偶氮染料的检测论文

氢氧化钾提高尿液干化学白细胞的检出率【摘要】 目的 探讨氢氧化钾(KOH)对尿液干化学白细胞(WBC)检出率的影响。方法 将UF�100尿沉渣仪检测提示WBC升高且镜检确认为阳性，而干化学试纸检测为阴性的标本70份，加入 ml的 mol·L-1 KOH溶液混匀后重新检测；将尿沉渣仪检测、镜检、干化学都为阴性的标本30份(男、女各15份)加入 ml的 mol·L-1KOH溶液作对照。结果 70份假阴性标本滴加KOH重新检测后全部为阳性；30份阴性标本重测结果仍均为阴性。结论 加入KOH可有效提高干化学白细胞的检出率,降低假阴性率 【关键词】 白细胞；尿液干化学法；氢氧化钾尿液干化学法具有检测速度快、项目多的特点，尤其对尿路感染具有较迅速的诊断价值，但在试纸灵敏度不够或存在干扰因素的情况下会产生假阴性，引起误、漏诊。有文献报道，尿液干化学白细胞（WBC）检测的灵敏度与尿液pH值有关〔1〕。本研究旨在探索在尿液中加入氢氧化钾（KOH）溶液，以提高WBC检出率,降低假阴性率。 1 材料和方法 材料 标本来自1 468例本院10 d门诊患者的随机尿液样本。 仪器和试剂 UF�100尿沉渣仪及其配套试剂、质控品（批号：A7010）均为日本Sysmex公司生产，H10Ⅱ尿液分析仪及其配套试纸（批号：20071020和20071120）、质控品（批号：20070629）均为长春迪瑞实业有限公司生产。Olympus双筒显微镜为日本奥林巴斯光学工业株式会社生产。分析纯KOH由上海第二试剂厂生产。 方法 仪器操作均按操作手册进行，手工离心镜检按《全国临床检验操作规程》进行，阳性标本判断以参考文献〔2〕标准：UF�100尿沉渣分析仪计数WBC>26个·μl-1,且手工离心镜检每高倍镜下WBC数>5个；尿干化学试纸检测WBC为1+或以上。阴性判断标准：UF�100尿沉渣分析仪计数WBC<14个·μl-1,尿干化学分析试纸检测WBC阴性，手工离心镜检每高倍镜下WBC数<4个。两者之间的可疑样本不选用。假阴性判断标准：UF�100尿沉渣分析仪检测提示WBC升高并镜检确认为阳性，而干化学试纸检测为阴性的标本。每日做完质控后进行样本检测。 2 结 果 提高检测率的最佳浓度 （1）取阴性标本30份，每份分成4小份，每小份尿液6 ml，分别加入 mol·L-1的KOH 、、和 ml混匀后重新检测，结果见表1。（2）取假阴性标本30份，操作方法同阴性标本，结果见表2。表1 阴性标本加KOH后重测WBC结果（n=30）份表2 假阴性标本加KOH重测WBC结果（n=30）份 由表1、2可见，6 ml尿液中加入 mol·L-1的KOH ml为最佳浓度，既可以保证阳性标本全部被检出，又可以减少假阳性的出现。 加KOH后的重测结果 1 468份尿标本中UF�100尿沉渣分析仪和离心涂片镜检阳性者560例，尿干化学试纸检测假阴性203例，假阴性率为。我们取其中的70份假阴性标本，每份取6 ml尿液加入 mol·L-1 KOH ml混匀后重检测，结果见表3。表3 假阴性标本加KOH重测WBC结果由表3可见，加入KOH后，70例假阴性标本重新检测后全部为阳性。 3 讨 论 尿干化学法检测WBC是利用中性粒细胞中的酯酶水解试纸中的吡咯酚酯产生游离酚，游离酚与苯酚基重氮盐偶联，生成紫色偶氮染料。但如果中性粒细胞中的酯酶没有释放出来(或释放较少)，则不能快速水解吡咯酚酯，在较短时间内不能充分反应而使试纸检测WBC成假阴性。 从本试验结果可以看出，单用尿干化学法检测假阴性率达，对于糖尿病病人，尿路感染是较常见的并发症，反复发作后可以转为慢性。慢性感染后的尿液可能以淋巴细胞为主，而淋巴细胞中不存在中性粒细胞酯酶，也会导致WBC检测假阴性使检测率降低。本实验中有5例(5/203)尿糖(3+)～（4+）的阴性标本，加入KOH混匀重新检测后均为阳性。与文献报道〔3�4〕的尿糖对WBC检测有影响的结果不符。因此，笔者认为，尿糖对尿液WBC的检测结果没有影响，这仅是试纸检测的局限造成的假阴性。 从本试验WBC假阴性的203例标本中，亚硝酸盐(NIT)、隐血(Bld)、蛋白(Pro)也都为阴性的标本有90例。如果以1996年的标准〔5〕：干化学检测NIT、Bld、Pro、WBC都为阴性的标本就可以免镜检，那本研究中将有(90/1 468)的阳性漏检率(加上Bld的假阴性，实际上漏检率将高于)。因此，笔者认为，尿试纸干化学NIT、Bld、Pro、WBC四项都为阴性的标本就可以免镜检的决定有待商榷，赞同张晓宁〔6〕提出的干化学加混匀一滴尿镜检作为过筛的观点。 在进行干化学检测中，本科都是在室内质控在控的前提下进行样本检测，而室内质控是一种中性粒细胞酯酶已释放的溶液，因此做质控时能很快与试纸反应。当测定标本时，试纸中的白细胞破坏剂量不足(或没有破坏)，中性粒细胞酯酶释放较慢，则在较短时间内不能充分反应而使结果出现假阴性。因此，笔者认为，在试纸白细胞膜块中加入破坏白细胞的试剂KOH可使白细胞酯酶快速释放，结合定量加入尿液的尿液分析仪检测，能较好地控制KOH的浓度使其达到WBC完全破坏，而不至于产生假阳性。从而有效地提高WBC检测的灵敏度，也能解决室内质控品与尿样本之间的差异。【参考文献】 〔1〕郭东洁，安国瑞，聪慧.尿液的pH对干化学比重与白细胞的影响〔J〕.河北医药，1998，20(2)：113.〔2〕刘成玉.临床基础检验学实验指导〔M〕.2版.北京：人民卫生出版社，2003:110�111.〔3〕陈春华.尿液中葡萄糖对干化学检测白细胞的影响〔J〕.临床检验杂志，2007，25(5)：340�340.〔4〕杨妍，贾林，贾惠琳.尿糖对尿液分析仪血细胞干化学检测的影响〔J〕.医学检验，2006，27(4)：53�53.〔5〕朱忠勇.中华医学会检验学会临床血液与尿分析专题研讨会纪要〔J〕.中华检验医学杂志，1996，19(2)：122�124.〔6〕张晓宁.摒弃尿干化学法筛选标准，推行干化学法+混匀一滴尿镜检作为过筛〔J〕.中华检验医学杂志，2007，30(7)：828�829.

氢氧化钾（化学式：KOH），俗称苛性钾，白色固体，溶于水、醇，但不溶于醚。在空气中极易吸湿而潮解。可与二氧化碳反应生成碳酸钾。所以它会被用作吸收二氧化碳之用。制备可从电解高纯度的氯化钾水溶液制得。有强烈腐蚀性，常用于制取碳酸钾，固体氢氧化钾为白色正交结晶，有块状和片状两种，溶于水放出大量热。吸入后强烈刺激呼吸道或造成灼伤。皮肤和眼直接接触可引起灼伤，一旦眼睛或皮肤接触到氢氧化钾，迅速将受伤部位以水不断冲洗15 分钟以上；口服会灼伤消化道，可致死。

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