胶体金试纸条检测实验报告论文

本试纸条是采用胶体金免疫层析技术研制的新一代诊断试剂，可检测血清或血浆标本中的HIV-1/2特异性抗体。整个操作时间仅需30分钟，操作简便、快速、准确、自带质控对照、不需任何附加试剂。适用于临床检测、无偿献血现场筛查等。既可单人份检测也可用于大样本筛查。1、将待检样品和检测试剂置室温（15-30℃）平衡10-15分钟。2、打开铝箔袋，取出检测盒，水平放置在洁净的操作台上。3、用检测盒附带的一次性滴管在样品室内（标记有"S"字样）加入80ul（2滴）待检样品（全血、血清、血浆），加样时应尽量避免产生气泡。隔5-10秒左右，再用滴管吸取一滴随货配性的缓冲液加入检测孔里。4、室温静置15-30分钟观察反应结果。第一步：用所提供的采血针在指尖采血第二步：用检测盒附带的一次性滴管在检测孔内（标记有"S"字样）加入80ul（2滴血液）待检样品 15-30分钟内观察检测区反应结果--------------------------------------------------------------------------------阴性：只有一条线红出现则为阴性，若是在窗口期后的检测，则可排除了。阳性：若出现两条红线（对照线C与检测线T都为红线）则为阳性结果。若为阳性，可再在当地市级以上防疫站实验室复检确定。无效：质控条带C和检测条带T均未出现色带或仅检测条带T出现色带而质控条带C无色。原因可能是操作错误或试剂失效，需进行重新检测。

胶体金是由氯金酸(HAuCl4)在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等作用下，可聚合成一定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态，形成带负电的疏水胶溶液，由于静电作用而成为稳定的胶体状态，故称胶体金。胶体金在弱碱环境下带负电荷，可与蛋白质分子的正电荷基团形成牢固的结合，由于这种结合是静电结合，所以不影响蛋白质的生物特性。

胶体金除了与蛋白质结合以外，还可以与许多其它生物大分子结合，如SPA、PHA、ConA等。根据胶体金的一些物理性状，如高电子密度、颗粒大小、形状及颜色反应，加上结合物的免疫和生物学特性，因而使胶体金广泛地应用于免疫学、组织学、病理学和细胞生物学等领域。

胶体金标记，实质上是蛋白质等高分子被吸附到胶体金颗粒表面的包被过程。吸附机理可能是胶体金颗粒表面负电荷，与蛋白质的正电荷基团因静电吸附而形成牢固结合。用还原法可以方便地从氯金酸制备各种不同粒径、也就是不同颜色的胶体金颗粒。

这种球形的粒子对蛋白质有很强的吸附功能，可以与葡萄球菌A蛋白、免疫球蛋白、毒素、糖蛋白、酶、抗生素、激素、牛血清白蛋白多肽缀合物等非共价结合，因而在基础研究和临床实验中成为非常有用的工具。

扩展资料

常用的免疫胶体金检测技术：

（1）免疫胶体金光镜染色法 细胞悬液涂片或组织切片，可用胶体金标记的抗体进行染色，也可在胶体金标记的基础上，以银显影液增强标记，使被还原的银原子沉积于已标记的金颗粒表面，可明显增强胶体金标记的敏感性。

（2）免疫胶体金电镜染色法 可用胶体金标记的抗体或抗抗体与负染病毒样本或组织超薄切片结合，然后进行负染。可用于病毒形态的观察和病毒检测。

（3）斑点免疫金渗滤法 应用微孔滤膜（如膜）作载体，先将抗原或抗体点于膜上，封闭后加待检样本，洗涤后用胶体金标记的抗体检测相应的抗原或抗体。

（4）胶体金免疫层析法 将特异性的抗原或抗体以条带状固定在膜上，胶体金标记试剂（抗体或单克隆抗体）吸附在结合垫上，当待检样本加到试纸条一端的样本垫上后，通过毛细作用向前移动，溶解结合垫上的胶体金标记试剂后相互反应；

当移动至固定的抗原或抗体的区域时，待检物与金标试剂的结合物又与之发生特异性结合而被截留，聚集在检测带上，可通过肉眼观察到显色结果。该法现已发展成为诊断试纸条，使用十分方便。

乳胶法和胶体金法的区别

1、原理不同：

普通聚苯乙烯乳胶和抗体的结合是无选择性的物理静电吸附，抗体很难结合到乳胶表面，即使致敏上的抗体也容易从乳胶微球上脱落或者变性失活，而使用多肽缩合剂或交联剂则操作过程繁琐、耗时。

胶体金法是由氯金酸(HAuCl4)在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等作用下，可聚合成一定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态，形成带负电的疏水胶溶液，由于静电作用而成为稳定的胶体状态，故称胶体金。

2、应用不同：

胶体金也是免疫电镜技术中较为理想的免疫标记物。胶体金技术具有方便快捷、特异敏感、稳定性强、不需要特殊设备和试剂、结果判断直观等优点, 因而特别适合于广大基层检验人员以及大批量检测和大面积普查等, 具有巨大的发展潜力和广阔的应用前景。

乳胶凝集法具有独特优点: 不需要特殊仪器、肉眼判断、操作简便、不需要专门培训；检测时间短，一般为 2 min；价格低廉，检测单份血清样品的成本比其它血清学和病原学方法低得多；适于现场检测等，在临床检验中被广泛应用。

参考资料来源：百度百科-胶体金检测