流行病学研究论文动物实验

病 毒 病 细 菌 病 真 菌 病一. 犬瘟热• 犬瘟热(canine distemper，CD)是由犬瘟热病毒引起的一种高度接触性的病毒性传染病。主要发生于幼犬，临床上以双相热型、急性鼻卡他、支气管炎、卡他性肺炎、严重的胃肠炎和神经症状为特征。1. 病 原• 犬瘟热病毒(canine distemper Virus，CDV)属于副粘病毒科麻疹病毒属的成员，病毒粒子多呈球形，直径在150~300nm之间，病毒的基因组为RNA。圆形的病毒体内含有直径为15~的螺旋形核心。• 病毒在环境中不能稳定存在，大多数常用的清洁剂、消毒剂，以及加热等都能很容易地将病毒杀死。的福尔马林、1%煤分皂溶液或3%氢氧化钠溶液能在数小时内灭活病毒。CDV在条件下均能存活。而有利于病毒的保存。本病毒在-70℃或冻干条件下可长期存活，对热和干燥敏感，50℃~ 60℃时30 min失去活性。• CDV病毒可在犬、貂、猴、鸡等和人类多种原代与传代细胞上生长。在犬肾单层细胞培养中形成多核体、核内和胞质内包涵体及星状细胞；在犬肺巨噬细胞中培养，形成葡萄串样细胞病变；在鸡胚成纤维细胞中培养，形成星芒和露珠样的细胞病变；在鸡胚绒毛尿囊膜上增殖能形成特征性痘斑。2. 流行病学• 本病对幼犬危害最为严重，犬科、鼬科和浣熊科的动物如狼、狐、豺、獾、熊猫、山狗、野狗等均能感染发病。雪貂对犬瘟热病特别敏感，自然发病的死亡率可达到100％，因此，常用雪貂作为本病的实验动物。人类或其它家畜对本病无易感性。• 免疫母犬出生的小犬，可从初乳中得到母源抗体获得被动免疫。未经免疫的幼犬除非饲养绝对隔离的地方，否则与其它带毒犬接触后很难避免感染。老犬之所以感染率低，主要是由于先前曾与病毒有过接触，一般2岁以上的犬发病率就逐渐降低，5~10岁的犬人工感染仅有5%左右发病。患病后康复犬可获得终身兔疫。• 病毒主要通过飞沫传播。病犬是本病的传染源。病毒除大量地存在于鼻涕、唾液外，还见于血液、脑脊液、淋巴结、肝、脾、脊髓、心包液及胸、腹水中，并且能通过尿液长期排毒、污染周围环境。与病犬在一起的易感犬无法免受传染。感染门户是呼吸道，也可通过食物经消化道感染。3. 发病机理• 感染的自然途径是上呼吸道。病毒主要从鼻咽和呼吸道散播到支气管淋巴结和扁桃体。感染后第1星期出现病毒血症，随后很快散布到全身淋巴结、骨髓和上皮组织固有膜。50 %的犬在感染后迅速产生抗体，随着抗体滴度的升高，病毒逐渐消失，这些犬多数不表现明显症状。另一半则不产生足够的抗体，因而病毒广泛散播到全身的上皮组织，呈现病毒侵害多系统的临床症状。病犬一旦出现神经症状，不久就会死亡。4. 症 状• 发烧。• 病初体温升高，发热可达40℃ 以上，持续 2d后迅速降至常温，经2~3d后体温第2次升高，可持续数星期，呈现典型双相热型。• 病犬在第1次高热后，精神不振，食欲减退，流泪和水样鼻液，症状较轻微。第2次体温升高后，病情迅速恶化，出现呼吸系统、消化系统和神经系统以及其它的一些典型症状。• 咳嗽、黏液性和脓性眼、鼻分泌物，肺炎。• 以呼吸系统症状为主的病犬，鼻镜干燥，鼻腔分泌物增多，初期清稀呈浆液样，以后逐渐变为脓性鼻液，有时还混有血液，在打喷嚏和咳嗽时附着鼻孔周围，同时出现“干咔”症状，呼吸加快，由腹式呼吸变为张口呼吸，眼结膜潮红。• 厌食、呕吐、腹泻、脱水。• 以消化系统症状为主的病犬食欲废绝、大量饮水、呕吐，病初便秘，不久发生下痢，粪便中混有黏液，恶臭难闻，有时混有血液和气泡，口腔内发生溃疡。• 抽搐、肌肉震颤、共济失调、转圈。• 以神经系统症状为主的病犬，癫痫、痉挛间隙性发作，多见于颜面部、唇部、眼睑，嘴巴一张一合，或者不自主地连续“咂嘴”，口流白沫。严重病例可见转圈运动，后躯麻痹甚至瘫痪不能站立。病程稍长的病例，表现出舞蹈病症状，或者出现“踏脚样”特殊症状。• 失明 、腹部有脓包。• 部分病例在腹下部和股内侧皮肤上出现米粒大小的红色丘疹。在恢复期丘疹可自行消失。绝大多数病犬眼睑肿胀，有大量的脓性眼眵，附着在上下眼睑边缘，常常使上下眼睑粘合在一起不能睁开(早晨特别明显)，进而发生角膜溃疡，导致双目失明。慢性病例常常出现足垫增厚 (角质化过度)的症状，这一型病例全身症状不明显，仅有轻度挑食和体温轻微上升的现象，病程达1～2月之久，大部分以死亡告终，少数能康复。• 本病的潜伏期为3~6d，急性病例常在出现症状后的l~2 d内死亡。慢性以消化道症状为主的病例，病程长达1月以上。本病死亡率为80％以上。5. 病理变化• 肠系膜淋巴结和肠黏膜中的淋巴网状组织髓样肿胀，脾脏髓质增生，扁桃体肿胀，胸腺缩小呈胶冻状，肾上腺皮质变性。• 呼吸道病变表现为上呼吸道黏膜的卡他性炎症和非典型性支气管炎，消化道的病变可见卡他性肠炎，幼犬有明显的出血性肠炎变化，慢性病例脚底表面角质层增生，表现肉趾增厚。• 表现神经症状的病犬有脑血管袖套现象(广泛的血管周围单核细胞聚集)，非化脓性软脑膜炎。6. 诊 断• 本病的诊断较困难，因为经常存在混合感染，使临床症状复杂化。结合流行病学调查，也只能提出怀疑本病的线索，因此确诊尚有赖于实验室诊断，同时注意与其它几种传染病的鉴别诊断。试纸盒快速诊断法• 用棉签粘取病犬的眼分泌物、鼻唾液或者尿液，插入装有反应稀释液的样品管中，搅拌混匀，用吸管吸取样品稀释液，向试纸样品孔中滴入4滴，5~10min后判断结果。出现一条红线者为阴性，出现两条红线为阳性，无红线出现，试纸无效。荧光抗体检查• 犬瘟热荧光抗体的制备：用幼犬、貂(雪貂)等易感动物制取高免血清，提取其中的免疫球蛋白Ig G，再用异硫氰酸荧光素与Ig G结合。经层析脱洗后而获得精制的犬瘟热荧光抗体。• 诊断方法：生前采血分离白细胞涂片，死后采取脾、肝、淋巴结等组织抹片。涂片用冷丙酮固定，自然干燥，按犬瘟热荧光抗体的使用效价，用％的伊文斯兰溶液稀释后，滴于涂片上。置于37℃湿润条件下染色30 min。水洗吹干，封固后在荧光显微镜下检查。犬瘟热阳性细胞像鲜明可辨，细胞浆内有苹果绿荧光，细胞核清晰可见呈暗黑色。• 犬瘟热阳性，细胞像鲜明可辨，细胞浆内有苹果绿荧光，细胞核清晰可见呈暗黑色。• 犬瘟热阴性，细胞浆为紫红色或暗红色无荧光，细胞核不清楚。区 别• 犬传染性肝炎，常见暂时的肝、胆囊病变及体腔血样渗出物。犬瘟热则无此变化。组织学检查，犬传染性肝炎为核内包涵体，而犬瘟热无此变化。在细胞核内和胞质内均有包涵体，且以胞质包涵体为主。• 狂犬病有喉头、咬肌麻痹的“恐水症”症状和攻击人畜的现象，而犬瘟热无此症状。7. 预 防• 犬瘟热是犬科动物最为严重的传染病，控制该病的有效措施是及时搞好犬只的疫苗免疫。用于犬瘟热预防的疫苗主要是细胞培养的犬瘟热弱毒疫苗，其次麻疹疫苗在非常时期(疫区内幼犬断奶后1～2星期)也可用于紧急免疫。目前国内普遍应用的疫苗有荷兰生产的二联苗、五联苗、六联苗、七联苗；美国生产的七睢苗；法国生产的七联苗和国产的五联苗、六联苗、七联苗。具体免疫程序• 3月龄以内的幼犬给予3个剂量的免疫，第一个剂量应在断奶后7--10d内注射，以后每个剂量以2星期的间隔肌肉注射；3月龄以上的幼犬，给予两个剂量的免疫，两个剂量的间隔时阋为2星期；成年犬每年给予两个剂量的免疫，两个剂量的间隔时间为15至180d，怀孕母犬在产前15d进行免疫接种，小犬可以通过乳汁获得较高滴度的抗体保护，一直到断奶。8. 治 疗• 病毒性疾病目前尚无理想的药物治疗，一般认为犬瘟热高免血清、犬瘟热单克隆抗体、免疫球蛋白、干扰素和抗病毒药物联合应用，对早期病犬有一定疗效，多数情况下采取对症治疗。• (1)使用犬瘟热单克隆抗体、犬瘟热高免血清和犬用丙种球蛋白 犬瘟热高免血清小犬每次5～10 mL，大犬20～40 mL/次，肌肉注射或静滴，1次/d，连续3～5d；犬丙种球蛋白小犬2 mL，大犬4～6 mL，2次/d，连续3～5 d；犬瘟热单克隆抗体5～20 mL，皮下注射，1次/d，连续3 d。• (2)使用抗病毒药物 聚肌胞小犬～1 mg，大犬1～2 mg，肌肉注射，1次/d，连续3～5 d；也可用病毒唑，小犬50 mg，大犬100 mg，肌肉注射，2次/d，连续3d。• (3)强心补液 肠炎症状明显和呕吐严重的病例，可用林格氏液30～50mg/kg体重，10%葡萄糖酸钙2～5mL，维生素B6 50～100 mg，混合静脉滴注。• (4)控制继发感染 用氨苄青霉素、羟氨苄青霉素、头孢氨苄或者先锋霉素按20～25mg/kg体重，同时配合卡那霉素、丁胺卡那霉素或者阿奇霉素肌肉注射，2次/d，连续3～5 d。• (5)调整心律 心律不齐者，用生脉注射液2～4mL，肌苷50～100mg，维生素B12 ～1mg混合肌肉注射，2次/d，连续3 d。心率失常的病例，用心律平口服，小犬每次75 mg，大犬每次150 mg，2～3次/d，连续2～3 d。• (6)治疗鼻炎 脓性鼻炎或严重鼻塞的病例，可用麻黄素、地塞米松和卡那霉素滴鼻液混合滴鼻。• (7)止咳化痰 对干咳或者痉挛性咳嗽的病例可用咳快好，小犬10mg，大犬20mg；氨茶碱，小犬30 mg，大犬50～100 mg；扑尔敏，小犬2 mg，大犬4 mg；甘草片，小犬1片，大犬2～3片；地塞米松 mg，混合口服，3次/d，连续2 d。照着写

流行病学调查分析是动物检疫检验的基本方法之一，通过流行病学调查，可详细了解动物疫病流行的规律，为疾病防治策略的制定奠定基础。

流行病学调查的目的在于寻找病因、查明流行条件、分析流行规律，制定切实可行的疫病防治策略。流行病学分析的目的在于对汇总的资料进行加工整理，综合分析可能存在的客观规律，做好疾病防治措施的预判工作。

一般来讲，流行病学调查是为了汇总资料，分析是为了从汇总资料中寻找潜在的规律，指导进一步的防疫实践。

规定管理的动物疫病分为下列三类：

一类疫病

是指对人与动物危害严重，需要采取紧急、严厉的强制预防、控制、扑灭等措施的。

二类疫病

是指可能造成重大经济损失，需要采取严格控制、扑灭等措施，防止扩散的。

三类疫病

是指常见多发、可能造成重大经济损失，需要控制和净化的。

上述一、二、三类动物疫病具体病种名录由国务院兽医主管部门制定并公布。

作者 | 李 晨阳 王东丽

“喝点儿红酒，美容养颜、软化血管。”“少喝一点没关系，还能预防冠心病。”酒桌上，你是不是也听到过这样的劝酒词？

尽管酗酒的危害板上钉钉，仍有很多人相信少量饮酒对 健康 不仅无害，还有好处。

然而，1月13日《自然—通讯》发表的一项来自西湖大学教授杨剑团队的研究，给爱酒人士的心灵鸡汤泼了一瓢凉水。

矛盾：到底负相关还是正相关？

在网络上流传的各类文章中，少量饮酒的好处包括软化血管、降低胆固醇、控制体重甚至预防肿瘤等。

更令爱酒人士欢欣鼓舞的是，一些发表在正规学术期刊上的研究也在为“适度饮酒”背书。

2019年发表在《自然—遗传学》的一项研究指出，每周饮酒量与2型糖尿病、慢性肾脏疾病、帕金森病、重度抑郁症、自闭症谱系障碍等疾病呈“负遗传相关性”。

而2017年发表在《分子精神病学》上的一篇论文则声称，酒精摄入量增加与肥胖程度呈负相关。

部分研究中，饮酒量和疾病风险的关系呈现“J”形曲线，似乎提示存在一个“最佳”饮酒量，在这个点上，多种疾病的风险降到了最低，甚至比滴酒不沾的人还要低。

这样的曲线，就像给饮酒者的行为打上了一个美妙的“对勾”。

澳大利亚昆士兰大学博士研究生薛昂立的研究课题是探究喝酒、吸烟、运动等生活习惯与疾病的因果关系。

很快，他发现了不少矛盾的地方。

“在全基因组关联研究的论文中，的确不乏饮酒和糖尿病、心血管疾病等呈负相关的结论。但如果用孟德尔随机化方法进行因果分析，就会发现饮酒对那些疾病有风险效应。”他说，“这让我感到很奇怪。”

进一步查阅文献时，研究人员像侦探那样察觉到了症结所在。

迷案：谁在调查问卷里撒了谎？

“你只能调查人，而不能用人做实验——这是人类流行病学研究与动物实验最大的不同。”

论文通讯作者杨剑对《中国科学报》说，“在这种情况下，调查问卷就成了最常用的研究办法，尽管它并不理想。”

漏洞就隐藏在调查问卷中。

英国生物银行是迄今已建成的最全规模人类信息资源库之一。

全球科研工作者都可以利用其数据探究基因、生活方式和人类疾病的关系。

研究人员分析了英国生物银行超过45万人的数据，其中约万人宣称自己从不喝酒。

有趣的是，数据库同时还提供了这些人在英国医院的就医记录。

研究人员发现，在这万自称“滴酒不沾”的人中，至少10%患过与饮酒密切相关的疾病，如酒精肝等。

还有一些人在医生面前说了实话，承认自己喝过酒。

问卷中还有一些涉及饮酒种类、频率和数量的问题，如“多久喝一次酒”“啤酒、红酒各喝多少”，结果有将近1万人前面刚说自己近一年内喝过酒 ，后面就在各种酒的摄入量一栏全填了“0”。

“误报其实是非常普遍的现象。”薛昂立说，“在我们分析的调查问卷中，10%~20%的人都存在这个问题。”

但这可能只是冰山一角，因为有些误报是研究人员检测不到的。如果某人一天喝两杯酒，在问卷中只报了每天半杯，那他的谎言可能永远不会被发现。

奇谈：戒酒的人反而生病了？

除了有意无意的撒谎，另一种更微妙的因素也在影响着科学家的判断，研究人员把它称为“时间纵向变化”。怎么理解这个概念？

问卷提问方式通常是这样的：你喝多少酒（请回答近一年的情况）？也就是说，问卷收集的数据只能反映一年以内的情况。

但英国生物银行的问卷恰好还补充了另外一个问题：跟10年前相比，你喝酒是更多了、更少了还是维持不变？数据显示，那些比10年前饮酒更少的人，疾病发病率要比其他两组高出很多。难道戒酒限酒反而让他们的 健康 状况恶化了吗？

“你要想想：一些有饮酒习惯的人，这几年突然少喝甚至不喝酒了，这可能是什么原因呢？”杨剑笑道。

调查问卷进一步追问这些人减少饮酒的原因，其中最主要的就是“疾病”和“医嘱”。

“这意味着，减少喝酒的这批人里，本来就富集了大量患有疾病的人。”

杨剑解释，“可见个体行为随时间改变，往往会导致数据形成非常大的系统误差。”

在矫正上述引起误差的因素后，研究人员不出意外地看到，饮酒与多种疾病的“负相关”都消失了，与高血压、糖尿病、缺铁性贫血等疾病的“正相关”则开始显现。

至于那个令爱酒人士心旷神怡的“对勾”——“J”形曲线，在剔除前后矛盾的数据后，也变成了一条乏味的直线。

也就是说，疾病风险与饮酒量呈现单纯的线性关系——少喝少得病、多喝多得病，非常简单粗暴。

“我们现在基本可以确定，饮酒对 健康 基本没有任何好处。而那些得出少量饮酒有利 健康 结论的研究，大概率是因为有人谎报了饮酒行为，或者因为疾病而改变了生活习惯。”杨剑总结道。

相关论文信息：

《中国科学报》 (2021-01-13 第1版 要闻 )