trizol提不出来rna的原因有可能是以下原因:
1)你的Trizol试剂核有无问题?2)研究材料是否新鲜,RNA容易降解,应妇80度保存。3)如果都没问题,你的操作有无问题?
trizol提取rna的步骤:(仅供参考)
用户需自备的试剂和材料
无水乙醇、氯仿、Glycogen(可能需要)、 Eppendorf管(RNase-free)、 Tips(RNase-free)
准备工作
RNase酶非常稳定,是导致RNA降解最主要的物质。它在一些极端的条件可以暂时失活,但限制因素去除后有迅速复性。用常规的高温高压蒸气灭菌方法和蛋白抑制剂都不能是RNase完全失活。它广泛存在于人的皮肤上,因此,在与RNA制备有关的分子生物学实验时,必须戴手套。
RNase的又一污染源是取液器,根据取液器制造商的要求对取液器进行处理。一般情况下采用用DEPC配制的70%乙醇擦洗取液器的内部和外部,基本达到要求。取RNase-free的物品时必须戴手套。
料制品的处理
尽可能使用无菌,一次性塑料制品,已标明RNase-Free 的塑料制品,如没有开封使用过通常没有必要再次处理。对于国产塑料制品,原则上都必须处理方可使用。处理步骤如下:
璃玻和金属物品 250°C烘烤3小时以上。
从组织中提取总RNA
从细胞中提取总RNA
操作步骤
注:组织或细胞量过少,可酌情减少Trizol用量;组织或细胞用量过多,会引起DNA对RNA的污染;
高蛋白、脂肪或多糖类组织,肌肉组织或块状植物组织等,组织匀浆或液氮研磨后须4℃ 12,000g离心10min去掉不溶物,再进行下面操作,若顶层有脂肪物,则也须去掉;
热天提RNA,带手套是必须的,手是RNase的主要来源;
组织块用液氮研磨,效果最好,若没有液氮或电动匀浆器,可用手动匀浆器代替,此时组织块不宜过大,且需先用眼科剪刀将组织碱碱剪碎,然后再充分研磨。