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酶联免疫吸附测定（enzyme linked immunosorbent assay，简写ELISA）
指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上，利用抗原抗体特异性结合进行免疫反应的定性和定量检测方法；酶联免疫吸附测定（ELISA）为免疫学中的经典实验。
基本原理为：使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。
扩展资料
结果判断——
1、定性测定：
定性测定的结果判断是对受检标本中是否含有待测抗原或抗体作出"有"或"无"的简单回答，分别用"阳性"、"阴性"表示。"阳性"表示该标本在该测定系统中有反应。"阴性"则为无反应。
2、定量测定：
ELISA操作步骤复杂，影响反应因素较多，特别是固相载体的包被难达到各个体之间的一致，因此在定量测定中，每批测试均须用一系列不同浓度的参考标准品在相同的条件下制作标准曲线。
参考资料来源：百度百科-ELISA
ELISA 试剂盒方面可以咨询上海武昊公司，不知你是否知道样本中的含量，浓度如果在ELISA的检测范围之内没有问题的，你自己不会做也没事的，购买武昊公司的产品，他们可以帮你免费代做。
不是先后结合。你应该设立两组，即一组固相抗体加磷酸化抗原，然后另一组固相抗体加非磷酸化抗原。然后显色后对比两组的OD差异。加磷酸化抗体的组的OD当然高了。酶标抗体是抗你的磷酸化蛋白的抗体啊，这个是要你自制的。底物你用最普通的就行了，比如OPD、TMB等都行。 我建议你的酶标抗体用磷酸化抗体，而固化抗体最好不用磷酸化抗体，尤其是你的磷酸化蛋白只有1个磷酸化位点的时候。因为固相抗体和酶标抗体有可能去竞争结合磷酸化位点。
1. 你说的应该是sandwich elisa吧，这是双抗体夹心ELISA，是ELISA的其中一种，具体实验过程试剂盒上有明确的说明，按着说明做就可以，一般2~3小时吧。2. 要根据你要检测的目的蛋白的量选择试剂盒，不同的试剂盒的灵敏度是不同的，你要选择适合你用的，买试剂和的时候问问就可以。3. ELISA是非常成熟的检测方法了，你蛋白含量很低的话对试剂盒要求就比较高，最好用进口试剂盒，而且试剂盒的灵敏度一定要高，你预计你要检测蛋白的量要在试剂盒检测范围内，如果蛋白量太低，容易检测不出来，太高要稀释后再检测。祝实验顺利吧
应该还好吧，因为博士论文却是关系到学术方面的东西，具体的话肯定是要更加专业一点的
浅谈酶联免疫吸附试验实验教学思考的分析论文
【摘要】 酶联免疫吸附试验是广泛应用于临床检验诊断的免疫学检验技术，实验教学中采用该技术检测“乙肝两对半”。为适应中职生教育人才培养模式的教学改革，使学生符合具有“理论知识适度、技术应用能力强”的要求，我们对实验教学内容和方法进行改革，从适用性角度选题，通过实验操作考核，采取以考促学的手段，加强酶联免疫吸附试验的训练力度，提高学生实验操作能力，培养学生独立工作的能力。
【关键词】 酶联免疫吸附试验；免疫学检验；实验；考核
酶联免疫吸附试验(enzyme－linkedimmunosorbentassay，ELISA)是广泛应用于临床检验诊断的免疫学检验技术。该技术集基本理论、基本技能为一体，能使学生能对前期所学的理论知识及技能进一步加强和提高，是一个能为学生进人临床实习打好基础的系统实训。目前该技术的临床检测多采用商品化的ELISA试剂盒，实验步骤较少，操作简单。然而，参与反应的成分很多，如抗原抗体浓度、酶结合物浓度以及试剂的质量控制等等，影响因素众多。传统的实验教学中，实验材料的准备、仪器的准备及调试、标本及试剂的处理等工作基本上是由教师包办。实验的许多环节学生没有亲自做，因而在实验完成后，部分学生对实验还是一知半解，更谈不上能力的锻炼和培养［1］。为适应中职生教育人才培养模式的教学改革，使学生符合具有“理论知识适度、技术应用能力强”的要求，对免疫学检验实验教学内容和方法进行改革势在必行。为此我们通过实验技能操作考核，采取以考促学的手段，加强了酶联免疫吸附试验内容的训练力度，也收到了一定的效果，以下谈谈我们的做法及效果。
1精选考核内容，以适应临床实践的需要
考核内容的选择上以围绕临床实际进行选择，真正使学生做到学以致用。不但要让学生了解、掌握先进的免疫学检验技术和操作方法，还必须着重培养学生的创造性思维和综合分析问题的能力，从而全面提高学生素质［2］。ELISA由于操作简单、灵敏度高、可定性定量，在临床检验诊断中应用最为广泛。常用于如病毒性肝炎、艾滋病、疱疹等传染性疾病的检测诊断，还常用于补体、免疫球蛋白和肿瘤标志物的检测。要想在有限的课时里完成诸多的内容训练，显然是不现实的。因此我们仅选择了最具有代表性的“乙肝两对半”检测作为该技术的训练及考核内容。“乙肝两对半”共有五项检测项目，即HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb，实验中所需要的实验器材均能由检验实验室提供，易于准备，给学生提供了选择和发挥的空间。实验过程中所需要的待测血清标本为阳性或阴性标准物，不具传染性，保证了学生实验的安全性。学生只要掌握了“乙肝两对半”的检验程序和检验方法，其他在临床上需要用ELISA技术检测的常见项目则触类旁通，能起到事半功倍的效果，至于少见的、较为复杂的检测项目可以在日后的实习及工作中继续学习。
2调整考核内容，可行性及针对性强
酶联免疫吸附试验教学内容在学时安排上有6课时，理论与实验课课时之比为1．1。以往的教学形式为先理论授课，教师讲解实验的原理及检验程序，实验教学中教师讲解后进行示范教学，学生照葫芦画瓢的再做实验;实验操作考核只设HBsAg项目的考核，考核项目单一、形式单一。学生只需完成实验操作，报告结果即可。而现行的考核内容是“乙肝两对半”的共五项检测项目，各个项目的检验过程如标本的稀释、试剂选择、加样顺序有所不一。从限制考核时间的角度考虑，学生在考核时随机抽考其中的一个项目，由考生自主选择所需物品进行实验操作，这样增加了考试的随机性和灵活性。虽然抽考使得考核难度增加，但能强化学生对ELISA检测乙肝两对半操作步骤的理解。当学生抽到题目后，在熟悉操作步骤的基础上，只要懂得该项目检测时需注意的细节，如检测HBcAb需将血清稀释50倍，HBeAb的检测需加入中和试剂，学生在对离心机、水浴箱及微量移液器的使用相当熟悉的基础上，不难将标本中的结果如实地检测出来。
3考核的形式
学生重理论、轻实验的现象普遍存在，有的学生每操作一步就看一下笔记，或者是询问其他同学，有的学生甚至希望教师能一步步的教，因而学生对酶联免疫吸附试验缺乏系统的认知。我们将考核的形式设计有理论测试(占30分)和操作考核(占70分)。通过调整考核内容，将能力培养贯穿于整个训练过程，将单纯理论教学融合于实验教学中，能把理论知识激活，也强化了学生的实验操作能力及解决问题、分析问题能力。理论测试采用本教研室的计算机交互平台进行，根据教学内容特点，理论测试我们进行这样的设计，首先收集乙肝两对半检测相关试题，建立题库，内容涉及实验原理、操作、材料、结果观察及临床意义。如(1)乙肝两对半检测涉及ELISA的哪些原理?分别检测什么项目?(2)通过各反应孔显色，判断疫苗接种者、病毒携带者、“大三阳”、“小三阳”;(3)手工洗涤有何要求;(4)加终止液的目的是什么;(5)ELISA常用的酶是哪种?其底物是什么。共组10套试题，学生抽签后通过计算机交互平台指向性地发布试题、进行考试。考虑到学生对理论考试容易产生畏难情绪，在题型的设计上，设有填充题，标示题、连线题及填空题等，内容直观、清晰，学生“寓考于乐”，在轻松愉快的心理环境下地完成理论测试。
4考试评分严谨，设计合理
理论考核从试题集中抽取出6道题组卷，每题5分，共30分。操作考核的评分项目包括:专业素质(衣着仪表、考试态度、纪律)5分;实验准备(实验用品、试剂的预处理、标本处理、标记记录)5分;实验步骤(加样、微量移液器的使用、孵育、洗涤、显色)35分，结果观察10分;操作后清场(试剂、器材归位、实验台面清理)5分，综合评价(规定时间完成、实验后清场、消毒等)10分，共70分。评分标准于考试前告知学生，给学生能充分地复习和准备，注意操作细节，提高考试质量。考试时每个学生独立完成试验，教师全程监考，及时对出错环节扣分，评出总分。
5效果分析
在酶联免疫吸附试验的实验教学中，采用考核方式，取得了以下成效。
5．1利于调动学生的主观能动性，激发起学习的热情
实验操作考核综合反映出学生的实验预习、实验过程和实验态度等各方面的表现。考核成绩占期末总成绩的30%，将学生实验考核计入课程总成绩后，学生上实验课的目的性增强，课上都抢着做实验，从以往实验缺乏主动性，不预习，不复习，变为积极思考，认真准备。实验报告抄袭现象也明显减少，改变了重理论轻实践的现象［3］。从学生提出的'问题，如溶血标本可以检测“乙肝两对半”吗?如果用溶血标本检测，会有什么影响，会影响什么试剂?从这些问题的提出可以看出，学生懂得对实验进行思考，也懂得遇到问题主动和老师商量，学生不断发现问题、思考问题、解决问题的能力得到提高。
5．2独立工作能力的培养
独立工作能力是一个医学检验工作者最基本素质，中职生毕业后就业单位多是基层医院，基层医院的检验科可能只有1至2名检验员，每天的检验工作任务都要独立完成。因而学生在就学期间即应注重独立工作能力培养。在实验考核过程中，实验物品的选择、摆放，实验结束后操作台的清理等，是学生自己准备和独立完成。学生在考核时需考虑到考核时间的限制，因此只有熟悉基本的理论知识、熟练基本操作，才能在规定时间内完成实验，得出正确的结果，考试前不做好准备实验将无法顺利完成。
5．3实验基本技能的训练
由于酶联免疫吸附试验涉及环节多，通过考试能综合考核学生的基本实验技术，如移液管的准确吸样，血清等倍稀释的方法;能考察学生对常用仪器设备如离心机、恒温孵育箱、酶标仪、洗板机的操作;在对血清标本进行检测时，使用过的物品如棉签、试管、注射器的正确处置，能增强学生的无菌操作技术和观念。
5．4学生的评价及反馈
此考核方案在两届学生进行了实施，通过操作考核，学生们得到较为系统的训练，对ELISA检测乙肝两对半的整个流程有了较为深刻的认识。有必要开展，通过考核能更好地将理论与实践相结合，学生能自如地、成功地检测出标准物血清标本的正确结果，同时也很有成就感，增强了对实习及将来的工作的信心。在对2013级的学生进行实习情况跟踪、访谈中得知，学生普遍认为，ELISA技术在临床免疫检验诊断中应用广泛，用此技术检测的项目多，工作量较大。由于在操作考核强化了技能，在实习老师的指导下，能很快地进入角色，增强了工作自信心。对学生进行实验考核的同时，也对教师提出了更高要求。教师准备的理论测试问题在内容上需与临床免疫检验接轨，使考核更科学合理化。规范实验教学，严谨、规范示作好示教。学生操作过程中，巡视督查，及时纠正学生的错误。以考促学法强化酶联免疫吸附试验的实验教学，补充和完善了免疫学检验实验教学的内容和方法，也希望能以此提高学生对其他课程学习的主动性及激发起学习的热情。
ELISA法是现代医学临床免疫诊断的重要方法,它的基本原理是：使抗原或抗体结合到某种固相载体表面,并保持其免疫活性,再使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体,这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性,又保留酶的活性.在测定时,把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应.用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开,最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例.加入酶反应的底物后,底物被酶催化变为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据颜色反应的深浅刊物定性或定量分析.由于酶的催化频率很高,故可极大地地放大反应效果,从而使测定方法达到很高的敏感度.ELISA可用于测定各类抗原,也可用于测定抗体.比如现代检测的各类病毒、寄生虫等抗原抗体、激素、肿瘤标志物还有一些毒物药物都是通过该项技术进行测定的.在这种测定方法中有3种必要的试剂：固相的抗原或抗体、酶标记的抗原或抗体和酶作用的底物.
酶联免疫吸附测定（enzyme linked immunosorbent assay，简写ELISA）
指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上，利用抗原抗体特异性结合进行免疫反应的定性和定量检测方法；酶联免疫吸附测定（ELISA）为免疫学中的经典实验。
基本原理为：使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。
扩展资料
结果判断——
1、定性测定：
定性测定的结果判断是对受检标本中是否含有待测抗原或抗体作出"有"或"无"的简单回答，分别用"阳性"、"阴性"表示。"阳性"表示该标本在该测定系统中有反应。"阴性"则为无反应。
2、定量测定：
ELISA操作步骤复杂，影响反应因素较多，特别是固相载体的包被难达到各个体之间的一致，因此在定量测定中，每批测试均须用一系列不同浓度的参考标准品在相同的条件下制作标准曲线。
参考资料来源：百度百科-ELISA
ELISA的英文全称是enzyme-linkedimmunosorbentassays即酶联免疫吸附测定。顾名思义，该方法涉及到用酶标记（联接）抗体或抗原和免疫吸附（一般指抗原抗体的反应）过程。该方法可以广泛地用于测定各种生物分子。
医学上ELISA指的是酶联免疫吸附测定
酶联免疫吸附测定指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上，利用抗原抗体特异性结合进行免疫反应的定性和定量检测方法。
酶联免疫吸附测定为免疫学中的经典实验，本词条从定义、基本原理、分类方法、操作要点等方面对其进行了详细介绍。
扩展资料：
ELISA操作步骤复杂，影响反应因素较多，特别是固相载体的包被难达到各个体之间的一致，因此在定量测定中，每批测试均须用一系列不同浓度的参考标准品在相同的条件下制作标准曲线。
测定大分子量物质的夹心法ELISA，标准曲线的范围一般较宽，曲线最高点的吸光度可接近，绘制时常用半对数值，以检测物的浓度为横坐标。
以吸光度为纵坐标，将各浓度的值逐点连接，所得曲线一般呈S形，其头、尾部曲线趋于平坦，中央较呈直线的部分是最理想的检测区域。
参考资料来源：百度百科—ELISA
过高会导致实际阳性，而因为阴性对照值过高，诊断为阴性,出现假阴性反之亦然,过低会导致出现假阳性 .
酶联免疫吸附测定（enzyme linked immunosorbent assay，简写ELISA）
指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上，利用抗原抗体特异性结合进行免疫反应的定性和定量检测方法；酶联免疫吸附测定（ELISA）为免疫学中的经典实验。
基本原理为：使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。
扩展资料
结果判断——
1、定性测定：
定性测定的结果判断是对受检标本中是否含有待测抗原或抗体作出"有"或"无"的简单回答，分别用"阳性"、"阴性"表示。"阳性"表示该标本在该测定系统中有反应。"阴性"则为无反应。
2、定量测定：
ELISA操作步骤复杂，影响反应因素较多，特别是固相载体的包被难达到各个体之间的一致，因此在定量测定中，每批测试均须用一系列不同浓度的参考标准品在相同的条件下制作标准曲线。
参考资料来源：百度百科-ELISA
电子工业出版社出版的《PASW/SPSS Statistics中文版统计分析教程(第3版)(含CD光盘1张)》有很多医学例子，按书上介绍的步骤做即可。
医学上ELISA指的是酶联免疫吸附测定
酶联免疫吸附测定指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上，利用抗原抗体特异性结合进行免疫反应的定性和定量检测方法。
酶联免疫吸附测定为免疫学中的经典实验，本词条从定义、基本原理、分类方法、操作要点等方面对其进行了详细介绍。
扩展资料：
ELISA操作步骤复杂，影响反应因素较多，特别是固相载体的包被难达到各个体之间的一致，因此在定量测定中，每批测试均须用一系列不同浓度的参考标准品在相同的条件下制作标准曲线。
测定大分子量物质的夹心法ELISA，标准曲线的范围一般较宽，曲线最高点的吸光度可接近，绘制时常用半对数值，以检测物的浓度为横坐标。
以吸光度为纵坐标，将各浓度的值逐点连接，所得曲线一般呈S形，其头、尾部曲线趋于平坦，中央较呈直线的部分是最理想的检测区域。
参考资料来源：百度百科—ELISA
ELISA的全称enzyme-linked immuno sorbent assay,即酶联免疫吸附试验,是用来检测抗原或抗体的,因为原理是抗原抗体特异性结合,所以敏感性非常高,可以检测极微量的待测物,在医学上的应用很多,只要是蛋白质基本都可以检
ELISA法是现代医学临床免疫诊断的重要方法,它的基本原理是：使抗原或抗体结合到某种固相载体表面,并保持其免疫活性,再使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体,这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性,又保留酶的活性.在测定时,把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应.用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开,最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例.加入酶反应的底物后,底物被酶催化变为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据颜色反应的深浅刊物定性或定量分析.由于酶的催化频率很高,故可极大地地放大反应效果,从而使测定方法达到很高的敏感度.ELISA可用于测定各类抗原,也可用于测定抗体.比如现代检测的各类病毒、寄生虫等抗原抗体、激素、肿瘤标志物还有一些毒物药物都是通过该项技术进行测定的.在这种测定方法中有3种必要的试剂：固相的抗原或抗体、酶标记的抗原或抗体和酶作用的底物.
ELISA的英文全称是enzyme-linkedimmunosorbentassays即酶联免疫吸附测定。顾名思义，该方法涉及到用酶标记（联接）抗体或抗原和免疫吸附（一般指抗原抗体的反应）过程。该方法可以广泛地用于测定各种生物分子。
介绍 ELISA (enzyme-linked immuno-sorbent assay) 和 EIA (enzyme immunoassay) 都是免疫学检测方法，用于检测样本（例如血清、尿液、唾液等）中特定物质的存在。两种方法都使用酶标记的抗体来检测物质，但是它们在抗原-抗体反应的检测和测试结果的解释方面有所不同。 原理 ELISA方法使用抗原-抗体反应，即将待测物质与特异性抗体结合，然后检测酶标签的二抗与抗体的结合情况，从而确认检测结果。EIA也使用抗原-抗体反应，但是与ELISA不同的是在测试样本前要处理样本来消除干扰物质。 类型 有直接ELISA、间接ELISA、竞争ELISA、抗体夹心ELISA等多种类型。其中，直接ELISA直接用来检测待测样本中的抗原；间接ELISA使用特异性的检测抗体来检测待测样本中的抗体；竞争ELISA和抗体夹心ELISA则是用来检测待测样本中的抗原和抗体。EIA方法则包括直接和间接两种类型，但是在测试前要经过处理。 应用 ELISA和EIA广泛应用于医学、生物学等领域中。例如，ELISA可以用于检测肿瘤、传染病等疾病的相应抗体或抗原；EIA可以用于检测毒品、激素、药物、气体等。此外，两种方法也可以用于食品卫生检测、环境监测等领域。 优缺点 ELISA方法检测灵敏度高，结果准确可靠，但是操作相对复杂，可能会受到干扰物质的影响。EIA方法操作相对简单，对干扰物质也有很好的抗干扰能力，但是在处理样本和结果解释方面存在难度。 总结 ELISA和EIA方法虽然有些不同，但是都是检测生物样本中特定物质的有用工具。在实际应用中需要根据具体情况选择使用哪种方法，在保证结果准确可靠的前提下，提高工作效率和方便操作。