话说,我也一直在找这道题的答案。。。而且我一直怀疑它其实问的是不是细胞表面受体的种类。。。然后就是离子通道偶联受体4,G蛋白偶联受体还有酶联受体。。。
【关键词】 靶向给药;药剂学;药物载体0引言常规剂型的药物经静脉、口服或局部注射后,药物分布于全身,真正到达治疗靶区的药物量仅为给药量的小部分,而大部分药物在非靶区的分布不仅无治疗作用,还会带来毒副作用. 因此,药物新剂型的开发已成为现代药剂学发展的一个方向,其中靶向给药系统(Targeted drug delivery system, TDDS)的研究已经成为药剂学研究热点〔1〕. TDDS指一类能使药物浓集定位于病变组织、器官、细胞或细胞内的新型给药系统. 靶向制剂具有疗效高、药物用量少. 毒副作用小等优点. 理想的TDDS应在靶器官或作用部位释药,同时全身摄取很少,这样,既可提高疗效,又可降低药物的毒副作用. TDDS要求药物能到达靶器官、靶细胞,甚至细胞内的结构,并要求有一定浓度的药物停留相当长的时间,以便发挥药效. 成功的TDDS应具备3个要素:定位蓄积、控制释药、无毒可生物降解. 靶向制剂包括被动靶向制剂、主动靶向制剂和物理化学靶向制剂3大类. 目前,实现靶向给药的主要方法有载体介导、受体介导、前药、化学传递系统等. 现就靶向给药方法研究进展作一介绍.1载体介导的靶向给药常用的靶向给药载体是各种微粒. 微粒给药系统具有被动靶向的性能. 有机药物经微粒化可提高其生物利用度及制剂的均匀性、分散性和吸收性,改变其体内分布. 微粒给药系统包括脂质体(LS),纳米粒(NP)或纳米囊(NC),微球(MS)或微囊(MC),细胞和乳剂等. 微粒靶向于各器官的机制在于网状内皮系统(RES)具有丰富的吞噬细胞,可将一定大小的微粒( μm)作为异物摄取于肝、脾;较大的微粒(7~30 μm)不能滤过毛细血管床,被机械截留于肺部;而小于50 nm的微粒可通过毛细血管末梢进入骨髓.肝癌、肝炎等肝脏疾病是常见病和多发病,但目前药物治疗效果很不理想,其原因除药物本身药理作用尚不够理想外,不能将药物有效地输送至肝脏的病变部位也是一重要原因. 将一些抗肿瘤、抗肝炎药物制备成微粒,给药后可增加药物的肝靶向性. 米托蒽醌白蛋白微球(DHAQ BSA MS)的体内分布研究发现,给药20 min时,DHAQ BSA MS和米托蒽醌(DHAQ)在小鼠体内分布有显著差异,DHAQ BSA MS约有80%的药物集中在肝脏,而以上的DHAQ存在于血液中〔2〕. 张莉等〔3〕考察去甲斑蝥素(NCTD)微乳的形态、粒径分布及生物安全性,研究NCTD微乳及其注射液在小鼠体内的组织分布,结果表明,NCTD微乳较NCTD注射液增强了药物的肝靶向性,降低了肾脏分布,在一定程度上延长药物在小鼠体内的循环时间. 纳米粒和纳米囊肝靶向制剂的研究报道较多,如氟尿嘧啶、阿霉素、羟基喜树碱、狼毒乙素、环孢素等抗癌药物都被制成了纳米靶向制剂〔4〕. 王剑红等〔5〕采用二步法制备米托蒽醌明胶微球,粒径在 μm范围的占总数,体外释药与原药相比延长了4倍. 经小鼠体内分布试验表明具有明显的肺靶向性,靶向效率增加了3~35倍,肺中药代动力学行为可用一室开放模型描述,平均滞留时间延长10 h. 在纳米粒表面上包封亲水性表面活性剂,或通过化学方法连接上聚乙二醇或其衍生物,可以减少与网状内皮细胞膜的亲和性,从而避免网状内皮细胞的吞噬,提高毫微粒对脑组织的靶向性. Gulyaev等〔6〕以生物降解材料聚氰基丙烯酸丁酯为载体,以吐温80为包封材料制备了阿霉素毫微粒,研究结果表明脑中阿霉素浓度是对照组的60倍. 一些易于分解的多肽或不能通过血脑屏障的药物(如达拉根、洛哌丁胺、筒箭毒碱)通过制成包有吐温80的生物降解毫微粒在动物身上已取得一定的靶向治疗效果〔7〕. 研究表明粒径是影响微粒进入骨髓的关键因素,粒径越小越容易进入骨髓. 彭应旭等〔8〕制得不同粒径的柔红霉素聚氰基丙烯酸正丁酯毫微粒,小鼠尾静脉给药,小粒径组(70±24) nm骨髓内柔红霉素浓度是大粒径组(425±75) nm的倍. 骨髓会因肿瘤浸润、化疗药物或严重感染受到抑制. 研究表明,多种生长因子,如人粒细胞集落刺激因子(GCSF),粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GMCSF)可促使骨髓细胞自我更新、分裂增殖,并提高其活性. 利用骨髓靶向载体可提高药物在骨髓内分布,并避免血象中的不良反应. Gibaud等〔9〕以聚氰基丙烯酸异丁酯、异己酯毫微粒为载体携带GCSF,提高了其在骨髓内的分布.基因治疗是一种专一性的靶向治疗. 基因治疗就是利用基因转移技术将外源重组基因或核酸导入人体靶细胞内,以纠正基因缺陷或其表达异常. 纳米颗粒作为基因载体具有一些显著的优点. 纳米颗粒能包裹、浓缩、保护核苷酸,使其免遭核酸酶的降解;比表面积大,具有生物亲和性,易于在其表面耦联特异性的靶向分子,实现基因治疗的特异性;在循环系统中的循环时间较普通颗粒明显延长,在一定时间内不会像普通颗粒那样迅速地被吞噬细胞清除;让核苷酸缓慢释放,有效地延长作用时间,并维持有效的产物浓度,提高转染效率和转染产物的生物利用度;代谢产物少,副作用小,无免疫排斥反应等.2受体介导的靶向给药利用细胞表面的受体设计靶向给药系统是最常见的主动靶向给药系统. 去唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)是一种跨膜糖蛋白,它存在于哺乳动物的肝实质细胞上. 其主要功能是去除唾液酸糖蛋白和凋亡细胞、清除脂蛋白. 研究发现,ASGPR能特异性地识别N乙酰氨基半乳糖、半乳糖和乳糖,利用这些特性可以将一些外源的功能性物质经过半乳糖等修饰后,定向地转入到肝细胞中发挥作用. Lee等合成了三分枝N乙酰氨基半乳糖糖簇YEE,它与肝细胞的结合能力为乙酰氨基半乳糖单糖的1万倍. 我们考察了半乳糖苷修饰的十六酸拉米夫定酯固体脂质纳米粒(LAPGSLN)的肝靶向性,其靶向效率为,比未修饰纳米粒的靶向效率高倍〔10〕. 药物通过与大分子载体连接,再对载体进行半乳糖化,可以产生较好的肝靶向效果. 若能使药物直接半乳糖化,则可以简化耦联环节,提高靶向效率. 这一思路对蛋白类药物而言,较易实现. 蛋白质或多肽(分子质量在一定范围)在连接上半乳糖后,都有可能成为受体结合的肝靶向性物质. 小分子物质经类似途径能否靶向于肝,取决于糖和药物密度、分子质量、摄取屏障等多方面因素. 小分子药物共价连接乳糖或半乳糖,初步揭示其靶向性并不好,有关机制和可行性尚待进一步探讨.半乳糖基化壳聚糖(GC)与质粒pEGFPN1混和制备成纳米微囊复合物,体外转染SMMC7721细胞. 将含1 mg质粒的纳米微囊经肝动脉和门静脉注射入犬体内,实验结果表明半乳糖基化壳聚糖在体外有较高的转染率,在犬体内有肝靶向性,可用作肝靶向基因治疗的载体〔11〕. 大多数肿瘤细胞表面的叶酸受体数目和活性明显高于正常细胞. 以叶酸作为导向淋巴系统或肿瘤细胞的放射性核素的载体,同时将叶酸作为靶向肿瘤细胞的抗肿瘤药物的载体已做了广泛的研究〔12〕.表皮生长因子受体(EGFR)是一种跨膜糖蛋白,由原癌基因cerbB1所编码,是erbB受体家族之一,在多种肿瘤中观察到EGFR高水平的表达,如神经胶质细胞瘤、前列腺癌、乳腺癌、胃癌、结直肠癌、卵巢癌和胸腺上皮癌等. 针对富集EGFR的恶性肿瘤,方华圣等〔13〕成功地建立了EGFR富集的恶性肿瘤的靶向基因治疗方法.3抗体介导的靶向给药mAb是药物良好的靶向性载体, 将其通过共价交联或吸附到药物载体(如脂质体、毫微粒、微球、磁性载体等)或药物具有自身抗体(如红细胞)或抗体与细胞毒分子形成结合物,避免其对正常组织毒性,选择性发挥抗肿瘤作用. 徐凤华等〔14〕利用己二酰肼制备腙键连接的聚谷氨酸表阿霉素,然后使其与单抗交联制得偶合物. 偶合物较好地保留了抗体活性,体外细胞毒性较游离药物略有下降,但表现出单抗介导的靶细胞选择性杀伤作用,为其进一步制备细胞靶向的肿瘤化疗药物奠定了基础.用于治疗白血病的CMA676是由一种人源化的mAb hp 与新型的抗肿瘤抗生素calicheamicin的N乙酰γ衍生物偶联而成的〔15〕,当CMA676与CD33抗原相结合,抗原抗体复合物迅速内在化,进入胞内后,calicheamicin衍生物被水解释放,通过序列特异性方式与DNA双螺旋的小沟结合,使脱氧核糖环中的氢原子发生转移,从而使DNA双链断裂,诱导细胞死亡〔16〕. EGFR mAb可直接作用于EGFR的细胞外配体结合区,阻滞配体的结合,如IMCC225, ABXEGFR和EMD55900等,能抑制细胞生长和存活率,诱导细胞凋亡和抑制血管生成,曲妥珠单抗(Trasruzumab)作用于erbB2的细胞外区域,该药已获美国FDA批准用于转移性的乳腺癌的治疗〔17〕. IMCC225具有增强细胞毒性药物和放射治疗效应的作用,IMCC225与拓扑特肯(TPT)的联合用于荷有人类结肠癌移植体的裸鼠,能提高其生存率〔18〕. 由第四军医大学和成都华神集团股份有限公司联合研制的治疗肝癌新药碘〔13lI〕美妥昔单抗注射液,日前获得国家食品药品监督管理局颁发的生产文号,即将上市. 这是全球第一个专门用于治疗原发性肝癌的单抗导向同位素药物.4制成前体药物一些药物与适当的载体反应制备成前体药物,给药后药物就会在特定部位释放,达到靶向给药的目的. 脑是人高级神经活动的指挥中枢,也是神经系统最复杂的部分. 但由于血脑屏障(bloodbrain barrier, BBB)的存在,使得大部分治疗药物不能有效透过BBB. 含OH, NH2, COOH结构的脂溶性差的药物可通过酯化、酰胺化、氨甲基化、醚化、环化等化学反应制成脂溶性大的前体药物,进入CNS后,其亲脂性基团通过生物转化而释放出活性药物. 张志荣等〔19〕合成了3′, 5′二辛酰基氟苷,并制备了其药质体,给小鼠静脉注射后用HPLC法测定药物在体内各组织的分布,结果表明,氟苷酯化后的前体药物的药质体有良好的脑靶向性.结肠内有大量的细菌,能产生许多独特的酶系,许多高分子材料在结肠被这些酶所降解,而这些高分子材料作为药物载体在胃、小肠由于相应酶的缺乏不能被降解,这就保证药物在胃和小肠不释放. 如多糖、果胶、瓜耳胶、偶氮类聚合物和α, β, γ环糊精均可成为结肠给药体系的载体材料. 常利用结肠内厌氧环境,使偶氮键还原的特点制成偶氮前体药物. 柳氮磺胺吡啶是由5氨基水杨酸(5ASA)与磺胺吡啶用偶氮键连接而成. 口服后在结肠释药,发挥5ASA治疗溃疡性结肠炎的作用,减少其胃肠吸收产生的全身不良反应. 5ASA也与非生理活性的高分子聚合物通过偶氮双键制成前体药物〔20〕. 糖皮质激素共价连接于多糖〔21〕,环糊精〔22〕制成的前药,口服后在结肠部位可释放出药物,可用于结肠炎的治疗. 我们〔23,24〕合成了果胶酮洛芬(PTKP)前药,进行了体内外评价. 结果表明,此前药在不同pH环境下结构稳定,只能被结肠果胶酶特异性降解,释放出KP,发挥治疗作用. 也可以利用结肠pH差异和时滞效应设计结肠靶向给药系统〔25〕.5化学传递系统化学传递系统(chemical delivery system, CDS)是一种输送药物透过生理屏障到达靶部位,再经生物转化释放药物的药物传递系统. CDS通常是将含OH, NH2, COOH结构的药物共价连接于二氢吡啶载体(Q),药物(D)与靶向剂二氢吡啶结合为DQ结合物,建立了二氢吡啶―二氢吡啶钅翁盐氧化还原脑内定向转释递药系统. Chen等〔26〕设计了Tyr Lys的脑靶向CDS,并评价它的药效. Lys的C末端接亲脂性胆甾烯酯,N末端通过一种L氨基酸桥接靶向剂1,4二氢葫芦巴碱(含吡啶结构)制成Tyr Lys CDS,全身给药后,通过被动扩散机制透过BBB,且经酶催化1,4二氢葫芦巴碱变为季铵盐型使其存留于脑内. 通过小鼠甩尾间隔期实验证明,Tyr Lys CDS作用时间明显延长. Mahmoud等〔27〕将吸电子羧甲基连接到氮原子构建了一种新的二氢吡啶载体介导的脑定向转释系统(N羧甲基1,4二氢吡啶3,5二酰胺),该载体稳定,具有良好的脑定向转释能力.靶向给药的研究还面临许多实质性的挑战. 提高药物在靶组织的生物利用度;提高TDDS对靶组织、靶细胞作用的特异性;使生物大分子更有效地在作用靶点释放,并进入靶细胞内;体内代谢动力学模型;质量评价项目和标准,体内生理作用等问题都是研究的重点. 随着靶向给药系统研究的深入,新的靶向给药途径、新的载药方法将会不断出现,遇到的问题会逐步解决. 靶向给药的研究不仅具有理论意义,而且会产生明显的经济和社会效益.【参考文献】〔1〕 Theresa MA, Pieter RC. Drug delivery systems: Entering the mainstream 〔J〕. Science, 2004;303(5665):1818-1822.〔2〕 张志荣,钱文. 肝靶向米托蒽醌白蛋白微球的研究〔J〕. 药学学报,1997;32(1): ZR, Qian WJ. Study on mitoxantrone albumin microspheres for liver targeting 〔J〕. Acta Pharm Sin, 1997;32(1):72-78.〔3〕 张莉,向东,洪诤,等. 肝靶向去甲斑蝥素微乳的研究〔J〕. 药学学报,2004;39(8): L, Xiang D, Hong Z, et al. Studies on the liver targeting of norcantharindin microemulsion 〔J〕. Acta Pharm Sin, 2004;39(8):650-655.〔4〕 韩勇,易以木. 纳米粒肝靶向作用机制的研究进展〔J〕. 中国药师,2002;5(12): Y, Yi YM. Studies on the liver targeting mechanism of nanoparticles 〔J〕. Chin Pharm, 2002;5(12):751-752.〔5〕 王剑红,陆彬,胥佩菱,等. 肺靶向米托蒽醌明胶微球的研究〔J〕. 药学学报,1995;30(7): JH, Lu B, Xu PL, et al. Studies on lung targeting gelatin microspheres of mitoxantrone 〔J〕. Acta Pharm Sin, 1995;30(7):549-555.〔6〕 Gulyaev AE, Gelperina SE, Skidan IN, et al. Significant transport of doxorubicin into the brain with polysorbate 8Ocoated nanoparticles 〔J〕. Pharm Res, 1999;16(10):1564-1569.〔7〕 Ramge P, Unger RE, Oltrogge JB, et al. Polysor bate 80coating enhances uptake of polybutylcyanoacrylate(PBCA)nanoparticles by human and bovine primary brain capillary endothelial cells 〔J〕. Eur J Neurosci,2000;12(6):1931-1940.
原文链接: Huilin Shao, Hyungsoon Im, Cesar M. Castro, Xandra Breakefield, Ralph Weissleder and Hakho Lee. New Technologies for Analysis of Extracellular Vesicles. Chem Rev. 2018 Feb 28;118(4):1917-1950. doi: .
该综述发表在Chemical Reviews杂志上,影响因子高达分,对细胞外囊泡的研究方法总结非常全面,基本上目前EVs研究中用到的研究方法,这篇综述都有介绍,十分详尽!通讯作者是哈佛大学的Hakho Lee教授。
Extracellular Vesicles (EVs) 细胞外囊泡是由细胞主动释放的多样的纳米级膜囊泡。类似大小的囊泡可根据其生物发生、大小和生物物理性质进一步分类(如外泌体、微囊泡)。虽然EVs最初被认为是细胞碎片,因此未被重视,但现在EVs越来越多地被认为是细胞间通信和疾病诊断和预后的循环生物标志物的重要载体。
该综述的内容包含:
生物流体(Biofluids)中含有大量的EVs,这些EVs可以从Parental Cells转移不同的分子去其他细胞,包括:蛋白,mRNA/miRNA,DNA等。
EV的形成决定了其膜组成。 微小囊泡的膜组成最能反映其Parental Cells(母细胞)的质膜。 相反,外泌体中已经鉴定出特异性的内体蛋白分子,这反映出外泌体形成的机制。内体分选复合物(ESCRT)已被广泛认为用于调节和引导特定分子进入MVB的腔内囊泡。ESCRT及其四个主要复合物(ESCRT 0,I,II和III)负责传递泛素化蛋白,用于溶酶体降解和蛋白回收。最近的研究表明,特定的ESCRT家族蛋白的耗竭可以改变外泌体的蛋白质含量和细胞释放外泌体的速率。更有趣的是,发现外泌体富含ESCRT系统的成分(例如TSG101和Alix),可用作外泌体识别的标记。 ESCRT不是介导外泌体形成的唯一机制。其他不依赖ESCRT的过程似乎也能以相互交织的方式参与其形成和分泌。外泌体也富含ESCRT非依赖性的分子。例如,四跨膜蛋白CD9,CD63和CD81已被证明参与内体小泡运输。小GTP酶的Rab家族参与小泡运输和与质膜融合表明这些蛋白在释放外泌体中的作用。另外,外泌体中神经酰胺水平升高,抑制鞘磷脂会引起的外泌体释放减少,表明鞘磷脂酶与囊泡释放有关。 外泌体和微囊泡都包含核酸,包括miRNA,mRNA,DNA和其他非编码RNA。自从最初发现EV含有RNA,人们一直非常关注EV RNA用作诊断生物标志物。在开创性的工作中,Skog等人发现胶质母细胞瘤患者的血清外泌体含有特征性的突变mRNA(EGFRvIII mRNA)和miRNA,可用于提供诊断信息。这些核酸的发现导致了这样的假设,即EVs可以在细胞之间转移遗传信息。确实,瓦拉迪等人和Skog等表明,EV含有转移进入宿主细胞后仍然可以翻译的mRNA。EV中也有逆转座子和其他非编码RNA的表达。逆转录转座子序列和miRNA以及可翻译的mRNA都通过EV进行转移,这些成果突出了EVs作为遗传信息的载体和传播者的重要性。
虽然传统的光学显微镜的衍射极限接近EV的大小,但是不能产生清晰的图像。高分辨率EV图像需要通过电子显微镜(EM)或原子力显微镜(AFM)得到。然而,这些方法的通量有限,因为需要专门的染色方案和设备。
(a)扫描电子显微镜(SEM)提供三维的表面拓扑信息。
(b)透射电子显微镜(TEM)具有出色的图像分辨率,可结合免疫金标记一起使用来提供分子表征。
(c)冷冻电镜(cryo-EM)无需大量处理即可分析EV形态。
动态光散射 (DLS),也称作 光子相关光谱 或 准弹性光散射 ,是一种物理表征手段,用来测量 溶液 或 悬浮液 中的 粒径分布 ,也可以用来测量如高分子浓溶液等复杂 流体 的行为。当光射到远小于其波长的小颗粒上时,光会向各方向散射( 瑞利散射 )。如果光源是 激光 ,在某一方向上,我们可以观察到散射光的强度随时间而波动,这是因为溶液中的微小颗粒在做 布朗运动 ,且每个发生散射的颗粒之间的距离一直随时间变化。来自不同颗粒的散射光因相位不同产生建设性或破坏性干涉。所得到的强度随时间波动的曲线带有引起散射的颗粒随时间移动的资讯。动态光散射实验易受灰尘或杂质影响,故样品的 过滤 和 离心 十分重要。 动态光散射用于表征蛋白质、高分子、胶束、糖和纳米颗粒的尺寸。如果系统是单分散的,颗粒的平均有效直径可以求出来,这一测量取决于颗粒的心,表面结构,颗粒的浓度和介质中的离子种类。DLS也可以用于稳定性研究,通过测量不同时间的粒径分布,可以展现颗粒随时间聚沉的趋势。随着微粒的聚沉,具有较大粒径的颗粒变多。同样,DLS也可以用来分析温度对稳定性的影响。 动态光散射是收集溶液中做布朗运动的颗粒散射光强度起伏的变化,通过相关器将光强的波动转化为相关曲线,从而得到光强波动的速度,计算出粒子的扩散速度信息和粒子的粒径。 小颗粒样品的布朗运动速度快,光强波动较快,相关曲线衰减较快,大颗粒反之。 在外泌体研究中,动态光散射测量敏感度较高,测量下限为10纳米。相对于SEM技术来说,样品制备简单,只需要简单的过滤,测量速度较快。但是动态光散射技术由于是测量光强的波动数据,所以大颗粒的光强波动信号会掩盖较小颗粒的光强波动信号,所以动态光散射不适合大小不一的复杂外泌体样本的测量,只适合通过色谱法制备的大小均一的外泌体的尺寸测量,并且无法测量样品中外泌体的浓度。
纳米粒子跟踪分析(NTA) 是一种光学粒子跟踪方法,用于确定粒子的浓度和大小分布。用光束照射样品中的粒子。当粒子散射光并经历布朗运动时,摄像机记录下每个粒子的路径以确定平均速度和扩散率。与DLS的体散射测量不同,NTA跟踪单个粒子的散射。 然后,此信息将用于数学计算浓度(即视野中的粒子数量)和尺寸分布(即通过Strokes-Einstein方程的流体动力学直径,图5b)。 为了准确定量异质囊泡的浓度和大小,NTA程序需要精确优化摄像头和分析设置。 可能需要使用不同设置进行单独测量,以获取异质混合物中EV子集的准确读数。
EVs在大小、起源和分子组成上都是异质性的;除此之外,它们还存在于不同的复杂的生物流体中,包括血、胸腔积液、腹水、乳汁、唾液、脑脊液和尿液。这些流体中还含有大量的非囊泡大分子结构,可能会干扰EV的分析。所以EV的分离和富集显得尤为重要。
超速离心法(80%)和密度梯度离心法(20%)是最常见的两种高通量混合分离法。根据它们分离机制,这些方法可以分为三大类:密度、亲和和大小。
用不同的离心力将颗粒分离:以较低的离心力(300g)去除细胞碎片,而以较高的离心力(100000g)对EV进行沉淀和浓缩。尽管该方法是应用最广泛的金标准,但它也有许多缺点,如体积大、仪器昂贵、处理时间长、过程繁琐、被聚集的蛋白质和核蛋白颗粒污染以及需要大量的样品。
蔗糖梯度离心法是一种更为严格的超速离心法,它有助于进一步分离不同密度的囊泡,通常用于分离外泌体(悬浮密度为至 g/mL)。在这种方法中,一个包含不同大小囊泡和大分子的样品在一个密度从上到下递增的梯度表面上被分层。在离心过程中,不同的分子以不同的速率通过梯度沉积。由于其分辨率更高,该方法被认为可以分离更高纯度的EVs(特别是外泌体);然而,它面临着许多与超速离心法相关的限制。更加新的等渗梯度(如碘黄醇梯度)法被认为效果更好。
最近,基于聚合物共沉淀法的商业试剂盒(例如,ExoQuick, Exo-Spin)已被开发用于EV富集。这些试剂采用降低EV的水合作用(从而降低溶解度)导致沉淀,然后在低离心力的情况下,沉淀的EV产物可以很容易地、重复性地分离出来,从而避免了长时间的超速离心法操作。然而,这些试剂盒对于大规模使用来说是昂贵的,而且对于EV来说缺乏特异性。该方法还容易产生非均相聚合物颗粒。由于这些试剂均降低了EV和蛋白质的溶解度,因此该方法还可共沉淀脂蛋白和Ago-2 RNA复合物。因此,共沉淀法作为EV分离方法受到了限制。
大小排阻色谱法根据它们的分子大小通过凝胶过滤来分离囊泡和其他分子。这种凝胶由含有特定大小分布孔隙的球形珠组成。当样品进入凝胶时,小分子扩散到孔隙中,而大分子则直接洗脱。因此,大分子比小分子更早地离开色谱柱,这使得分子的停留时间与色谱柱的大小相关联成为可能。近年来,该分离方法已被应用于从复杂的生物媒介中分离纯化囊泡。Sepharose, GE Healthcare; qEV, iZon等商业公司也正在开发商业的产品以简化EV富集,这些产品的排除柱都大约是75纳米孔径的树脂。蛋白质和其他较小的污染分子被滞留在孔径中,而较大的囊泡(>75 nm)可以迅速通过并在空隙中被洗脱。大小排阻法可将EV与可溶性蛋白分离;为提高分离的效率和分辨率,需要考虑多种因素,包括介质类型、孔径、EV与介质之间的相互作用、柱的尺寸、柱的填充以及流速等。
为了提高复杂生物流体的EV分离效率和特异性,人们开发了多种新的EV富集方法。然而,与传统方法相比,这些新方法中的大多数具有较低的吞吐率,应加以解决使之变得实用。
基于分子大小的分离是一种很有潜力的方法,可以将EV与大型细胞碎片分离开来。各种微流体过滤系统已经被开发出来,用于从大的细胞碎片和蛋白质聚集物中分离EV,这些系统大部分是基于分子大小差异。例如,Rho等人构建了一种微流控设备,该设备使用膜过滤器对未处理的血液样本进行筛选,来分离EV。膜过滤器的大小∼1μm。在膜的下方插入一个毛细管,用于引导过滤后的EV进入收集通道。膜过滤器和毛细管导向器夹在两个环形磁铁之间;这种设置在进行大量的样品处理时可以方便地更换过滤器集。
Lee等人最近使用声波以无接触方式对EV进行细分。这种分离利用超声波驻波,根据囊泡的大小和密度对其施加不同的声交互作用力。该装置由一对相互交错的换能器(IDT)电极组成,用以产生跨流动通道的驻波表面声波。
EV蛋白主要来源于胞质膜、胞质醇,而非其他胞内细胞器(如高尔基体、内质网、细胞核等)。EV蛋白质的构成提示了囊泡的生物发生和cargo sorting(这个翻译有点怪)。因此国际细胞外囊泡组织建议应该仔细鉴定EV蛋白,特别是跨膜蛋白和胞质蛋白。
在哺乳动物中,跨膜蛋白和脂质结合的细胞外蛋白(如内贴蛋白)都与微囊泡和外泌体有关。外泌体的跨膜蛋白富含四聚体蛋白(如CD9、CD63和CD81)一个具有四个跨膜结构域的蛋白质超家族。四聚体蛋白参与细胞膜的转运和生物合成的成熟,在外泌体中高表达,这一特性使得四聚体蛋白被用于外泌体的定量和表征。然而,需要注意的是,四聚体蛋白并不只在外泌体中唯一表达。另一方面,微囊泡富含整合素、选择素和CD40配体,表明它们来自于细胞的质膜,EV富含特异的跨膜蛋白受体(如表皮生长因子受体/ EGFRs)和黏附蛋白(如上皮细胞黏附分子/EpCAM)。由于许多跨膜蛋白参与了正常生理和疾病的发病机制,它们被用作重要的病理生理学EV生物标志物。
EV相关的囊内蛋白具有多种功能。它们包括具有膜或受体结合能力的参与囊泡运输的胞质蛋白,如TSG101、ALIX、annexin和Rabs。EV还富含细胞骨架蛋白(如:内酯、肌凝蛋白和小管蛋白)、分子伴侣蛋白(如:热休克蛋白/HSPs)、代谢酶(如:烯醇化酶、甘油醛3-磷酸脱氢酶/GAPDH和核糖体蛋白)。有趣的是,最近的研究发现EV蛋白可以被受体细胞有效地运输和接收,从而在体内和体外引起强烈的细胞反应。这带来了EV作为治疗和药物载体的新机遇。
EV蛋白的定量和特征鉴定不仅对阐明EV的生物发生和cargo sorting有重要意义,而且对鉴别生理和病理标志物也有重要意义。然而,传统的蛋白质分析,包括Western blotting和酶联免疫吸附试验(ELISA),通常需要大样本量、大量处理和/或庞大的专门仪器,因而不太适合临床应用。
在EV蛋白评估时,Western blotting可能是最常用的技术,用于提示与EV相关的靶蛋白的存在。在这个过程中,纯化的囊泡制剂(通常通过现行的梯度超离心法金标准制备)可以用含有变性剂和蛋白酶抑制剂的缓冲裂解液进行处理。然后用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS−PAGE)分离蛋白裂解物,然后转移到膜上,对特定的蛋白target进行免疫印迹。虽然这种方法有很长的准备和处理时间(> 10h),但是Western blotting可以提供关于蛋白质分子大小的有用信息。
不像Western blotting,ELISA只能在相对较小的范围内对目标蛋白进行定量,质谱分析可实现高通量肽谱分析。纯化的EV制剂经过酶消化和肽分离,然后用质谱仪电离分析。在这个复杂的过程中,多个步骤严重影响EV蛋白组学分析。除了有效的EV纯化,质谱分析之前的肽分馏被认为是鉴定囊泡蛋白的一个重要前提。通常通过三种主要方法实现:(1)SDS−PAGE,(2)二维液相色谱和(3)基于等电聚焦的分馏。 值得注意的是,既然质谱分析可以鉴定消化后的肽片段,那么适当的蛋白质鉴定、定量和验证是必要的。已经有两种用于定量的技术方法:基于标签的和无标签的。在基于标签的定量分析中,标签(等压或同位素)被用于比较分析。无标签的定量分析中,色谱强度的谱计数被应用。识别出的候选蛋白可以使用其他传统的蛋白质技术如Western blotting进行验证。在检测灵敏度方面,质谱法通常不如基于抗体的技术敏感。 虽然质谱分析需要大量的准备和处理时间(数天),但它可以提供高通量、定量和EV比较蛋白质组分析。到目前为止,已有成千上万的囊泡蛋白被系统分类,蛋白质-蛋白质相互作用分析。基于质谱的哺乳动物和细菌EV的蛋白质组学分析的详细讨论已经在一些综述中被强调。这些网络和相互作用的研究有助于阐明EV载体的功能活动及其在细胞间远距离通信中的重要作用。
为了解决EV蛋白质定量相关的技术挑战,新一代生物传感器正在开发中。与传统的蛋白质检测方法相比,这些生物传感器利用独特的传感机制,可以检测各种大小和分子含量的EV。这些技术中的许多只需要更小的样本量和更少的样本处理过程,因此非常适合于医疗应用。
流式细胞术是一种基于光散射和荧光激活来分选单个大颗粒(如细胞或微米大小的实体)的强大的技术,然而,传统的流式细胞术对检测直径小于500 nm的小颗粒的灵敏度和分辨率有限。此外,它还受到高光学背景的影响,由于鞘层流体中存在小颗粒(约200 nm)。用传统流式细胞术量化EV时,大量的小EV可能被忽略或者计数偏低:可能同时有多个小的囊泡被照亮被计数成一个单独的事件,这种现象被称为“群体理论”。 为了解决传统流式细胞术的弊端,微米大小的乳胶珠被用来绑定多个囊泡。然后用荧光抗体对结合的EV进行染色,并对其蛋白标记物进行鉴定。然而,这种方法缺乏分析单个囊泡的能力,并且不能区分不同的囊泡亚群,这可能会导致特征的丢失。
该技术主要基于磁性纳米粒子(MNPs)。由于大多数生物物质天然缺乏铁磁背景,这种传感几乎不受同系统中其他生物样品的干扰。因此,即使光学上浑浊的样品对磁场也是透明的;当靶分子被特定的MNPs靶向时,它们与自然的生物背景形成了强烈的对比。在基于核磁共振(NMR)的磁检测中,MNPs置于NMR磁场中,产生局部磁场,改变周围水分子的横向弛豫率,放大分析信号。因此,核磁共振减少了样本处理过程,提高了检测灵敏度,已经被开发用于多个医疗点应用(例如,直接从血液样本中检测循环肿瘤细胞和细菌)。 但是将这种技术运用在EV检测上却遇到了挑战,因为EV明显比肿瘤细胞小1到2个数量级。Shao等人开发了一种专门用于EV检测和蛋白质分析的新分析技术。此方法采用两步生物正交点击化学方法来标记EV,这种小分子(<200 Da)标记策略并没有显著增加抗体或MNP的大小,从而提高了从非结合抗体和MNPs中保留目标囊泡的效率。使用微流控芯片上微核磁共振(μNMR)直接测量EV来确定EV生物标志物的丰度。 相比传统的蛋白技术,μNMR系统表现出更好的检测灵敏度:比WB和ELASA灵敏10 3 倍。Shao等人利用这种集成技术可研究在培养皿中生长的多形性胶质母细胞瘤(GBM)细胞系中的EV。比较蛋白分析证实,EV确实反映了其亲代细胞的蛋白概况,组合GBM的四种标志物(EGFR、EGFRvIII、PDPN和IDH1) R132H)可用于区分癌症来源的EVs与宿主细胞来源的EVs。
鉴于EV的尺寸小,一种新的快速无标签EVs检测方案:表面等离子体共振(SPR)被提出。SPR是指在入射光照射下,金属介电界面上传导电子的集体振荡。不同于其他基于时敏荧光和化学发光探针的光学检测方法,SPR传感检测金属-介电介面附近生物分子结合相关的局部折射率变化,应用于无标签和实时检测。
RNA是EV携带的主要核酸。与细胞中的RNA相比,eEV运输的RNA通常更短(通常<200个核苷酸,但也有长达5 kb的)。它们主要是非编码rna,包括microRNA(miRNA)、tRNA (tRNA)、长链非编码RNA (lnRNA)和片段化的mRNA。编码mRNA (mRNA)已在长度为200~1000个核苷酸的转录组中被识别。mRNA可以翻译成蛋白质,而miRNA可以调节受体细胞中靶mRNA的翻译。EV中RNA的数量和性质可以根据其来源的细胞类型而变化。 由于它们在受体细胞中保留了功能,研究人员提出了有趣的假设,即可能存在专门的机制将不同的RNA分配给EV运输到特定的受体细胞,或可能利用这些机制运送治疗性RNA到特定的部位。这是一个活跃的研究领域,已经有一些综述对其进行阐述。
近年来的研究发现,EV中含有相当比例的母细胞的mRNA,其中许多是细胞特异性的mRNA。这些mRNA分子通常以片段的形式存在于EV中,保护其不被RNA酶降解,使它们成为强有力的循环生物标志物。 此外,已在多个研究中得到证实:EV中一些<2 kb的mRNA分子能够编码支持蛋白质合成的多肽(即,蛋白质翻译的功能)。这些研究强调了EV作为特定的细胞信使在影响受体细胞和促进细胞间通讯等多方面的作用。
miRNA是一类小的非编码rna(一般为17 - 24个核苷酸),通常通过靶向mRNA的3’非翻译区介导转录后基因沉默。通过抑制蛋白质的翻译,EV miRNAs在许多生物过程中都是强有力的调控因子。不同于EV中的循环mRNA,miRNA可以以多种稳定形式存在于体液中。除了被包裹在EV中,循环miRNA还可以被加载到高密度脂蛋白或结合到囊泡外的AGO2蛋白上。目前的证据表明,虽然大多数循环miRNA都与RNA结合蛋白相结合,但在EV中也能发现少量的miRNA。然而,miRNAs在EV中的分布仍不清楚。与mRNA的情况一样,EVs中的miRNA表达反映了其细胞来源,但与亲代细胞略有不同。一些miRNA已被发现优先表达在EV中,并在受体细胞中保持功能以调节蛋白翻译。最近的研究还发现,在哺乳动物细胞培养中常用的胎牛血清可能在体外EV制备过程中导致miRNA伪影。
通过NGS,我们还发现有其他类型的RNA存在EV中。这些RNA包括tRNA,rRNA,小核RNA(snRNA)、小核仁RNA (snoRNA)以及长链非编码RNA (lncRNA)。参见上表。
最近的研究表明某些EV可能含有DNA片段。这些DNA是双链片段,范围从100个碱基对(bp)到 k bp,EV外部还有一些与之相关的> bp的DNA片段。这些片段代表整个基因组DNA,可用于鉴定亲代肿瘤细胞中存在的突变。虽然有可信的证据表明在EV中存在DNA,但其功能尚未确定。
EV核酸作为一种潜在的循环生物标志物和受体细胞间的调节因子已被广泛研究。传统的核酸提取和分析工具已经成功地为我们理解EV核酸奠定了重要的基础。由于EVs中核酸的含量较低,开发高效的提取方法和灵敏的检测策略是非常重要的,特别是在小样本中对稀有目标分子进行检测。
随着人们对利用EV核酸作为微创诊断标记的兴趣日益浓厚,新的生物传感器技术已被开发出来,使提取和分析变得更加高效、快速。这些新平台中有许多提供了对目标核酸标记的敏感定量,并且能够在复杂的生物学背景下识别疾病标记,甚至包括单核苷酸点突变。这为个性化临床医疗开辟了许多新的机会。
虽然传统PCR是检测基因/转录突变的强大技术(例如,EGFRvIII缺失突变),但其敏感性有限,其在检测单核苷酸突变方面存在很多不足。这个问题与EVs特别相关,因为在野生型转录本的大背景中,突变转录本的比例很低。Chen等人最近采用了一种液滴数字PCR (ddPCR)技术来检测EV中的罕见突变。
Shao等人最近开发了一种综合微流控平台,用于现场EV核酸分析,该平台集成了三个功能模块:靶向富集EVs,芯片上RNA分离,实时RNA分析。这个平台被称为免疫磁性外泌体RNA(iMER)分析平台:利用抗体功能化的磁珠从宿主来源的囊泡中分离癌症特异性EVs,然后在芯片上裂解免疫磁珠吸附的囊泡。当EV裂解液通过玻璃珠过滤器时,选择性吸附EV RNA并从过滤器中洗脱,用于反转录和qPCR分析。为了简化分析过程,所有关键部件都集成到一个芯片盒中。 随着该系统的发展,作者研究了核蛋白的两个mRNA靶标,MGMT(6-甲基鸟嘌呤)
肿瘤是一种复杂的结构,包括恶性细胞和周围的基质细胞,如内皮细胞、成纤维细胞和免疫细胞。最近的研究表明,EVs在肿瘤微环境中促进细胞间通讯,从而调节疾病的发生、发展,并且在治疗反应方面发挥重要作用。
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在大多数神经退行性疾病(如阿尔茨海默病、帕金森病、额颞叶痴呆)中存在类似的疾病进展模型,其中错误折叠的蛋白质自结合形成有序的聚合体并在细胞中聚集。阿尔茨海默病(AD)中,淀粉样蛋白的Abeta肽的形成可能是这些蛋白聚合体中最著名的。帕金森疾病(PD)中,另一种类型的聚合体在细胞内形成,主要由alpha-synuclein(突触核蛋白)组成,称为路易小体。最近的研究表明,许多神经退行性疾病中涉及的错误折叠蛋白出现在EV中。因此,这些囊泡为检测和监测神经退行性疾病带来了新的希望。 AD是一种迟发性神经系统疾病:由于神经变性而导致记忆和认知能力的逐渐丧失。虽然AD的确切病因仍是一个有争议的话题,但很明显,与Aβ肽相关的斑块沉积和与tau蛋白相关的神经纤维缠结对疾病的进展是非常重要的。这些淀粉样肽来源于淀粉样前体蛋白(APP)的蛋白水解过程。这一
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发展绿色食品大豆产品促进黑龙江省大豆产业振兴摘要:黑龙江省借助得天独厚的环境资源优势和较高的机械栽培技术水平,绿色食品大豆生产取得了较快的发展。但由于受国际市场的冲击较大,还面临着种植收益过低、基础设施薄弱、精深加工能力不强等限制因素。 关键词:绿色食品;大豆产业;黑龙江省 一、黑龙江省绿色食品大豆发展现状 大豆是黑龙江省的主栽作物,在黑龙江省有多年的栽培历史,种植面积、总产量都占全国的1/3左右。2000年省委、省政府提出“打绿色牌、走特色路”的发展战略,明确了发展优质、高效的现代农业是黑龙江农业的发展方向。在这一战略的指引下黑龙江省绿色食品产业取得了较快的发展,绿色食品大豆产业也随着迅速发展起来,从2000年以来黑龙江省绿色大豆的种植面积逐年增加,到2008年黑龙江省绿色食品大豆种植面积达到1 万亩,年均递增20%以上,现已占全省大豆种植面积1/4以上,产量达到250万吨以上。已建成全国绿色食品原料大豆标准化生产基地44个,面积1 万亩。认证绿色食品大豆产品138个,企业65 家。 二、黑龙江省绿色食品大豆的产业优势 1.黑龙江省环境条件优良。黑龙江开发较晚,环境污染小,病虫害发生率比南方低。森林、草原、湿地资源丰富,全省拥有森林3亿亩,森林覆盖率;天然草原面积约6 500万亩;湿地面积6 510万亩。生态良好,具备发展绿色大豆得天独厚的条件。黑龙江土质肥沃,是世界上仅有的三大黑土地之一,全省属中、寒温带大陆性季风气候,年降水量370毫米~670毫米,光、热、雨同季,适于大豆生长,加之昼夜温差大,有利于干物质积累,农产品品质优良。 2.大豆栽培技术水平较高。黑龙江省是全国大豆主产区之一,大豆面积占全国种植面积近1/3,黑龙江省农垦耕地占全省的1/5,土地规模化种植、机械标准化作业、栽培制度科学化已经走在全国现代农业建设的前列。目前,全省在各环节、各层面开展的农场与地方县合作共建成效突出,带动了地方大豆种植水平的提高。 3.绿色大豆的科研水平较高。黑龙江省从事大豆生产技术研究的科研机构较多,每个市都有多家从事大豆技术的研究机构,近几年,每年的育成品种都在十个以上,70%以上大豆品种为高脂肪、高蛋白及兼用型品种,黑字号、垦字号大豆油脂居全国领先水平,东农42等品种蛋白含量领先国际水平;每年省政府都投入专项资金用于绿色大豆产业的开发和研究,委托东北农业大学、农科院、植保站等单位进行绿色大豆高效生产技术的专题研究,为绿色大豆的生产、加工提供科技保障。 三、黑龙江省绿色大豆产业发展限制因素 1.加入WTO后受国际市场影响比较大。2001年加入WTO以来,中国关税大幅降低, 大豆和豆粕进口关税都降低到了3% 和5% 以下, 不对大豆的进口实行配额制,不对大豆出口实行补贴,这在政策上为国外大豆的进口铺平了道路。这几年中国的大豆进口在逐步增加,2005年中国的大豆进口量约为2 600万吨,2006年大概是2 800万吨,2007年3 万吨,几乎每年都有200万吨的增加,2008年中国大豆进口量达到3 万吨,较2007年的进口量大幅增加万吨,增幅达到,连续第四年创下中国大豆进口量的历史最高纪录,预计2009年的进口量还将增加。与进口大豆相比, 国产大豆无论在商品质量和价格上均有较大差距,2008年底,黑龙江省大豆的国储库收购价格3 700元/吨左右,而进口大豆到港价格仅为3 100元/吨,每吨比国产大豆低600元。 2.三大主栽作物比较大豆处于劣势地位。2005年以来黑龙江省大豆的种植面积逐年下降,2007年种植面积为5 713万亩,与2005年相比减少600万亩,这里还没有考虑后开垦的耕地面积补充进来的(大多数生荒地都适合种大豆)。相反,水稻、玉米种植面积却逐年增加,尤其玉米面积2007年比2005年增加了1 800万亩,这也在客观上促进了大豆面积的萎缩。原因主要是与水稻、玉米相比种植大豆的效益底,农民种植的积极性不高。2008年大豆的公顷收益不足千元,而水稻、玉米的公顷收益都在3 000元以上。 3.大豆主产区的基础设施比较薄弱。黑龙江省大豆的主产区基本还没有摆脱“靠天吃饭”的局面,大豆是比较适合机械化作业的作物,黑龙江省的机械化种植水平也较高,但农田基础设施相对来说还比较薄弱,近几年连续发生的春旱、夏旱等自然灾害给黑龙江省的大豆生产造成了很大的损失,我们各级政府虽然每年都在组织人力物力财力进行抗旱,但收效不大,主要原因是大豆种植面积较大、资金的投入还不到位,机井眼数还不能覆盖大多数产区。没有形成“旱能浇、涝能排”的绿色农业生产模式。 4.大豆精深加工能力不强。黑龙江省大豆加工企业多是传统的制油企业,数量多,成规模的少,粗加工多,深加工少;传统加工多,新兴加工少;有些企业甚至没有小包装,直接给省外企业加工毛油,这样利润空间就小。产业布局与产品结构不尽合理,产品结构不能适应市场需求变化。从规模结构上看,标准化、规模化程度低,综合利用水平低。虽然一些企业也申请了绿色食品标志,但都是一些大豆、豆油、豆粕等初加工产品,像一些深加工豆制品、分离蛋白等加工企业近两年刚刚出现,但规模较小,还没有形成品牌,市场影响力小。必须采取高新技术向工业化、深加工方向发展。 黑龙江省大豆加工企业与沿海企业相比,大豆基本都为本地大豆,收购成本较高,而且大多数豆油都是销往省外,销售半径也较长,运输成本增加,这使得黑龙江省的豆油加工企业在市场竞争中处于不利地位。 四、黑龙江省发展绿色大豆产业的建议 1.借助政策优势,扩大绿色大豆种植面积。从2004年开始,黑龙江省进行了全国绿色食品原料大豆标准化生产基地的创建工作,省财政拿出专项资金用于绿色大豆基地的环境监测和管理费用,各大豆主产县应利用该项目,积极争取开展绿色食品大豆标准化生产基地的创建工作。基地的创建上连着企业,下牵着农户,是一个企业增利、农民增收、农业增效的绿色富农工程,也是省委、省政府提出的“打绿色牌、走特色路”发展战略的一个具体体现。积极落实省政府“千亿斤粮食产能工程”,到2012年,全省建设优质大豆基地5 700万亩,大豆总产量170亿斤。按绿色食品大豆生产技术规程种植的大豆是优质大豆,绿色食品大豆基地是优质大豆基地建设的重要途径,各大豆主产县应借助政策优势、制订计划,采取切实可行的措施推动绿色食品大豆基地的发展。 2.实行由种植大省向加工大省的战略转变。黑龙江省是大豆的种植大省,绿色大豆的种植面积也排在全国首位,但加工相对薄弱。黑龙江省应积极制定措施,实行由种植大省向加工大省的转变。近几年除了老牌的九三油脂、阳霖油脂大型油脂加工企业外,也涌现出了像哈高科异黄酮、日月星蛋白粉、瑞盛素肉这样的深加工企业,政府应高度重视,积极扶持这些企业做大做强,实现对整个绿色大豆产业的拉动作用。无论是大豆生产还是大豆制品加工,都必须实施标准化生产, 逐步建立科学、完备的大豆质量安全标准、检验检测和质量认证三大体系,狠抓产地环境、农业投入、生产过程、包装标识、市场准入五大环节的管理,改变无标生产、无标上市和无标流通的状态。要把“振兴大豆产业行动计划”和“打绿色牌、走特色路”的发展战略结合起来,推广大豆绿色栽培技术,杜绝使用不合理农药与化肥,建立绿色有机大豆生产基地,发展无污染、安全、优质、营养的绿色大豆原料和绿色大豆制品,以适应安全、营养食品消费的需要。 3.加强管理,确保大豆食品质量安全。“三聚氰胺”事件之后,国家对食品安全的重视程度空前的高,食品质量安全法也于今年6月实施。所以企业应该通过加强企业管理,来确保质量安全,应当建立食品质量安全档案,保存企业购销记录、生产记录和检验记录等与食品质量安全有关的资料,有条件的企业可以试行产品质量追溯制度和召回制度。企业食品质量安全档案应当保存三年,做到哪个环节出现问题有据可查。黑龙江省大豆加工的标准体系、检验检测体系、食品安全体系及质量认知体系也相对滞后,大多数企业没有通过“国际质量管理标准(ISO9000)”及“国际环境管理标准(ISO14000)”,“良好操作制造(GMP)”,“危害分析关键控制点(HACCP)”等相关认证,质量安全管理相对松散,若把黑龙江省建成农产品深加工大省,食品强省还需进一步与国际接轨,加强企业的管理水平,向品质优良、管理一流、绿色名牌的方向前进。 4.加大力度保护非转基因大豆生产,打造绿色食品大豆产品知名品牌。在世界范围内,许多国家种植的都是转基因大豆,因其出油率高、产量高、种植成本低,竞争力远远强于中国大豆。但中国大豆具有高蛋白、非转基因和绿色食品大豆产品的品牌特色,用于加工成食用大豆系列食品,具有质量高、品质好、食用安全等优势。因此,以非转基因、绿色食品、优质安全为切入点,黑龙江省要积极培育黑龙江省的绿色食品大豆产品品牌,严格非转基因大豆标识制度,加大宣传,提高知名度,争强市场竞争力。像九三豆油、阳霖豆油这样的老品牌,继续巩固市场占有率,向新食用油产品开发、改善产品包装、有机产品认证方向发展;新的深加工企业应看清形势、抓住机遇,确定好自身的市场定位,努力确立市场的品牌地位。像大庆日月星蛋白有限公司就是一个很好的例子,它们率先在全国进行高纯度蛋白质粉的开发,并调配成适合不同人群的营养蛋白质粉、饮料、饼干等,认证了十多个绿色食品标志,公司以非转基因、绿色营养、优质安全为宣传口号,成功占领了国内大部分市场,是国内最大的蛋白质粉加工企业,现“日月星”商标已是中国驰名商标和亚洲最具价值品牌。黑龙江省的企业要跳出转基因大豆及其制品的恶性竞争圈子,独树一帜,以非转基因和绿色食品的黑龙江品牌,提高大豆产品的附加值,叫响品牌,占领国内市场、打入国际市场。 参考文献: [1]孙向东,任红波.加入WTO后黑龙江省大豆产业展望与对策[J].黑龙江农业科学,2000,(6):39-41. [2]韩晓增,王守宇.发展黑龙江省绿色大豆产业带的思考[J].大豆通报,2001,(6):3-4. [3]芦玉双.黑龙江省大豆产业现状及对策的调研报告[J].大豆通报,2003,(1):28-30. [4]曹海英.黑龙江省大豆生产的制约因素与对策[J].黑龙江粮食,2006,(1):18-20.
论文参考文献,就是你所写的论文中引用的其他资料中的内容,如数据、概念及别人的研究成果等。不能随便写,是要写出准确出处的。 参考文献的编写格式要求。 一、参考文献著录格式 1 、期刊作者.题名〔J〕.刊名,出版年,卷(期)∶起止页码 2、 专著作者.书名〔M〕.版本(第一版不著录).出版地∶出版者,出版年∶起止页码 3、 论文集作者.题名〔C〕.编者.论文集名,出版地∶出版者,出版年∶起止页码 4 、学位论文作者.题名〔D〕.保存地点.保存单位.年份 5 、专利文献题名〔P〕.国别.专利文献种类.专利号.出版日期 6、 标准编号.标准名称〔S〕 7、 报纸作者.题名〔N〕.报纸名.出版日期(版次) 8 、报告作者.题名〔R〕.保存地点.年份 9 、电子文献作者.题名〔电子文献及载体类型标识〕.文献出处,日期 二、文献类型及其标识 1、根据GB3469 规定,各类常用文献标识如下: ①期刊〔J〕 ②专著〔M〕 ③论文集〔C〕 ④学位论文〔D〕 ⑤专利〔P〕 ⑥标准〔S〕 ⑦报纸〔N〕 ⑧技术报告〔R〕 2、电子文献载体类型用双字母标识,具体如下: ①磁带〔MT〕 ②磁盘〔DK〕 ③光盘〔CD〕 ④联机网络〔OL〕 3、电子文献载体类型的参考文献类型标识方法为:〔文献类型标识/载体类型标识〕。例如: ①联机网上数据库〔DB/OL〕 ②磁带数据库〔DB/MT〕 ③光盘图书〔M/CD〕 ④磁盘软件〔CP/DK〕 ⑤网上期刊〔J/OL〕 ⑥网上电子公告〔EB/OL〕 三、举例 1、期刊论文 〔1〕周庆荣,张泽廷,朱美文,等.固体溶质在含夹带剂超临界流体中的溶解度〔J〕.化工学报,1995(3):317—323 〔2〕Dobbs J M, Wong J M. Modification of supercritical fluid phasebehavior using polor coselvent〔J〕. Ind Eng Chem Res, 1987,26:56 〔3〕刘仲能,金文清.合成医药中间体4-甲基咪唑的研究〔J〕.精细化工,2002(2):103-105 〔4〕 Mesquita A C, Mori M N, Vieira J M, et al . Vinyl acetate polymerization by ionizing radiation〔J〕.Radiation Physics and Chemistry,2002, 63:465 2、专著 〔1〕蒋挺大.亮聚糖〔M〕.北京:化学工业出版社,2001.127 〔2〕Kortun G. Reflectance Spectroscopy〔M〕. New York: Spring-Verlag,1969 3、论文集 〔1〕郭宏,王熊,刘宗林.膜分离技术在大豆分离蛋白生产中综合利用的研究〔C〕.//余立新.第三届全国膜和膜过程学术报告会议论文集.北京:高教出版社,1999.421-425 〔2〕Eiben A E, vander Hauw J K.Solving 3-SAT with adaptive genetic algorithms 〔C〕.//Proc 4th IEEE Conf Evolutionary Computation.Piscataway: IEEE Press, 1997.81-86 4、学位论文 〔1〕陈金梅.氟石膏生产早强快硬水泥的试验研究(D).西安:西安建筑科学大学,2000 〔 2 〕 Chrisstoffels L A J . Carrier-facilitated transport as a mechanistic tool in supramolecular chemistry〔D〕.The Netherland:Twente University.1988 5、专利文献 〔1〕Hasegawa, Toshiyuki, Yoshida,et al.Paper Coating composition〔P〕.EP 0634524.1995-01-18 〔 2 〕 仲前昌夫, 佐藤寿昭. 感光性树脂〔 P 〕. 日本, 特开平09-26667.1997-01-28 〔3〕Yamaguchi K, Hayashi A.Plant growth promotor and productionthereof 〔P〕.Jpn, Jp1290606. 1999-11-22 〔4〕厦门大学.二烷氨基乙醇羧酸酯的制备方法〔P〕.中国发明专利,CN1073429.1993-06-23 6、技术标准文献 〔1〕ISO 1210-1982,塑料——小试样接触火焰法测定塑料燃烧性〔S〕 〔2〕GB 2410-80,透明塑料透光率及雾度实验方法〔S〕 7、报纸 〔1〕陈志平.减灾设计研究新动态〔N〕.科技日报,1997-12-12(5) 8、报告 〔1〕中国机械工程学会.密相气力输送技术〔R〕.北京:1996 9、电子文献 〔1〕万锦柔.中国大学学报论文文摘(1983-1993)〔DB/CD〕.北京:中国百科全书出版社,1996
研究生自我介绍1
早上好,尊敬的教授!
我很荣幸能参加研究生复试。非常感谢你给我这个机会!
我叫***,我来自广西,我22岁了。我是南京工业大学的一个本科生,信息管理与信息系统专业。南京工业大学具有悠久的历史,美丽的校园风景为我提供良好的学习环境。三年的努力后,我掌握所学的大部分专业课程,有良好的英语能力。
在我的大学在过去的3年里,作为一个本科生,我一直努力工作,在我的专业上已经建立了扎实的专业基础知识,全面提高了我的素质。我有很多的奖学金,我感到我落在别人的后面,我会尽快找到原因,尽力赶上别人。只拥有这个,我可以专心学习,最后终于成功了。我相信我的扎实的教育背景,将为我一个基金会完成我的学士学位课程!
我是一个充满激情的女孩。我总是感到新鲜事物感兴趣,我将会精力充沛时遇到困难。我是一个坚持的人。我曾经为自己设立一个目标,我会争取我所有的努力到最后一刻。我也是一个很随和的人享受与周围的人,同时良好的关系,我也是一个团队精神的女孩。
在我的业余时间,我喜欢跳舞,打羽毛球和看英语电影。跳舞和打羽毛球是我最喜欢的运动。他们使我保持健康,充满活力和品种的乐观的人生态度。另外,我真的很喜欢看英语电影。它不仅可以消磨时间,而且消费我的听力技巧。我知道我的英语不够好,我会继续研究。
研究生自我介绍2
我是一个进取心比较强的人,性格稳重,不张扬,做事踏实认真,能吃苦耐劳,敢于承担职责。喜欢与人沟通,善于与人合住,具有良好的团队协作意识。与人友善,能和各种人友好相处。具有较强的学习潜力,我自学了VisualC++编程、嵌入式linux开发等课程。
我是一个军事爱好者,喜欢浏览军事新闻和军事博客,和朋友谈论国家战略和各国的最新武器等。但是,我绝对不是一个好战分子,我很热爱和平。我热爱体育锻炼,喜欢打篮球、跑步等运动。
我是通信专业的学生,我十分喜欢这个专业,大学四年,我认真学习了与之相关的一些课程,为自己的专业实践和进一步的学习打下了坚实的.基础。我深知动手实践潜力对本专业的重要性,因此我在学好各门课程的同时也注重参加各种课外实践活动。我参加了2008年全国大学生数学建模大赛、第二届“Actel”杯FPGA设计大赛和2009年全国大学生电子设计大赛,透过这几次大赛,我学会了matlab编程和算法仿真,硬件电路PCB板的设计,单片机开发,积累了一些单片机开发经验,同时也提高了自己与人合作,与人沟通的潜力。在学习嵌入式系统时,我使用VC编写了C/S架构的酒店点餐系统仿真程序,透过这个程序的开发,使我熟练掌握了使用VC开发GUI应用程序和网络应用程序,以及面向对象程序设计思想,之后又做了一个基于ARMlinux的MJPEG视频传输系统,透过这个系统的开发使我掌握了面向过程的模块化程序设计思想,我编写应用程序的潜力有很大程度的提高。在这过程中,我开始接触网络多媒体和DSP,对网络多媒体和DSP开发有一些了解。这是我大学四年的一部分经历。
因为我年轻,不可避免有一些缺点,但是对于自己的缺点我绝不会去回避,我喜欢那些能够指出我缺点的人,并且我会尽力去改掉这些缺点。
我热爱我的生活,感激生活给我的一切(包括磨难)。我认为我很幸运,我有一个健康的身体,有几个知心的朋友,有爱我的父母还有一个可爱的小妹。当然这也包括我喜爱的专业。
对我的未来,我很有信心,我相信未来我能有一份很好的工作和一个幸福的家庭,因为我一向在认真的生活。
这就是我!
谢谢您们!
研究生自我介绍3
大家早上好,很高兴来参加这次面试。首先,请允许我介绍一下自己。我的名字叫秦佳音。我出生于1981年4月23日。我是本地人。今年我将从吉林师范大学毕业。我的专业是汉语言文学,我期望我有机会在仰慕已久的吉林大学完成我硕士阶段的学习,我很自信因为我有这样的潜力!我是一个热情,开朗,和有创造力的女孩。同时,我认为自己思维敏捷,做事谨慎。我期盼着我的研究生学习和生活。不久我将证明你们选取我是最明智的决定。谢谢你给我这样一个宝贵的机会。本文来自作文地带
参加研究生考试的原因:
首先,我喜欢我的专业。汉语言文学是中国文学现代化开始的象征。这是我国人民思想现代化的重要一部分。更进一步的说,现代文学与我们的日常生活紧密相关,它将深深的影响我们的社会模式和性质。我对大师们新颖或温和或深刻的风格十分着迷。但我不会轻易满足于这种肤浅的知识。我期望能够透过进一步学习,对现代文学有更深刻的了解。这是我参加研究生考试的一个重要原因。
其次,我喜欢大学的感觉。它充满着朝气。而且我被学校的气氛深深的吸引。最重要的是,如果能够进入贵校理解教育我将深感荣幸。
最后,我想谈一下一个实际性的问题。成为一名大学教师是我的梦想。我想实现自己的梦想让自己变成一个有足够资格的人。我认为硕士阶段的学习将丰富我的知识、让我胜任我未来的工作。
这是我为什么参加研究生入学考试的简单而清晰的理由。
研究生自我介绍4
我叫xxx,今年22岁,是这所大学的应届毕业生,在今年考研的时候我报选了李铮老师的蛋白质组学。此刻我在12层上完成本科毕业论文。论文资料关于建立双向电泳技术,恰好是蛋白质组学研究的基础工作。
下面我来简单自我介绍下我自己。
我从小就个性喜欢生物,并立志当一个生物学家。此刻家里还有两阳台的花草鱼虫,书柜中更是摆满了生物类书籍。我还以前在奥林匹克生物竞赛上获得全国第三名。
我在这个城市中长大,在家庭的熏陶下涉猎群书,学习自己喜欢的东西。忘我的程度总是让我喜欢专注于一件事情,不达目的誓不摆休。如果日后荣幸和老师们一齐共事,你们便能够从我以前的生活中略见一斑。
我的性格十分随和,好交朋友。别人对我的评价是:和我在一齐十分快乐。我的兴趣十分广泛,在大学期间除了对本专业资料产生浓厚兴趣并深得一些老师喜欢外,我还透过电脑学习了常用的软件,比如OFFICE系统,DREAMWEAR,FIREWORKS,FLASH,PHOTOSHOP以及近百种小型软件。
我已经在网上发表了5余万字的网络小说,并且准备在毕业的时候出版一本电子书,此刻已经完成了2万字的创作。
除此以外,我个性喜欢旅游,从99年至今的每年暑假我都会外出。此刻已经去过全国各地13多个城市。旅游让我更加有激情,这样才会在为目标努力的过程中更加有激情。值得一提的是,我在语言上的天分更是被人所羡慕,此刻我除了会全国很多方言外,还自学了西班牙语,和德语。
在过去的大学生活里,我深切体会到了知识的掌握是如何深远地影响人生。就象我小时想当一个科学家一样,想要让自己活得更精彩便不能停留在原地。所以我选取了考研,选取了继续深造。在考研之初,我对学校里生物化学与细胞学两个专业爱不释手,但在一次陈老师介绍的参观之后,我便被那里浓厚的研究氛围,先进的仪器以及亲如一家的师生关系所吸引,于是依然报考了前沿的蛋白质组学。透过这段时间在那里,我更加体会到我的选取没有错,我愿意为自己也愿意为12层奉献自己的青春与汗水。
如果我荣幸地上了研究生,我想我是会这样貌的:每一天勤勤恳恳,用微笑的表情应对每一个人,应对每一个新生的太阳。在完成学习与实验外,还要用业余时间继续深造西班牙语,并且学习掠锘蚍ㄓ铩R蛭鞍字首檠в爰扑慊际跸⑾⑾喙兀一瓜虢哟ト砑开发和数据库建立,甚至质谱技术。自主创新技术更是被这个时代所呼唤,如果有机会,我想在这方面尝试一下br/子在川上曰:“逝者如斯夫。”
大学四年一晃而过,我已经积累了超多的知识和激情,此刻我渴望有自己施展才华的机会和地方。如果诸位老师能够给我这样一个机会,我想我是会用未来证明大家这天的选取是绝对正确的。
研究生自我介绍5
我叫xx-x,是本科应届毕业生,就读于浙江财经学院,所学专业是信息管理与信息系统。
大学期间,我担任班长一职,经常组织班级活动,培养了良好的人际交往潜力。同时,在学校里,我又用心参加各种活动,在浙江省电子商务竞赛中,我所在的队伍的作品获得的优异的成绩。另外,我没有放松课程的学习,曾获得了校社会工作奖学金和优秀学生二等奖学金。大二的暑假期间,我在联通公司市场部实习了一个月,主要负责联通套餐服务的产品介绍。
我的性格是沉着冷静类型的,做事耐心,而且具有团队精神,个人十分推崇的的一句话是“细节决定成败”
感谢学校能给我这次争取进修研究生的机会,也十分荣幸能够在那里和各位老师应对面的交流。首先请允许我做个自我介绍,梁伟超,河北沙河人,本科阶段主修市场营销专业。除了具有比较强的逻辑思维和系统思维潜力,过去的一年多时间,透过参加创业计划竞赛,对管理专业的知识掌握比较熟练。有信心能够胜任研究工作。
之所以读研究生,主要基于以下三点原因,一是对管理学的浓厚兴趣,期望能够做一些更深入的研究;一是为实现咨询师的梦想,需要更深层次地自我发展。二是实践的需要,立志在三年研究中建立一套属于自己的全方位管理模式,用于指导中小企业(尤其是家族企业)的管理提升。
研究生自我介绍6
早上好,各位尊敬的老师,我很荣幸这天有这样面试的机会。我能够介绍自己了吗
我叫xxx,今年22岁,是这所大学的应届毕业生,在今年考研的时候我报选了李铮老师的蛋白质组学。此刻我在12层上完成本科毕业论文。论文资料关于建立双向电泳技术,恰好是蛋白质组学研究的基础工作。
下面我来简单自我介绍下我自己。
我从小就个性喜欢生物,并立志当一个生物学家。此刻家里还有两阳台的花草鱼虫,书柜中更是摆满了生物类书籍。我还以前在奥林匹克生物竞赛上获得全国第三名。
我在这个城市中长大,在家庭的熏陶下涉猎群书,学习自己喜欢的东西。忘我的程度总是让我喜欢专注于一件事情,不达目的誓不摆休。如果日后荣幸和老师们一齐共事,你们便能够从我以前的生活中略见一斑。
我的性格十分随和,好交朋友。别人对我的评价是:和我在一齐十分快乐。我的兴趣十分广泛,在大学期间除了对本专业资料产生浓厚兴趣并深得一些老师喜欢外,我还透过电脑学习了常用的软件,比如office系统,dreamwear,fireworks,flash,photoshop以及近百种小型软件。
我已经在网上发表了50余万字的网络小说,并且准备在毕业的时候出版一本电子书,此刻已经完成了20万字的创作。研究生面试自我介绍研究生面试自我介绍。
除此以外,我个性喜欢旅游,从99年至今的每年暑假我都会外出。此刻已经去过全国各地130多个城市。旅游让我更加有激情,这样才会在为目标努力的过程中更加有激情。值得一提的是,我在语言上的天分更是被人所羡慕,此刻我除了会全国很多方言外,还自学了西班牙语,和德语。
在过去的大学生活里,我深切体会到了知识的掌握是如何深远地影响人生。就象我小时想当一个科学家一样,想要让自己活得更精彩便不能停留在原地。所以我选取了考研,选取了继续深造。在考研之初,我对学校里生物化学与细胞学两个专业爱不释手,但在一次陈老师介绍的参观之后,我便被那里浓厚的研究氛围,先进的仪器以及亲如一家的师生关系所吸引,于是依然报考了前沿的蛋白质组学。透过这段时间在那里,我更加体会到我的选取没有错,我愿意为自己也愿意为12层奉献自己的青春与汗水。
如果我荣幸地上了研究生,我想我是会这样貌的:每一天勤勤恳恳,用微笑的表情应对每一个人,应对每一个新生的太阳。在完成学习与实验外,还要用业余时间继续深造西班牙语,并且学习掠锘蚍ㄓ铩r蛭鞍字首檠в爰扑慊际跸⑾⑾喙兀一瓜虢哟ト砑开发和数据库建立,甚至质谱技术。自主创新技术更是被这个时代所呼唤,如果有机会,我想在这方面尝试一下br/子在川上曰:"逝者如斯夫。"
大学四年一晃而过,我已经积累了超多的知识和激情,此刻我渴望有自己施展才华的机会和地方。如果诸位老师能够给我这样一个机会,我想我是会用未来证明大家这天的选取是绝对正确的。
谢谢你们的耐心。研究生面试自我介绍发展为奋斗方向,树立正确的人生观、价值观和世界观。为适应社会发展的需求,我认真学习专业知识,发挥自己的特长;挖掘自身的潜力,结合暑期社会实践,从而提高了自己的学习潜力和分析处理问题潜力。"学而知不足"是我学习、工作的动力,除了必修课外,还自学office、flash、frontpage2016、photoshop、dreamweavermx等软件。学习之余,我坚持参加各种体育活动与社交活动。在思想行为方面,我作风优良、待人诚恳,能较好处理人际关际,处事冷静稳健,能合理地统筹安排生活中的事务。
作为一名研究新生,我所拥有的是年青和知识。年轻也许意味着欠缺经验,但是年轻也意味着热情和活力,我自信能凭自己的潜力和学识克服各种困难实现自我的人生价值。我也期望在今后的学习生活中,我能和大家成为学习上的良友与生活中的知己,谢谢!
中西医结合医学论文范文篇2 浅论新时期中西医结合 21世纪必将是中西医结合医学蓬勃发展的世纪,也是全人类传统医药与现代医药相结合的“结合医学”蓬勃发展的世纪。促进和实现中西医结合,是我国医学发展的方向和远大目标,是我国医药卫生工作者及科技工作者共同承担的历史使命。 中西医结合医学的定义是:“综合运用中西医药理论与方法,以及中西医药学互相交叉渗透中产生的新理论与新方法,研究人体结构与功能、人体与环境(自然与社会)的关系,探索并解决人类健康、疾病及生命问题的科学。”中西医结合是我国独具特色的一门学科,它是建立在中国传统医学与现代医学的基础上,且在两者之间相互兼容、相互渗透、相互结合后形成的一门新兴学科。 中西医结合的内涵,应该是通过比较中西两种医学体系在医疗实践中所采用的思维方式、认识手段和应对措施的异同,吸收各自的长处,逐步做到在理论体系上融会贯通,在临床实践中优势互补。现代科学可以帮助理解和阐明深奥复杂的中医理论,而中医药学对人体生命现象的独特认识和对疾病独到的治疗手段又能丰富和充实现代生命科学的内涵。中西医结合是我国医学事业发展的特色和亮点,也是我们缩短与医学发达国家之间的差距,并以自己的特色赶上和超过世界先进水平的优势所在。 目前国外对“结合医学”的研究和投入呈逐年上升趋势,美国NIH1992年用于整个替代医学的研究经费仅200万美元,而近年仅哈佛大学麻省总院用于中医药的科研经费已超过1亿美元。广东等省政府都已明确将中医、中西医结合研究列入全省重点工作之一。这些都为我们积极谋求中西医结合的发展提供了良好的机遇。面对这样一个大好的时机,中西医结合工作要做的事情还很多。 一、中西医结合的意义 1.疾病预防。如在传染病的预防当中,中医学在这方面办法不多,而西医学“疫苗”方法就很有效而且简单方便。 2.疾病诊断。中医在诊断上是笼统的、抽象的、理论性的,而西医在诊断上是具体的、准确的、实在的。如高血压脑血管意外患者,中医说是“中风”、“肝风内动”等所致,这的确不好理解,患者也不易接受。要明确诊断该病,就需要应用现代化设备,即西医检查手段,如CT、MRT或DSA。 3.疾病治疗。对某一种疾病,采用中西医结合方法思考,明确中医治疗疗效好还是西医治疗疗效好,然后应用疗效好的方法治疗,以尽量减少患者痛苦,减轻患者负担。 4.疾病康复。许多疾病,西医只能采取加强营养、增强功能锻炼等措施,靠人体自身恢复,而中医可以采用针灸、理疗等康复措施,这时中、医康复治疗措施就是最好的。 二、理论互补发展 建国初期制定的“团结中西医”的卫生工作方针,以及1954年以后中西团结合作的真正实现,是中西医结合迈出的第一步。在中西医结合的研究过程中,“西学中”人员是中西医结合研究的主体。后来随着中医院校正规教育的发展,通过进一步学习西医而由中医成长为中西医结合人才者逐渐增多。这类人才与“西学中”相比,虽有西医学基础不够坚实的缺陷,但在“系统学习,全面掌握”中医学方面,却又表现出一定的优势。确立现代科学方法为中西医结合研究方法,是中西医结合研究工作的关键。现代科学方法当然包括现代医学方法。一般而言,生命科学不过是物理、化学、数学等非生命科学在生命研究领域中的应用。由于方法论的统一性,现代医学与不断发展的现代自然科学的高度亲和性,是传统医学所无法比拟的。 近两百年来,现代科学的进展带来西医的飞速发展。西医一直致力于从微观角度探讨生理、病理,从而带动新的疗法及药物的发明。在后基因组学时代,生物医学界认识到基因并不能决定一切,因此又有了蛋白组学、代谢组学等帮助人们了解从基因到蛋白再到组织和器官,直至人体这一复杂系统的运作方式。其治疗手段的发展可归结为以基因或某些分子为目标的靶向治疗、代表药物等。 因此,多数学者认为中医应当向西医学习,打开黑箱,探求脏腑经络阴阳的本质,各相当于西医的何种系统、器官、功能乃至分子,方药治疗不仅能表现为临床疗效,而且要从分子机理上进行实验验证,从而说明中医的某一理论是科学的,并且把这当作中西医结合的首要任务。从20世纪70年代以来,中、西医界一直在做上述努力,并取得不少的成果,如肾本质的研究、阴阳的物质基础、经络的实质等。 三、用西医的方法评价中医疗效 具体而言,就是用队列研究、循证医学的方法评价中医疗效,规范中医的“辨证”。例如冠心病全都归于数种乃至一种证型,并以固定的方药施治,再以随机、双盲、对照的方法判断疗效。多数学者认为这种以病统证,及于方药的治疗及评价体系,有助于中医证的客观化及疗效的可重复性。 这种方法将中医辨“证”的特点纳入到了西医诊“病”的体系之中,简化了中医的思维,易于掌握,方便西医运用中成药,例如治疗心衰用参麦针,治疗发热用清开灵,等等,但同时也失去了中医个体化治疗的优势。中医诊断和治疗的核心环节是证。通过患者的表现,归纳出属于何证,便可制定相应的法、方、药,如药证相符,即可收到预期的效果。否则,即需进一步思考辨证、用药是否正确。成功治疗一例患者后,以后遇到类似的患者就会考虑以相同的理法方药略作调整加以应用,同一类证可以用同一类方,《伤寒论》即为代表,这就是中医疗效的可重复性。 中西医结合可以理解为把中医学理论和西医学理论相联系,各取其优势,做到优势互补,然后应用到疾病的预防、诊断、治疗和康复过程中,实现更好地为人民健康服务的目的;为了推广中医药,证明中医药的疗效,对中药进行有效成分研究,即中药的西药化研究,这也是中西医结合的一部分内容。 参考文献: [1]沈自尹.从肾本质研究到证本质研究的思考与实践――中西医结合研究推动了更高层次的中医与西医互补.上海中医药杂志,2005,34(4):47. [2]北京中医学院.中医学基础[M].上海:上海科技出版社,. 猜你喜欢: 1. 中西医结合医学毕业论文范文 2. 大学生医学论文范文 3. 本科医学毕业论文范本 4. 大学医学论文范文
为了研究蛋白质组学技术在医疗健康养殖中的应用,本论文共开展三部分试验,分别为日粮中添加非淀粉多糖酶对生长猪背最长肌蛋白质组表达的影响、高浓度氨气条件下肉鸡小肠黏膜和肝脏蛋白质组表达的影响。试验一生长猪日粮中添加非淀粉多糖酶,试验期50d,通过蛋白质组学技术检测,试验结果表明:日粮中添加非淀粉多糖酶使得蛋白质代谢相关功能的蛋白发生明显变化。同时,还可促进免疫应答,改善氧化应激和解毒,相反,生长猪肌肉中炎症反应相关蛋白表达量下降。试验二和试验三的肉鸡饲养于人工气候舱,氨气浓度分别设置为3±3μL/L和75土3μL/L,试验期20d。试验结果表明:肉鸡暴露于高浓度氨气下,严重减低了平均日增重和采食量,增加了料肉比;同时影响其免疫器官和小肠绒毛的发育。通过对小肠黏膜蛋白质组学分析,总共有43个蛋白表达发生显著差异变化。其中上调表达蛋白主要集中于氧化磷酸化,凋亡相关蛋白。下调表达蛋白主要与细胞结构和生长,转录及翻译调控,免疫应答,氧化应激,营养吸收有关。通过对肝脏组织蛋白质组学分析,共发现30个差异表达蛋白,功能涉及营养物质代谢(能量、脂类和氨基酸)、免疫应答、转录与翻译调控、应激和解毒功能。其中共有两个蛋白,GLB1和AKAP8 L都是慢性肝脏损伤的标志蛋白。
笨蛋,自己写嘛!!!!!!
乳清蛋白质粉的功效与作用:
1、提供身体构造新组织所需的氨基酸,延缓人体衰老。
2、在体内制造酶,改善肠胃功能。
3、为免疫系统制造对抗细菌和感染的抗体。
4、调节体内的水分、电解质平衡,增强机体抗疲劳能力。
5、向细胞输送氧和各种营养物质,加速机体修复。
扩展资料:
正常人群不需要额外补充蛋白粉。
蛋白粉主要分为两种,一是乳清蛋白,一是大豆蛋白。乳清蛋白是动物蛋白,相比之下,更利于人体吸收利用。
绝大部分城市居民不存在蛋白质不足的问题,正常饮食的人群根本无需额外补充。一般成人每日每公斤需要蛋白质1克。每天吃适量主食(男性6两以上,女性5两以上),吃1个鸡蛋、3两瘦肉和2~3两豆类制品,再喝300~500克牛奶或等量的酸奶、豆浆,足以补充健康人每日所需蛋白质。
过多蛋白质会加重肾脏负担。
1、健康人群,只要有均衡的饮食,合理的搭配,不需要额外增加蛋白质,过多的增加蛋白质会加重肾脏的代谢负担。
2、有加强蛋白质需要的人群,在食用蛋白质粉时,不宜单独食用蛋白质粉,即不宜直接加开水食用,可以加入粥、果汁等富含碳水化合物的流质中食用,这样蛋白质的吸收率会增加。
参考资料来源:百度百科-乳清蛋白粉
人民网-蛋白粉,你会选吗?
人民网-蛋白粉别乱吃 只有这几类人才需要补充
在日常生活中总会有一些孕妇因为胃口差难以从饮食中获得足够的营养满足胎儿以及自身身体的需求,这时候就要通过吃一些营养品补充必要的营养物质,而不同的营养品保健功效是不同的,在购买营养品时需要多注意,那么乳清蛋白和蛋白质粉的区别,乳清蛋白和蛋白质粉哪个好?乳清蛋白粉主要是采用先进的工艺从牛奶中分离提取出来的蛋白质,所以蛋白粉和乳清蛋白粉最大的一个区别就是吸收效率不一样,与蛋白质粉相比,乳清蛋白粉纯度高、吸收率也非常快,食用后半小时就能被吸收。 另外,乳清蛋白和蛋白质粉中都含有优质的蛋白质,不过它们的营养价值是存在一定区别的,相对而言乳清蛋白粉营养价值优于普通的蛋白质粉,乳清蛋白粉含有丰富的多种氨基酸,容易被消化和利用,而蛋白质粉含有的氨基酸含量比乳清蛋白粉要少,不过每个人的体质不一样,食用后产生的效果也会有所区别。 总之,乳清蛋白和蛋白质粉都属于蛋白粉,但是这两种蛋白粉不管是吸收利用率、营养价值、价格等都存在很多区别,一般乳清蛋白粉营养价值比较高,价格也稍微贵一些,建议根据实际需求去购买。
1、乳清蛋白的营养成分非常接近母乳并且含9种必需氨基酸及多种免疫活性物质,可帮助宝宝提升免疫力。
2、大量优质蛋白质保证胎儿发育,避免产后妇女身体虚弱、活动减少、食欲不佳并有组织受损,患病风险大大增加。
3、乳清蛋白可以帮助中老年人补充足量优质蛋白以维持肌肉力度和各个器官的运转,且乳清蛋白消化吸收率高,含有丰富的支链氨基酸可以帮助提高免疫力、促进肌肉与骨骼健康,预防慢性疾病。
4、大量优质蛋白质可以帮助机体进行伤口愈合有着明显的著效,还可以提升免疫力避免并发症。
扩展资料:
《中国居民膳食营养素参考摄入量》 中推荐成人每人每天蛋白质的摄入量是65~90克,或者按总能量计占10%~12%即可满足代谢需要。此外,蛋白质摄入量因人的年龄、体重及劳动强度不同而存在一定的差异。
因此,人们只要身体健康,饮食正常,进食量正常,不偏食挑食,就完全能从天然食物中获取足够量的蛋白质,尽可能地摄入真正的食物,不需要再额外吃蛋白质粉。
参考资料:人民网-乳清蛋白更适合四类人群补充
我搜索了一下,给你粘贴供参考:乳清蛋白粉:【功能】乳清蛋白质粉是采用先进工艺从牛奶分离提取出来的珍贵蛋白质,以其纯度高、吸收率高、氨基酸组成最合理等诸多优势被推为“蛋白之王”。【组成】乳清蛋白粉是在牛奶中进行分离加工提取出来,主要的成分是蛋白质,一般在70%-75%浓度是比较高的,再就是少了的碳水化合物,就是我们说的糖!一般占5%-10%,这样搭配而成,快速补充我们身体肌肉生长所需要的蛋白质。【饮用方式】在训练后半小时内补充,可以搭配香蕉或者是面包,或是的少量的葡萄糖,这样更容易让身体吸收,不转化为热量。如果在经济条件允许的条件下,你又是一个对增肌欲望比较强的,早餐时候喝一杯也是效果很好的,早上喝身体的吸收更好。【适合人群】体脂中等,有肌肉轮廓,想雕刻肌肉细节。【副作用】过量服用乳清蛋白粉潜在的副作用: 诱发心脏病:蛋白质在体内的分解产物聚积会影响正常的肝肾功能和免疫力低下,食用过多的蛋白质还会增加患癌症的风险。正氮蛋白:【功能】正氮蛋白粉属于一种高品质蛋白粉,在纯度达90%以上的超纯乳清蛋白中加入天然促正氮因 子,保证肌肉时刻处于合成速度>分解速度的正氮状态,促进肌肉的增长。同时正氮蛋白粉组合了快速消化的乳清蛋白与缓慢释放的酪蛋白,可以为肌肉持续供养;其中所含的谷氨酰胺还有助于减少高强度训练后的肌肉损伤。【组成】正氮蛋白是普通乳清蛋白的升级,由80%的蛋白质加上少量的碳水化合物,区别于乳清蛋白的,正氮蛋白里面含有我们身体必须的氨基酸(亮氨酸,异亮氨酸,苏氨酸,蛋氨酸,等十多种)能更好的促进我们身体肌肉的修复和合成。【饮用方式】在训练后半小时内补充,可以搭配香蕉或者是面包,或是的少量的葡萄糖,这样更容易让身体吸收,不转化为热量。如果在经济条件允许的条件下,你又是一个对增肌欲望比较强的,早餐时候喝一杯也是效果很好的,早上喝身体的吸收更好。【适合人群】高水平训练水平,突破训练平台期,雕刻线条,增肌【副作用】正氮蛋白和乳清蛋白都是属于一类,都并非是激素类固醇,只是一种常规的运动营养补剂,过量服用会诱发心脏病:蛋白质在体内的分解产物聚积会影响正常的肝肾功能和免疫力低下,食用过多的蛋白质还会增加患癌症的风险。