋白质的研究，他们通过二维液相色谱串联质谱技术鉴定出182个蛋白质，pI（3.9~12.5），MW（Mr 6000~527 000），这些蛋白与许多生化过程相关，比如电子传递、蛋白质运输、蛋白质合成、脂类代谢和离子运输. 2.3线粒体蛋白质复合物的研究线粒体内膜上嵌有很多蛋白质复合物，对于线粒体的功能具有重要作用，应用常规的双相电泳很难将这些蛋白质复合物完整地分离出来. Devreese等〔10〕采用Bluenative polyacrylamide gel electrophoresis（BNPAGE）分离线粒体内膜上的五个氧化磷酸化复合物，结合肽质量指纹图谱，成功地鉴定出氧化磷酸化复合物中60%的已知蛋白质. BNPAGE在分离蛋白质复合物时可以保持它们的完整性，因此这项技术可以用于研究在不同的生理病理状态下蛋白质复合物的变化及临床诊断等. 2.4线粒体蛋白质组数据库目前人们查询最多的线粒体蛋白质组数据库有MITOP, MitoP2和SWISSPROT三种. MITOP〔11〕是有关线粒体、核编码的基因和相应的线粒体蛋白质的综合性数据库，收录了1150种线粒体相关的基因和对应的蛋白质，人们可依据基因、蛋白质、同源性、通道与代谢、人类疾病分类查询相关的信息.MitoP2〔12〕数据库中主要为核编码的线粒体蛋白质组的数据，MitoP2数据库将不同来源的线粒体蛋白质的信息整合在一起，人们可以根据不同的参数进行查询. MitoP2数据库既包括最新的数据也包括最初的MITOP〔11〕数据库中的数据. 目前数据库中主要为酵母和人的线粒体蛋白质组的数据，以后还将收录小鼠、线虫等的数据. 数据库旨在为人们提供线粒体蛋白质的综合性数据. SWISSPROT数据库包含269种人类线粒体蛋白质，其中与人类疾病相关的蛋白质有225种. 数据库中有相当一部分蛋白质没有明确的定位和功能信息的描述. 随着线粒体研究热潮到来和蛋白质组学技术的发展，将有更多的数据被填充到数据库中. 3线粒体蛋白质组研究中存在的问题 3.1线粒体碱性蛋白质与低分子量蛋白质线粒体蛋白质中，具有碱性等电点的蛋白质占有很大比例，在等电聚焦时难以溶解，一些碱性程度很大的蛋白质如细胞色素C（pH 10.3）在pH 3~10的IPG胶上不能被分离出. 线粒体蛋白质中相当一部分蛋白是低分子量蛋白，因此在SDSPAGE电泳时要分别应用高浓度和低浓度分离胶，以更好地分离低分子量蛋白质和高分子量蛋白质. 3.2线粒体膜蛋白质线粒体是一个具有双层膜结构的细胞器，内膜和外膜上整和有很多膜蛋白质，这些膜蛋白质对于线粒体功能的发挥具有重要作用，但是膜蛋白质具有很强的疏水性，在等电聚焦时，用常规的水化液难以溶解，因此用常规的IPG胶检测不出来. 换用不同的裂解液对膜蛋白的溶解具有帮助. 有研究人员在等电聚焦缓冲液中加入SB310以增加膜蛋白的溶解性. 在等电聚焦前对样品进行有机酸处理也可以增加膜蛋白的溶解性. 在研究中人们发现,不同的样品应该选用不同的裂解液，没有一种裂解液能够适合于所有的膜蛋白质.百事通针对膜蛋白质的难溶和等电聚焦时的沉淀，一些研究人员另辟径，避开双相电泳而进行一维SDSPAGE电泳，如Taylor等〔13〕先通过蔗糖梯度离心将线粒体蛋白质分成不同的组分，而后将每一个组分进行一维电泳，一维电泳中SDS可以很好地溶解疏水性蛋白质和膜整合蛋白质，他们鉴定出600多种线粒体蛋白质，其中有很多蛋白质以前应用双相电泳没有被鉴定出来. 他们鉴定的蛋白质中有很多具有跨膜结构域，如adenine nucleotide translocator（ANT1）和VDACs蛋白质，这些蛋白质对于调节线粒体的功能具有关键作用而且应用常规双相电泳很难被鉴定出来. 提高质谱鉴定的灵敏性对于一维SDSPAGE电泳后蛋白质分析鉴定具有很大的帮助，Pflieger等〔14〕应用液相色谱串联质谱（LCMS/MS）成功地鉴定出179种线粒体蛋白质，其中43%是膜蛋白质而且23%具有跨膜结构域. 液相色谱串联质谱（LCMS/MS）检测灵敏度较高，SDS可以很好地溶解膜蛋白，因此这种方法比传统的双相电泳具有更高的灵敏性而且不受蛋白质等电点、分子量、疏水性的限制. 3.3线粒体样品的纯度线粒体样品的纯度对于蛋白质组分析非常重要，在样品制备的过程中，具有与线粒体相同沉降系数的成分会同线粒体一起沉降下来，如内质网、微粒体、胞浆蛋白的一些成分. 这些蛋白斑点出现在双相电泳胶上，会影响整体蛋白质组分析的结果. 因此提高样品的纯度至关重要. Scheffler等〔15〕采用多步percoll/metrizamide密度梯度离心纯化线粒体样品，双相电泳后鉴定出61个蛋白质，几乎全部是线粒体蛋白质. 4未来展望 随着人类基因组工作草图的完成，生命科学的研究进入后基因组时代，蛋白质组学的研究遂成为重点. 蛋白质组学旨在采用全方位、高通量的技术路线，确认生物体全部蛋白质的表达和功能模式，从一个机体、一个器官组织或一个细胞的蛋白质整体活动来揭示生命规律，并研究疾病的发生机制、建立疾病的早期诊断和防治方法. 抗体技术在线粒体蛋白质组学领域中具有重要的应用价值. 单克隆抗体还具有高度的特异性，应用于亲和层析技术中不仅可以去除组织细胞样品中高表达的蛋白质成分，同样也可以富集表达量极低的组分. 结合蛋白免疫转印、流式细胞术和免疫组织细胞化学，实现对相应蛋白质的定性、定量和细胞（内）定位分析. 与微阵列技术（芯片）结合，可以研制出含有成百上千种抗体的蛋白(抗体)芯片，这种新技术使得研究人员可以在一次实验中比较生物样品中成百上千的蛋白质的相对丰度，能够检测到样品中浓度很低的抗原，以实现蛋白质组学对复杂组分高通量、高效率的检测. 某些抗体可以特异性识别蛋白质翻译后修饰的糖基化或磷酸化位点、降解产物、功能状态和构象变化，成为基因芯片检测不可替代的补充. 抗体捕获组分的分析有助于蛋白质复合物及其相互作用的研究，也在新的蛋白质发现和确认方面提供重要信息和证据. 随着抗体技术的不断提高，抗体数目的不断增多，蛋白质组学的研究也将更加深入. 线粒体不仅参与细胞重要的生命活动，而且对于生物进化的研究也有重要意义. 随着线粒体研究热潮的到来，将有更多的蛋白质被发现，对于蛋白质功能的研究也将更加深入，相信线粒体蛋白质组的研究对于人类疾病的发病机制和早期诊断将做出重要贡献. 【参考文献】 〔1〕 Jiang X, Wang X. Cytochrome Cmediated apoptosis 〔J〕. Annu Rev Biochem, 2004,73: 87-106. 〔2〕 Chen XJ, Wang X, Kaufman BA, et al. Aconitase couples metabolic regulation to mitochondrial DNA maintenance 〔J〕. Science, 2005,307(5710): 714-717. 〔3〕 Petros JA, Baumann AK, RuizPesini E, et al. mtDNA mutations increase tumorigenicity in prostate cancer 〔J〕. PNAS, 2005,102(3):719-724. 〔4〕 Wonsey DR, Zeller KI, Dang CV. The cMyc target gene PRDX3 is required for mitochondrial homeostasis and neoplastic transformation 〔J〕. PNAS, 2002, 99(10): 6649-6654. 〔5〕 Taylor RW, Turnbull DM. Mitochondrial DNA mutations in human disease〔J〕. Nat Rev Genet, 2005,6:389-402. 〔6〕 Rabilloud T, Kieffer S, Procaccio V, et al. Twodimensional electrophoresis of human placental mitochondria and protein identification by mass spectrometry: toward a human mitochondrial proteome 〔J〕. Electrophoresis, 1998,19:1006-1014. 〔7〕 Fountoulakis M, Berndt P, Langen H, et al. The rat liver mitochondrial proteins〔J〕. Electrophoresis, 2002,23:311-328. 〔8〕 Mootha VK, Bunkenborg J, Olsen JV, et al. Integrated analysis of protein composition, tissue diversity, and gene regulation in mouse mitochondria 〔J〕. Cell, 2003,115(5): 629-640. 〔9〕 Cruz SD, Xenarios I, Langridge J, et al. Proteomic analysis of the mouse liver mitochondrial inner membrane 〔J〕. J Biol Chem, 2003, 278(42): 41566-41571. 〔10〕 Devreese B, Vanrobaeys F, Smet J, et al. Mass spectrometric identification of mitochondrial oxidative phosphorylation subunits separated by twodimensional bluenative polyacrylamide gel electrophoresis 〔J〕. Electrophoresis, 2002,23: 2525-2533. 〔11〕 Scharfe C, Zaccaria P, Hoertnagel K, et al. MITOP, the mitochondrial proteome database: 2000 update 〔J〕. Nuc Acid Res, 2000,28(1):155-158. 〔12〕 Andreoli C, Prokisch H, Hortnagel K, et al. MitoP2, an integrated database on mitochondrial proteins in yeast and man 〔J〕. Nuc Acid Res, 2004,32(90001):459-462. 〔13〕 Taylor SW, Warnock DE, Glenn GM, et al. An alternative strategy to determine the mitochondrial proteome using sucrose gradient fractionation and 1D PAGE on highly purified human heart mitochondria 〔J〕. J Proteome Res, 2002,1(5):451-458. 〔14〕 Pflieger D, Le Caer JP, Lemaire C, et al. Systematic identi?cation of mitochondrial proteins by LCMS/MS 〔J〕. Anal Chem, 2002,74:2400-2406. 〔15〕 Scheffler NK, Miller SW, Carroll AK, et al. Twodimensional electrophoresis and mass spectrometric identification of mitochondrial proteins from an SHSY5Y neuroblastoma cell line〔J〕. Mitochondrion, 2001,1(2):161-179.
蛋白质提取与制备的原理和方法 蛋白质提取与制备蛋白质种类很多，性质上的差异很大，既或是同类蛋白质，因选用材料不同，使用方法差别也很大，且又处于不同的体系中，因此不可能有一个固定的程序适用各类蛋白质的分离。但多数分离工作中的关键部分基本手段还是共同的，大部分蛋白质均可溶于水、稀盐、稀酸或稀碱溶液中，少数与脂类结合的蛋白质溶于乙醇、丙酮及丁醇等有机溶剂中。因此可采用不同溶剂提取、分离及纯化蛋白质和酶。蛋白质与酶在不同溶剂中溶解度的差异，主要取决于蛋白分子中非极性疏水基团与极性亲水基团的比例，其次取决于这些基团的排列和偶极矩。故分子结构性质是不同蛋白质溶解差异的内因。温度、pH、离子强度等是影响蛋白质溶解度的外界条件。提取蛋白质时常根据这些内外因素综合加以利用。将细胞内蛋白质提取出来。并与其它不需要的物质分开。但动物材料中的蛋白质有些可溶性的形式存在于体液（如血浆、消化硫等）中，可以不必经过提取直接进行分离。蛋白质中的角蛋白、胶原及丝蛋白等不溶性蛋白质，只需要适当的溶剂洗去可溶性的伴随物，如脂类、糖类以及其他可溶性蛋白质，最后剩下的就是不溶性蛋白质。这些蛋白质经细胞破碎后，用水、稀盐酸及缓冲液等适当溶剂，将蛋白质溶解出来，再用离心法除去不溶物，即得粗提取液。水适用于白蛋白类蛋白质的抽提。如果抽提物的pH用适当缓冲液控制时，共稳定性及溶解度均能增加。如球蛋白类能溶于稀盐溶液中，脂蛋白可用稀的去垢剂溶液如十二烷基硫酸钠、洋地黄皂苷（Digitonin）溶液或有机溶剂来抽提。其它不溶于水的蛋白质通常用稀碱溶液抽提。蛋白质类别和溶解性质 白蛋白和球蛋白：溶于水及稀盐、稀酸、稀碱溶液，可被50%饱和度硫酸铵析出。真球蛋白：一般在等电点时不溶于水，但加入少量的盐、酸、碱则可溶解。拟球蛋白：溶于水，可为50%饱和度硫酸铵析出醇溶蛋白：溶于70～80%乙醇中，不溶于水及无水乙醇壳蛋白：在等电点不溶于水，也不溶于稀盐酸，易溶于稀酸、稀碱溶液精蛋白：溶于水和稀酸，易在稀氨水中沉淀组蛋白：溶于水和稀酸，易在稀氨水中沉淀硬蛋白质: 不溶于水、盐、稀酸及稀碱缀合蛋白(包括磷蛋白、粘蛋白、糖蛋白、核蛋白、脂蛋白、血红蛋白、金属蛋白、黄素蛋白和氮苯蛋白等): 此类蛋白质溶解性质随蛋白质与非蛋白质结合部分的不同而异，除脂蛋白外，一般可溶于稀酸、稀碱及盐溶液中，脂蛋白如脂肪部分露于外，则脂溶性占优势，如脂肪部分被包围于分子之中，则水溶性占优势。蛋白质的制备是一项十分细致的工作。涉及物理学、化学和生物学的知识很广。近年来虽然有了不改进，但其主要原理仍不外乎两个方面：一是利用混合物中几个组分分配率的差别，把它们分配于可用机械方法分离的两个或几个物相中，如盐析、有机溶剂提取、层析和结晶等；二是将混合物置于单一物相中，通过物理力场的作用使各组分分配于不同区域而达到分离的目的，如电泳、超离心、超滤等。由于蛋白质不能溶化，也不能蒸发，所能分配的物相只限于固相和液相，并在这两相间互相交替进行分离纯化。制备方法可按照分子大小、形状、带电性质及溶解度等主要因素进行分类。按分子大小和形态分为差速离心、超滤、分子筛及透析等方法；按溶解度分为盐析、溶剂抽提、分配层析、逆流分配及结晶等方法；按电荷差异分为电泳、电渗析、等电点沉淀、离子交换层析及吸附层析等；按生物功能专一性有亲合层析法等。由于不同生物大分子结构及理化性质不同，分离方法也不一样。即同一类生物大分子由于选用材料不同，使用方法差别也很大。因此很难有一个统一标准的方法对任何蛋白质均可循用。因此实验前应进行充分调查研究，查阅有关文献资料，对欲分离提纯物质的物理、化学及生物学性质先有一定了解，然后再着手进行实验工作。对于一个未知结构及性质的试样进行创造性的分离提纯时，更需要经过各种方法比较和摸索，才能找到一些工作规律和获得预期结果。其次在分离提纯工作前，常须建立相应的分析鉴定方法，以正确指导整个分离纯化工作的顺利进行。高度提纯某一生物大分子，一般要经过多种方法、步骤及不断变换各种外界条件才能达到目的。因此，整个实验过程方法的优劣，选择条件效果的好坏，均须通过分析鉴定来判明。另一方面，蛋白质常以与其他生物体物质结合形式存在，因此也易与这些物质结合，这给分离精制带来了困难。如极微量的金属和糖对巨大蛋白质的稳定性起决定作用，若被除去则不稳定的蛋白质结晶化的难度也随之增加。如高峰淀粉酶A的Ca2+，胰岛素Zn2+等。此外，高分子蛋白质具有一定的立体构象，相当不稳定，如前所述极易变性、变构，因此限制了分离精制的方法。通常是根据具体对象联用各种方法。为得到天然状态的蛋白质，尽量采用温和的手段，如中性、低温、避免起泡等，并还要注意防腐。注意共存成分的影响。如蝮蛇粗毒的蛋白质水解酶活性很高，在分离纯化中需引起重视。纯化蝮蛇神经毒素时，当室温超过20℃时，几乎得不到神经毒素。蝮蛇毒中的蛋白水解酶能被0.1mol/L EDTA完全抑制，因此在进行柱层析前先将粗毒素0.1mol/LEDTA溶液处理，即使在室温高于20℃，仍能很好的得到神经毒素。整个制备过程一般可分为5个阶段：①材料的选择和预处理②细胞的破碎（有时需进行细胞器的分离）③提取④纯化（包括盐析，有机溶剂沉淀，有机溶剂提取、吸附、层析、超离心及结晶等）⑤浓缩、干燥及保存。以上5个阶段不是要求每个方案都完整地具备，也不是每一阶段截然分开。不论是哪一阶段使用哪一种方法，均必须在操作中保存生物大分子结构的完整性。保存活性防止变性及降解现象的发生。因空间结构主要依靠氢键、盐键和范德华力的存在，遇酸、遇碱、高温、剧烈的机械作用及强烈的辐射等均可导致活性丧失。因此选择的条件应为十分温和。同时应注意防止系统中重金属离子、细胞自身酶系及其他有毒物质的污染。蛋白质提取与制备的注意事宜：一、原料的选择早年为了研究的方便，尽量寻找含某种蛋白质丰富的器官从中提取蛋白质。但至目前经常遇到的多是含量低的器官或组织且量也很小，如下丘脑、松果体、细胞膜或内膜等原材料，因而对提取要求更复杂一些。原料的选择主要依据实验目的定。从工业生产角度考虑，注意选含量高、来源丰富及成本低的原料。尽量要新鲜原料。但有时这几方面不同时具备。含量丰富但来源困难，或含量来源均理想，但分离纯化操作繁琐，反而不如含量略低些易于获得纯品者。一般要注意种属的关系，如鲣的心肌细胞色素C较马的易结晶，马的血红蛋白 较牛的易结晶。要事前调查制备的难易情况。若利用蛋白质的活性，对原料的种属应几乎无影响。如利用胰蛋白 酶水解蛋白质的活性，用猪或牛胰脏均可。但若研究蛋白质自身的性质及结构时，原料的来源种属必须一定。研究由于病态引起的特殊蛋白质（本斯.琼斯氏蛋白 、贫血血红蛋白 ）时，不但使用种属一定的原料，而且要取自同一个体的原料。可能时尽量用全年均可采到的原料。对动物生理状态间的差异（如饥饿时脂肪和糖类相对减少），采收期及产地等因素也要注意。二、前处理1、细胞的破碎材料选定通常要进行处理。要剔除结缔组织及脂肪组织。如不能立即进行实验，则应冷冻保存。除了提取及胞细外成分，对细胞内及多细胞生物组织中的蛋白质的分离提取均须先将细胞破碎，使其充分释放到溶液中。不同生物体或同一生物体不同的组织，其细胞破坏难易不一，使用方法也不完全相同。如动物胰、肝、脑组织一般较柔软，作普通匀浆器磨研即可，肌肉及心组织较韧，需预先绞碎再制成匀桨。⑴机械方法主要通过机械切力的作用使组织细胞破坏。常用器械有：①高速组织捣碎机（转速可达10000rpm，具高速转动的锋利的刀片），宜用于动物内脏组织的破碎；②玻璃匀浆器（用两个磨砂面相互摩擦，将细胞磨碎），适用于少量材料，也可用不锈钢或硬质塑料等，两面间隔只有十分之几毫米，对细胞破碎程度较高速捣碎机高，机械切力对分子破坏较小。小量的也可用乳钵与适当的缓冲剂磨碎提取，也可加氧化铝、石英砂及玻璃粉磨细。但在磨细时局部往往生热导致变性或pH显著变化，尤其用玻璃粉和氧化铝时。磨细剂的吸附也可导致损失。⑵物理方法主要通过各种物理因素的作用，使组织细胞破碎的方法。Ⅰ反复冻融法于冷藏库或干冰反复于零下15～20℃使之冻固，然后缓慢地融解，如此反复操作，使大部分细胞及细胞内颗粒破坏。由于渗透压的变化，使结合水冻结产生组织的变性，冰片将细胞膜破碎，使蛋白质可溶化，成为粘稠的浓溶液，但脂蛋白 冻结变性。Ⅱ冷热变替法将材料投入沸水中，于90℃左右维持数分钟，立即置于冰浴中使之迅速冷却，绝大部分细胞被破坏。Ⅲ超声波法暴露于9～10千周声波或10～500千周超声波所产生的机械振动，只要有设备该法方便且效果也好，但一次处理量较小。应用超声波处理时应注意避免溶液中气泡的存在。处理一些超声波敏感的蛋白质酶时宜慎重。Ⅳ加压破碎法加一定气压或水压也可使细胞破碎。⑶化学及生物化学方法Ⅰ有机溶媒法粉碎后的新鲜材料在0℃以下加入5～10倍量的丙酮，迅速搅拌均匀，可破碎细胞膜，破坏蛋白质与脂质的结合。蛋白质一般不变性，被脱脂和脱水成为干燥粉末。用少量乙醚洗，经滤纸干燥，如脱氢酶等可保存数月不失去活性。Ⅱ自溶法将待破碎的鲜材料在一定pH和适当的温度下，利用自身的蛋白 酶将细胞破坏，使细胞内含物释放出来。比较稳定，变性较难，蛋白质不被分解而可溶化。利用该法可从胰脏制取羧肽酶。自体融解时需要时间，需加少量甲苯、氯仿等。应防止细菌污染。于温室30℃左右较早溶化。自体融解过程中PH显著变化，随时要调节pH。自溶温度选在0～4℃，因自溶时间较长，不易控制，所以制备活性蛋白质时较少用。Ⅲ酶法与前述的自体融法同理，用胰蛋白酶等蛋白酶除去变性蛋白质。但值得提出的是溶菌酶处理时，它能水解构成枯草菌等菌体膜的多糖类。能溶解菌的酶分布很广。尤其卵白中含量高，而多易结晶化。1g菌体加1～10mg溶菌酶，pH6.2～7.01h内完全溶菌。于生理食盐水或0.2mol蔗糖溶液中溶菌，虽失去细胞膜，但原形质没有脱出。除溶菌酶外，蜗牛酶及纤维素酶也常被选为破坏细菌及植物细胞用。表面活性剂处理较常用的有十二烷基磺酸钠、氯化十二烷基吡淀及去氧胆酸钠等。此外一些细胞膜较脆弱的细胞，可把它们置于水或低渗缓冲剂中透析将细胞胀破。2、细胞器的分离制备某一种生物大分子需要采用细胞中某一部分的材料，或者为了纯化某一特定细胞器上的生物大分子，防止其他细胞组分的干扰，细胞破碎后常将细胞内各组分先行分离，对于制备一些难度较大需求纯度较高的生物大分子是有利的。尤其近年来分子生物学、分子遗传学、遗传工程等学科和技术的发展，对分布在各种细胞器上的核酸和蛋白质的研究工作日益增多，分离各种细胞器上的各类核酸和特异性蛋白质已成为生物大分子制备工作重要内容之一。各类生物大分子在细胞内的分布是不同的。DNA几乎全部集中在细胞核内。RNA则大部分分布于细胞质。各种酶在细胞内分布也有一定位置。因此制备细胞器上的生物大分子时，预先须对整个细胞结构和各类生物大分子在细胞内分布匹有所了解。以肝细胞为例,蛋白质、酶及核酸在肝细胞内分布情况为: 细胞核: 精蛋白、组蛋白、核酸合成酶系 RNA占总量10%左右 DNA几乎全部粒线体: 电子传递、氯化磷酸化、三羧酸循环、脂肪酸氧化、氨基酸氧化、脲合成等酶 系RNA占总量5%左右 DNA微量内质网（微粒体）: 蛋白质合成酶系、羟化酶系 RNA占总量50%左右溶酶体：水解酶系（包括核酸酶、磷酸脂酶、组织蛋白酶及糖苷及糖苷酶等） 高尔基氏体: 糖苷转移酶、粘多糖及类固醇合成酶系 细胞膜：载体与受体蛋白、特异抗蛋、ATP酶、环化腺苷酶、5’-核苷酸酶、琥珀酸脱氢酶、葡萄糖-6-磷酸酶等 ,细胞液 嘧啶和嘌呤代谢、氨基酸合成酶系、可溶性蛋白类 RNA（主要为tRNA）占总量30%.细胞器的分离一般采用差速离心法。细胞经过破碎后，在适当介质中进行差速离心。利用细胞各组分质量大小不同，沉降于离心管内不同区域，分离后即得所需组分。细胞器的分离制备、介质的选择十分重要。最早使用的介质是生理盐水。因它容易使亚细胞颗粒发生聚集作用结成块状，沉淀分离效果不理想，现一般改用蔗糖、Ficoll（一种蔗糖多聚物）或葡萄糖-聚乙二醇等高分子溶液。1.水溶液提取大部分蛋白质均溶于水、稀盐、稀碱或稀酸溶液中。因此蛋白质的提取一般以水为主。稀盐溶液和缓冲溶液对蛋白质稳定性好、溶度大，也是提取蛋白质的最常用溶剂。以盐溶液及缓冲液提取蛋白质经常注意下面几个因素。盐浓度等渗盐溶液尤以0.02～0.05mol/L磷酸盐缓冲液和碳酸盐缓冲液常用。0.15mol/L氯化钠溶液应用也较多。如6-磷酸葡萄糖脱氢酶用0.1mol/L碳酸氢钠液提取等。有时为了螯合某些金属离子和解离酶分子与其他杂质的静电结合，也常使用枸橼酸钠缓冲液和焦磷酸钠缓冲液。有些蛋白质在低盐浓度下浓度低，如脱氧核糖核蛋白质需用1mol/L以上氯化钠液提取。总之，只要能溶解在水溶液中而与细胞颗粒结合不太紧密的蛋白质和酶，细胞破碎后选择适当的盐浓度及PH，一般是不难提取的。只有某些与细胞颗粒上的脂类物质结合较紧的，需采用有机溶剂或加入表面活性剂处理等方法提取。PH值蛋白质提取液的PH值首先应保证在蛋白质稳定的范围内，即选择在偏离等电点两侧。如碱性蛋白质则选在偏酸一侧，酸性蛋白质选择偏碱一侧，以增大蛋白质的溶解度，提高提取效果。如细胞色素C属碱性蛋白质，常用稀酸提取，肌肉甘油醛-3-磷酸脱氢酶属酸性蛋白质，用稀碱提取。某些蛋白质或酶与其分物质结合常以离子键形式存在，选择pH3～6范围对于分离提取是有利的。温度多数酶的提取温度在5℃以下。少数对温度耐受性较高的蛋白质和酶，可适当提高温度，使杂蛋白变性分离且也有利于提取和进一步纯化。如胃蛋白酶等及许多多肽激素类，选择37～50℃条件下提取，效果比低温提取更好。此外提取酶时加入底物或辅酶，改变酶分子表面电荷分布，也能促进提取效果。2.有机溶剂提取有机溶剂提取用于提取蛋白质的实例至今是不多的。但一些和脂结合较牢或分子中非极性侧链较多的蛋白质，不溶于水、稀盐或稀碱液中，可用不同比例的有机溶剂提取。从一些粒线体（Mitochondria）及微粒体（Microsome）等含多量脂质物质中提取蛋白质时，采用Morton的丁醇法效果较好。因丁醇使蛋白质的变性较少，亲脂性强，易透入细胞内部，与水也能溶解10%，因此具有脂质与水之间的表面活性作用，可占据蛋白质与脂质的结合点，也阻碍蛋白质与脂质的再结合，使蛋白质在水中溶解能力大大增加。丁醇提取法的pH及温度选择范围较广（pH3～10，温度-2℃至40℃）。国内用该法曾成功地提取了琥珀酸脱氢酶。丁醇法对提取碱性磷酸脂酶效果也是十分显著的。胰岛素既能溶于稀酸、稀碱又能溶于酸性乙醇或酸性丙酮中。以60―70%的酸性乙醇提取效果最好，一方面可抑制蛋白质水解酶对胰岛素的破坏，同时也达到大量除去杂蛋白的目的。3.表面活性剂的利用 对于某些与脂质结合的蛋白质和酶，也有采用表面活性剂如胆酸盐及十二烷基磺酸钠等处理。表面活性剂有阴离子型（如脂肪酸盐、烷基苯磺酸盐及胆酸盐等），阳离子型（如氧化苄烷基二甲基铵等）及非离子型（Triton X-100 、Tirton X-114、吐温60及吐温80）等。非离子型表面活性剂比离子型温和，不易引起酶失活，使用较多。对于膜结构上的脂蛋白和结构，己广泛采用胆酸盐处理，两者形成复合物，并带上净电荷，由于电荷再排斥作用使膜破裂。近年来研究膜蛋白使用表面活性剂的稀溶液提取时，较喜欢用非离子型表面活性剂。4.对提取物的保护在各种细胞中普遍存在着蛋白水解酶，提取时要注意防止由它引起的水解。前面所讲的降低提取温度其目的之一也是防止蛋白水解酶的水解。多数蛋白水解酶的最适PH在3～5或更高些，因在较低PH条件下可降低蛋白质水解酶引起的破坏程度。低pH可使许多酶的酶原在提取过程中不致激活而保留在酶原状态，不表现水解活力。加蛋白质水解酶的抑制剂也同样起保护作用，如以丝氨酸为活性中心的酶加二异丙基氟磷酸，以巯基为中心的酶加对氯汞苯甲酸等。提取溶液中加有机溶剂时也能产生相类似的作用。蛋白水解酶的性质变化很大，上述条件均视具体对象而变化。有一些蛋白含巯基，这些巯基可能是活性所必需。在提取这种蛋白不要带入金属离子和氧化剂。前者可往提取液中加金属螯合剂如EDTA，后者可加入还原剂如抗坏血酸。有某些蛋白质带一些非共价键结合的配基。提取时要注意保护，不要使酸基丢失。蛋白质提取与制备的方法：1.分离纯化的原则从破碎材料或细胞器提出的蛋白质是不纯的，需进一步纯化。纯化包括将蛋白质与非蛋白质分开，将各种不同的蛋白质分开。选择提取条件时，就要考虑尽量除去非蛋白质。一般总是有其它物质伴随混入提取液中。但有些杂质（如脂肪）以事先除去为宜。先除去便于以后操作。常用有机溶剂提取除去。对于异类物质，提纯蛋白质和酶时常混有核酸或多糖，一般可用专一性酶水解，有机溶剂抽取及选择性部分沉淀等方法处理。小分子物质常在整个制备过程中通过多次液相与固相转化中被分离或最后用透析法除去。而对同类物质如酶与杂蛋白、RNA、DNA以及不同结构的蛋白质、酶、核酸之间产分离，情况则复杂得多。主要采用的方法有盐析法、有机溶剂沉淀法，等电点沉淀法、吸附法、结晶法、电泳法、超离心法及柱层析法等。其中盐析法、等电点法及结晶法用于蛋白质和酶的提纯较多，有机溶剂抽提和沉淀用于核提纯较多，柱层析法、梯度离心法对蛋白质和核酸的提纯应用十分广泛。如前所述，蛋白质的分离纯化较难，而且其本身的性质又限制了某些方法的使用，因此要研究目的物的微细特征，巧妙的联用各种方法并进行严密的操作，同时有必要了解精制各过程的精制程度和回收率。具有活性的蛋白质可利用吸收光谱等物理性质或以相当于单位氮活性增加为尺度进行追踪。其他蛋白质可用电泳、超离心、层析、扩散及溶解等测定纯度。如结晶核糖核酸酶经层析分为两个成分。可见对确定蛋白质结晶纯度尚无最终的尺度。根据经验即或纯净的标准品，有极微量的不纯物时，也会给实验带来较大的影响。不稳定的蛋白质，如分离SH-酶时使用试剂及缓冲液等，要确认不含重金属离子（特级试剂也需检定）。蛋白质纯化的操作如脱盐、浓缩干燥等均与低分子化合物不同，必须经过独特的繁琐操作。蛋白质和蛋白质相互分离主要利用它们之间的各种性质的微小差别。诸如分子形状、分子量大小、电离性质、溶解度、生物功能专一性等。蛋白质提取液中，除包含所需要的蛋白质（或酶）外，还含有其它蛋白质、多糖、脂类、核酸及肽类等杂质。杂质除去的方法有：A.核酸沉淀法该法可用核酸沉淀剂和氯化锰、硫酸鱼精蛋白或链霉素等。必要时也可用脱氧核糖核酸酶除去核酸。即在粗匀浆中加入少量DNase,于4℃保温30～60min，可使DNA降解为足够小的碎片，以致不影响以后的纯化。B.醋酸铅沉淀法利用醋酸铅沉淀剂除去杂蛋白。因这些沉淀剂也常常使需要的酶（或蛋白质）缓缓变性而失去活性，所以用这类试剂时应迅速进行盐析，使样品与这类试剂脱离接触。C.调pH值或加热沉淀法利用蛋白质酸碱变性性质的差异除去杂蛋白。利用蛋白质的热变性的温度系数差异，可在一定的PH下将蛋白提取液加热到一定的温度，使对热不稳定的杂蛋白性沉淀而除去。D.选择性变性法利用各种蛋白质稳定性的不同，可用选择性变性法来除去杂蛋白 。例如胰蛋白 酶及细胞色素C等少数特别稳定的酶，甚至可用2.5%三氯醋酸处理，此时其它杂蛋白 均变性而沉淀，而胰蛋白 酶和细胞色素C则仍留在溶液中。E.透析法小分子物质常在整个制备过程中多次液相与固相互转化中被分离，或最后用透析法除去。F.利用溶解度不同的纯化方法2.盐析法盐析法对于许多非电解质的分离纯化均适合。对蛋白质和酶的提纯应用也最早。至今还广泛使用，一般粗抽提物经常利用盐析法进行粗分。也有反复用盐析法得到纯的蛋白质的例子。其原理是蛋白质在低盐浓度下的溶解度随盐液浓度升高而增加（盐溶，与离子强度10～1间成比例增加）。球蛋白 当盐浓度不断上升时，蛋白质的溶解度又以不同程度下降并先后析出（盐析）（离子强度I2～10）。这是由于蛋白质分子内和分子间的电荷的极性基团有静电引力。当水中加入少量盐时，盐离子与水分子对蛋白质分子一的极性基团的影响，使蛋白质在水中溶解度增大。但盐浓度增加一定程度时，水的活度降低，蛋白质表面的电荷大量被中和，水化膜被破坏，于是蛋白质相互聚集而沉淀析出。盐析法是根据不同蛋白质在一定浓度盐溶液中溶解度降低程度不同达到彼此分离的方法。盐的选择如上所述，蛋白质在水中溶解度取决于蛋白质分子上离子基团周围的水分子数目，即取决于蛋白质的水合程度。因此，控制水合程度，也就是控制蛋白质的溶解度。控制方法最常用的是加入中性盐。主要有硫酸铵、硫酸镁 、硫酸钠、氯化钠、磷酸钠等。其中应用最广的是硫酸铵，它的优点是温度系数小而溶解度大（25℃时饱满和溶解度为4.1mol,即767g/l;0℃时饱满和溶解度为3.9mol,即676g/l）。在这一溶解度范围内，许多蛋白质均可盐析出来，且硫酸铵价廉易得，分段效果较其它盐好，不易引起蛋白质变性。应用硫酸铵时对蛋白 氮的测定有干扰，另外缓冲能力较差，故有时也应用硫酸钠，如盐析免疫球蛋白 ，用硫酸钠的效果也不错，硫酸钠的缺点是30℃以下溶解度太低。其它的中性盐如磷酸钠的盐析作用比硫酸铵好，但也由于溶解度太低，受温度影响大，故应用不广。氯化钠的溶解度不如硫酸铵，但在不同温度下它的溶解度变化不大，这是方便之处。它也是便宜不易纯化的试剂。硫酸铵浓溶液的PH常在4.5～5.5之间,市售的硫酸铵还常含有少量游离硫酸,PH值往往降至4.5以下,当用其他PH值进行盐析时,需用硫酸或氨水调节.确定沉淀蛋白质所需硫酸铵浓度的方法将少量样品冷却到0～5℃，然后搅拌加入固体硫酸铵粉末，见蛋白质产生沉淀时，离心除去沉淀，分析上清液确定所要蛋白质的浓度，如它仍在溶液中则弃去沉淀，再加更多的硫酸铵于上清液中，直到产生蛋白质沉淀时止。以所要提取的蛋白质在溶液中的浓度对硫酸铵浓度作图，得沉淀曲线，找出蛋白质开始沉淀的浓度。如不考虑收率，饱和度区间可取得窄一些，使纯度高一些。盐析时注意的几个问题:(1)盐的饱和度: 不同蛋白质盐析时要求盐的饱和度不同。分离几个混合组成的蛋白质时，盐的饱和度常由稀到浓渐次增加。每出现一种蛋白质沉淀进行离心或过滤分离后，再继续增加盐的饱和度，使第2种蛋白质沉淀。例如用硫酸铵盐析分离血浆中的蛋白质饱和度达20%时，纤维蛋白原首先析出；饱和增至28～33%时，优球蛋白 析出；饱和度再增至33～50%时，拟球蛋白 析出；饱和度大于50%以上时清蛋白 析出。用硫酸铵不同饱和度分段盐析法，可从牛胰酸性提取液中分离得到9种以上蛋白质及酶。(2)PH值: pH值在等电点时蛋白质溶解度最小易沉淀析出。因此盐析时除个别特殊情况外，pH值常选择在被分离的蛋白质等电点附近。由于硫酸铵有弱酸性，它的饱和溶液的pH值低于7，如所要蛋白质遇酸易变性则应在适当缓冲液中进行。(3)蛋白质浓度: 在相同盐析条件下蛋白质浓度愈高愈易沉淀。使用盐的饱和度的极限也愈低。如血清球蛋白 的浓度从0.5%增至3.0%时,需用中性盐的饱和度的最低极限从29%递减至24%.某一蛋白质欲进行两次盐析时,第1次由于浓度较稀,盐析分段范围较宽,第2次则逐渐变窄.例如胆碱酯酶用硫酸铵盐析进时，第1次硫酸铵饱和度为35%至60%,第2次为40%至60%.蛋白质浓度高些虽然对沉淀有利,但浓度过高也易引起杂蛋白的共沉作用.因此,必须选择适当浓度尽可能避免共沉作用的干扰。(4)温度: 由于浓盐液对蛋白质有一定保护作用，盐析操作一般可在室温下进行。至于某些对热特别敏感的酶，则宜维持低温条件。通常蛋白质盐析时对温度要求不太严格。但在中性盐中结晶纯化时，温度影响则比较明显。================================================
我不是研究这方面的，写个大概。你自己琢磨。这是按万字以上的论文提纲写的。。一、中西酒文化差异的国内外研究现状二、中西酒文化的基本范畴和相通之处三、中西酒文化差异表现。这应是重点章。一般来说，应该分为物质和精神两个层次。物质方面，你比如说对中西方对酒的偏好不同；酒器的使用也不同。精神方面，比如喝酒礼仪、酒的精神内涵都是有差异性的。四、中西酒文化差异的原因。历史啊、民族啊、地理环境啊等等五、结论部分。通过研究这种差异性有啥积极作用或影响。最明显的影响肯定是有助于中西方文化交流。好了，大概就这么多，根据你的落脚点可以多方面发挥。。。。
中西方酒文化论文
人的情绪情感是一种复杂而又高级的心理活动，喝酒能加速人的情绪情感的变化与构成。那么，中西方酒文化有什么不同呢?
一、宗教信仰的影响
人们的宗教信仰和酒的关系密切：一方面，宗教的教义影响着人们的饮酒行为;另一方面，人们的许多宗教活动又都离不开酒。
佛教在中国的影响较为广泛。
佛教的五条戒律中就有“不饮酒”这一条。
很多中国人信奉佛教的教戒，尽可能地不饮酒或控制饮酒;再加上中国的酒大多是用粮食酿造的。
所以，人们对于饮酒持的是一种比较谨慎的态度：认为喝酒只要达到一种微醺之境即可，当一个飘飘然的“酒仙”，而不愿当一个喝酒喝到失去常态的“酒鬼”。
可以这么说，佛教戒律对人们的饮酒行为影响很大，甚至起支配作用。
然而，西方人的主流宗教是基督教，葡萄酒在《圣经》里多次被提到。
耶稣在知道了自己的命运后,在最后的晚餐上说：“面包是我的肉，葡萄酒是我的血。”其目的在于要人们记住他是为人类赎罪而死的。
因此，基督教徒视葡萄酒为圣血———耶稣的血液。
他们在做弥撒的时侯喝圣血、吃圣体，视酒为耶稣救世精神的化身，认为人喝了酒就能与上帝的心灵相通，从而得到仁慈上帝的佑护。
在此背景下，人们对于葡萄酒怀着一种喜爱、敬仰的心情，教会人员把种植葡萄和酿造葡萄酒看作是他们的份内事。
在宗教活动中，人们分食象征着基督血与肉的葡萄酒和面包，旨在继承基督精神。
在举行酒神祭祀的时侯，人们结队游荡，组成合唱表演队唱酒神颂歌，载歌载舞，在树林里或者在荒野里喝酒纵情狂欢，人的本性得到了完全地释放。
二、价值观的影响
中国的酒文化典型地体现了集体主义的价值观念。
中国人之间的关系倾向于依靠、合作，也就是一种集体主义的紧密社会结构。
中国人喝酒讲究气氛，三五成群，呼朋引伴。
在喝酒时，中国人常常敬酒、劝酒，遇上喜庆节日的时侯还会有一些活动，比如划拳、行酒令、做游戏等来活跃饮酒气氛。
劝酒不仅表现了中国人的热情好客，更与他们的集体主义思维有很大的关系。
一群中国人喝酒要比一群西方人喝酒更热闹、更有趣。
除非是借酒消愁的或者是嗜酒如命的，否则很少看得到独自饮酒作乐的中国人。
中国人的集体主义的紧密社会结构使得他们视酒为交际工具，大家聚在一起喝酒大都是出于联络感情的需要。
在中国酒被赋予了很多感情色彩，酒是联系中国人感情的纽带、润滑剂。
人们喝的是酒，饮的是感情，重视的是饮酒人，劝对方多喝是为了表示友好、诚意。
夸张点讲，在中国，人与人之间的感情是喝出来的，“感情深，一口闷;感情浅，舔一舔。”在中国人的人际关系交往中酒起着非常重要的作用，“无酒不成席”、“无酒情不厚，无酒礼不真”，以酒寄情，“一切尽在不言中”。
中国人还注重“以人为本”，认为酒是为人服务的。
因此，不管是繁多的酒器、敬酒的次序还是在饮酒者座位的安排上，无不体现出了中国酒文化“以人为本”的价值观。
然而，西方的酒文化则是个人主义的体现，一切都以自己为出发点。
尽管他们也会有群聚而饮，但他们更注重的是个人对酒的浅尝独酌。
西方人强调个人民主自由，从不干涉、强迫别人，所以他们在喝酒的时候全凭个人自由自主，不想喝就不喝，想喝多少就喝多少，无需客套。
西方人的这种个人主义也使得他们不愿意依赖别人，也不希望别人依赖自己，甚至包括自己的亲属。
他们之间这种关系决定了酒只能扮演艺术品的角色，是聚会的附属品。
西方这种个人主义的松散社会结构使得他们把酒看作是艺术品，他们是为欣赏美酒而饮酒。
西方人也讲究尊重个人隐私，互不干涉彼此，所以他们在酒桌上互相不敬酒、不劝酒，也不兴做游戏如划拳、猜数等。
只有在一些特定的场合，他们才会一同举杯。
西方人还注重“以物为本”，无论是酒礼、选择酒器时、还是在品饮的顺序上，他们都会认真考虑每一种酒的性质、味道，力求将不同酒的不同特点都表现得淋漓尽致。
三、心理因素的影响
酒文化也常常伴有心理因素的表现，并在一定程度上制约着人们的饮酒行为。
饮酒，作为一种社会的有规律的活动，是人们有意识地进行的，反映了人们一定的精神意志，人们的情趣和精神的寄托等，也常会反映出人们心理上的一些积淀。
它们在酒的作用下，就会在一定适宜的时间、场合、气氛中迸发出来。
这些也就构成了饮酒心理，它是酒文化内涵的重要组成部分，且往往是其中的核心。
中国人常常赋予酒很多感情色彩，他们的饮酒心理更多地趋向于精神层面。
①表现人格和个性的心理，通过饮酒就表现得更加充分具体了。
比如唐代的李白，对酒的爱好以及他独特的饮酒神态反映了他酷爱自由、不受拘束的个性。
②反映动机和需要的心理。
中国人饮不同的酒有不同的需要和动机，比如通过喝白酒来抵御寒冷，喝药酒来强身健体或治病。
③显示观念和理想的心理。
人们对某些观念的崇尚以及对理想的追求也常会蕴含在酒文化活动中。
比如在中国有不少民族都有“三杯酒”的习俗。
敬三杯酒，罚三杯酒，其中“三”这一数字就包含追求圆满的意思。
④激发思维和灵感的心理。
适量饮酒能刺激人们的思维能力，激发灵感，使人展开想象的翅膀。
中国历史上许多诗人为了激发诗兴而饮酒，像李白、杜甫、辛弃疾等，他们在酒后写下了许多经典之作。
“李白斗酒诗百篇”就是此意。
⑤升华情绪和情感的心理。
人的.情绪情感是一种复杂而又高级的心理活动，喝酒能加速人的情绪情感的变化与构成。
所以，人一般在饮酒的时侯更容易吐露自己内心的真实情感，即人们常说的“酒后吐真言”。
而西方人更多地视酒为个人愉悦感官、舒缓精神的一种物质。
正如他们选择酒器是为了更好地来品酒一样，他们不像中国人那样赋予酒很多东西，利用酒来传情达意。
西方人以生命的欢畅为主题。
德国哲学家尼采认为饮酒就是情绪的发泄，是抛弃传统束缚回归原始状态的生存体验，人类在消失个体与世界合一的绝望痛苦的哀号中获得生的极大快意。
整天忙忙碌碌，面对生活的无奈、感叹生命的短暂无常，只有在酒酣耳热后，沉重的心灵才能得以片刻的慰藉，脆弱的人性才能得以片刻的解脱。
总之，酒作为一种饮品得到了很多中外人士的喜爱，并在人们的日常生活中起着重要的作用。
由于中西方人不同的宗教信仰、价值观、心理因素、生活环境、风俗习惯以及思维方式等方面的不同，导致了中西方酒文化之间的差异。
随着当今中西方交流的扩大，了解中西方酒文化之间的差异有助于人们理解酒背后所隐藏的风格迥异的文化、民族意义，能够更好地为中西方的文化交流起到积极的促进作用。
酒作为中国的一种传统饮品，千百年来为我国人民所钟爱，享有“玉液”“琼浆”之美誉。随着社会经济的日益发展和生活方式的多元化，酿酒饮酒历史悠久的四川，在成为酒的主产区的同时也成为酒的主要消费区。在不断增加的饮酒人群中，部分基层干部的饮酒观念值得关注，酗酒诱发腐败与贪杯误事的事例屡见不鲜。这一现象，究其原因，除制度约束缺失外，我们认为，主要在于日常生活中缺少一种积极健康的、更少功利性的、融入了我们民族文化优秀传统和审美情趣的“酒德观”。 我国是世界三大酒系之一——白酒的发源地，中国的曲药酿造技术和酒文化，曾对人类文明产生过重大影响，有着杰出的贡献，被称为“四大发明”之外的第五大发明。 巴山钟灵，蜀水毓秀，勤劳智慧的巴蜀先民创造了光辉灿烂的酿酒业。如果说中国酒文化是一曲旋律优美的交响乐，巴蜀酒文化则是其中一篇最动人的乐章。这从历代巴蜀名酒及新中国成立后中国历届酒类评比中可见一斑。距今四千余年成都宝墩文化遗址出土的陶制酒器以及其后三星堆与彭县竹瓦街出土的精美青铜酒器，无不表明古蜀先民很早就掌握了谷物酿酒技术。西汉之时，四川酒便以文君当垆的典故引人入胜，汉代的画像砖更是形象生动的再现了当时四川酿酒业的发展盛况。唐代“剑南之烧春”被作为宫廷御酒，至此，四川酒跻身于华夏名酒之列。建国以后，四川酿酒业获得空前发展，成为全省食品工业的支柱产业，多年来对全省国民经济和财政收入作出了重要贡献，在全国酒类发展中也占有重要一席。四川名酒之多为全国之冠，享有“六朵金花”的美誉。时至今日，四川白酒业仍居行业领先地位。 四川酿酒自古兴盛，酿酒的原料、水性、土质和气候条件得天独厚。所谓一方水土养一方人，作为酒乡的四川人，在长期生产酒、消费酒，全方位地与酒打交道的过程中，与酒结下了不解之缘。一年之中，无论是建房起屋，还是婚娶丧葬、祝寿请客乃至饯别，酒都是少不了的。尤其是每逢祭祀、节庆、游赏，酒的需求更甚。除夕之夜，合家欢聚，有“团年酒”；正月里亲朋好友聚会，有“请春酒”；端午节为图吉利，要喝“雄黄酒”；九九重阳节，成都人要到望江楼或城内之鼓楼蒸酒；腊月二十三、二十四日要用酒祭灶。此外，还有“寿酒”、“婚酒”、“送亲酒”、“满月酒”等等，数不胜数。可以说，四川人举宴必酒，逢会必酒，会友须酒，待客须酒，就连平时宴请客人，不叫“请吃饭”，而是“请吃酒”。 此外，巴蜀地区世代居住着彝、藏、羌、土家、苗、回、纳西、僳、布依、满、傣、蒙古等众多的少数民族。这些少数民族有着各自独特的饮酒习俗，其丰富多彩的饮酒风俗给巴蜀酒文化增添了浓郁的民族风味。彝族谚语说：“汉人贵茶，彝人贵酒。”“为人不喝酒，白来世上走。”酒被彝民当作敬献英雄的琼浆，知心相遇的桥梁。藏族同胞普遍好酒，尤为喜爱青稞酒，青稞酒是藏族人民喜庆佳节，欢呼胜利，嫁娶迎接，至友团聚，别离饯行等活动中不可缺少的饮品。羌寨是充满酒香的世界，男女老幼几乎无人不喝咂酒。土家人平时用咂酒驱除疲劳，客人来时就用其招待，直到酩酊大醉为止。苗族同胞除饮咂酒外，还酿糯米酒、黄谷酒、玉米酒等，祭祖庆丰收，佳节喜事都喝酒。迎客有“迎客酒”，招待宾客有“交杯酒”，送客有“送客酒”。情真意切，叫人不得不喝。纳西族是豪饮的民族，而且能自酿水酒和白酒。僳僳族男女老幼在日常生活中都离不开水酒，其待客的最高礼节是饮“双人酒”。饮酒时，由主人斟好大婉酒，主客各一手捧住酒碗同时饮下，表示宾客之间亲密友好，情谊深长。 悠久的酿饮历史，丰富多彩的酒文化，使四川人不但与酒结友，甚至有相当一部分人嗜酒成癖。卫生部在全国开展的第三次卫生服务调查中，对四川省21个市、州中30个乡镇和30个街道的15岁以上城乡居民共10277人的饮酒状况进行了调查。其中经常饮酒的为12.5％，男性经常饮酒的为22.7％，高于同期全国平均水平。今年年初，中国保健协会发布了《2007年度关于四川省民众健康饮酒状况的调查报告》，四川饮酒人群平均单次饮酒量为2.76两(以38度酒为标准)，折算为纯酒精41.95克，超出了国际及我国现行的安全饮用标准。中国保健协会相关人士表示，根据调查，四川大多数饮酒者的健康饮酒状况不合格，如果以100分为满分，63.02％的饮酒者健康饮酒状况得分在59分以下，属于亟待加强科学饮酒观念的人群；60～74分之间的有30.70％，属于科学饮酒观念有待提高的人群；75～89分之间的人群只有6.14％，属于需要养成良好饮酒习惯的人群；90～100分的人群仅有0.14％，属于具有正确饮酒观念的人群。 佳酿之乡的四川人在日常生活中与酒结下了深厚情缘。尤其是在改革开放的今天，随着人们生活水平的提高和人际交往的增多，酒作为交际的媒介和手段，在庆功祝捷、结婚祝寿、签字立约、团圆接风等比较隆重的场合往往能更好地调节情绪、沟通思想、交流感情、增进友谊。而酒作为人际交往的媒介在国家和地方的政治生活中也发挥了相当作用。然而，在不少地方的一些部门，变质的官场酒局应酬已经明显超出了“合理”范畴，空耗了领导干部大量的时间和精力。领导干部忙于应酬，必然会产生误导，使下属视应酬为“工作”而仿效之，渐渐疏于职守，正可谓“上梁不正下梁歪”，极易扭曲工作作风滋生腐败，从而导致广大人民群众的强烈不满。在一些部门，官僚作风严重，不但普通群众上门办事门难进、人难找、脸难看、事难办，即使是下级党委、政府到上面去办事，也不容易。然而，很多事情在餐桌上比在会议室里更易于解决。于是，为了今后到上面办事容易点儿，下级干部则充分利用请客吃饭这一增进了解、加深感情的有效手段，只要上级机关的领导下来，就赔着笑脸来接待应酬。结果，筷子一举，酒杯一端，谈笑之间很多成问题的问题及不成问题的问题，均能迎刃而解。 人们在酒局社交中相互联系、互通信息、互相依存，形成酒桌上的熟人同盟，所以才有了一切情谊尽在酒中、酒逢知己千杯少、谈事儿要酒局，没事儿更要酒局等这样一些耳熟能详的表达。 不可否认，在社会生活中，酒局在联络感情，增进友谊方面有着不可替代的作用。由于许多由专业领域和正式组织领域中产生的原则和制度有一部分被熟人社会中的关系网所战胜，这种强化力量使得酒局变得越来越重要。通过酒局可以不断延伸关系的网络，可以获得新关系，巩固老关系。从“不会喝酒，前途没有；一喝九两，重点培养；只喝饮料，领导不要；能喝不输，领导秘书；一喝就倒，官位难保；常喝嫌少，人才难找；……”、“酒杯一端，政策放宽”、“能喝半斤喝一斤，这样的干部要提升”等调侃、夸张的顺口溜中，多多少少反映了部分基层单位官场酒文化中的不正之风。 但正如一位基层干部所说，应酬太多，自己不情愿，家人埋怨，群众抱怨，严重损耗了工作精力和身体健康，影响了干部形象。俗话说，“吃了人家的嘴软，拿了人家的手短”。酒桌上不分彼此，公事就很难做到公办。“酒杯一端，政策放宽”，“筷子一举，可以可以”。一些基层干部在觥筹交错、酒酣耳热之际，情变自然地大于法变：大事化小，小事化了； “豆腐渣工程”、“虚假数字”通过了；不该拨付的款项划出去了；一些“歪”干部提拔上来了……甚至邪念、色欲、胆量也随着酒气的升腾而冲向脑门，于是乎在头重脚轻、歪歪斜斜、晕晕乎乎之时干出了违法乱纪的傻事、坏事。 针对这一状况，有人提出“禁酒”，一些单位明令禁止工作日午餐饮酒。但效果并不理想。一些干部还找出种种借口为自己开脱：部属请，不喝容易脱离群众；下乡下点，不喝怕被人家猜忌。更何况，“酒桌能搞调查研究，喝酒可以摸到实情”。理由既如此堂皇，焉有不大喝特喝之理?!少数基层干部更是把陪领导喝酒作为联络感情的重要手段，不惜“喝坏党风喝坏胃，喝得单位没经费，喝得群众背靠背”。某些基层单位酒风仍然长盛不衰。 不少基层干部反映，越来越多的应酬、不必要的接待，好似一座“大山”压得他们喘不过气来，过多的应酬接待已严重影响了基层干部作风，尤其是过度饮酒，使一些基层干部苦不堪言。但为何部分基层干部嗜酒之风却日甚一日呢? 我们调查以为，除制度约束缺失外，主要是人们对酒缺乏一种正确的认识。 数千年来，有人视酒为福浆，不可一日无酒；有人视酒为祸水，宁可终生远离。酒，并非人人都喜好。爱酒的人，对它赞美备至，把它比作“玉液”、“甘露”，称之为“太平君子”、“天禄大夫”，不可须臾离之。“百年三万六千日，一日须饮三百杯”(李白诗)，直到“数茎白发那抛得?百罚深杯亦不辞”(杜甫诗)。他们终身与酒为伍，直到死而后已。恶酒的人，则把酒说得无一可取，非但不喝，有的一见就反感，甚至“头疼”。有的人认为，酒是致疾败行、乱性伤身的凶物，乃至说“亡国之君、败家之子”的出现，莫不与酒有关，可谓“深恶痛绝”。对于同一种食品，爱恶悬殊，对立鲜明，应该承认也是罕见的。酒如同一把双刃剑，严格地说，酒本身并无功过之分，骂酒誉酒，酒功酒过，全在于饮者自身如何把握。“过犹不及”，正反皆然，诚如司马迁在《史记》中所说：“酒极则乱，乐极生悲，万事尽然”。 显然，建立一种积极健康的、更少功利性的、融入民族文化优秀传统和审美情趣的“酒德观”，定能扬其酒的积极一面，抑其消极一面。 中华民族的饮酒历史源远流长。古代先哲很早就强调饮酒不能过量并倡导饮酒有节。“唯酒无量，不及乱”，“不为酒困”，照各人的酒量、财力和劳作时间，适量饮酒，以不及于困乱为度，这是一代伟大的思想家和教育家孔丘对“酒德”言简意赅又能身体力行的理性论断。“酒德”一词，最早见于《尚书》和《诗经》：“无若殷王受之迷乱，酗于酒德哉。”“既醉以酒，既饱以德”，“醉酒饱德，人有士君子之行焉。”酒德的含义是说饮酒要有德行，不能像纣王那样“颠覆厥德，荒湛于酒。”遵循酒德，方为君子。 饮酒讲究德量。所谓德量，是指饮酒要有节制，适可而止，恰到好处。古人对饮酒之量很有研究，认为“以半为好”，有诗为证：“好花乘看半开时，好酒宜在半醉中”。提倡“饮随人量”，“酒遇故人随人量，花当好处及时看”就是这个道理，这样可以避免“酒逢知己千杯少”所造成的酩酊大醉。古人强调饮酒注重德量，说明很早以前人们便明了饮酒量与健康的辩证关系。《本草备要》写道：“少饮则和血运气，壮神”。从现代医学观点来看，少则益，多则弊。少饮增加唾液、胃液的分泌，促进胃、肠的消化与吸收，增进血液循环，疏通经络，振奋情神，消除疲劳。美国哈佛大学医学院研究指出：每天饮酒不超过二盎司纯酒精(约合白酒1.2两)，有助于减少冠心病。 提倡“适量饮酒，增进健康”的理念，是倡导一种健康文明的生活方式和行为，以和谐、健康的酒文化促进社会的安定，使饮酒进入一个积极主动、可以控制的新时代。 任何一种食品都一样，食用适量，于人有益；食用过量，有损健康。酒也不例外，它的益害尤其显著。因此，传播现代酒道，不是可有可无，而是一个重要的当务之急的社会课题。 “适量饮酒，增进健康”就是提倡一种科学健康的饮酒主张，适量饮酒就是提倡理性地饮酒，适度地饮酒，科学地饮酒。理性地饮酒即饮好酒(指纯粮固态发酵的名优酒)、低度酒，不嗜酒成习，每周至少两天以上不饮酒；适度地饮酒就是饮酒要适量，不强饮，不酗酒，每日饮酒量相当于每公斤体重饮1g酒计算，一般约100mL白酒；科学地饮酒为饮酒时心境要好，不空腹饮，不混饮，饮必小咽，饮后少茶。 酒的属性似乎注定了酒天生就是是非之物，酒中有乐，但乐极生悲。酒是人际交往中的催化剂，人们适量饮酒，可以起到调剂生活，振奋精神，增添喜庆情趣，和谐人际关系，没有酒的人生该是多么枯燥乏味!然而，醉酒伤身和酗酒败事的负面又是我们不能不引为鉴戒的。“花看半开，酒饮微醺”的趣味，才是最令人徘徊的境界。不醉、不困、不暇、饮酒有节，应是酒德的真谛，亦是中国酒文化的精华。
关于李白的800字议论文精选8篇范文
在我的心中，有一个长长的影子，纵跨上下千余年，青衫长袖。持剑把酒，他，是李白。下面我为大家收集整理了“关于李白的800字议论文”，欢迎阅读与借鉴!
李白(701～762)，字太白，号青莲居士。先世为陇西(今甘肃)人，5岁时随父亲迁居四川。少年即显露才华，吟诗作赋，博学广览，并好游侠。
25岁时开始漫游各地，42岁那年被任命为供奉翰林。李白毕生写诗。他写起诗来既快又好，杜甫说他是“斗酒诗百篇”。他的诗歌，热情奔放，气势宏阔，富有浪漫主义色彩，后世称他为“诗仙”。
李白的父亲是位商人，做生意赚了不少钱，相当富裕。相传，李白小时候在四川象耳山读书。有一天逃学下山，经过一条小山涧，见到一位老奶奶在山洞旁磨铁棒。李白觉得很奇怪，走上前询问，老奶奶回答说要用铁棒磨针。一根粗铁棒要磨成一根细小的针谈何容易，但老奶奶信心十足，她说：“只要功夫深，铁棒磨成针。”从此以后李白就打消逃学念头，下功夫读书了。他既学文又习武，专门学习剑术。决心要做一个满腔侠义的“游侠”。
李白幼年时候记忆力特别好。诸子百家，佛经道书，无不过目成诵。据说他五岁就会诵写“六甲”，十岁能读诸子百家的书，懂得了不少天文、地理、历史、文学等各方面的知识。此外，他还学会了弹琴，唱歌，舞蹈。
一天，李白家中来了一位客人，风流儒雅，气概不凡，是当时很有名气的文人，这次是到蜀中来做官的。在长安，他早就听说李白的诗名，这次来到蜀中还未上任就前来拜访了。家人带他来到一条河边的柳树荫下，只见一个年幼的书生，头戴纶巾，佩一把宝剑，正在吟诗，同样是风流倜傥，卓越不群，诗人对这少年的喜欢之情油然而生。他又看了看少年李白的诗稿，先是吃惊，后是赞叹，最后竟是击节拊掌了，他说：“小家伙的文辞简直可以和司马相如平分秋色啊!好好写吧，中国第二个屈原就要横空出世了。”
李白自小志趣远大，禀性高洁。当时的读书人要想求取功名，都去参加进士考试。李白想，大丈夫在世，要做就做个国家栋梁，否则就一辈子只当一个平民百姓。他常常自比谢安，相信总有一天会“长风破浪会有时，直挂云帆济沧海”。
李白少年时代的诗歌留下来不多，比较早的一篇是《访戴天山道士不遇》。说的是有一天李白到深山的道观中去寻访一位道士。时值初春季节，桃花正带露开放，飞瀑流泉，野竹小鹿，山中景色确实美不胜收。然而道士却始终没有回来，从早晨到下午，一直见不到人影，他只好悻悻而归了。回到家后愈想愈觉得那道士真是如同不食人间烟火的神人，再也按捺不住诗兴。
于是展纸挥笔-
犬吠水声中，桃花带露浓。
树深时见鹿，溪午不闻钟。
野竹分青霭，飞泉挂碧峰。
无人知所去，愁倚两三松。
相信每个人的心里或多或少的都会有那么一个或者几个人，他们让你觉得这个世界没有什么是不可能的，尤其是在你觉得沮丧的时候，而我也是其中的一员，就像现在的追星一样，不过对于明星我好像有一点不够专一，这样说并不是因为他们不够优秀，而是因为他们可能没有触动自己的心，而有那么一个人，不管经过了多少年，对于他，我有的只能是仰望，我愿意追随着他的脚步，虽然不能追上他的步伐，但我还是希望多多少少的可以重复他的足迹，他就是李白，绣口一吐就是半个盛唐的伟大的浪漫主义诗人。
第一次读的他的诗是那首脍炙人口的“床前明月光，疑是地上霜。举头望明月，低头思故乡。”我不知道当初是因为什么就简简单单的喜欢上了这首诗，现在想来或许是因为它用最为常见的场景刻画出了那份看不见的思乡之情吧，直到现在，每一次因为一些迫不得已的原因离开家之后，我总是会望着月亮思念我那遥远的家乡，想着千年前的那一晚，李白是不是就如现在的我一样，在一个离家的晚上不知道将自己的满腔思念如何寄回家乡，看着天上的明月更加思念自己的故乡。虽然后来描写思乡之情的诗数不胜数，但它永远是一朵耀眼的玫瑰。而他后来的很多诗对我而言都是一颗颗在珍贵不过的珍珠，“人生得意须尽欢，莫使金樽空对月”，像这样脍炙人口的'诗比比皆是，这样一个浪漫的人，这样一个潇洒的人，这样一个才华横溢的人，我又有什么理由不喜欢，不崇拜呢?
当然不是所有人心里都会像我一样装着一个古人的我的好朋友就和我有着不一样的观点，在他看来李白不过是一介书生，虽然他并不否认李白的才华，也羡慕他的潇洒，但众所周知，对于社稷江山，他并没有多少野心，我的朋友他钦佩的是将军项羽，即便最后自刎于乌江边上，也称得上是一代英雄，我不觉得他说的有什么错的，观点不同不意味着就要抨击对方，有时候就因为有所不同才会激发深交的兴趣，，所以我也同意项羽是一个英雄，但我也同时觉得他缺少智慧，其实偶像并不是完美之人，人都说“人无完人”，偶像也是一样的。
爱李白，爱着这份诗意。
“人生在世不称意，明朝散发弄扁舟。”
颓废下藏着孤独、寂寞，但最多的，还是那种解脱。
李白早已挣脱了世俗的束缚，挣脱了那一幅幅无形的枷锁。他已经明白，时间的一切烦恼，都是“抽刀断水水更流，举杯销愁愁更愁”。于是他决意，放下。从小便乐天的他，在仕途受挫后便明白自己的人生道路应去的方向：斗酒诗百篇，眠于酒家，与诗为伴。他坚信“天生我材必有用，千金散尽还复来。”他坚信，诗人，是他最合适的人生道路。的确，只有诗，才能道出他心中的愁绪，只有诗，才能给他灵魂的解脱
所以他不再追随功名，他的生活，只剩诗、酒。他的创作，无关功名，只遂诗意。
看，诗意给他灵感：无论是幻影还是实景，无论是浪漫还是孤愁，一切的一切，李白用一杆笔、一张纸，尽数倒了出来。他将百味情感冗杂如“君不见黄河之水天上来，奔流到海不复回。”有赞叹，有浪漫，有实际，有惋惜……他，是诗意附体，他，是诗仙无疑，诗中有他，他中有诗。
我心中的李白，有远大的理想抱负，那便是游遍祖国山河，沉醉其间，高歌一曲，岂不美哉?有美轮美奂的《登金陵凤凰台》;有险峻曲折的《蜀道难》;还有清明孤远的《宣州谢朓楼饯别校书叔云》……李白的足迹，遍布大江南北。
我心中的李白，有丰富的想象力和极浪漫的情操。这时间，既然已是不如人意，何不用想象和诗句，将它在笔下描写得更美好?皆因李白是位诗人，且是位乐天派的诗人。于是瀑布便“疑是银河落九天”，于是月亮便“月下飞天镜”，而晕呢，便也“结海楼”……李白的想象与浪漫，使他赋诗一首，世间万物俱已失色。
我心中的李白，散漫的外表下是不羁的灵魂。他不需要管束，不管是谁，就算“天子呼来”，也照样“不上船”。因为管束，早已偏离了他胸中的那一片热忱;因为管束，早已偏离了他胸中的`一腔豪情;因为管束，早已成为与他对立、与自由开放豪爽的他对立的事物!于是李白不要管束，他只要活给诗、活给自己。他，确是不羁的。
当历史的铅华渐渐褪去，我看到了李白。他一身布衣，提浊酒一壶，正对酒当歌，高呼着“人生几何，今朝一醉方休!”
这便是一个真实的李白。
最为史上最有天赋的诗人，你永远无法探知李白内心的全部，所以我们能做的只是静静的去品味他的作品，静静地去感受这位伟大“诗仙”的灵魂。
无关功名，只遂诗意。
酒入豪肠，七分酿成了月光，剩下的三分啸成了剑气，绣口一吐便是整个盛唐有人说像你这的大诗人几千年才出现一个，可像你豪迈的人格，飘逸的诗，前代没有，后人也无法及。你是一代诗仙。
你生在盛唐，盛唐成就你豪迈的诗，你飘逸的诗意造就了盛唐一个高度，一个后人无法企及的高度。一壶酒，一轮月，一个你，站在高高的山峰，让微风吹起你那青衫。任凭后人用企及的眼光看你。
我读着你的诗，追寻你一路。那时你也是年轻气盛，有着和杜甫一样的报国之志——“致君尧舜上”。那天你面对着皇帝的征召，你高喊“我辈岂是蓬蒿人”，那时的你意气风发，你以为从此你可以一展抱负。可你错了，玄宗看中的只是你的文采，你只他的御用诗人。过久了你看到的是官场的黑暗。于是你和酒一起醉得一塌糊涂，你在金殿上让高力士脱靴，杨贵妃磨墨。可就是这一醉你丢掉了世人看好的前程，被赐金放还的你骑着白鹿畅游在天地之间，豪放的你依旧吟唱着“安能摧眉折腰事权贵”的安慰开始山水的生活。
“飞流直下三千尺，疑是银河落九天”是你路过庐山瀑布的天马行空;“孤帆远影碧空尽，唯见长江天际流”是你在黄鹤楼送友孤单的身影;“吴宫花草埋幽径，晋代衣冠成古丘”是你登金陵凤凰台的感慨“蜀道难，难于上青天”是你过巴蜀时的艰辛!
我读着你的诗，和你走在那放还的的路上。可依旧吟唱“长风破浪会有时，直挂云帆济沧海”的你为何要借酒消愁，为何要长醉不复醒?可你借酒消愁的你愁绪满怀，就如你要用剑斩断那奔流的水一样，水依旧奔腾不息。是什么让你的烦劳丝悠长悠长?我的诗人是什么让你这般愁苦!
漫步河畔，我看见了一身素衣的你，注视着怅望江天的你。“恰似飞燕倚红妆”一句流传千古的诗句和杨玉环的一句嗔语，把一个极度辉煌的人生滑落到社会的底层。
“香车宝马”“誓取楼兰”“杀敌报国”你苦笑，泪水无声滑落，你低头轻抚生锈的宝剑，奔腾的壮志又如未灭的火把熊熊的燃烧起来，呵!自己多么无知，四出巴蜀，挥金巨万，万里江河，游履邑遍，
本以为金殿之上让高力士脱靴，贵妃磨墨，已注定自己的一生在荣华富贵中，可“太白金星”又怎样?
满腹经纶又怎样?抵得了杨贵妃对李隆基的一句悄悄话吗?好恨!好恨!!
我的心里有一根弦突然被愁苦的一代诗仙拨动。
一滴墨滴在纸上。
我赶紧用毛笔修好这个“李”字,又在后面添上了一个“气势非凡”的“白”。
我凝视着眼前这张书写着《将进酒》的宣纸,不禁又浏览了一遍:“君不见黄河之水天上来,奔流到海不复回。君不见高堂明镜悲白发,朝如青丝暮成雪……”我的目光落在了署名“李白”上,这个名字在我脑海中回荡着,不断放大,放大……
李白,他的思想,他的诗,甚至他本人,就像一匹矫健的野马,时而在一碧千里的草原上奔驰,时而又在怪石嶙峋的高山上攀登。他既爱把自己囚禁于文字之中,用笔抒发他的豪迈、忧郁、苦闷、愤慨;他也爱游山玩水,天门山、庐山、天姥山、三峡……
他重情——桃花潭水深千尺,不及汪伦送我情。
他豪放——飞流直下三千尺,疑是银河落九天。
他乐观——两岸猿声啼不住,轻舟已过万重山。
然而,我更喜欢他的自信——天生我材必有用,千金散尽还复来!
读李白,你不能不被他感染。那“与尔同销万古愁”的气魄,那“抽刀断水水更流”的狂放,就足以配得上 “诗仙”的称号。更不要说他对权贵的蔑视了——安能摧眉折腰事权贵,使我不得开心颜?这是何等的气度!
难怪杜甫称赞他“笔落惊风雨,诗成泣鬼神” 。
我常常会因为他的某一首诗而去追溯他的经历,于是便知道了“御手调羹”“力士脱靴”“贵妃捧砚”的故事,这些,让我对他有了更深的景仰。
生活中的我,也曾为一些小事斤斤计较过,也曾为一些烦恼惴惴不安过,也会为某次考试成绩的不理想而哭泣……可是,不管什么时候,只要想起了李白,想起了他的诗,这些烦恼都会随之烟消云散。是啊,比起诗人的经历,我的这些,又算什么呢?
听于丹老师说过:李白有一对翅膀,一边是酒,一边是诗,他可以凭借诗情酒力,从高山上飞越而过。
其实,我们每个人都有一双隐形的翅膀,如果能像李白那样大气,豪迈,自信,不拘泥,我想,我们定会展开隐形的翅膀,朝着理想的目标飞去……
想着想着,李白似乎从那宣纸上活过来了。
于是,我更爱李白。
说起"李白"这个名字,大家一定不陌生吧!李白是唐代的大诗人,许多人都爱读他写的诗。我对他的理解也很深刻。
李白字太白，号青莲居士。他享有“诗仙”之称，是伟大的浪漫主义诗人。他的祖籍是陇西郡成纪县，出生于蜀郡绵州冒隆县。李白逝世于762年，因病卒，享年61岁。他为后人留下了诗文千篇有余，代表作有：《蜀道难》《行路难》《梦游天姥吟留别》《将进酒》《梁甫吟》《静夜思》等诗篇，有《李太白集》传世。李白的诗数不胜数，人们世世代代都在吟诵。
李白的诗中，我最喜欢的是《赠汪伦》。
“李白乘舟将与行，忽闻岸上踏歌声。桃花潭水深千尺，不及汪抡送我情。”意思是说，李白游泾县桃花潭时，常在村民汪伦家作客。临走时，汪伦来送行，于是李白写这首诗留别。这首诗中表达了李白对汪伦这个普通村民的深情厚谊。
关于李白，有一个故事，叫“李太白跳月”。故事讲：南京夫子庙前，有一座文德桥。听老辈人说，每逢冬月十五月亮当头的时候，站在桥头朝水上看，倒映在水里的月亮影子刚好分成两半：桥这边半个，那边半个。它为什么会分成两半?这之间还有一个故事。
传说唐朝大诗人李太白，有一次到金陵来，在文德桥旁边的一座酒楼上歇脚。这天碰巧是正月十五，到了晚上，他就独自做在酒楼上赏月，一边喝酒，一边吟诗作赋。李太白生平最喜爱月亮，说月亮又干净又好看。这天晚上，他抬头看见天上的月亮洁白滚圆，心里非常高兴，就多喝了几杯。到了半夜，李太白趁着酒性，下楼走到文德桥上。他刚走上桥，一低头，忽然看见月亮掉在水里了，河水一动，洁白的月影上就添了几条黑纹。李太白这时喝得醉醺醺的，只当是月亮给河水弄脏了。他靴子也顾不得脱，张开双手就跳下桥去捞月亮。谁知这一跳，月亮没捞着，却把水里的月亮弄破了，顿时分成了两半儿——故事就这样传下来了。后来人们在文德桥旁边修了个“得月台”，据说那里就是当年大诗人李太白赏月的地方。
李白还有许多故事，他也是我学习的榜样!
灯下沏一杯茉莉花茶，茶香清幽浓厚。我坐在桌前，翻开你的诗篇，走近千年前的你。绚丽多姿，豪迈瑰丽，你的一悲一笑，一喜一怒，一悲一叹，无不从扉页中一一跃出，闪现在我的眼前。
你像是云中的仙子，不知从何出来，衣裙飘飘，风骨清朗。凡是有酒香之处，必有你驻足的身影。在野地、在别墅、在驿道边，或小酌，或豪饮，尽兴了，挥毫泼墨，不亦乐乎!
“花间一壶酒……对影成三人”，你醉眼惺忪，画牡丹为美丽的少女，与你一起欢歌起舞;让清风为你吹奏，素月伴你推杯换盏。何其酣畅，好不痛快?
清晨，你登州远行。千里之地，对你不过弹指之间，你高唱：“两岸猿声啼不住，轻舟已过万重山。”“两岸青山相对出，孤帆一片日边来。”
豪情动江海，潇洒满关山!
你足迹踏遍祖国的大好河山，登庐山，你赞叹：“飞流直下三千尺，疑是银河落九天。”上蜀道，你摇头：“蜀道之难，难于上青天。”人们刚刚发现你的踪迹，听见你的笑谈，不想，你又飘然而去，在别处听松涛、观云海、赏日出……人们不寻着你，只听见你留下的遗传传千年的长叹，一篇篇不朽的诗篇!
喜欢你的人们想尽办法请你，于是就有了汪伦与你的故事。汪伦奉上价值的美酒佳肴，盛情的款待你，山野村夫的真情也感动了你。汪伦踏歌相送，你终于禁不住泪洒千行：“桃花潭水深千尺，不及汪伦送我情。”你对朋友也是一片至诚，炽热如火啊!
可是当朝的权贵，你又是一片真性情。当唐玄宗李隆基想要你为他写诗为乐，你故意似颠如狂，朝其所有，让皇帝和众臣为你磨墨，让皇帝的爱妃为你脱靴，弄得朝野皆惊，何其痛快淋漓!你付之一笑，挥手一笔，顷刻间，一篇皆灰飞烟灭，只剩下你，定格为永恒，刻进历史的长卷，随滔滔时光洪流雄浑而来，伴历史的脚步，潇洒奔向未来……
今天在21世纪的高楼大厦里，在钢筋混泥土包裹的城市的一隅，一位12岁的小女孩正细细的看你，读你，如醉如痴……
夜已深，没有风。只有“滴答”的钟声陪伴。茶香清幽，诗韵悠长，我已失眠。失眠的我伴明月而轻轻私语：“李白，我想对你说……”
从古至今，诗依旧是让人所欣赏、所赞扬的。在古代，你无法想象出有多少人想要报国却无门时的悲愤与哀愁。“诗仙”李白便是其中之一。
当我们回望盛唐时，站在盛唐中间的不是帝王，而是李白啊!李白的诗构思奇特，富有浪漫主义，就连杜甫也对他有“笔落惊风雨，诗成泣鬼神”之评。
一句“天生我材必有用，千金散尽还复来”激励着我们多少人想要上进的心!我想大概也只有性格豪迈的李白才能写出这样的诗句吧!天生我材必有用，让我明白无论什么时候，都要拥有一颗自信的心，但也并不代表要过于自信。
李白的一生，可谓是非常艰苦的。他向往为国建功立业;深切关怀着时局的安危。可在他进入官场时，却被里面的尔虞我诈，世俗的道貌岸然，无情的现实冷却了一腔热血。他的一生历尽坎坷，报国无门。可笑的是，际遇的颠簸和灵魂的煎熬却成就了李白。
或许用一句“吃得苦中苦，方为人上人”来概括再合适不过了，人的一生想要平平淡淡、毫无波澜，即使身处和平年代，也全无可能。此时若不感慨，更待何时?
我想，一个人只有不断努力，才能散发其特有的光芒，李白大抵也是被世事磨砺罢了。是啊，每个人都会接受这一场特有的洗礼。
现如今，恐怕有许多人向利益权贵折腰。可，李白却感慨：“安能摧眉折腰事权贵，使我不得开心颜”，这一句无不显示出他对权贵之势的无限蔑视。
仰望诗仙，一股傲然之气油然而生。所以，人们佩服你、铭记你，那是理所当然的!
学生时代有许多李白的诗伴随我们左右，就如曾学过的《行路难》，有这样一句话“长风破浪会有时，直挂云帆济沧海”。每当我们念起李白的诗来，都会有一种奇特的感觉，所以我可以肯定地说他的名字、他的诗能流传至今，都是有价值存在的。
如今的我们，在面对困难与挫折时，要摆正好自己的态度。切记不能在未来的日子里为了利益而折腰，要知道，人是有尊严的。
仰天大笑出门去，我辈岂是蓬蒿人。赞李白，叹李白，咏李白，让我们以傲然的姿态去迎接明天，让我们以自信的笑容向远方前进，让我们以一身傲骨奔向终点!
桃花潭在今安徽省泾县，据记载它“深不可测”。李白游桃花潭时，曾受到当地乡民汪伦的款待，临离开时汪伦又赶到潭边相送，李白便即兴书写此诗赠给汪伦。我们现在用“情深似海”之类的词，已不觉新鲜了，但在唐代，李白即兴指潭水喻深情，则是个创新，因而令后人赞赏。问题是：李白是名动天下的大诗人，而据说汪伦只不过是一介乡村青年，且只是在李白游桃花潭时偶尔结识，那么，李白对汪伦如此深情热烈的赞颂是否有足够的感情内蕴呢？“深不可测”的桃花潭犹不及“汪伦送我情”该不会是诗仙虚与委蛇的应酬夸张吧？其实不然。细揣诗意，李白是把汪伦对自己的毫无私利之心的纯洁的友谊同世态炎凉相对比，是有着丰厚的现实生活感受作为基础的。李白这人，有大志，也有大才，诗名早就响震天下。但因他禀性兀傲，不愿阿附权贵，低眉俯首，因而长期遭受排斥，很不得志，对人情冷暖、世态炎凉有着深切的体验。这次，他游桃花潭一带，自然会结识许多当地人士，但在离开时，却只有汪伦组织了一队人唱着歌，用脚踏着节拍前来热烈送行。这自然使潦倒失意的李白深为感动。当然，作为一首短小的绝句，他只能如此含蓄地写，因此，只有细加品味，才能体会到。“李白乘舟将欲行”，写诗人登舟时有所期待，而又惘然若失。句首直呼己名，含有一种深沉的感叹意味，犹如说：李白呀李白呀！“将欲”这两个字读起来是很感滞重的，似乎连招呼船家起程这样简单的事还得狠狠心才行。他为什么心情这样沉重呢？可以想见的起码有这样几个方面：其一，“舟”为小船，当不会有许多人同行。“行”有“往”义，但不象“前往某地”那样有明确的目的地；有“去（离开）”义，但也不强调离开某地。这样看来，诗人用“行”字是为了表现一种欲行不行的矛盾心态。为什么呢？试想，诗人将要乘一叶孤舟继续他的漫游，在漫长的旅途中，其孤独可想而知。此时，他回望桃花潭岸边，这些天来所见之美景怎会不使他恋恋不舍？但终究是要离开了。这就会令人深深感叹。其二，诗人性格豪放，喜结交天下豪杰。此时，若有好友相送，金樽清酒，一饮“三百杯”，无论是放歌还是悲吟，总能渲泄胸中郁郁之情。可现在，孤零零地悄然离去，心中自然深感失望和怅惘。总之，第一句写诗人欲行不行时的怅惘，为下一句蓄足了情势。
关于李白的议论文800字范文10篇
中华民族的历史悠久而深远，李白，他不仅是一部民族文明的创造史，一部民族精神的生长史，也是一部风流人物的缔造史。下面我为大家收集整理了“关于李白的议论文”，欢迎阅读与借鉴!
作为最伟大的浪漫主义诗人，李白的诗清新飘逸，豪迈旷达，已成了中国文学史上不可动摇的扛鼎之作，而《蜀道难》，就是这诸多审美对象中的一个经典。
李白借“蜀道”这一特定的审美对象，通过描写“蜀道”之“难”，来表达自己对生命的体悟与认识。而这种强烈的生命意识，就是《蜀道难》的魅力之所在。而今，往日的嗟叹与无奈都变成了令人欣赏的美景、奇观，“黄鹤之飞尚不得，猿猱欲度愁攀援”的千年古道，也变成了宽阔的道路，行人车辆不断。
一场突如其来的人间灾难悄然而至，5.12四川汶川大地震，地动山摇，山崩地裂，房屋倒塌，桥梁坍塌，公路被山体滑坡、泥石流阻断……人民的生命财产遭受了巨大的损失，再一次出现了“蜀道难”的局面。
面对困境，有的人选择面对，有的人则躲避。而我们的解放军义无反顾地担负起了抗震救灾的重任。他们冒着生命危险，用自己的身体和困难抗争，从瓦硕下面救出一个个在死亡线上挣扎的生命;他们冒着生命危险，从4999米严重缺氧的高空，空降地震灾区救助灾区人民，创造了世界军队空降史的奇迹;他们冒着生命危险，挖凿堰塞体导流明渠，排除了堰塞体溃坝湖水淹没下游绵阳市的险情，创造了世界上成功处理大型堰塞湖的奇迹。是呀，蜀道难，但难不倒我们的民族和国家，也难不到我们英勇。
在人生的道路上，我们也会有“蜀道难”的境遇。面对困难，我们应该怎么选择?文学家王国维曾把人生的境界分为三种：昨夜西风调碧树，独上高楼，望尽天涯路;衣带渐宽终不悔，为伊消得人憔悴;众里寻她千百度，蓦然回首，那人却在灯火阑珊处。无论何时何地，王国维想告诉我们的是，要有那份别样的豁达、顽强和坚持不懈。而刘墉先生则把这三种境界分别比作骆驼、狮子、婴儿。现在的我们就像骆驼一样为了走出沙漠，就算再苦，也必须坚持。只有走出沙漠，才有活的机会。中年的我们好像狮子，为了达到自己的目标，为了让家人过更好的生活而拼命工作，满足自己的物质或是精神上的需要。晚年的我们却回归到婴儿时的天真，与世无争，很淡定的过完余生。无论我们像什么，我们都要做好自己，做最好的自己，做最想做的自己。
“狂来轻世界，醉里得真如”，当李白迷醉于自己的精神家园，陶醉在巴山蜀道上的一幅幅雄奇俊美的图画时，他的“狂放”“洒脱”，可谓发挥到了极致!
最近我读了诗人李白所写的《蜀道难》一文，这篇文章虽然不是第一次读，但是当再次读完后又让人感慨万千，又一次被李白的那种浪漫主义情怀带进了诗里，《蜀道难》凸现了大气磅礴的崇高美，演绎了迅疾变幻的运动美，奔涌出参差错落的音韵美，真正谱写了一首浪漫主义的绝唱。现淡淡读了文章后的感想：
作为最伟大的浪漫主义诗人，李白的诗清新飘逸，豪迈旷达，已成了中国文学史上不可动摇的扛鼎之作，而《蜀道难》，就是这诸多审美对象中的一个经典。
李白的人格力量是什么?勿庸置疑，那就是“天生我材必有用”“长风破浪会有时”的自信，是“人生得意须尽欢”“会须一饮三百杯”的狂放。一个“狂”字，是他喷薄如日热情似火的情感的体现，也是他对自己精神家园本能的执着的选择：对“钟鼓馔玉”的嗤之以鼻，蔑视鄙弃，对黑暗现实的不满抗争，毅然绝弃;对祖国壮丽山河的一往情深，无比热爱!
总观全诗内容，真正体现了一种雄健伟岸，高峻奇险，浑然天成的崇高美，一种气象不凡的壮阔美。只有李白，只有有着风卷残云般气魄的李白，才能让蜀道上连天的群峰，壁立的悬崖，汹涌的恶水，凄凉的丛林，还有那磨牙吮血的恐怖，全都渲染出大气磅礴的长轴画卷，才能凸现出一种惊天地泣鬼神的崇高美!“蜀道之难，难于上青天”这空间上难度上的极度扩张;“尔来四万八千岁，不与秦塞通人烟”，这时间上的极度绵延拓展;“地崩山摧壮士死，然后天梯石栈相钩连”，这“五丁开山”的巨大的神勇力量;“飞湍瀑流争喧豗”的汹涌激荡，“一夫当关，万夫莫开”的奇险峥嵘，这一切的'一切，在诗人如椽巨笔的挥洒下，没有一个不是突破景物常态的，没有一个不是宏大壮阔的，没有一个不是粗拙奇谲的，也没有一个不是令人心动魂悸的!总观全诗内容，真正体现了一种雄健伟岸，高峻奇险，浑然天成的崇高美，一种气象不凡的壮阔美!
《蜀道难》，一首狂放的浪漫的绝唱，从内容到形式，无不都是诗人狂放之情主宰下的鬼斧神工般的走笔渲染，写意泼墨!知道李白的《蜀道难》的人，应该很多，他给人以辽阔的远景，一种地平线的宽广的感觉，又有一种崩天开地的豁然。
这是一种我们民族的本质，艰辛却坚定，不易却执著。
唐朝不乏出类拔萃的.诗人，我却独钟于你——谪仙人李白。钟情于你不拘一格、别具匠心的诗篇，钟情于你豪迈洒脱、自由奔放的性情。我心中的你，绝不止于课本上对你寥寥数言介绍的形象，而是另一番模样。
一首诗
我会背诵的第一首诗，便是你的《静夜思》：“床前明月光，疑是地上霜。举头望明月，低头思故乡。”这首诗通俗易懂，朗朗上口，让儿时的我百读不厌。正是这首诗，让我认识了你。
后来，我又逐渐学习了你更多的诗篇。“笔落惊天地，诗成泣鬼神。”连诗圣杜甫都对你有如此高的评价，我又怎能不为你折服?
一斗酒
你也爱酒，并为此挥毫了不少笔墨。“人生得意须尽欢，莫使金樽空对月”“将进酒，杯莫停”、“天生我材必有用，千金散尽还复来”……一首《将进酒》，正是酒醉微醺时所作，“天生我材必有用”更是成为了千古传诵的名句。“花间一壶酒，独酌无相亲。举杯邀明月，对影成三人。”同为酒后所作，《月下独酌》却写出了另一种意境。也许饮酒后，你诗兴大发，才让你得以写出如此精美绝伦的诗句。
一曲长歌
与你相处的时光，永远那么美好。你带我游遍大好河山，赏尽人间百态。你让我欣赏到“飞流直下三千尺，疑似银河落九天”的庐山瀑布;“上有六龙回日之高标，下有冲波逆折之回川”的险峻蜀道。你让我看到了“云想衣裳花想容”的杨贵妃，看到了“深坐颦蛾眉”的美人。读你的诗歌，我仿佛穿越了时空。尽管岁月悠悠，也冲不淡墨痕。
一剑天涯
你是诗仙，亦是剑仙。你既在文坛上才华横溢，也是一个侠肝义胆的行者。“十步杀一人，千里不留行。”一首《侠客行》，充分的表现出你对侠客的倾慕与对游行江湖的向往。“安能摧眉折腰事权贵，使我不得开心颜!”厌恶权贵的你，在官场上道出了你内心的感慨。游行江湖的你，才是真正的青莲剑仙。
“酒放豪肠，七分酿成了月光，余下的三分啸成剑气，绣口一吐就半个盛唐。”这就是我心中的你，卓尔不凡、桀骜不驯、侠肝义胆的李白!我读着诗，细品那一千三百多年前，你那段略有遗憾的人生。
从我第一次接触诗歌起，口中就经常吟唱那句“举头望明月，低头思故乡”。是李白这个“诗仙”带我走近诗歌的世界，透过他的毛笔领略大唐的山山水水，通过他的文采看世间的风风雨雨。但我不曾真正了解过李白，所以假期中我亲身走近了李白，才真正领略到李白的伟大。
我所想象到的李白总是有着苍颜白发，布满皱纹的手轻抚着胡须，站在船头，布衣随风飘浮，在群山中穿梭，吟咏着诗歌。别看李白的老年时代饱含了传奇色彩，他的童年同样不一般。传说李白出生的时候，有长庚星带着耀眼灿烂的光芒划破夜空突然坠落近李客(李白的父亲)的宅院并且李白的母亲生产前也梦到太白金星从天落入她怀中。这样不寻常的出生或许奠定了后来李白的伟绩吧!少年时的李白聪明过人，一次宴会上更是随即赋诗一首，得到了众人的称赞，也从此有了“神童”的美誉。
李白实在是中国诗人中的游侠，在山水中消磨寂寞和痛苦，在山水中挥笔疾书，留下了许多精品。他在游峨眉山时写下《登峨眉山》，“蜀国多仙山，峨眉邈难匹”写出了峨眉山陡峭险峻、横空出世的雄伟气势;他在游览散花楼时写下《登锦城散花楼》，“金窗夹绣户，珠箔悬银钩”写出了散花楼的雕栏绣户，气派壮观;他在登上岳阳楼时写下了《与夏十二登岳阳楼》;他在登上庐山，在香炉峰看到瀑布从断岩陡壁上飞流而下是写下了那千古流传的《望庐山瀑布》抒发了他隐逸仙居、出世脱俗的愿望和对大自然的的热爱;他在畅游金陵时，思索着这儿曾上演的一幕幕轰轰烈烈的兴亡成败的历史悲喜剧写下了《月夜金陵怀古》等诗。
迄今为止，李白已辞世大约一千三百年了，虽然无人知晓他死于何年何月何时，虽然无人知晓他是怎样死的，但人们一直爱戴着他，为他编了个浪漫的归宿。他卓越的诗情和才华，豪放洒脱的胸怀气度和浪漫的情怀构成了盛唐文化魅力的所在。现在我心目中李白不再是那个满脸忧愁，苍颜白发的老人，而是一个双目有神，胸怀斗志，浪漫潇洒的“诗仙”。
“人生在世不称意，明朝散发弄扁舟。”
颓废下藏着孤独、寂寞，但最多的，还是那种解脱。
李白早已挣脱了世俗的束缚，挣脱了那一幅幅无形的枷锁。他已经明白，时间的一切烦恼，都是“抽刀断水水更流，举杯销愁愁更愁”。于是他决意，放下。从小便乐天的他，在仕途受挫后便明白自己的人生道路应去的方向：斗酒诗百篇，眠于酒家，与诗为伴。他坚信“天生我材必有用，千金散尽还复来。”他坚信，诗人，是他最合适的人生道路。的确，只有诗，才能道出他心中的愁绪，只有诗，才能给他灵魂的解脱
所以他不再追随功名，他的生活，只剩诗、酒。他的创作，无关功名，只遂诗意。
看，诗意给他灵感：无论是幻影还是实景，无论是浪漫还是孤愁，一切的一切，李白用一杆笔、一张纸，尽数倒了出来。他将百味情感冗杂如“君不见黄河之水天上来，奔流到海不复回。”有赞叹，有浪漫，有实际，有惋惜……他，是诗意附体，他，是诗仙无疑，诗中有他，他中有诗。
我心中的李白，有远大的理想抱负，那便是游遍祖国山河，沉醉其间，高歌一曲，岂不美哉?有美轮美奂的《登金陵凤凰台》;有险峻曲折的《蜀道难》;还有清明孤远的《宣州谢朓楼饯别校书叔云》……李白的足迹，遍布大江南北。
我心中的李白，有丰富的想象力和极浪漫的情操。这时间，既然已是不如人意，何不用想象和诗句，将它在笔下描写得更美好?皆因李白是位诗人，且是位乐天派的诗人。于是瀑布便“疑是银河落九天”，于是月亮便“月下飞天镜”，而晕呢，便也“结海楼”……李白的想象与浪漫，使他赋诗一首，世间万物俱已失色。
我心中的李白，散漫的外表下是不羁的灵魂。他不需要管束，不管是谁，就算“天子呼来”，也照样“不上船”。因为管束，早已偏离了他胸中的那一片热忱;因为管束，早已偏离了他胸中的一腔豪情;因为管束，早已成为与他对立、与自由开放豪爽的他对立的事物!于是李白不要管束，他只要活给诗、活给自己。他，确是不羁的。
当历史的铅华渐渐褪去，我看到了李白。他一身布衣，提浊酒一壶，正对酒当歌，高呼着“人生几何，今朝一醉方休!”
这便是一个真实的李白。
最为史上最有天赋的诗人，你永远无法探知李白内心的全部，所以我们能做的只是静静的去品味他的作品，静静地去感受这位伟大“诗仙”的灵魂。
无关功名，只遂诗意。
我眼中的李白，是矛盾的集合体，他是将儒仙侠三者合以为气的第一人，他有那种天上地下独来独往的气概，又有用世济时，汲汲于功名的壮志。这种矛盾并没有困惑他的心志，而是勾勒出李白的棱角分明，狂放豪迈的真性情。
我眼中的李白，特例独行，淡泊名利。曾几何时，他高唱着“仰天大笑出门去，我辈岂是蓬篙人”昂首挺胸走进皇宫，在他的眼里没有功名利禄的诱惑。有的只是一展才华，报效国家的豪情。然而事与愿违，不可一世的李白怎能卑屈地作个“御用文人”?“安能捶眉折腰事权贵，使我不得开心颜。”只有李白这般狂放的人吐得出这样的诗句，也只有他，能举起诗歌的火炬。他骄傲，因此不会向任何人卑躬屈膝，因而在他的笔下，无数的“若垂天之云”的诗篇留于后世也，千古不朽。
我眼中的李白，对酒当歌，享受人生。他的狂放，他的才气，终遭人妒;但即使仕途受挫，即使孤独寂寞，即使怀才不遇，他也仍可以高唱“天生我才毕有用”，仍可以“举杯邀明月”，也仍可以“一醉累月轻王侯”。酒的清冽张显了李白的狂放，李白的豪迈给酒添了几分魅力。失意时借酒消愁，得意的时候饮酒助兴，酒陪伴李白走过人生的大起大落，无论何时何地，李白都是“人生得意须尽欢”，“会须一饮三百杯”。他固然有愁苦，他固然有寂寞，可他从没放弃过，他知道人生短暂，转眼就“青丝如雪”。一去不复返，面对无限的时间和有限的矛盾，他懂得享受人生，懂得抓住生命中每一个瞬间。
我眼中的李白，追求理想，向往自由。他眼中的长江，不仅仅是滔滔江水，而且有“白波九道流雪山”的气势;他眼中的天姥山，可以“势拔五岳掩赤城”;他眼中的庐山瀑布“飞流直下三千尺，疑是银河落九天”。一切高山大川都像是他的内心世界，他追求没有阻隔的大地，他将自己的感情融于山水，将豪气赋予景物，一吞一吐道出他崇高的理想，没有矫揉造作，有的只是真实，真挚。
他是空中的一轮明月，月光所及的地方都有他浪漫的气息，他并没有陨落，他只是永不安于现状，永不停止追求的寻觅了另一个世界继续发光发亮。
他，年少有为，饱读诗书。积极入世，关心国家，是他一生思想的主流，
他，以酒为伴，游遍祖国的大江南北，留下千古诗篇，
他，满腹才华的诗仙，相信“天生我材必有用”的信念，
他，藐视权贵，即使重病，也要参军，平息战乱，
他，执着于理想，追求着自由，
他，李白，一个无可复制的经典，一个不可超越的传奇!
幼时，我们背“举头望明月，低头思故乡。”，这是最简单的思乡，少时，我们读“飞流直下三千尺，疑是银河落九天”，感受到庐山瀑布的壮阔，现时，我们说“天生我材必有用，千金散尽还复来”流露出自信为人的自我价值，怀才不遇和渴望用世的积极思想感情。长时，我们阅“长风破浪会有时，直挂云帆济沧海。”感受到相信自己的理想抱负总有实现的一天，读李白的诗，读出了诗仙的豪气!
我心中的李白博学多才，狂草写就吓蛮书。“天心取米”改“未必敢来”，让大唐扬眉吐气，使外番不敢再行侵犯，李白的博学急智立现眼前。
我心中的李白淡泊名利，其实，说李白淡泊名利有些被动。起先，李白想要做君主的辅弼大臣，但不改其桀骜不驯的性格，得罪了满朝文武。但唐玄宗的“赐金放还”成了李白政治道路上的分水岭。
我心中的李白重情重义，“桃花潭水深千尺，不及汪伦送我情”，李白汪伦，交情深厚，没有李白的重情重义，汪伦怎会在李白将要离开的时候赠歌相别。
我喜欢李白，喜欢李白“人生得意须尽欢，莫使金樽空对月”的乐观，喜欢李白“总为浮云能蔽日，长安不见使人愁。”的惆怅，喜欢李白“我寄愁心与明月，随风直到夜郎西”的感情深挚，喜欢李白“举杯邀明月，对影成三人。”的旷达胸襟，喜欢李白……
“酒入豪肠，七分酿成了月光，余下的三分啸成剑气，绣口一吐就半个盛唐”这是余光中对李白的评价，李白的一生以酒为伴，一个酒葫芦，一身衣裳，游遍四方。他就像浮云，一缕缕，在天空中尽情挥毫泼墨。
我心中的李白是一个无可复制的经典，一个不可超越的传奇!
小时候，吟诵《静夜思》：“床前明月光，疑是地上霜。举头望明月，低头思故乡。”当时我就想这到底是怎样一位老爷爷呢，是有着花白的美鬓，穿着雪白雪白的长衫，手拿着一壶清酒，手柱一根拐棍的赛神仙爷爷吗?这是对他最初的记忆，也是最初的相识，也还不曾懂那首《静夜思》。
初中，渐渐地长大，渐渐的懂了青春，渐渐的懂得了友谊，有一把伞，雨停了也不肯收;有一束花，枯萎了也不肯丢;有一个梦，天亮了也不肯醒;有一个人，纵使走到天涯海角也一定会在我心底深深留。此时我把你想象成邻家哥哥一样，是怎样的壮志胸怀，是怎样的友谊情深，一首《赠汪伦》把你对兄弟的情谊诠释的淋漓尽致，“桃花潭水深千尺，不及汪伦送我情。又有人说你与杜甫相逢却又忘却之快，我则认为相反，你是个含蓄的人，你讨厌兄弟情缠缠绵绵。你要的是”人生得以知己，斯当以同怀视之。
如今我不想再让你当我邻家的哥哥，我想当你的知己，问吾一句，可否?“安能摧眉折腰事权贵，使我不得开心颜”是怎样的大气凛然，让你有陶渊明般的不为五斗米折腰的精神。我就是这样敬佩你。长亭外，古道边，芳草雾连天，你我席地而坐，畅读未来，从古到今，那该是多么美好的一幅画面。一阵微风袭来，拨乱了我的发丝，刺痛了我的眼睛，我猛地一阵才回想起来，原来这是我在幻想，疼痛又把我拉回现实里。
在我失意时，是你教会了我“天生我材必有用，千金散尽还复来。”你那豪迈的情怀，你那满腔的热血，感染了多少失意少年，又挽救了多少低落心霾。如果可以，我真想与你生在一代，一日，你便偶遇了我，两人共趣相投，原来你就是我要找的知己，原来你也在这里。在我思乡时，是你用那“此夜曲中闻折柳，何人不起故园情”描绘出我的心情。你那惆怅的情愫，你那脍炙人口的诗句，道出了多少人的心声，诉出了多少人的念想。又有多少人像我一样痴迷于你，从简单的相识到念念不忘的相知。
“人生得意须尽欢，莫使金樽空对月”，就是喜欢你潇洒的情怀，就是迷恋你孤傲的文字。期盼有朝一日，你青衫美髯饮酒，我素装长发对望，知己，就是与你这样。
千古诗才，蓬莱文章建安古。
一身傲骨，青莲居士谪仙人。
——题记
李白，自号青莲居士。突然忆起那浮于水面的莲花，不蔓不枝，亭亭净植;而李白，高洁亦傲然脱俗。以莲为号，于是莲的清香与李白的傲气交糅而来。
李白解道，他学庄子站在九天绝顶看人间，用超然物外的眼光面对人世的悲欢离合。也正是这样的思想，造就了他天上地下独来独往的气概和敢于冲破封建束缚不屑权贵的胆识。
和同时代的许多文人一样，李白也有着“学而优则仕”的理想。他期望辅君主而治天下，在政坛上大展宏图。终于，他因赫赫诗名得到了玄宗得礼遇，力士脱靴，贵妃磨墨，那是他仕途上多么得意的时刻!于是他一挥而就：“名花倾国两相欢，长使君王带笑看。解释春风无限恨，沉香亭北倚栏杆。”
他在众声迎合中栩栩然得意，“仰天大笑出门去”，高呼“我辈岂是蓬蒿人”。然而，无情的现实用冷水浇醒了他原本即为虚幻的梦想。不经意间，他看到了力士脱靴时谄媚的丑态和贵妃磨墨背后那不可告人的笑。
李白知道了;当前的荣耀都只是过眼烟云，自己只不过是在陪皇帝寻欢作乐。
试想，不羁的诗仙如何忍受朝堂上的倾轧与黑暗?李白在混乱的政坛上痛苦地喊着：“君王虽爱娥眉好，无奈宫中妒杀人。”然而他是狂放的，不再为名利所诱，也不向淫威屈服，始终保持着一颗心的清洁，大丈夫的铮铮傲骨和拳拳赤子之心。
于是，他宁愿散尽千斤，只求一醉，也不愿摧眉折腰，做大唐的御用文人。
李白终因他那不屑与世俗同流合污的傲骨而愤然走出仕途。
他遍访青山绿水，在黄沙漫天北风吹雁中骑驴高歌。他浊酒深酌，寻幽豪饮，同销万古情愁;南下吴越，梦游天姥，齐叙难酬鸿志。
李白将傲气寄情山水。“黄河之水天上来，奔流到海不复回”、“飞流直下三千尺，疑是银河落九天”、“天姥连天向天横，势拔五岳掩赤城”……一切高山大川都是他内心狂傲之气的外现。
大概这才是李白真正的位置。倒骑青牛，纵情山水，远离世俗的污秽，与清风为伴，与日月为友。
在一片秀丽的湖光山色中，看到莲花“出淤泥而不染，濯清涟而不妖”曼然盛开……
在一个书声琅琅的早晨，我认识了他。他吟着那首响彻千古的名诗，大步向我走来：“床前明月光，疑是地上霜。举头望明月，低头思故乡。”这是我第一次接触诗歌，那时候的我觉得李白真是好神奇，竟能写出这么多好听的诗。
大了一点，读了更多的名家诗篇，认识了更多大名鼎鼎的诗人，但无一能超越李白。此时，李白在我眼中就是名副其实的“诗仙”，超然脱俗，圣洁不可侵犯。再想像一下他的样貌：一定是一袭白袍飘然，左手握酒壶，右手举酒杯，仙风道骨，潇洒飘逸。哪怕是九天之外的仙人也不过如此吧!
后来，我开始了解李白。发现他这个人一出生就是天才般的存在，“五岁诵六甲，十岁观百家”，似乎小时候就把该读的书都读了。长大点，他还“十五观奇书，做赋凌相如”。所以，李白这个人一生都那么狂放不羁。作为一个诗人，李白最显著的标签无疑是他的“浪漫主义”——飘逸的想象。他的诗句总能让人拍手叫好：怎么能有那么多天马行空的想象，而且能用行如流水般的文字写下来?
看到奔流而下的瀑布，他能幻想“飞流直下三千尺，疑是银河落九天”;与朋友分别，他能幻想“我寄愁心与明月，随风直到夜郎西”;甚至当他寂寞的时候，都能幻想“举杯邀明月，对影成三人”……
李白此人还一贯恃才傲物，狂放不羁，对杨国忠、高力士这样一肚草包的权贵不屑一顾，从不会为权利功名而摧眉折腰。龙巾拭吐，御手调羹，力士脱靴，贵妃捧砚，国舅磨墨，这都是他的骄傲。想鼎盛之际，李白以一句“借问汉宫谁得似，可怜飞燕倚新妆”使皇城上下万千人痴迷。却也是这句妙诗，使他遭高力士恶语。李白啊，你不过用典故飞燕新妆比喻名花凝香，并无半点讽刺杨贵妃的意思。可却被高力士说成是在羞辱贵妃，于是乎，李白罢官了。皇城外，他高唱“天生我材必有用，千金散尽还复来。”李白的诗里流露出太多的怀才不遇、壮志难酬的悲愤。就是因为这种狂妄的自傲，他才站在了云端上，俯视众生。
李白啊，你那洒脱的心灵让我羡慕;你那不羁的豪情让我留恋;你那放旷的心胸让我追求。你就是我眼中的“仙人”!