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学生将所学知识、方法、技能迁移应用到新的学习、生活和工作中，并转化成为自身能力，是科学教育和教学的根本目的之一。以下是我精心整理的高中哲学论文范文的相关资料，希望对你有帮助!高中哲学论文范文篇一 高中哲学促进学习迁移策略初探 摘 要： 学生将所学知识、方法、技能迁移应用到新的学习、生活和工作中，并转化成为自身能力，是科学教育和教学的根本目的之一。本文以高中哲学教学为基础，旨在探讨高中哲学促进学习迁移的教学策略，以不断提高学生的综合能力，促进学生全面发展。 关键词： 高中哲学 学习迁移 教学策略 在学习《生活与哲学》模块中，许多学生感到哲学难学，对相对抽象的原理不感兴趣，为应付考试而死记硬背，体会不到哲学学习是一件有趣的事情，更无法在学习和生活中自觉运用辩证唯物主义分析问题、解决问题。如何激发高中学生学习《生活与哲学》课的兴趣，使他们真正爱学哲学、会学哲学、在生活中会用哲学、促进哲学学习迁移成为当代高中政治老师不可推脱的责任。为此，笔者就高中哲学教学中如何促进学习迁移谈谈自己的认识。 一、趣味教学促成迁移 趣味，就是使人感到愉快，能激发兴趣的一种特性。在学习中，兴趣是学习的先导，学生对学习充满兴趣就会对学习产生绵绵不绝的持久热情，就会在学习中积极地探寻和思考问题，并努力解决问题。在哲学教学中，用充满趣味的教学观点、手段、技术支持来营造有趣、引人入胜的课堂氛围，使学生在学习中感到乐趣，产生兴趣，从而自主、积极地学习，有效地发展各项能力，提高学生素质。政治教师在课堂教学的各个环节中增添趣味的方法大致有以下几种。 第一，导入设计激趣。在教学中，一个简短精彩的趣味导入，可以立刻集中学生注意力，并激发学生的求知欲和参与热情，使他们全身心地投入到课堂中。所以，一开始就抓住学生的心，就能为一堂成功的课堂教学奠定良好基础。那么，怎么才能做到导入设计激发学生兴趣，使学生以更大的热情投入到课程中，进而真正领会课堂的精髓并最终消化吸收学以致用呢?我们可能可以在新鲜、新奇和新知上下工夫。这三者都强调“新”字，新鲜可以包括新奇，新鲜新奇的本质在于新知，只是各自的侧重点有所不同。如在讲《世界是普遍联系的》时，可以这样导入：我们班有没有同学会画画?如果以“踏花归去马蹄香”或“深山藏古寺”为题作一幅画，你会怎样立意构图，才能绝妙地体现诗的意境?这样以一个看似与教材毫不相关的甚至有点怪异的问题导入，可以引发学生思考，积极联想，启发思维，激发学生的浓厚兴趣，并主动阐述自己的观点。这对学生在发展信息获取、理解概括、分析推理等能力上的迁移产生积极影响。 第二，情境设计有趣。根据学生的学习欲望、需要，运用故事、国际国内时事热点，成语、警句、诗词、模仿、漫画、音乐、视频等行之有效的手段和方法，创设趣味盎然的课堂情境，往往能满足学生的求知欲，激发学习兴趣，让学生在不知不觉中掌握知识，提高觉悟。成功的情境创设使学生获得形象的感染、情感的体验、智慧的启迪，学习动机在其间不断强化，所有这些都有效地促使学生掌握教材知识。对学生的道德教育、思想教育、审美教育就是这个过程中潜移默化地进行着。这样，哲学教学就不仅是学习工具的掌握，而且包含思想、道德、智慧的收获，完成认知、教育、发展三方面的任务。 第三，点拨精妙有趣。哲学知识是对其他具体科学的概括和总结，对学生而言，哲学抽象深奥不好理解掌握，在学生不能很好地对哲学内容进行理解的情况下，就需要教师加以智慧而精辟的点拨指引，使学生获得理解上的顿悟。顿悟的出现及获得结果正是迁移的成功。例如，在学习《在实践中追求和发展真理》这一框中“真理是具体的有条件的”这一知识点时，一位教师是这样引导点拨的：“2+5=?”教师问，学生回答“等于7嘛”，“不错，在数学领域里，2+5=7，这是天经地义、颠扑不破的。但是在其他领域呢?”说到这里，教师拿出一张题为《万马奔腾》的图片让学生欣赏。只见画面上突出地画了两匹奔马，在这两匹奔马后面又错落有致、大小不一地画了五匹马，这五匹马后面便是许多影影绰绰的黑点点。教师指着图片说：“从整个画面的形象看，只有前后七匹马，然而，凡是看过这幅图的人，都会感到这里有万马奔腾，这难道不是2+5=10000吗?从这个事例中，我们可以得知任何真理都有自己适用的……”“范围”学生异口同声回答道。教师通过事例，适时引导、点拨，最终让学生获得认识，由此得到的认识学生是信服的，印象也是深刻的，更能深刻体会“真理的条件性”这一知识。 二、强化训练加强迁移 在哲学学习过程中，知识和技能的迁移并不是简单地将已有的知识经验机械地“模仿”或“移位”。在实际学习中，相当一部分学生虽然具备了解决问题所需要的各种知识，但在需要时难以及时准确地提取应用，更不能将其灵活运用。所以要保证知识迁移的进行需要形成知识迁移的能力，既包括培养解决类似问题的思维定势，形成知识迁移的一般性规律和方法，又包括用习惯方法难以解决问题时能够从其他角度分析、解决问题的能力，也就是应变能力。 因此，可以这样强化训练：围绕若干重点、难点和疑点知识的教学内容，从不同角度构造问题，通过演练使学生全面准确地理解问题的本质属性。在面临新问题情境时，能迅速找出新旧知识间的共同要素，从而确定所需解决的新问题属哪类已有知识或已有知识的延伸和拓展。因此，可以针对每一课的内容标准、重难点设置有针对性的练习题，进行迁移目标训练;同时尝试让学生自己命题，先模仿后独创。这样就做到把知识训练、思维训练和能力训练相结合，以高屋建瓴的形式把握知识。每次训练后，及时总结反馈练习考试中所反映的问题，及时查漏补缺，养成良好的考试习惯，将知识迁移能力的培养落到实处。 三、能力交互生成及有效叠合 要实现迁移过程，仅靠记忆或是单纯训练是不够的。一个迁移过程的完成实际需要多种能力的相互支撑，而在个体发展的过程中多项能力之间呈现出彼此影响和互相促进的关系就是能力交互生成的过程。在各项能力交互生成中，往往会出现某一两种能力比较突出，但还有一些能力相对薄弱，这就需要对能力进行有效叠合。 在哲学学习迁移能力层级构成中，理解能力、概括能力、推理能力、归类能力、运用能力的发展是存在梯度先后的，在哲学教学中，要指导学生进行富有成效的学习，使学生个体的综合能力获得有效提高，就必须在能力分散训练的基础上进一步使各项能力交互生成，实现有效叠加。 落实在哲学教学中，要实现能力的交互生成及有效叠加，教师可以通过提示或提供检验手段等途径使学生认识自己已获得的能力和已达到的目标，以及下一步需要完成的任务，并对自己下一步的学习进行反思性规划。其中，教师可以适当把下一阶段的培养目标提前透露给学生。这样，就能使学生的学习处于奥苏贝尔所说的“意义学习”状态，从而使所学习内容对学生具有潜在意义，这样就能够与学生已有的知识结构联系起来。 这样，新近知识在吸纳旧有知识的基础上，更易被学生接受理解，个体已有的能力结构也会呈更好的开放态势，并产生更大的迁移效应，由此实现以理解促进概括，以概括促进推理、归类，并最终促进运用这样的互促互进的良好局面。 参考文献： [1]牛俊峰.试论在政治教学中如何采取措施实现知识迁移[J].吉林教育，2010，(4). [2]张陈慧玲.浅谈高中政治教学中的知识迁移的问题研究[J].大观周-T1，2012，(3). [3]赵彩兰.迁移方法在高中政治课中的运用[J].现代教育教学探索，2010，(11).
教育学院近年（2009-2013）发表的CSSCI来源以上学术论文：教育学院近年（2009-2013）发表的CSSCI来源以上学术论文（一） 作者 论文名称 期刊 发表日期 备注 褚福斌 田径运动员中的大鱼小池效应 中国体育科技 2009（2） CSSCI 李晓岩 和谐课堂：教学设计的伦理诉求 电化教育研究 2011（7） CSSCI 阎乃胜 做时代主人：回望杜亚泉“科学的劳动家”的素养观 教育发展研究 2013(14) CSSCI 阎乃胜 论杜亚泉的科学哲学观 东北大学学报（人文社科版） 2013(3) CSSCI 阎乃胜 论杜亚泉的科学观 自然辩证法研究 2010（8） CSSCI 阎乃胜 当代西方人本主义课程观对我国高校课改的启示 现代大学教育 2010（2） CSSCI 阎乃胜 角色论视阈下教师教育教学能力的构成探析——基于教师资格认证的考察 教师教育研究 2010（2） CSSCI 阎乃胜 将人权教育融入中学德育课程之中 教育科学研究 2009（9） CSSCI 张家年 信息化领导力视野中的学校信息化主管素质结构和实践模式研究 现代教育技术 2013（6） CSSCI 张家年 刍议信息技术效应及其对策 情报理论与实践 2013（6） CSSCI 张家年 网络教育中通用教学设计原则和模式的研究 现代教育技术 2013（2） CSSCI 张家年 网络环境下自主学习模型的构建 远程教育杂志 2012（5） CSSCI 张家年 伦理学视野中的网络教育伦理初探 开放教育研究 2011（4） CSSCI 张家年 网站易访问性设计的理念、原则和模型 情报理论与实践 2009（1） CSSCI 张家年 构建无障碍信息环境的法律基础与标准实施的研究 情报理论与实践 2009（5） CSSCI 张家年 基于XSLT的Web易访问性评估工具的初步设计 图书情报工作 2009（13） CSSCI 张家年 On accessibility of concept, principle and model of educational web sites design Proceedings-2009 International Conference on New Trends in Information and Service Science 2009（June 30-July 2） EI 张敏 青少年负性情绪事件性质判断偏向的情绪弹性与性别效应 心理科学 2013（2） CSSCI 张敏 青少年负性情绪信息注意偏向的情绪弹性和性别效应 心理与行为研究 2013（1） CSSCI 张敏 青少年负性情绪信息记忆偏向的情绪弹性和性别效应 心理学探新 2012（4） CSSCI 张敏 青少年情绪弹性的影响因素研究 心理科学 2011（3） CSSCI 张敏 青少年情绪弹性问卷的研究报告 心理科学 2010（1） CSSCI 赵小云 大学生生涯阻碍知觉问卷的编制 中国临床心理学杂志 2012（5） CSSCI 赵小云 土家、苗、侗、藏族高中生学业自我发展的特点及教育对策 心理科学 2012（2） CSSCI 赵小云 感召及其相关研究 心理科学进展 2011（11） CSSCI 赵小云 国外生涯适应力研究述评 心理科学进展 2010（9） CSSCI 赵小云 中学生的班级环境、学业自我与学业求助的关系 心理学探新 2010（5） CSSCI 教育学院近年（2009-2013）发表的CSSCI来源以上学术论文（二） 作 者 论文名称 期刊 发表日期 备注 彭 勃 基于生态学的高等教育资源配置和培植探析 科技进步与对策 2008（2） CSSCI 彭 勃 高等教育资源的分类及其文化资源的培植 江苏高教 2008（2） CSSCI 彭 勃 高等教育文化资源及其生态化培植 学术论坛 2008（5） CSSCI 彭 勃 高等教育人才资源的生态化配置 学术论坛 2009（10） CSSCI 彭 勃 高校内“学者从政”: 一个生态的检视 学术论坛 2010（3） CSSCI 彭 勃 高等教育资源视域中的弱势高校探讨及对策 江淮论坛 2013（2） CSSCI 王翠艳 左利手及其形成机制：生理、病理及心理学的视角 心理学探新 2012(3) CSSCI 王翠艳 美国手语的空间特性及其运用 中国特殊教育 2012（12） CSSCI 燕 燕 梅洛·庞蒂：具身意识的身体 世界哲学 2010（7） CSSCI 燕 燕 具身的形式灵魂：亚里士多德与梅洛·庞蒂 现代哲学 2010（11） CSSCI 燕 燕 梅洛·庞蒂名相的肉身-从我能的身体到一体的肉身 现代哲学 2012（5） CSSCI 燕 燕 家井真《（诗经）原意研究》的方法论以及对国内身体哲学研究的启示 世界哲学 2012（11） CSSCI
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经查《当代教育实践与教学研究》属于连续型电子期刊，被知网收录，由方圆电子音像出版社有限公司主办，由河北出版传媒集团有限责任公司主管，属于省级刊物。
《当代教育实践与教学研究》由 河北方圆电子音像出版社主办，河北省电化教育馆协办。这就是一个最最普通的 省级期刊。
1.发表论文的过程投稿-审稿-用稿通知-办理相关费用-出刊-邮递样刊一般作者先了解期刊，选定期刊后，找到投稿方式，部分期刊要求书面形式投稿。大部分是采用电子稿件形式。2. 发表论文审核时间一般普通刊物（省级、国家级）审核时间为一周，高质量的 杂志 ，审核 时间 为14-20天。核心期刊审核时间一般为4个月，须经过初审、复审、终审三道程序。3. 发表论文有效问题国家规定，必须发表在正规的CN期刊正刊上
Journal of Contemporary Medical Practice影响因子意思是：当代医学实践杂志影响因子。
重点词汇：Journal
英［＇dʒɜ：n（ə）l］
释义：
n.杂志，期刊，报纸；日记，日志；（会计）日记账。
［复数：journals；第三人称单数：journals；现在分词：journaling；过去式：journaled；过去分词：journaled］
短语：
The Wall Street Journal华尔街日报；华尔街时报；华尔街杂志。
词语辨析：magazine，journal，periodical，publication，newspaper。
这些名词均有“出版物或定期刊物”之意。
1、magazine指刊登各种文章、小说、诗歌、评论的杂志。
2、journal本义为“日报”，现在可指定期发生的周刊、月刊、季刊等或指学术团体出版的刊物、杂志或学报。
3、periodical通常指除日报以外的定期出版刊物。
4、publication指出版物，发行物。
5、newspaper一般指每日出版的报纸。
医学论文杂志普刊：《医学前沿》 《医师在线》 《临床医药文献》《实用妇科内分泌》《全科口腔医学》《中西医结合心血管病》等核心：《四川中医》 《中医学报》 这些都是不错的刊物朋友你是评职称用吗？现在咱们国内，学术已经沦落为商品了，学术买卖已经见怪不怪了，基本上交上版面费就给你发表。这一点其实我也很无语......但是，论文还是要发表，因为论文发表已经是刚性需求。发表的时候注意以下几点就可以。第一，先考虑你发表论文的用途，评中职，还是高职。中职一般发表省级以上就可以，高职就需要有国家级的了，甚至核心期刊。毕业论文的话，还是根据学校的要求了。第二，考虑价格方面，省级 国家级 核心价格都不一样，但是咱们也不能一再追求低价格，网上假刊太多，小心占小便宜吃大亏，了几百快无所谓，主要是耽搁了事情，评职称一年就一次（要找可以用支付宝付款的）。第三，时间问题，刊物确定好了 一定要确定下（新闻出版总署）是否能查到。然后就是时间，一般杂志从定稿到出刊都得需要1个月，赶上高峰期3月都有可能，如果对方什么都答应你，今天给稿子明天邮递给你刊物，这个肯定是假刊的。第四，价格方面，这个不好说，杂志种类太多，没法完全根据省级 国家级来判断价格，核心期刊的话 悬殊很大。最后祝你成功，这是我发表论文的经验，我帮我同事也发表了一些，希望对你有所帮助。
据学术堂的了解，医学论文是医者从事医学科学研究工作的文字记录和书面总结，通过论文的载体方式来展现医者的临床医学经验。下面是什么医学杂志容易发表的知识分享，欢迎阅读指正。1.现代实用医学杂志 省级期刊主管单位：浙江省卫生厅主办单位：宁波市医学信息研究所国际刊号：1671-0800国内刊号：33-1268/R出版地方：浙江邮发代号：32-121创刊时间：1994发行周期：月刊《现代实用医学》（月刊）创刊于1988年，由宁波市医学会、宁波市医学信息研究所主办。以“立足宁波、面向全国、服务城乡”为宗旨，学习和汲取中华系列杂志和我省品质杂志的办刊经验，自觉以省级杂志的标准严格要求自己。《现代实用医学》在办刊特色方面，力求体现“现代、综合、实用”，以现代科学理论为准绳，突出多学科交叉知识综合研讨，报道内容新颖实用，密切结合临床。《现代实用医学》每期都安排了一个专题，邀请省内外着名专家为“专家论坛”栏目撰搞，相关专题论文相对集中，重点突出。2.当代医学杂志 部级期刊主管单位：中华人民共和国国家卫生健康委员会主办单位：中国医师协会国际刊号：1009-4393国内刊号：11-4449/R出版地方：北京邮发代号：82-829创刊时间：1994发行周期：旬刊《当代医学》《当代医学》（旬刊）创刊于1994年，是中华人民共和国国家卫生健康委员会主管，中国医师协会主办的部级综合性期刊。本刊为《中国核心期刊（遴选）数据库》《CNKI中文期刊全文数据库（CJFD）》《中国生物医学文献数据库》收录期刊、《万方数据——数字化期刊群》全文上网期刊和《中国学术期刊综合评价数据库（CAJCDE）》统计源期刊。获奖情况：2004年获卫生部期刊奖。《当代医学》是目前中国医疗卫生领域以系统阐述职业化医院经营与管理理念的部级医药卫生类综合性学术期刊。《当代医学》杂志将帮助中国的医院院长解析中国的医药宏观政策和相关法规；洞察医药市场的经济运行规律；把握世界医学和科技前沿的发展趋势；掌握医院战略规划、财务和资本管理、品质管理、人力资源管理、资讯管理等现代医院职业化经营管理方式，引领医疗信息化建设潮流，打造21世纪的职业院长。3.安徽医学杂志 统计源期刊主管单位：安徽省卫生厅主办单位：安徽省卫生厅国际刊号：1000-0399国内刊号：34-1077/R出版地方：安徽邮发代号：26-22创刊时间：1973年发行周期：月刊《安徽医学》主要介绍本省在医学临床、教学、科研上取得的新成果、新发现、新进展，促进学术交流，普及与提高相结合，提高全省医学发展水平，增进群众身体健康。读者对象是中、高级医务工作者。《安徽医学》创刊于1973年，是一本综合性医刊。1992年并荣获北大核心期刊。4.北方药学杂志 省级期刊主管单位：内蒙古自冶区食品药品监督管理局主办单位：内蒙古自治区药品学会国际刊号：1672-8351国内刊号：15-1333/R出版地方：内蒙古邮发代号：16-421创刊时间：2004发行周期：月刊《北方药学》国家科技部和国家新闻出版署批准的由内蒙古自治区食品药品监督管理局主管，内蒙古自治区药品学会主办，西部十二个省(市、区)药学会协办的《北方药学》于2004年6月28日诞生了。《北方药学》的办刊宗旨是：坚持实事求是的科技学态度，开展学术交流，促进我国西部医药学与传统医药学科技的提高与发展。本刊的服务对象是：广大医药科技工作者、管理者、医药卫生人员、药学教育、科研人员以及药品生产企业和药品经营企业人员。主要反映国内外药学科研成果，以及西部十二个省(市、区)广大药学工作者及各少数民族医药研究的新成果、新发现、新动态。为我国西部地区广大医药工作者与国内外医药界同仁进行学术交流、信息沟通开辟途径和渠道，提供和搭建广阔的学术平台，也为国内外学者更多的了解中国民族医药，使我国民族医药走向世界，起到桥梁和纽带的作用。《北方药学》的创刊，顺应了崇尚天然，回归自然的社会发展潮流。符合我国医药产业政策和西部大开发策略，是我们西部十二个省(市、区)医药科技工作者的一件大喜事，它实现了广大西部药学工作者多年的心愿，必将激励西部十二个省(市、区)及国内更多的同行、专家、学者共同探索医药科技、学术的发展。《北方药学》以创新、存真、求实的严肃科学态度，不断提高办刊质量及编辑部的管理，力争把《北方药学》办成一个内容丰富、形式多样、既有医学术价值，又有实用价值，重在实用的专业性刊物。广大读者可借助本刊了解西部医药科技的发展动态，捕捉思路，提高学术水平，展示科研成果。5.临床医药实践杂志 部级期刊主管单位：山西省卫生和计划生育委员会主办单位：山西医科大学第二医院国际刊号：1671-8631国内刊号：14-1300/R出版地方：山西邮发代号：22-39创刊时间：1974发行周期：月刊《临床医药实践》杂志创办于1974年，是由山西省卫生健康委员会主管、山西医科大学第二医院主办的国家综合性医学期刊，也是我国传播医药卫生新理论的医学期刊之一，创办多年来，为各级医学科技人员服务，为医学科技事业的发展服务，为促进我国医学科技信息转换为社会生产力而服务。以上就是关于什么医学杂志容易发表的分享，希望对你有所帮助。
《当代医学》杂志是国家新闻出版总署正式批准，由中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会(原卫生部)主管，中国医疗保健国际交流促进会主办的国家级综合性期刊,一年36期，曾荣获卫生部优秀期刊奖。。本刊为《中国核心期刊（遴选）数据库》《CNKI中文期刊全文数据库（CJFD）》《中国生物医学文献数据库》收录期刊、《万方数据——数字化期刊群》全文上网期刊和《中国学术期刊综合评价数据库（CAJCDE）》统计源期刊和《中文科技期刊数据库》收录期刊。本刊为国家级正式出版刊物，面向海内外公开发行，国际标准刊号：ISSN 1009-4393, 国内统一刊号：CN11-4449/R, 国内邮发代号：82-829。
教育理论与实践——投稿方式见截图
复合影响因子： 综合影响因子：
主办： 山西省教育科学研究所;山西省教育学会周期： 旬刊出版地：山西省太原市语种： 中文;开本： 大16开ISSN： 1004-633XCN： 14-1027/G4邮发代号： 22-31历史沿革：现用刊名：教育理论与实践 Theory and Practice of Education创刊时间：1981该刊被以下数据库收录：中国人文社会科学引文数据库(CHSSCD—2004)核心期刊：中文核心期刊(2011)
中文核心期刊(2008)中文核心期刊(2004)中文核心期刊(2000)中文核心期刊(1996)中文核心期刊(1992)
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近来，有关单位和作者反映，有人冒用本刊名义征集稿件，编辑出版仿制的《教育理论与实践》。对此，本刊声明
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《教育理论与实践》编辑部
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《教育界》杂志不错，纯教育的省级期刊，可以试试。他们的官方网站：
就生物技术来说，它出不了实验室，进入不了生产体系，没有生产运作的目的和动力，就不会是生物经济的因素。所以，生物技术的第一个层面的含义就是划定了生物技术的质料，从定义的角度来说，就是规定了事物的属性。形式逻辑的定义法也是亚里...
浅析生物技术药物的现状及应用 生物质能技术应用现状及发展趋势 环境生物技术的发展及应用 生物技术在植物病虫草害防治中的应用及展望 生物技术在果树上应用研究现状及发展方向 谈生物技术在农业上的应用及发展前景 现代生物技术的应用及展望 可以找到很多这方面的论文 希望对你有帮助~
分子生物技术在微生物降解环境 污染物中的应用 [摘要〕介绍了与环境微生物关键降解酶基因的筛选、克隆及应用相关的分r生物技术，包括聚合酶链式反应技 术、基因重组技术、荧光原位杂交技术和生物信息学等技术，并对这些技术在污染物降解基因检测、筛选和克隆方 面的应用进行了阐述与探讨、 [关键词]分子生物技术;微生物;基因;环境污染物;降解 随着现代j:\地技术的发展，多环芳烃、含氯有 机物和硝基苯类化合物等人工合成井难以降解的 污染物大量排放，造成世界范围内的环境污染和生 态破坏，严重地威胁人类和其他生物的正常生存和 发展。利用微生物修复技术对受污染的水体及土 壤进行处理，凸显了其重要的意义和可行性。研究 人员发现并筛选到一些微生物，它们不仅对环境有 较高的适应性、对污染物有较高的耐受性，而且对 污染物有较强的降解效率和专一性。然而环境中 存在的大量微生物中仅有少于1%可通过传统的培 养方法进行培养、分离和纯化，绝大多数细菌需要 非常严格的营养条件川。因此，为了对修复环境有 所贡献却难以培养的微生物进行更全面了解，也为 了筛选到更多有利于降解环境污染物的微生物菌 种及其关键酶基因，分子生物技术和手段逐渐被广 泛应用到环境可降解污染物及降解机理方面的研 究中。 本文对近年来发展起来的聚合酶链式反应 (PCR)技术、基因重组技术、荧光原位杂交(FISH) 技术和生物信息学等多种分子生物技术进行了介 绍，并总结了它们在污染物降解基因检测、筛选和 克隆方面的应用。 1与环境污染物降解相关的分子生 物技术 及其相关技术 PCR是一种利用脱氧核糖核酸(DNA)半保留 复制原理，在体外扩增位于两段已知序列之间的 DNA区段从而得到大量拷贝的分子生物技术。根 据其模板、引物来源或扩增条件的不同，PcR技术 可分为以下几种:(l)反转录pCR(RT一PeR)技 术，将mRNA反转录为cDNA后再对其进行PCR 扩增，可用来构建cDNA文库，分析不同生长时期 的mRNA表达状况和相关性以及mRNA的定量测 定等;(2)巢式PCR技术，在扩增大片段目的DNA 时，先用非特意性引物扩增再用特意性引物对第一 次扩增产物进行第二次扩增，以获得可供分析的 DNA;(3)竞争PCR技术，是一种定量PCR，向PCR 反应体系中加人人工构建的带有突变的竞争模板， 通过控制竞争模板的浓度来确定目的模板的浓度， 对目的模板作定量研究;(4)实时荧光定量PCR技 术，在PCR反应体系中加人荧光基团，利用荧光信 号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线 对未知模板进行定量分析，该法已广泛用于基因表 达研究、转基因研究等方面;(5)扩增的rDNA限制 酶切分析技术，根据原核生物rDNA序列的保守性， 将扩增的rDNA片段进行酶切，通过酶切图谱来分 析菌间的多样性;(6)RNA随机引导PCR技术，基 于任意寡核昔酸引物与RNA之间可能的配对，在 低严谨度条件下经聚合酶催化使链延伸，将细胞总 RNA或InRNA作为反转录反应的模板，此技术结 合单链构象多态性，用非变性胶分辨大小相同而构 象不同的片段，可用于诊断遗传突变及分析污染条 件下序列的多态性;(7)随机扩增多态DNA (RAPD)技术，是一种基于PCR检测PCR引物结合 位点序列改变的方法，通常以10bp的寡核昔酸序 列为引物，对基因组DNA随机扩增，电泳分离染色 扩‘增产物，再分析多态性。 技术 FISH技术利用荧光标记的探针在细胞内与特 异的互补核酸序列杂交，通过激发杂交探针的荧光 来检测信号。荧光探针比放射性探针更安全，具有 较好的分辨力，不需要额外的检测步骤。近年来， 由于FISH技术具有灵敏、便捷等优点，迅速发展完 善成为研究环境微生物的有力工具。此外，可用不 同激发和散射波长的荧光染料标记探针，在一步反 应中同时检测几个靶序列。该技术主要包括试样 固定、预处理、预杂交、探针和试样变性、杂交、漂洗 去除未结合的探针、检测杂交信号等步骤。由于 165rRNA具有遗传稳定性，因此成为FISH技术检 测最常用的靶序列。 基因重组技术 基因重组技术是从供体生物的基因组中通过 酶切扩增等手段获取目的基因，与载体连接形成重 组DNA分子，再导入到受体细胞中，让外源基因得 以表达。在已经分离出的许多菌株中，与降解能力 有关的基因多在质粒体上。由于质粒很容易在细 菌的繁殖过程中遗失，对细菌降解能力的长期稳定 非常不利，可将其与污染物降解有关的酶基因重组 到大肠杆菌等微生物中进行表达，以此构建的各种 生物降解特性增强的重组菌可用于污染环境的治 理修复或发酵某些废弃物。 生物信息学 20世纪后期，生物学的迅猛发展，从数量上和 质量上极大地丰富了基因组数据库、蛋白质数据 库、酶数据库和文献数据库等许多生物科学的数据 资源。已有多个国家和国际科研组织建立了生物 信息数据库，如欧洲分子生物学实验室(Eur叩ean MolecularBiologyLaboratory)核酸序列数据库和美 国国家生物技术情报中心(Nationaleente:fo:Bio- technologyInformation，NCBI)基因序列数据库等。 科学家利用计算机及生物信息分析软件分析这些 数据资源，确定大分子序列、结构、表达模式和生化 途径与生物数据之间的关系，区分生物个体间遗传 差异，揭示DNA多样性。例如，基本局部比对搜索 工具(BasieLoealAlignmentSearehTool，BLAST)， 是一套在蛋白质数据库或DNA数据库中进行相似 性比较的分析工具。它基于Altschul等的方法「2〕， 在序列数据库中对查询序列进行同源性比对工作。 BLAST程序可对一条或多条、任何数量、任何形式的 序列在一个或多个核酸或蛋白序列库中进行比对，甚 至将有缺口的比对序列也考虑在内，利用比较结果中 的得分对序列进行相似性说明。基因的序列分析可 揭示出生物物种之间的关系，在污染治理研究中可用 于生物基因组特殊区域或特异基因的测序。 2分子生物技术在环境污染物降解 中的应用 土壤试样总DNA的提取 用适当方法直接从土壤中提取DNA并纯化， 是从分子生物学角度对土壤微生物进行研究的前 提条件，而后可进行酶切、PCR扩增、核酸分子杂交 等分子生物学技术操作。从土壤中提取微生物 DNA主要分为汽接法和间接法}’{。直接法是在 ogram等的方法基础卜发展起来的，其主要包括2 个步骤:(l)原位细胞裂解;(2)DNA提取和纯化。 直接法提取的DNA超过细菌总DNA的60%且省 力，但提取的DNA常常有折断、腐殖酸污染、甚至 提取物中还夹杂有未知的胞外DNA和真核生物的 DNA。最先报道间接法的是Faegri等[‘〕，其主要包 括4个步骤:(l)分散土壤;(2)分离细胞与土壤; (3)细胞裂解;(4)DNA纯化。间接法提取DNA 产量低且费力，但纯度较高、DNA损伤小，提取的 大片段DNA可用来构建cos而d和细菌人工染色体 文库等。 采用PCR及相关技术扩增分析DNA片段 可降解污染物的微生物必然能产生分解代谢 该污染物的酶。selvaratnam等L’l用编码苯酚单加 氧酶dmpN摹因的RT一PCR技术来检测序列间歇 式活性污泥反应器‘{一，降解酚的假单胞菌。检测结 果表明，RT一PCR技术不仅能检测微生物降解酚的 能力，还能测量dmpN基因的转录水平，从而确定假 单胞菌特殊的分解活性，发现了在转录水平下，酚 浓度与通气时间之问存在正相关关系。 将PCR技术和变性梯度凝胶电泳(DGGE)结 合起来，在变性条件适当的情况下能分辨一个碱基 对，分辨率较高。染色后的凝胶用成像系统进行分 析，可在一定程度l几反应试样的复杂性。条带的多 少能反应试样「 一 }1微生物组成的差异，条带的亮度能 反应试样中微生物的多少。基于以上优点，日前该 技术在微生物群落结构的分析和动态研究方面得 到了厂‘泛应用。DGGE可通过分析PCR扩增的基 因点突变来探索微生物的复杂性。徐玉泉等[“〕从 某废水中分离出一株能以苯酚为惟一碳源的菌株 PHEA一2，使用PCR一DGGE技术对该菌165 rDNA进行分析，发现该菌与醋酸钙不动杆菌同源。 M盯sh等r了)利用PcR一DGGE技术获得了活性污泥 中真核微生物的种群变化情况。王峰等下8〕采用 PCR一DGGE技术对城市污水化学生物絮凝处理中 活性污泥和生物膜微生物种群结构进行了分析，结 果表明活性污泥培养前后微生物种群结构发生r 很大改变。 RAPD技术也是一种应用比较广泛的以多态性 引物来扩增某些片段的技术。RAPD技术可用于检 测含有混合微生物种群的各种微生物反应器中微 生物的多样性。用RAPD技术分析检测实验室规 模的油脂淤泥培养料中的细菌菌群发现，用油脂淤 泥改良过的培养料比未改良的更适于不同的微生 物种群生长[9j。vainio等t’。〕从516种孤立的菌落 中提取出165rDNA，经PCR扩增后进行测序，检测 活性污泥中微生物种群的结构。这些组合技术的 应用显著增强r对微生物的检测和鉴定能力，为理 论研究工艺优化及提高生物处理效率提供了条件。 基因重组 基因工程技术应用于环境保护起始于20世纪 80年代。其基本原理是通过基因分离和重组技术， 将目的基因片段，比如可编码降解某种污染物的 酶，转移到受体生物细胞中并表达，使受体生物具 有该目的基因表达显现的特殊性状，从而达到治理 污染的目的。找到特定污染的抗性基因，利用基因 重组技术转基因后也可获得其他抗性植株以及筛 选到可转化污染物的植物，还可开发超量积累植物 进行污染土壤的生物修复。 罗如新等L”〕用放射性同位素标记tfdc基因片 段作探针，Southemblot杂交定位Ll菌株的邻苯二 酚1，2一双加氧酶基因位于Pstl的I片段和BamH I的M、N片段，回收并将其直接克隆至表达载体 pKT230卜，获得的重组子能转化不具开环酶活性 的甲胺磷降解菌P2，得到高于天然宿主21倍的邻 苯二酚1，2一双加氧酶。stingley等{”〕通过构建基 因文库和重组质粒等基因工程方法证实了NidAB 双加氧酶是降解菲的关键酶类，并首次鉴定出此基 因通过磷苯二甲酸实现降解功能。chae等‘”}发现 不能降解苯酚的su如lobusso扣taricu、98/2菌株中 的儿茶酚2，3一双加氧酶基因与能降解苯酚的 sulfolo右u，，o如taricu、咫有[6J源区，分析得知它们 是山共同祖先进化而来。把儿茶酚2，3一双加氧酶 基因克隆到大肠杆菌中表达，可获得有较高降解活 性的双加氧酶。 重金属污染是环境污染的重要方面之一。随 着分子生物学技术的发展，越来越多的修复性蛋白 基因正被从植物、微生物和动物中陆续分离出来， 如汞离子还原酶基因、有机汞裂解酶基因、汞转运 蛋自基因、金属硫蛋白基因、植物络合素合成酶基 因、铁离子还原酶基因和锌转运蛋白基因L’‘〕。这些 基因通过基因工程的改造，重组到合适的受休细胞 中表达相应的蛋白质和酶，达到治理难以降解的有 毒有害污染物的目的。sorsa等〔”〕把MTS插人 LamB序列的153位点，在中表达MTs，解决 r细胞内MTs对金属离子有限的吸附能力。综L 所述，基因重组技术具有快速、高效的特性，已逐渐 成为环境生物技术的研究热点。 技术 FISH技术利用核糖体内长度适中(约1500bp)、 高度保守的165:RNA序列作为理想的基因分类靶 序列，其中使用的165:RNA寡核普酸探针一般是 进行了荧光标记的20bp左右特异性核昔酸片段， 利用该报告分子(如生物素、地高辛)与荧光素标记 的特异亲和素之间的免疫化学反应，经荧光检测系 统对待测DNA进行定性、定量或相对定位分析。 FISH技术能提供处理过程中微生物的数量、空间分 布和原位生理学等信息。 硝化细菌是一类生理上非常特殊的化能自氧 菌，传统的研究方法要经过富集、分离、分类和鉴定 步骤，耗时长。HSH技术的引人解决了上述困难。 FlsH技术还被广泛用于活性污泥系统、硝化流化床 反应器和膜生物反应器等废水处理系统}’61。 基因工程微生物越来越多地被用于农业害虫 控制和环境污染的生物修复，对人类健康和环境的 影响引起广泛关注。1994年出现了一种新的标记 系统:绿色荧光蛋白(GFP)，由于GFP基因表达产 物对细胞没有毒害作用，且由GFP产生的荧光标记 检测卜分方便、简单。在某些被污染的环境中可分 离出降解该污染物的细菌，通过基因重组等手段使 用GFP分子标记，可更容易的分离检测被标记的 细胞叫。 Bastes等[’8]进行了苯酚降解菌染色体GFP基 因标记实验。通过PCR和Southemblot分析，证明 GFP基因已成功整合到宿主细胞的染色体中。对 标记菌与野生型的降解能力比较结果证明，GFP分 子标记的插人并不影响细胞的苯酚降解能力。 用G即标记Pseudomonasputida，研究活性淤 泥中细菌存活情况{’9飞。Pseudomonasputida被转到 活性淤泥2min后，观察到细胞在淤泥絮凝物间自 由游动;培养3d后，发现荧光细胞减少，大部分已 被合并到淤泥絮凝物中，以防止细菌被原生动物捕 食。用oFP标记石.eozi和Serraliamarceseern，考 察菌株附到絮凝物卜的过程{’()j。使用表面荧光显 微镜能将带有GFP标记的细胞从活性污泥中区分 开，井进行观察和记数。而聚焦激光扫描显微镜 (cLsM)可使GFP标记细菌产生三维轮廓，结合表 面荧光显微镜和CLSM观察GFP标记细胞，结果表 明，细胞表面疏水性在细菌附到絮凝物的过程中起 重要作用，两种细菌附在絮凝物上的模式有很大不 同，通过这种方法可更好地理解细菌赫附机理，有 助于提高废水处理效果。 3结语 分子生物技术的应用使研究人员可从微观的 角度更细致深人地了解微生物对污染物降解的具 体生理生化机制，在分子水平 _ _ [揭示生物体吸收、 迁移、积累有害物质最终被毒害，及适应、抗性等生 态问题，从而筛选到更多有利用价值的微生物。随 着越来越多微生物全部基因序列的解码，对各种细 菌体内可降解基因的分布和表达会有更深人的了 解，有关技术的发展和成熟必将对污染物的降解过 程有一个整体的、生态水平上的认识。 参考文献 l李凤，刘世贵 . 分子生物学技术在环境微生物研究中的 应用 . 世界科技研究与发展，2003，25(4):88一92 2AltsehulSF，GishW，MillerW， mentsearehtool . 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