1. RP-HPLC法测定巯基含量采用色谱柱Kromasil-C18 (250×, 5μm)，流动相A()和流动相B（甲醇）梯度洗脱：流动相B 40%~80%，0~10min，然后80% B保持5min，流速，检测波长327nm，得到NTB标准曲线y=，回收率，RSD=，从而建立了一种高灵敏度巯基检测方法。2. 采用分子荧光光谱法作为反应条件，用反相高效液相色谱梯度洗脱法测定巯基用OPA、丹酰氯、茚三酮与半胱氨酸反应，测其可见紫外吸收光谱及荧光光谱；在不同PH、温度、反应时间条件下，用OPA与半胱氨酸反应测其荧光度；分别吸收半胱氨酸溶液0、20、40、60、80、100 μl，各加入10 μlH2O2,室温下反应30min，然后加热蒸干，残渣用200μl OPA衍生液，定容至5 ml，4 min时测其荧光光谱。取的硼酸缓冲溶液 5μl，混合10次；加入OPA衍生液2μl，混合进样走HPLC。梯度条件：洗脱液B所占比例0min为0，17min线性增加至60%，线性增加至100%，20min洗脱结束。激发波长为340nm,荧光检测波长为450nm。3.柱前衍生高效液相色谱-紫外检测法以tris(2-carboxylethyl) – phosphine (TCEP)为还原剂，7–fluorbenzo–2–oxa –1,3– diazole– 4-sulfonate(SBD-F)为衍生剂，N-乙酰半胱氨酸为内标，C8色谱柱分离，流动相为甲醇 -磷酸盐缓冲液（pH =3. 0）,梯度洗脱 ,385 nm处检测。线性范围为8. 3～1042. 6 μmol/L,最低检测限为 0. 42μmol/L,日内精密度为 1. 67%～1. 86%,日间精密度为 2. 08%～3. 06 %,平均回收率为 98. 1%～103. 2 %。4. 电化学脱附与荧光技术联用将样品固定在烷基硫醇自组装膜修饰的金电极表面 ,通过荧光试剂马来酰亚胺与游离巯基反应原位标记 GSH,恒电位条件下脱附电极表面吸附物 ,检测脱附物在 mol·溶液中的荧光强度。
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